1. Типы биотических взаимоотношений макро и микроорганизма
 Скачать 232.49 Kb.
|
|
68. Лабораторная диагностика КАМПИЛОБАКТЕРИОЗа. КАМПИЛОБАКТЕРИОЗ Кампилобактериоз - инфекционная болезнь, проявляющаяся у млекопитающих в виде абортов, временного бесплодия, задержания последа, вагинитов, метритов, рождения нежизнеспособного молодняка; у кур - снижения прироста массы бройлеров, яйценоскости кур-несушек и падежа цыплят. Классификация возбудителя. Род: Campylobacter. Вид: С. fetus (подвиды С. fetus venerealis, С. fetus fetus) – облигатная микрофлора жкт жвачных; С. Jejuni – возбудитель кампилобактериоза человека; С. sputorum (подвиды С. sputorum sputorum, С. sputorum bubulus, С. sputorum mucosalis) – человек, крс; С. Coli – человек и многие виды млекопитающих (рогатый скот, лошадь, свиньи, собаки и т.д.) Бактериологическая диагностика Материал для исследования: аборотированный плод с оболочками или голова, желудок, печень, легкие плода, часть плаценты; от коров - слизь из шейки матки или цервикально-вагинальной области; от быков - препуциальная слизь, сперма, секрет придаточных половых желез; от убитых с диагностической целью животных - матка, яичники, влагалище, лимфоузлы тазовой полости. Микроскопия методы окраски: разведенным 1:5 карболовым фуксином Циля 1-2 мин. микрокартина: полиморфные, тонкие, изогнутые палочки в виде запятой, летящей чайки, буквы V, спирали с одним или несколькими завитками, длиной 0,5-8 и толщиной 0,2-0,8 мкм. грамотрицательны; спор не образуют; капсул не образуют; подвижны. Культивирование посев на питательные среды: полужидкий 0,15-0,2 %-ный мясо-печеночный пептонный агар (ПЖА), 2-3 %-ный мясо-печеночный пептонный агар (МППА), сафранино-железоновобиоциновая среда (СЖН), агар Мартена и среда Китта-Тароцци без масла. особенности выделения возбудителя: микроаэрофилы (в атмосфере 10-15% СО2) или анаэробы; оптимальная температура 37-38oС; срок культивирования до 10 дней. культуральные свойства: на ПЖА через рост в пробирке около самой поверхности среды в виде серовато-голубоватого диска толщиной от 1 до 4 мм; на плотной среде - нежный мелкоросинчатый налет или отдельные голубоватые мельчайшие колонии; на СЖН при росте чистой культуры розовый цвет среды не изменяется, при смешанном росте или размножении только других видов микробов среда становится ярко-желтой. биохимические свойства: не ферментируют углеводы и мочевину, дезаминируют глутаминовую и аспарагиновую кислоты, оксидазоположительны, индол не выделяют. Образуют сероводород, за исключением подвида С. fetus venerealis. Желатин не разжижают, молоко не свертывают. Реакции с метиловым красным и Фогеса - Проскауэра отрицательны. Подвиды С. fetus синтезируют каталазу и не редуцируют нитраты. Биопроба Заражают подкожно, внутрибрюшинно, интравагинально или орально двух беременных морских свинок или четырех небеременных белых мышей. У морских свинок происходят аборты. Устойчивость В сене, подстилке, навозе, почве, воде кампилобактеры остаются жизнеспособными при температуре 18-27 °С до 20 дней, при 6 °С - до 1 мес; в гниющем материале разрушаются быстро. В инфицированных тканях матки и плодов при температуре минус 20 °С сохраняются 5-8 мес. Высушивание их убивает через 3 ч, при 55 °С гибнут в течение 10 мин.Растворы едких щелочей, хлорной извести, свежегашеной извести в концентрациях, применяемых для дезинфекции, убивают их за 5-10 мин. Иммунитет Переболевшие кампилобактериозом животные приобретают прочный иммунитет. Серологическая диагностика: у крупного рогатого скота при помощи реакции агглютинации с вагинальной слизью (РАВС). Компоненты: 1) влагалищная слизь в разведении от 1:50 до 1:400; 2) кампилобактериозный антиген; у овец при помощи РА с сывороткой крови. Компоненты: 1) сыворотка крови в разведении от 1:100 до 1:400; 2) кампилобактериозный антиген. Биопрепараты для специфической профилактики: эмульсинвакцина против кампилобактериоза овец. Иммунитет у привитых животных наступает через 10-15 дней после вакцинации и сохраняется не менее 12 мес. 69.Возбудители злокачественного отёка.(см самост работу) Возбудители злокачественного отёка - анаэробные бактерии из рода Clostridium. Из поражённых тканей чаще выделяют Cl. perfringens (60-80%), реже Cl. oedematiens (20-30%), Cl. septicum (10-20%) и Cl. histolyticum (2-5%). Возбудители широко распространены во внешней среде, особенно в почве. С кормом они попадают в желудочно-кишечный тракт животных, выделяются с испражнениями и рассеиваниются во внешней среде. К злокачественному отеку восприимчивы овцы, лошади, мулы, ослы, крупный рогатый скот, свиньи, олени. Маловосприимчивы и заболевают редко человек, плотоядные, птицы, собаки и кошки. Зарегистрированы случаи заболевания других видов животных. Наиболее восприимчивы лошади и овцы. В развитии инфекционного процесса основную роль играют следующие виды бактерий из рода клостридиум: Cl. septicum, Cl. ovyi, Cl. perfringens, Cl. histolyticum Cl. sordellii. У сельскохозяйственных животных возбудителем заболевания чаще является Cl. septicum, нередко наблюдается смешанная инфекция. У овец возбудителем может быть Cl. Chauvoei. Морфология и тинкториальные свойства Cl. septicum - полиморфная грамположительная бескапсульная подвижная палочка (перитрих), длиной 2-10 мкм и шириной 0,8-2 мкм. Споры овальной формы, располагаются центрально или субтерминально, образуются в культурах и трупе. В мазках из культур находят отдельные палочки, цепочки и нити. В препаратах-отпечатках из серозных покровов печени и других органов обнаруживают длинные нити. Культивирование Cl. septicum - строгий анаэроб. Оптимальная температура 37°С, рН 7,6. На среде Китт-Тароцци растет интенсивно, через 16-24 ч наступает равномерное помутнение среды с газообразованием. Через 48 ч микробы оседают на дно и бульон просветляется. При росте в мозговой среде почернения не наступает, но образуется газ. В агаре столбиком растет в виде нежных хлопьеподобных колоний диаметром 1 -2 мм с уплотненным центром и радиально отходящими перепутанными нитями, а на поверхности кровяного агара с глюкозой (агар Цейсслера) - в виде кружевных сплетений нитей-арабесок с зоной гемолиза. Молоко свертывается медленно (через 3 -5 дней), пептонизации сгустка казеина нет. Биохимические свойства Ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу, лактозу, галактозу, мальтозу, левулёзу и салицин, не разлагает глицерин и маннит. Очень редко разлагает сахарозу. Это свойство используется при дифференциальной бактериологической диагностике для идентификации Cl. septicum и Cl. chauvoei, так как последний микроб сахарозу ферментирует постоянно. Разжижает желатину и свертывает лакмусовое молоко с образованием кислоты и газа. Не переваривает коагулированную сыворотку и яичный белок, не образует индола, обычно не восстанавливает нитраты в нитриты и не вырабатывает большого количества сероводорода. Устойчивость Вегетативные формы микроба быстро гибнут под влиянием различных факторов внешней среды, они довольно чувствительны к кислороду. Споры относительно устойчивы и выдерживают кипячение в течение 2-15 мин. В почве этот микроб может вегетировать и сохраняться годами. Патогенность Cl. septicum синтезирует высокоактивный экзотоксин сложного состава. Токсин может быть выделен из фильтрата культур на бульоне Мартена (рН 7,6 -7,8), на средах из кислотного и ферментативного гидролизата казеина. В составе токсина обнаруживают четыре растворимых компонента (α, β, γ, δ). Альфа-токсин - кислородостабильный летальный, некротический и гемолитический фактор. Бета-токсин - кислородолабильный гемолизин. Является ферментом дезоксирибонуклеазой. Вызывает быстрый гемолиз. Нейтрализуется антисывороткой Cl. perfringens. Гамма-токсин - фермент гиалуронидаза. Дельта-токсин - кислородолабильный гемолизин, лизирующий эритроциты барана, лошади и человека. В культуральных фильтратах этого микроба, кроме указанных токсических компонентов, обнаружены еще фибринолизин и коллагеназа, которые могут играть некоторую роль в деструктивных процессах при газовой гангрене. Антигенная структура В составе CI. septicum выделены О- и Н-ан-тигены. Установлено, что имеется общность споровых антигенов у С1. septicum и CI. chauvoei, но они могут четко дифференцироваться по О-антигену. С помощью Н-агглютинации внутри вида Cl. septicum выявлено шесть серологических групп. Clostridium novyi Clostridium novyi (Cl. oedematiens) выделен Нови в 1883 г. из трупа морской свинки, его этиологическая роль как возбудителя газовой гангрены установлены в 1915 г. Вейнбергом и Сегеном. Морфология и тинкториальные свойства Крупная полиморфная прямая или слегка изогнутая с закругленными, иногда обрубленными краями палочка, длиной 4 -8 мкм и шириной 1 -1,5 мкм; бактерии могут располагаться короткими цепочками по 3 -5 и более клеток. Капсул не образует. В молодых культурах палочки подвижны (перитрихи), в присутствии кислорода подвижность быстро теряется. Образует круглые или овальные субтерминальные споры, которые обычно обнаруживаются через 24 ч роста культуры. Процесс спорообразования более интенсивный на щелочных средах, обедненных питательными веществами и разлагаемыми углеводами. Хорошо окрашиваются спиртоводными растворами обычных анилиновых красок. Молодые вегетативные клетки грамположительные, из старых культур - грамотрицательные. Культивирование Cl. novyi - один из наиболее строгих анаэробов. Оптимальная температура 37°С, рН 7,8. На среде Китт - Тароцци дает обильный рост со сплошным помутнением и слабым газообразованием. Культуры издают неприятный запах. На кровяном агаре с глюкозой растет в виде шероховатых серого цвета плоских колоний с неправильными бахромчатыми краями и отростками, образующими на периферии колоний параллельные петли. Колонии окружены зоной гемолиза. Мозговая среда не чернеет. Молоко свертывается медленно с выпадением мелких хлопьев, пептонизация не наступает. Биохимические свойства Сахаролитические свойства выражены слабо и различны у отдельных типов. Cl. novyi типа А, В и С ферментирует глюкозу, фруктозу и мальтозу, а тип D только глюкозу; глицерин разлагают все типы, кроме некоторых штаммов типа В. Способность разлагать углеводы изменяется в зависимости от штамма. Протеолитические свойства выражены слабо. Желатина разжижается медленно, свернутая сыворотка крови, вареное мясо, казеин и свернутый яичный белок не разжижаются. Нитраты восстанавливаются в аммиак без прохождения стадии нитритов. Сульфаты не восстанавливаются в сероводород, индол не образуется. Устойчивость Вегетативные формы по своей устойчивости не отличаются от других видов патогенных анаэробов. Они погибают от воздействия прямых солнечных лучей через 24 -48 ч, ультрафиолетовых лучей через 20 -30 мин. Нагревание до 80°С убивает их за 20 мин, кипячение -за 5 мин. Споры могут сохраняться в почве в течение 7 -8 лет и выдерживать кипячение 1 -2 ч. Патогенность Злокачественный отек, обусловленный Cl. novyi может возникать вследствие любого ранения, инфицированного этим возбудителем. Исход болезни, как правило, смертельный. Cl. novyi в организме и при росте на элективных питательных средах синтезирует и выделяет очень активный и сложный токсин, в составе которого обнаружено восемь компонентов. К числу лучше изученных относят альфа-, бета-, гамма- и дельта-токсины. Альфа-токсин - термолабильный, летальный, некротический, капиллярный яд. Вызывает некроз тканей, желатинозный отек и гибель животных. Бета-токсин - фосфорлипаза С (лецитиназа). Обладает некротическим, гемолитическим и летальным действием. Гамма-токсин -фосфорлипаза D. Некротизирующий и гемолитический факторы. Дельта-токсин - кислородолабильный гемолизин. Экзотоксин CI. novyi по активности превосходит токсины других возбудителей газовой гангрены. Он сильнее других токсинов угнетает фагоцитоз и обладает четким гемолитическим действием, которое нейтрализуется специфической антитоксической сывороткой, ему присущи летальные и некротические свойства и диффузионная активность. Токсин разрушается при нагревании до 50°С в течение 30 мин. Этот микроб также образует ферменты патогенности - гиалуронидазу, фибринолизин, дезоксирибонуклеазу, протеин азы. Антигенная структура По составу растворимых антигенов токсина различают четыре типа Cl. novyi -А, В, С и D. Тип А - l. novyi (Cl. oedematiens) -вызывает газовую гангрену у человека и животных, выделяется также при брадзоте. Вырабатывает альфа-, гамма- и дельта-токсины. Тип В - Cl. gigas - является возбудителем брадзота овец, инфекционного некротического гепатита овец, а также газовой гангрены человека и травоядных. Может вызывать у крупного рогатого скота и свиней инфекционный некротический гепатит. Вырабатывает альфа- и бета-токсины. Тип С - Cl. bubalorum - вызывает хронический остеомиелит у буйволов, продуцирует гамма-токсин. Тип D - Cl. haemolyticum - вызывает инфекционную иктерогемоглобнурию у крупного рогатого скота, очень редко у овец и в единичных случаях у свиней. Синтезирует бета-токсин, а также эта- и тэта-токсины. Первый из них фермент тропомиозиназа, расщепляет миозин и повреждает мышцы. Clostridium perfringens Clostridium perfringens (Вас. perfringens, Cl. welchii) открыт и описан в 1892 г. Уэлчем и Нетталом. Широко распространен в природе и встречается повсеместно, особенно большое количество его обнаруживают в почве, богатой гумусом. Патогенные штаммы микроба выделяются из почвы главным образом в местах, где почва загрязняется фекалиями животных. Основной резервуар сохранения патогенных штаммов - здоровые животные, в желудочно-кишечном тракте которых интенсивно размножается Cl. perfrigens и выделяется с фекалиями во внешнюю среду. Так происходит загрязнение кормов, пастбищ, почвы вначале вегетативными формами, а затем спорами: микроб быстро спорулирует и длительное время сохраняется. Cl. perfrigens - самый нетребовательный анаэроб, очень активный в биохимическом отношении и весьма патогенный. Морфология и тинкториальные свойства CI. perfringens всех типов - неподвижные без жгутиков с закругленными концами довольно толстые палочки длиной 4-8 мкм и шириной 0,6-1,5 мкм. Под воздействием различных факторов (антибиотики, состав среды и др.) форма бактерий может сильно изменяться. Поэтому в культуре наряду с типичными клетками обнаруживают короткие толстые палочки, почти кокковидной формы или же длинные с заостренным краем нити, достигающие 100-145 мкм. Палочки нередко бывают изогнутыми. В организме животных микроб образует капсулу. При выращивании на щелочных средах, богатых белками и несодержащих углеводы, образует крупные овальные центральные или субтерминальные споры. Спорообразование также происходит на свернутой лошадиной сыворотке и особенно интенсивно при засеве молодой культуры на влажный песок, который медленно подсушивается. Эта бактерия хорошо красится метиленовым синим и другими основными красками. В молодых культурах грамположительна, в старых - грамотрицательна. Культивирование Cl. perfringens не относится к строгим анаэробам. На среде Китт-Тароцци дает равномерную муть и газообразование уже через 2-3 ч после посева. Газообразование происходит за счет сбраживания глюкозы и изомальтозы при расщеплении гликогена мышц или печени, находящихся в среде. Через 3-5 дней среда просветляется и на дно выпадает обильный белый осадок за счет осевших микробов. Культура издает запах масляной кислоты. Рост также можно получить на простом бульоне с глюкозой. При росте на кровяном агаре, по Цейс-слеру, через 12 -18 ч образуются мелкие (до 2-4 мм) колонии, мутные или сероватые, окруженные одной или двумя зонами гемолиза; в дальнейшем под влиянием кислорода эти колонии становятся зеленоватыми. Существует три устойчивых варианта колоний: гладкий (S) слизистый (М) и шероховатый (R), иногда появляется смешанный вариант. Гладкие колонии на пластинке агара в начале роста напоминают нежные капли росы, затем теряют прозрачность и приобретают сероватую или белую окраску. Они круглые, сочные, куполообразные с гладкой блестящей поверхностью и ровным краем. В сахарном агаре столбиком колонии имеют чечевицеобразную форму. В мазках из S-форм Л колоний обнаруживают короткие бескапсульные клетки. Слизистые (М) колонии похожи на гладкие и отличаются более высоким куполом и слизистой консистенцией обнаруживают капсульные клетки. Шероховатые колонии неправильной формы, с изрезанным «фестончатым» краем, иногда с отростками в виде шипов, поверхность их неровная, бугристая. В мазках обнаруживают нити или цепочки из коротких палочек. На молоке через 16-24 ч появляется плотный губчатый сгусток, часто приподнятый газом до пробки, молочная сыворотка в такой пробирке прозрачная. При росте на среде Вильсон-Блера в результате восстановления железы уже через 2-4 ч наступает сплошное почернение агарового столбика и одновременно сильное газообразование. Мозговая среда не чернеет. Биохимические свойства Cl. perfringens обладает слабыми протеолитическими свойствами. Свернутую сыворотку и вареные кусочки мяса разжижает медленно (на 2 -7-й день). Однако у большинства штаммов типа А протеолитическая активность выражена в значительной степени. Этот микроб вырабатывает ферменты, расплавляющие через 24 ч желатину. Характерное свойство для Cl. perfringens - способность свертывать лакмусовое молоко с образованием сгустка кирпичного цвета и полным просветлением молочной сыворотки. Все штаммы сбраживают с образованием кислоты и газа глюкозу, галактозу, мальтозу, лактозу, левулёзу, сахарозу и не ферментируют маннит и дульцит. Некоторые штаммы могут разлагать глицерин и инулин. Синтезирует ферменты патогенности: лецитиназу, кроллагеназу, дезоксирибонуклеазу, гиалуронидазу. Устойчивость Вегетативные клетки малоустойчивы, резистентность же спор напротив очень высокая. Имеются данные, что споры различных штаммов типа А этого вида микроба выдерживают температуру 100 °С в течение 1 -3 ч. Патогенность Все типы Cl. perfringens способны вызывать газовую гангрену у человека и животных. Отдельные варианты являются возбудителями специфических инфекционных процессов у различных видов животных: брадзота овец, анаэробной дизентерии ягнят, энтеротоксемии овец, телят и т. д. Особенности действия культур и культуральных фильтратов Cl. perfringens на лабораторных животных зависят от штамма, питательной среды, на которой получена культура, от спектра главных летальных токсинов, вырабатываемых данным штаммом, а также от пути введения культуральной жидкости и количества смертельных доз токсинов. Cl. perfringens вырабатывает сложный экзотоксин - сложный комплекс, образующий не менее 15 факторов патогенности. Основными токсическими факторами являются: альфа-токсин - фосфолипаза (лецитиназа С) - один из главных факторов, обладающий летальным, некротическим, гемолитическим и цитопатогенным действием. Бета-токсин - летальный некротический фактор. Гамма-токсин представляет собой летальный, не обладающий гемолитической активностью фактор. Дельта-токсин - летальный и гемолитический яд. Эпсилон-токсин - летальный некротический протоксин, активирующийся трипсином. Тэта-токсин характеризуется резко выраженными гемолитическими и в слабой степени летальными и некротическими свойствами. Йота-токсин летальный, некротический протоксин, активирующийся трипсином. Каппа-токсин представлен коллагеназой, действующей на нативный коллаген. Лямбда-токсин - желатиназа, действующая на денатурированный коллаген и желатину. Ми-токсин – гиалуронидаза. Ни-токсин - дезоксирибонуклеаза. В составе экзопродуктов обнаружены также нейраминидаэный, плазмокоагулазный компоненты - и фибринолитический фермент. Сложный состав экзопродуктов бактерий этого вида определяет разностороннее действие и спектр патогенности. Антигенная структура Дифференциация CI. perfringens на типы основан на свойстве преимущественного выделения различных летальных токсинов, обладающих биологическим действием и нейтрализуемых специфической антисывороткой. Описано шесть типов (сероваров) Cl. oerfringens: А, В, С, D, E, F. Тип А - Cl. perfringens Тур A (Cl. Welchn) - вызывает газовую гангрену (злокачественный отек) у людей и животных, пищевые токсикоинфекции у людей, является основным возбудителем энтеротоксемии телят и взрослых свиней, может также вызывать некротический мастит овец коз и крупного рогатого скота. Вырабатывает альфа-, тэта- и каппа-токсины. Тип В - Cl. perfringens Тур В (Lamb dysentery bacillus) - вызывает анаэробную дизентерию (некротический энтерит) ягнят, козлят, телят поросят, жеребят и цыплят. В числе токсических компонентов обнаруживают альфа-, бета-, эпсилон-токсины, а также протеиназа и гиалуронидаза. Тип С - Cl. perfringens Тур С (Вас. paludis) -вызывает геморрагическую энтеротоксемию овец, иногда энтеротоксемию телят, ягнят, поросят, коз и верблюдов. Синтезирует альфа- и бета-токсины. Тип D - Cl. perfringens Тур D (Вас. ovitoxicus) -является возбудителем инфекционной энтеротоксемии овец («мягкая» почка), выделяется также при энтеротоксемии коз, телят и при «травяной болезни» у лошадей. Обладает альфа- и эпсилон-токсинами. Тип Е - Cl. perfringens Тур Е - выделен при энтеротоксемии телят и ягнят. Имеет альфа- и йота-токсины, а также активные коллагеназу и протеиназу. Тип F - Cl. perfringens Тур F (Вас. enterotoxicus) - описан как возбудитель некротического энтерита людей, выделяет альфа- и бета-токсины. Clostridium histolyticum Clostridium histolyticum (греч. - растворяющий ткани) выделен в 1916 г. Вейнбергом и Сегеном из раневого содержимого человека, пораженного газовой гангреной. При раневой анаэробной инфекции обнаруживают реже других микробов, не более чем в 1 -18 % случаев. Как правило, встречается в ассоциации с другими патогенными клостридиями, значительно осложняя течение болезни. У лошадей известны случаи, когда Cl. histlyticum был единственным возбудителем раневой инфекции. Этот микроб является естественным обитателем кишечника человека и животных. Морфология и тинкториальные свойства Среди других патогенных анаэробов О. histolyticum самый небольшой микроб. Это грамположительная палочка длиной 3 -5 мкм и шириной 0,2-0,5 мкм, хорошо образующая в старых культурах овальные, расположенные центрально или субтерминально (в виде игольного ушка) споры; в организме споры не формируются. Перитрих, подвижный в свежих культурах. Капсулу не имеет. Легко окрашивается спиртоводными растворами анилиновых красок. Культивирование Нестрогий анаэроб. В аэробных условиях дает слабый рост и не образует спор. На среде Китт-Тароцци растет без газообразования, в виде равномерного помутнения с последующим просветлением среды и образованием осадка. При росте на агаре с кровью, по Цейсслеру, через 24-48 ч отмечаются мелкие росинчатые колонии диаметром 0,5-1 мм, они полусферические, прозрачные, блестящие с ровным краем и узкой зоной гемолиза вокруг. Чаще гемолиз отсутствует. Старые колонии теряют прозрачность, становятся серыми или белыми с неровными краями. В глубине сахарного агара столбиком штаммы, обладающие подвижностью, образуют колонии-пушинки с уплотненным центром. Неподвижные штаммы формируют колонии-чечевицы, иногда с отростками. На мозговой среде на 2-3-и сутки роста начинается почернение максимум которого наступает на 7 -9-й день. Биохимические свойства Этот микроорганизм не ферментирует ни один из сахаров. Только некоторые штаммы сбраживают глюкозу, кислоту при этом не обнаруживают, она нейтрализуется аммиаком, образующимся при протеолизе белков. Обладает высокой протеолитической активностью, разлагая желатину, свернутую сыворотку, яичный белок, коллаген. Кусочки нативных мышц, помещенные в жидкую питательную среду интенсивно растущей культурой Cl. histolyticum, подвергаются быстрому протеолизу. Индол не образуется, сероводород в культурах выделяется в значительном количестве. Устойчивость Устойчивость сравнима с другими патогенными анаэрооами - возбудителями газовой гангрены. Однако устойчивость спор может меняться в зависимости от штамма, но обычно они погибают при кипячении в течение 1 ч. Патогенность На жидких средах Cl. histolyticum образует сложный термолабильный токсин, в составе которого обнаружено пять компонентов. Альфа-токсин - летальный, некротический яд. Поражает центральную нервную систему: при внутривенном его введении гибель животных наступает при явлениях судорог и конвульсий. Бета-токсин - коллагеназа, разрушает нативный и денатурированный коллаген, а также желатину. Гамма-токсин - протеиназа, активируется цистеином, разрушает желатину и казеин, на коллаген не действует. Дельта-токсин - эластаза, протеолитический фермент. Эпсилон-токсин - гемолизин, чувствителен к действию кислорода. Cl. histolyticum синтезирует также дезоксирибо-нуклеазу. Среди токсических компонентов этого микроба преобладают протеолитические ферменты. Антигенная структура Антигены бета-, гамма- и дельта-токсинов различны и нейтрализуются только гомологическими антисыворотками. Clostridium sordellii Clostridium sordellii (Cl. oedematoides, Cl. oedematis sporogenes). Выделен Сорделлив 1922 г. при заболевании газовой гангреной человека. Этот способ рассматривают как патогенный вариант. Морфология и тинктоиальные свойства Cl. sordellii - полиморфные палочки с закругленными концами длиной 3-8 мкм и шириной 1,2-1,5 мкм. Бактерии распологаются изолированно по 2-3 вместе редко цепочками. Образует овальные, центральные или субтерминальные споры, обнаруживаемые в культурах. Имеет жгутики, перетрих, активно подвижен в молодых культурах. Капсулу не синтезирует. По Грамму красится положительно. Культивирование Относится к строгим анаэробам. На среде Китт-Тороции в течение 24 ч дает интенсивное помутнение и газ, в старых культурах часто образуется слизь в виде нитей, культуры издают неприятный гнилостный запах; на кровяном агаре, по Цейсслеру, через 24-48 ч появляются слабо выпуклые серовато-белые колонии с неровными краями, окруженные узкой зоной гемолиза. В глубине агара столбиком колонии имеют форму чечевицы, иногда с выростами по краю. Биохимические свойства. Ферментирует глюкозу, мальтозу, фруктозу и не расщепляет лактозу и сахарозу. Синтезирует активные протеазы, уреазу и фибринолизин. Молоко пептонизирует, разжижает желатину и свернутую сыворотку, переваривает мясо и яичный белок. Вырабатывает аммиак и сероводород, индола не образует, нитраты в нитриты не восстанавливает. Патогенность Этот микроб обнаруживался у крупного рогатого скота при заболевании анаэробной гемоглобинурией и энтеротоксемией, а также при брадзоте и энтеротоксемии овец. Вирулентные штаммы Cl. sordellii вырабатывают высокоактивный термолабильный летальный, некротический токсин, вызывающий желатинозный отек (разрушается при 60 °С). Этот токсин напоминает альфа-токсин Cl. novyi и нейтрализуется специфической антисывороткой. Синтезирует также лецитиназу С, лизирующую эритроциты мышей, в меньшей степени - кролика и почти не действует на эритроциты овцы. Имеет общие антигенные субстанции с лецитиназой Cl. perfringens А. Вырабатывает гиалуронидазу и кислотолабильный гемолизин типа тэта-токсина Cl. perfringens. Ферментами патогенности у этого микроба также являются уреаза и фибринолизин. Материалом для бактериологического исследования служат тканевый экссудат, кусочки пораженных мышц, паренхиматозные органы, а от трупов овец, кроме того, часть сычуга и тонкого отдела кишечника с содержимым (для одновременного исследования на брадзот и энтеротоксемию). При исследовании материала проводят микроскопию мазков, посевы на питательные среды, заражение лабораторных животных. Мазки окрашивают по Граму и Муромцеву. Наличие в препаратах большого количества грамположительных палочек служит ориентировочным признаком при подозрении на клостридиальную инфекцию. Предложен также люминесцентно-серологический метод идентификации патогенных анаэробов, однако он еще недостаточно разработан для широкого практического применения. Свежий материал пастеровской пипеткой засевают на среду Китт-Тароцци, а также МПБ и МПА. Среду Китт -Тароцци предварительно регенерируют - прогревают на водяной бане при 100°С в течение 15-30 мин, после чего быстро охлаждают до 45-50°С. Если материал несвежий, то готовят суспензию на физиологическом растворе, прогревают ее 15-20 мин при 80 °С с целью разрушения вегетативных клеток сопутствующих бактерий и проводят высевы. Одновременно материал засевают на глюкозо-кровяной агар в чашках. Посевы инкубируют в анаэробных условиях 24-48 ч, после чего изучают рост на среде Китт-Тароцци и глюкозо-кровяном агаре. Устанавливают морфологию и подвижность бактерий из культур на среде Китт-Тароцци. С жидкой питательной среды для выделения чистой культуры делают дробные посевы на чашки с глюкозо-кровяным агаром. Наличие характерных колоний и крупных грамположительных палочек в мазках дает основание для постановки предварительного микробиологического диагноза. Биопроба Производят подкожное или внутримышечное заражение морских свинок взвесью из патологического материала в дозе 1 мл и наблюдают за ними 7-8 дней. При наличии возбудителей злокачественного отека животные погибают через 16-48 ч с характерными патологоанатомическими изменениями, вызываемыми определенным видом анаэроба. Серологическая диагностика Для определения вида возбудителя применяют реакцию нейтрализации. Культуру или ее центрифугат в дозе 0,2 мл вводят внутривенно (можно внутрибрюшинно) белым мышам или по 0,1 мл внутрикожно морским свинкам. В случае гибели мышей в течение первых суток или появления некроза кожи у морских свинок ставят реакцию нейтрализации на мышах и морских свинках с диагностическими сыворотками О. регfringens типа A, Cl. novyi типов А и В, Cl. septicum, Cl. histolyticum и CI. Sordellii. Смеси токсин-антитоксин выдерживают 40 мин при 37°С в термостате и затем вводят по 0,5 мл внутривенно белым мышам из расчета две мыши на каждую пробирку или по 0,2 мл внутрикожно морской свинке. Результаты учитывают через 5-6 ч и окончательно на третьи сутки. Видовую и типовую принадлежность изучаемой культуры устанавливают по нейтрализующему действию гомологичной антитоксической сыворотки. Профилактика и меры борьбы Предупреждение злок. от. основывается на антисептической обработке ран и соблюдении асептики при хирургических вмешательствах, инъекциях лекарств. веществ и биопрепаратов. Своевременная обработка ран с иссечением поражённых тканей предупреждает развитие болезни. При оказании акушерской помощи необходимо производить антисептическую обработку рук и инструментария. При тяжёлых родах и задержании последа рекомендуется животным вводить антибиотики, орошать их половые пути дезинфицирующими веществами. Возможна специфическая профилактика злок. от. овец поливалентным анатоксином. Лечение Включает хирургическую обработку, применение антибиотиков, симптоматических средств. Рану промывают - 2—3%-ным р-ром перекиси водорода или перманганата калия и присыпают норсульфазолом и йодоформом. Показано также внутримышечное введение антибиотиков тетрациклинового ряда. |