1. Типы биотических взаимоотношений макро и микроорганизма
 Скачать 232.49 Kb.
|
|
74.Лабораторная диагностика пастериллёзов. Лабораторная диагностика Бактериологическая Для выделения пастерелл используют только свежий патологический материал от нескольких трупов больных животных. Для первичного выделения и культивирования пастерелл пригодны только обогащенные питательные среды, в том числе МПА, с 5-10 % крови барана или лошади или сывороточный МПБ. Посевы из внутренних органов (кровь, печень, селезенка, легкие, трубчатая кость, головной мозг) и из мест поражения (лимфатические узлы, отечная ткань и др.) инкубируют в термостате при 37 0С в течение 24-48 ч. Из патологического материала готовят мазки и окрашивают по Граму, Романовскому-Гимзе или синькой Леффлера. Биологическая Биопроба Вирулентность выделенной культуры определяют путем постановки биологической пробы. Белых мышей или кроликов заражают культурой пастерелл, выделенной от крупного рогатого скота, свиней, овец, птиц (голубей, кур, уток). Белых мышей и кроликов заражают подкожно в дозе 0,2-0,5 мл суточной культурой пастерелл; голубей и 90-120 суточных цыплят – бульонной культурой в дозе 0,5 мл внутримышечно. Кроликов перед заражением исследуют на пастереллоносительство. С этой целью в течение трех дней до заражения им закапывают в носовые отверстия по две капли 0,5 % водного раствора бриллиантовой зелени. Появление гнойного истечения свидетельствует о пастереллоносительстве. Этих кроликов не используют в опыте. Для биопробы применяют также кровь или суспензию из паренхиматозных органов от павших животных. Через 24-48 ч после заражения культурой или исследуемым материалом подопытные животные погибают. На основании морфологии, культурально-биохимических свойств и биопробы ставят диагноз на пастереллез 75.Лабораторная диагностика рожи свиней и листериоза Рожа свиней (Erysipelas suum) - инфекционная болезнь, поражающая преимущественно молодых свиней (3-12 мес.), характеризующаяся лихорадкой, септицемией и воспалительной эритемой кожи, а при хроническом течении — эндокардитом и артритами. При отсутствии мер борьбы отличается высокой смертностью и весьма быстрым распространением среди не привитых против рожи свиней. Отдельные случаи этого заболевания регистрируют у крупного рогатого скота, ягнят, птицы и животных других видов. Возбудителем рожи свиней является бактерия Erysipelothrix insidiosa. Первые клинические признаки при остром течении болезни проявляются по истечению 3-4 дней инкубационного периода и выражаются в повышении температуры до 42°С, депрессии, запоре, слабости задних конечностей, конъюнктивите, застойных явлениях в легких, цианотической окраске кожных покровов, продолжительностью 2—4 суток. При молниеносном течении наблюдается отсутствие эритем, слабость, признаки энцефалита, а в случае подострого - крапивницы, кожная экзантема. Регистрируют так же случаи хронического течения болезни. В этом случае проявляются эндокардит, исхудание, некроз кожи и артриты. В лаборатории проводят бактериологическое исследование, которое включает: а) микроскопию мазков-отпечатков; б) выделение чистой культуры возбудителя рожи свиней из патматериала; в) биопробу. Для микроскопии готовят мазки-отпечатки из почек, селезенки, печени, пораженных участков кожи, сердца или из выделенной культуры возбудителя. Для получения чистой культуры возбудителя рожи высевы из патологического материала проводят на обычные и элективные питательные среды. Обычно посевы делают на хорошо просветленных мясопептонных бульоне и агаре или бульоне Хоттингера при рН 7,4-7,8. Посевы выдерживают в термостате при температуре 370С в течение 24-48 часов. Полученную культуру микроскопируют, изучают ее культуральные, биохимические свойства. Чистую культуру пересевают на полужидкий 0,2%-ный агар (для определения подвижности макрометодом), мясопептонную желатину, пептонную воду с полоской реактивной бумаги (для изучения возможности возбудителя выделять сероводород), на среды Гисса с углеводами, на индикаторные среды, в две пробирки с мясопептонным бульоном для проб на образование каталазы. Биопробу проводят на голубях и белых мышах. Заражают их в день поступления патологического материала суспензией в разведении 1:5, а затем суточной бульонной культурой. Заражение мышей производят подкожно в дозе 0,1-0,2 см3, голубей - внутримышечно в дозе 0,2-0,3 см3. В случае положительного диагноза на рожу свиней мыши должны погибнуть через 3-4 суток, а голуби - через 2-5 суток. Наблюдение за зараженными животными и птицей проводят в течение 6 суток. Из органов павших мышей и голубей делают высевы на питательные среды с целью выделения чистой культуры возбудителя рожи свиней. Из серологических методов диагностики применяют реакцию агглютинации (РА) в двух модификациях: пластинчатую и пробирочную, пробу роста. Наиболее чувствительными и достоверно отражающими иммунный статус организма являются проба роста и реакция агглютинации. Срок лабораторного исследования, с целью постановки диагноза на рожу свиней, составляет 7 дней. Обнаружение и идентификация возбудителя рожи свиней в чистых, смешанных культурах и патологическом материале определяют и с помощью люминесцирующей рожистой сыворотки. Листериоз - широко распространенное опасное природно-очаговое инфекционное заболевание человека и животных. Оно поражает центральную нервную систему, органы размножения, иногда протекает без симптомов. Вызывается бактерией Listeria monocytogenes. Это грамположительная палочка с закруглёнными концами, не образует спор и капсул, является факультативным анаэробом, растёт на обычных питательных средах. Встречается у животных почти всех видов. Наиболее часто поражаются овцы. Заболевание характеризуется поражением нервной системы, септическими явлениями, абортами и маститами. Бактериологическая диагностика включает микроскопическое исследование исходного материала, посевы на питательные среды, идентификацию выделенных культур по культурально-биохимическим, тинкториальным и серологическим свойствам, а также постановку биологической пробы на лабораторных животных. Микроскопическому исследованию подвергают мазки-отпечатки из головного мозга, внутренних органов и тканей. При приготовлении мазков-отпечатков чистым предметным стеклом 3 - 4 раза прикасаются к поверхности среза органа. Мазки готовят непосредственно из патматериала, а также после подращивания его проб при 37 °C в течение 4 - 6 часов. Мазки окрашивают по Граму, а также по методу флуоресцирующих антител. Бактериологическое исследование Из органов и обязательно головного мозга проводят обильные множественные посевы или предварительно готовят суспензию из головного мозга и паренхиматозных органов на физрастворе в соотношении 1:5 и из нее делают посевы. Для культивирования листерий используют обычные среды с добавлением 1% глюкозы и 2 - 3% глицерина или печеночный агар и бульон (pH среды 7,2 - 7,4), а также кровяной агар и элективные среды. Биологическое исследование (биопроба) Проводят на 2 - 3 белых мышах (масса 14 - 16 г). Животных заражают под кожу или внутрибрюшинно суспензией из головного мозга и внутренних органов или культурой в дозе 0,3 - 0,5 мл. При положительной биопробе животные погибают через 2 - 6 суток после заражения. При вскрытии отмечают множественные некротические очажки в печени, селезенке, почках. В отдельных случаях этих поражений может не быть. При наблюдении более 10 дней рекомендуется дополнительно делать посев из головного мозга. Очень чувствительны к подкожному заражению 5 - 6-дневные мыши-сосуны, которые гибнут через 18 - 36 часов. Для повышения эффективности биопробы белым мышам за 3 - 4 часа до заражения суспензией патматериала или культурой листерий инъецируют внутримышечно кортизон в дозе 5 мг. К заражению листериями восприимчивы и кролики. Показательно внутривенное заражение кроликов культурой листерий в дозе 0,5 - 1 млрд. микробных тел (по стандарту мутности), при этом количество моноцитов в крови зараженных животных увеличивается в несколько раз. Это является дополнительной характеристикой возбудителя болезни. Для серологического исследования берут пробы от животных любого возраста, подозреваемых в заболевании листериозом, а также от животных из поголовья, где заболевание подтверждено. От каждого животного берут из яремной вены 5 - 10 куб. см крови в стерильные пробирки или используют кровь, полученную при убое животного. Из отобранных проб крови получают сыворотку методом отстоя. Для свертывания крови и отстаивания сыворотки пробирки с кровью выдерживают 30 - 60 мин. при температуре 20 - 30 °C, а затем при температуре 4 - 10 °C. Сыворотка крови должна быть прозрачной, без признаков гемолиза. Допускается консервировать сыворотку 5-процентным раствором карболовой кислоты (1 - 2 капли на 1 куб. см сыворотки) или сухой борной кислоты (2% кислоты к объему сыворотки). Реакцию агглютинации (РА) в диагностике листериоза применяют для исследования сывороток животных с целью обнаружения листериозных агглютинирующих макроглобулиновых (19S) и микроглобулиновых (7S) антител. Результаты РА используют при постановке диагноза в комплексе с другими данными (бактериологическое исследование, эпизоотическая ситуация, клинические признаки, патологоанатомические изменения), а также для выявления скрыто больных и переболевших животных. Реакция признается положительной при обнаружении агглютинации с оценкой не менее чем на два креста в разведениях сыворотки 1:160 для овец, свиней и коз; 1:320 для крупного рогатого скота, лошадей; 1:40 для кроликов. 76.Лабораторная диагностика сальмонеллёзов Сальмонеллёз – заболевание, характеризующееся поражением жкт или токсикоинфекциями, вызванными различными серотипами возбудителя. Сальмонеллы чаще всего поражают молодняк, у которого заболевание проходит остро или подостро. У взрослых животных развиваются хронические патологии. Сальмонеллы относятся к семейству энтеробактерии, подразделяются на виды: - salmonella dublin - abortus - plinium - gallinarum - abortuc aqui - s. canis - s tibisuis - abortus ovis Лабораторная диагностика Бактериологический метод: Материал для исследования: при жизни – кал, сыворотка крови; посмертно – трупы мелких животных и птиц, паренхиматозные органы, мезентеральные лимфатические узлы, абортированный плод. Микроскопия: методы окраски: простой метод, по Граму; микрокартина: палочки с закругленными концами до 4 мкм, располагаются одиночно или попарно; грамотрицательные; спор не образуют; капсулу не образуют; Культивирование: посев на питательные среды: МПА, МПБ, дифференциально-диагностические – Эндо, Левина и др, накопительные; особенности выделения возбудителя: факультативные анаэробы; оптимальная температура 37oС; срок культивирования 18-20 часов. культуральные свойства: Все сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки, близкие к эшерихиям; на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка, на МПА – сочные, круглые с ровными краями серо-белого цвета колонии, на среде Эндо – бесцветные или розоватые колонии, на среде Левина – светло-фиолетовые колонии. После выделения чистой культуры лактозоотрицательных бактерий устанавливают их родовую принадлежность, затем дифференцируют до вида и сероварианта. С этой целью изучают их биохимические свойства и антигенное строение путем постановки пластинчатой реакции агглютинации (серологическая дифференциация). Биохимические свойства: обладают высокой сахаролитической активностью; для установления родовой принадлежности проводят посевы на короткий «цветной ряд» (среды Гисса) при этом сальмонеллы ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа, не расщепляют лактозу и сахарозу; дальнейшее изучение для установления видовой принадлежности проводят путем посевов на длинный «цветной ряд», в состав которого входят углеводы, и другие тесты; сальмонеллы не разжижают желатин, образуют сероводород, не образуют индол; дают положительную реакцию с метиловым красным: среда окрашивается в розово-красный цвет, отрицательную реакцию Фогеса-Проскауэра – желтое окрашивание среды. Биопроба: в необходимых случаях заражают подкожно белых мышей. Серологический метод: используют РА с сывороткой крови (кровью) при диагностике паратифозного аборта кобыл, поллуроза у кур; используют РА для дифференциации выделенной культуры сальмонелл с целью определения их вида и сероварианта; у сальмонелл различают соматический термостабильный антиген и жгутиковый термолабильный антиген; культуру сальмонелл предварительно проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками в РА на стекле. На основе общего для нескольких видов сальмонелл антигена они подразделяются на серологические группы, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита. При положительном результате с групповой сывороткой испытания той же культуры, выросшей на скошенном МПА с отдельными монорецепторными сыворотками, входящими в смесь поливалентной сыворотки. Затем эти же культуры испытывают с монорецепторными сыворотками, 1-й и 2-й фазы, обозначенными цифрами и малыми буквами – РИФ 77.Лабораторная диагностика клостридиозов(эмкара,столбняка,ботулизма). Эмфизематозный карбункул, или эмкар, — острая инфекционная болезнь, преимущественно крупного рогатого скота, а иногда и овец. Возбудитель — Clostridium chauvoei. В лаборатории проводят бактериоскопическое и бактериологическое исследования. Биологическую пробу ставят на морских свинках, заражая их суспензией из пораженных органов или суточной культурой. При наличии в материале возбудителя эмфизематозного карбункула морские свинки погибают через 18 - 48 ч. При вскрытии обнаруживают характерные для данной болезни изменения, а в мазках из органов и в отпечатках с печени - единично или попарно расположенные, равномерно или зернисто окрашенные палочки. Это позволяет дифференцировать их от сходных анаэробных микробов, которые в мазках обычно располагаются в виде длинных нитей или цепочек. Патологическим материалом для лабораторного диагноза служат кусочки пораженных мышц, отечный экссудат, кровь, взятые тотчас после гибели животного. Необходимо помнить: что запрещено вскрытие трупов животных, погибших от эмфизематозного карбункула (почвенная инфекция). Кусочки мышц отбирают без полного вскрытия трупа, если же труп случайно вскрыт, берут кусочки паренхиматозных органов. Исследование проводят по схеме: микроскопия мазков, посевы на питательные среды в анаэробных и аэробных условиях и заражение лабораторных животных. Микроскопия имеет ориентировочное значение. Мазки окрашивают по Граму и Муромцеву. С. chauvoei – грамположительная, полиморфная, спорообразующая, толстая с закругленными краями палочка. Бактерии располагаются одиночно или парами. Чистую культуру С. chauvoei удается выделить, если посевы делают сразу же после гибели животного. Но, как правило, материал бывает сильно загрязнен посторонней микрофлорой, поэтому применяют ряд методов подавления сопутствующей микрофлоры. Материал можно высушить в термостате, при этом вегетативные клетки гибнут, а споры сохраняют жизнеспособность. Рекомендуют также проводить посев в жидкую элективную среду с добавлением фенола, кристаллвиолета или азида натрия, которые ингибируют постороннюю микрофлору. Иногда материал прогревают при 80 0С в течение 15 минут. Исследуемый материал засевают пастеровской пипеткой в среду Китта-Тароцци, в МПБ, на МПА и глюкозо-кровяной агар в чашках (агар Цейсслера). Посевы инкубируют в анаэробных условиях при 37 0С в течение 24-48 ч. Со среды Китта-Тароцци для выделения чистой культуры делают дробный посев на чашки с глюкозо-кровяным агаром. Наличие характерных колоний на агаре и типичных по морфологии палочек в препаратах из колоний дают основание для постановки предварительного диагноза. Столбняк - (Tetanus), острая раневая инфекц. болезнь животных и человека, характеризующаяся выраженной рефлекторной возбудимостью и судорожными сокращениями мускулатуры тела. Возбудитель болезни — Clostridium tetani — подвижный, палочковидной формы микроб, анаэроб, образует споры, грамположителен. В естеств. условиях размножается в кишечнике травоядных, имеете с фекалиями попадает в почву и, образуя споры, на долгие годы инфицирует её. При росте в бульонной культуре и в тканях с пониженной жизнеспособностью микроб выделяет сильный токсин, 1 мл которого смертелен для взрослой лошади. Споры возбудителя весьма устойчивы во внешней среде. Бактериологическое исследование - исследуется материал, взятый из раны: гной, кусочки тканей, инородные тела, тампоны, закладываемые в рану при перевязке, перевязочный материал, содержащий выделения из раны, в случаях столбняка после родов или аборта берут на исследование выделения из влагалища и матки, при подозрении на столбняк у новорожденного исследованию подвергают выделения из пуповины, при исследовании трупа также берут материал из раны, если она имеется, из различных воспалительных очагов и старых рубцов. В некоторых случаях столбняка происходит генерализация инфекции, возбудитель может быть обнаружен во внутренних органах. Поэтому берут на исследование от трупа кровь, кусочки печени и селезенки. Исследование материала производится с целью обнаружения в нем столбнячного токсина и возбудителя столбняка. Обнаружение столбнячного токсина: исследуемый материал растирают в стерильной ступке, добавляют двойной объем физиологического раствора. Часть материала засевают в 2 флакона с жидкой питательной средой. Серологическое исследование - для постановки реакции нейтрализации на животных экстракт исследуемого материала вводят внутримышечно 2 мышам по 0,5 мл экстракта, а еще двум мышам те же дозы с противостолбнячной сывороткой. В зависимости от количества токсина симптомы столбняка у животных развиваются на первые или вторые сутки. У животных, получивших токсин с противостолбнячной сывороткой симптомы не появляются, что свидетельствует о наличии в исследуемом материале столбнячного токсина. Одновременно с постановкой реакции нейтрализации производят посев растертого материала в 2 флакона или 2 пробирки с питательной средой (бульон Мартена, бульон Вейнберга) под слоем вазелинового масла. Перед посевом из среды удаляют кислород путем кипячения 15 мин, а затем охлаждают до 40-50 °С и в нее добавляют 0,5 % глюкозы. После культивирования при температуре 35 °С на 2-е, 4-е, 6-е и 10-е сутки микроскопируют мазки из посевов и исследуют культуральную жидкость на наличие столбнячного токсина. Для этого ставят реакцию нейтрализации с противостолбнячной сывороткой. При обнаружении в посеве столбнячного токсина и наличии грамположительных палочек с крупными спорами дают положительный ответ. Биопроба Белые мыши или морские свинки - вводят экстракт исследуемого материала подкожно в заднюю лапку двум-трем животным. При наличии токсина через 2-4 сут у животных наблюдают тетанические судороги и гибель. Ботулизм - острое инфекционное заболевание. Его вызывают токсины, продуцируемые бактериями Clostridium botulinum. Ботулинические токсины поражают нервную систему, прочно связываясь нервными клетками. В результате инфекции возникают параличи, парезы (снижение силы мышц из-за повреждения нервных путей). В числе первых нарушается нервно-мышечная передача к мышцам глотки, гортани, глаз. Угнетаются функции дыхательных мышц вплоть до полного паралича. Возникают парезы желудочно-кишечного тракта, диафрагмы, межрёберных мышц. Развивается гипоксия всех видов. Микробиологическая диагностика Для проведения микробиологической диагностики из исследуемого биоматериала выделяют возбудителя и определяют моноспецифический токсин (А, В, Е и др.). Возбудитель обнаруживается путём посевов на питательные анаэробные среды. Для определения токсина используют биологическую пробу и реакцию нейтрализации на лабораторных мышах. Группе животных (обычно 5) вводят специально приготовленную жидкость с экстрактом культуры, полученной в исследовании биоматериала. Двум грызунам вводят живой материал, а трём — обезвреженный разными видами сыворотки по типам специфического токсина. Если две мыши, которым вводили живой материал, умирают, диагноз считается подтверждённым. Специфический токсин и необходимую для лечения сыворотку определяют по одному выжившему животному из трёх, которым вводили культуры Clostridium botulinum с сывороткой. Бактериологическая проба Бактериологическое исследование основано на особенностях жизненного цикла Clostridium botulinum. Собранный биоматериал помещают в пробирки на питательные среды и наблюдают за ростом бактерий. Клостридии типов А,B,С,D растут при температуре 30-40 °С, типа Е — 25-37 °С, типа G — 30-37 °С. Иммунодиагностика Для иммуноферментного анализа используют венозную кровь. Из неё получают сыворотку, в которую вводят соответствующие заболеванию антитела, помеченные ферментами. Образовавшийся иммунный комплекс вступает в реакцию с ферментом, что вызывает изменение цвета. Инструментальная оптическая оценка плотности цвета позволяет понять, заражено ли животное (или человек) ботулизмом. |