1. Типы биотических взаимоотношений макро и микроорганизма

• Название: 1. Типы биотических взаимоотношений макро и микроорганизма
• Дата: 26.05.2020
• Размер: 232.49 Kb.
• Имя файла: mikra (1)4.docx
• Тип: Документы; #125526
• страница: 20 из 20

88.Общая схема лабораторной диагностики микозов

Микозы - болезни человека и животных, вызываемые паразитическими грибами.
Лабораторная диагностика микозов
Материалом для исследования являются пораженные волосы, чешуйки кожи, кусочки ногтей, кожные и ногтевые соскобы, гной, мокрота, пунктаты лимфатических узлов, костного мозга, внутренних органов, кровь, спинномозговая жидкость, желудочный сок, желчь, испражнения, биоптаты и др.
Материал берут стерильными инструментами (пинцетом, скальпе­лем, иглой, ножницами, ложечкой Фолькмана и т.д.); тампоны для взятия ма­териала не используются. Пато­логический материал обрабатывают смесью едкого калия с диметисульфоксидом (20 г КОН + 100 мл 60%-го ДМСО).
Препараты «раздавленной капли» исследуют под большим увеличением (х40) обычного или фазово-контрастного микроскопа.
Для диагностики микозов применяется широкий комплекс лабораторных исследований (микроскопический, микологический, аллергический, серологический, генетические методы, биопроба.
Микроскопический метод: исследование нативных и окрашенных препаратов с целью обнаружения элементов гриба (мицелия, спор).
Играет важную роль в диагностике микозов, т.к. дает возможность быстро выявить в нативных и окрашенных препаратах наличие и расположение клеток, спор гриба и нитей мицелия в патологическом материале.
Наиболее часто для окраски грибов применяют общепринятые методы Грама, Романовского-Гимза, Циля-Нильсена, Бурри. Разработан также широкий набор специальных методов окраски грибов.
Микологический метод: посев на специальные питательные среды (Сабуро и др.). Идентификация выделенной культуры гриба на основании характеристики колоний, микроскопического строения гриба, а также по биохимическим и другим признакам.
Микологический метод (выделение чистой культуры гриба и ее идентификация) является важнейшей составной частью лабораторного исследования при микозах.
Посевы производят на специальные плотные и жидкие (неселективные и селективные) питательные среды (среды Сабуро – мальтозо-пептонная, сусло-агар, Чапека; кукурузный, рисовый, картофельный, кровя­ной, шоколадный, сердечно-мозговой, угольно-дрожжевой агар и т.д.).
Селективные среды содержат антибиотики (левомицетин, стрептомицин, пенициллин и др.), красители (бенгальский розовый и др.) или дезинфицирующие вещества. В отличие от слабощелочных сред для выращивания большинства бактерий, среды для культивирования грибов имеют кислую или слабокислую рН (5,7-6,8).
Культивирование грибов осуществляют обычно при температуре 22-280 С в течение 2-4 недель. Идентификацию выделенной культуры гриба проводят на основании характеристики колоний (внешний вид, форма, консистенция, цвет), микроскопического строения гриба (строение мицелия, форма и расположение
конидиеносцев и конидий – спор), а также по биохимическим и другим признакам.
Серологический метод – определение антител к грибам или их антигенам в сыворотке крови больных микозами с помощью РА, РСК, РНГА, РИФ, ИФА, иммуноблотинга.
Аллергический метод – постановка внутрикожных аллергических проб. Проводят с грибковыми аллергенами, представляющих собой взве­си из убитых грибов, фильтраты обезвреженных нагреванием культур, полисахаридные и бел­ковые фракции клеток гриба. Результаты аллергических проб учитывают через 20 мин (не­медленные) и через 24-48 ч (замедленные реакции).
Для выявления грибковой сенсибилизации орга­низма также применяют иммунологические тесты in vitro (дегрануляция базофилов как тест гиперчувствительно­сти немедленного типа, а для выявления гиперчувстви­тельности замедленного типа - реакцию торможения миграции лейкоцитов или бласттрансформации лимфоцитов).
Гистологический метод направлен на обнару­жение гриба в тканях, полученных при биопсии и аутопсии.
Биопроба - заражение чувствительных жи­вотных (мыши, крысы, хомяки, кролики, морские свинки, соба­ки, кошки) различными способами (накожно, внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно, внутрисердечно, интрацеребрально, перорально, интратрахеально) для выделения чистой культуры гриба.

89. Общая схема лабораторной диагностики микотоксикозов

Микотоксикозы. Болезни животных и человека; характеризуются отравлением, которое возникает при поедании кор­мов (пищи), содержащих токсические продукты жизнедеятельности микроскопических грибов-плесеней — микотоксины (от греч. mykes — гриб и toxinum — яд).
Известно около 250 видов различных микроскопических грибов, продуцирующих 100 токсических метаболитов.
Природными субстратами грибов-продуцентов микотоксинов служат разнообразные сельскохозяйственные культуры. К микотоксинам чувствительны почти все виды домашних, диких животных, птицы и рыбы.
Наименование микотоксикоза происходит от названия токсина или гриба-продуцента. При диагностике микотоксикоза наибольшее внимание уделяют обнаружению токсина, поскольку гриб-продуцент в ряде случаев к моменту исследования погибает и, кроме того, один и тот же микотоксин могут синтезировать различные виды грибов.
Лабораторная диагностика микотоксикозов основана на ре­зультатах токсико-биологических, органолептических, микологи­ческих и физико-химических исследований.
Материал для исследования
В лабораторию направляют пробы всех кормов, входивших в суточный рацион животного в течение одного месяца до проявления болезни, а также остатки кормов из кормушек, содержимое желудочно-кишечного тракта павших животных и др.
Отбор средних проб корма проводят ветеринар­ные и зооинженерные специалисты с представителями предприятий. Отобранную среднюю пробу делят на две части, упаковывают в чистые сухие стеклянные банки объемом 2...3 л, гермети­чески закрывают и пломбируют.
Одну часть отправляют в лабо­раторию, другую хранят в хозяйстве в течение одного месяца в условиях, предотвращающих порчу или вторичное загрязнение. В документе указывают цель исследования, вид кормового средства, назначение, массу всей партии, место отбора пробы, основ­ные клинические признаки у больных животных.
Прилагают копию акта вскрытия трупов (при гибели животных), копию экспертиз ветеринарной лаборатории об исключении инфекционных болезней и отравлений животных химическими или растительными ядами (если такие исследования были проделаны лабораторией).
Органолептическое исследование
Определяют внешний вид, цвет, запах корма, выявляют признаки, отличающие дефектный корм от доброкачественного (изменение цвета; затхлый, плесне­велый или гнилостный запах; наличие на поверхности корма мицелия гриба и др.). О санитарном качестве зерна можно косвенно судить по цвету и состоянию зерновых оболочек.
Токсикологическое исследование
Проводят на различных био­логических моделях: кроликах, аквариумных рыбках гуппи породы Винер, белых мышах или сельскохозяйственных животных.
На кроликах ставят кожную пробу. К 50 г измельченного кор­ма добавляют 150 мл диэтилового эфира (эфир для наркоза) или ацетона. Смесь встряхивают при комнатной температуре с помощью шуттель-аппарата 3 ч. Экстракт фильтруют и выпаривают до полного исчезновения запаха.
Налет, оставшийся на стенках чашки, смывают небольшим количеством эфира и используют для биопробы, которую ставят на кроликах массой 2...2,5 кг.
Предварительно у кролика в области бедра, лопатки или бока выстригают участок кожи 6 см2. Пигментированная или с признаками шелушения кожа непригодна для исследования.
На одном кролике можно ставить не более четырех проб. На выстриженный участок кожи кролика наносят стеклянной лопаткой половину экстракта и легко втирают его. При восковидной консистенции экстракта его предварительно подогревают. Часть участка оставляют свободной от экстракта как контрольную. Через 24 ч наносят оставшийся экстракт.
Чтобы предупредить его слизывание, кролику надевают воротник (не менее чем на три дня). Учет проводят на следующий день после повторного нанесения экстракта и продолжают вести наблюдение в течение 3...5 дней в зависимости от реакции, после чего дают окон­чательную оценку:
а) корм нетоксичный — отсутствуют воспали­тельная реакция и изменения на коже;
б) корм слаботоксич­ный — шелушение кожи, отечность, болезненность, незначи­тельное утолщение кожи с образованием отдельных корочек;
в) корм токсичный — резкая гиперемия, отек, утолщение кожи, болезненность, появление язвы и струпа.
В качестве дополнительного теста определяют токсичность кормов на аквариумных рыбках. Методика основана на извлечении микотоксинов из фуражного зерна, продуктов его переработки и комбикормов, экстракции хлороформом и исследовании на рыбках гуппи.
В раствор экстракта помещают 5 рыбок незави­симо от пола и возраста. Ведут наблюдение в течение 24...30 ч. Оценка степени токсичности корма:
а) нетоксичный — при гибе­ли не более одной рыбки в течение 24 ч;
б) слаботоксичный — при гибели 2...4 рыбок;
в) токсичный — при гибели всех 5 гуппи за тот же отрезок времени.
Микологический анализ
Включает в себя выделение из кормов и идентификацию грибов-продуцентов микотоксинов. С этой целью из кормов делают посевы в чашки Петри с агаром Чапека, сусло-агаром или в жидкую среду Билай.
Грубые корма высевают во влажные камеры со средой Ван—Итерсона. Перед посевом агар расплавляют в водяной бане, после охлаждения до 45...50 ºС в него для подавления роста сопутствующей микрофлоры добавляют антибиотики (пенициллина 5*104 ЕД/л и стрептомицина 105 ЕД/л среды).
Для приготовления влажной камеры со средой Ван—Итерсона на дно чашки Петри кладут слой ваты с кружком фильтровальной бумаги по диаметру чашки и стерилизуют в сушильном шкафу. Перед посевом на фильтровальную бумагу на­ливают среду Ван—Итерсона до увлажнения бумаги, не создавая избытка влаги (около 5 мл).
Для выделения грибов из зерен последние раскладывают по поверхности фильтровальной бумаги по 10 штук, чтобы они не соприкасались одно с другим.
Посевы культивируют при 22...25 °С 3...10 дней до образования характерного спороношения, после чего проводят макро- и микроскопическое исследова­ние культур грибов с целью идентификации.
При макроскопическом исследовании учитывают различные признаки выросших колоний: цвет, форму, консистенцию, характер роста, образование склероциев, выделение пигмента, степень развития воздушного мицелия. Затем готовят препараты «раздавленная капля».
Микологическим крючком или препаровальной иглой берут частицы мицелия (желательно со спороношением из молодых культур с периферии, от старых — из центра колоний) и вносят их в фиксирующую жидкость.
Другой иглой материал расправляют на предметном стекле и покрывают по­кровным стеклом, слегка прижимая его. Микроскопируют с помощью малого объектива (х8, х40) или в иммерсионной системе при слегка спущенном конденсоре. Токсичность культур определяют методом кожной пробы на кроликах или другим способом.
Физико-химический анализ
Его цель — качественное и количе­ственное определение микотоксинов в кормах и других материалах с помощью различных методов — люминесцентного анализа, хроматографии и т.д.
При оценке результатов анализов необходимо учитывать данные всех исследований, а в случае постановки диагноза — клинические признаки и характер патологоанатомических изменений.

90. Толерантность. Сенсибилизация. Аллергия. Понятие.

Иммунологическая толерантность - отсутствие иммунного ответа при наличии в организме антигенов (толерогенов), доступных лимфоцитам.
Подразделяется на:
- естественную
- искусственную
Естественная иммунологическая толерантность обусловлена отрицательной селекцией аутореакгивных клонов лимфоцитов.
Искусственная иммунологическая толерантность возможна при введении чужеродных антигенов плоду или сразу после рождения (т. е. в период "иммунологической незрелости"), при разрушении или подавлении иммунной системы в результате облучения, введения цитотоксических агентов и др.
Сенсибилизация - приобретение организмом специфической повышенной чувствительности к чужеродным веществам — аллергенам, повышение его чувствительности к воздействию раздражителей. Это явление лежит в основе группы аллергических заболеваний.
Подразделяется на:
- активную
- пассивную
Для получения активной С. применяют не минимальные, а значительно большие дозы аллергена, неодинаковые для разных животных; величина доз зависит от способа и пути С. животного.
Так, морским свинкам вводят подкожно одно- или двукратно 0,01 мл лошадиной сыворотки или растворы другого белкового аллергена;. кроликам — 5—6 подкожных введений по 1—2 или 3—5 мл лошадиной сыворотки; собакам — 0,2—0,5 мл/кг одно- или двукратно.
Подкожный метод С. комбинируют с внутривенным: первый раз сыворотку вводят подкожно, второй — внутривенно.
Подобным образом можно сенсибилизировать кошек, африканских хорьков, волков, медведей, лис. Обезьян сенсибилизируют многократными внутривенными введениями небольших количеств яичного белка.
Пассивная С. возникает при введении здоровому животному сыворотки другого активно сенсибилизированного животного (для морской свинки 5—10 мл, для кролика 15—20 мл)
Аллергия – типовой иммунопатологический процесс, выраженный сверхчувствительностью иммунной системы организма при повторных
воздействиях аллергена на ранее сенсибилизированный этим аллергеном организм.
Это хроническое заболевание, вызванное неадекватной, нежелательной и неожиданной реакцией иммунной системы на воздействие веществ, которые обычно не приводят к заболеванию и не наносят вред животному или человеку, например: на продукты питания, лекарства, пыльцу растений, яд насекомых и др.
Некоторые симптомы аллергии: резь в глазах, отёки, насморк, крапивница, чихание, кашель и пр.
К аллергии относятся иммунные реакции (реакции гиперчувствительности I типа), при которых в организме человека вырабатываются антитела (иммуноглобулины Е) для специфических белков. Когда эти вещества приводят к гиперчувствительности организма, они называются аллергенами.