1. Возбудители холеры. Биологические свойства, факторы вирулентности. Правила забора и транспортировки материала в лабораторию. Особенности патогенеза
 Скачать 79.01 Kb.
|
8.Возбудитель туляремии. Биологические свойства, факторы вирулентности. Особенности патогенеза. Принципы лабораторной диагностики туляремии. Аллергодиагностика туляремии.Семейство – Brucellaceae Род – Francisella Виды – Francisella tularensis Francisella tularensis - возбудитель туляремии - острого или хронического системного природно-очагового заболева-ния человека и животных, которое характеризуется лихорадкой, интоксикацией и поражением лимфатических узлов. Возбудитель туляремии Francisella tularensis открыт в провинции Туляре (США, штат Калифорния) в 1911 г. Д. Мак-Коем и Ч. Чепином, детально изучен Э. Френсисом. Относится к роду Francisella с неясным систематическим положе-нием, входит во II группу патогенности. Выделяют три подвида (географические расы), отличающихся по антигенным свойствам и вирулентности: голарктический, распространенный в Европе, Азии и Северной Америке, не ферменти-рующий глицерин и умеренно патогенный для домашних кроликов; среднеазиатский, распространенный по доли-нам рек Средней Азии, ферментирующий глицерин и умеренно-патогенный для домашних кроли-ков; неарктический или американский, распространенный в Северной Америке, ферментирующий глицерин и высо-копатогенный для домашних кроликов. Голарктический подвид делится на биовары: японский, распространенный на Японских островах; эритромициночувствительный, распространенный в Европе, Азии, Северной Америке и чувстви-тельный к антибиотикам-макролидам; эритромициноустойчивый, распространенный в Восточной Европе и Западной Сибири. Морфология. Мелкие кокковидные палочки размерами 0,2-0,7×0,2 мкм, грамотрицательные, в мазках располагаются беспорядоч-но, неподвижные, спор не образуют, некоторые имеют капсулу. Возбудитель туляремии представляет собой очень мелкие (0,1-0,3x1,5 мкм) полиморфные (могут быть представлены кокками, овоидами, мелкими зернами, шарами или образованиями неправильной формы) грамотрицательные па-лочки, спор не образует, неподвижен, может образовывать слизистую капсулу. Размножение делением или почкова-нием. Почки образуются в результате асимметричного деления клетки (зона деления закладывается ближе к одному из полюсов клетки) путем врастания внутрь клетки цитоплазматической мембраны без вовлечения в этот процесс клеточной стенки или внутривакуолярно. Культуральные свойства. Строгие аэробы. Оптимальные условия культивирования: температура – 370С, рН – 6,8-7,2. Рост на питательных сре-дах замедленный – 3-5 суток. Требовательны к питательным средам: культивируются на средах с добавлением яичного желтка (среда Мак-Коя) или крови, цистина и глюкозы (среда Френсиса). В жидких питательных средах – рост в виде пленки. На плотных питательных средах вырастают крупные молочно-белые колонии с ровным краем. Аэроб. На простых питательных средах не растет. Культивируются на желточных средах или на средах с добавлением крови и цистеина. Оптимальная температура роста 37-38 °С. На плотных средах образует мелкие колонии молоч-нобелого цвета. Хорошо культивируется в желточном мешке куриного эмбриона. При культивировании на искус-ственных питательных средах происходят аттенуация бактерий и превращение их из вирулентной S-формы в авиру-лентную и неиммуногенную R-форму. Вакцинные штаммы бактерий представляют собой промежуточную форму из-менчивости, которую обозначают как S-R-вариант. Биохимическая активность. Биохимическая активность очень низкая, ферментируют до кислоты глюкозу и мальтозу, непостоянно ферментируют маннозу, левулезу, образуют сероводород. Слабо выражена. Ферментируют глюкозу, мальтозу и некоторые другие сахара до кислоты. По отношению к глицерину и распространению в природе выделяют 3 географические расы (подвиды) Francisella tularensis: · Голарктическая – не ферментирует глицерин, умеренно патогенна для человека и домашних крыс, распространена в Европе и Азии; · Среднеазиатская – ферментирует глицерин, умеренно патогенна для человека, встречается на территории нашей страны и Средней Азии; · Неарктическая – ферментирует глицерин, высоко патогенна для человека, распространена в Северной Америке. Образуют аммиак, Н2S, индол не образуют. Антигенная структура. содержит соматический О- и поверхностный Vi-антигены. Имеют антигенную близость с бруцеллами. В R-форме те-ряют Vi-антиген, а вместе с ним вирулентность и иммуногенность. 1. О-антиген – соматический, ЛПС КС. 2. Vi-антиген – разновидность капсульного антигена, обладает вирулентными и иммуногенными свойствами. Факторы патогенности. Неарктический подвид обладает высокой патогенностью для человека при кожном пути заражения, голарктический и среднеазиатский умеренно патогенны. Вирулентными являются S-формы колоний. Патогенные свойства связаны с оболочечным антигенным комплексом и токсичными веществами типа эндотоксина. Возбудитель патогенен для млекопитающих многих видов, но степень патогенности различна. Из лабораторных животных к нему высокочувстви-тельны морские свинки и белые мыши. Токсины – эндотоксином. Ферменты – гиалуронидаза, нейроминидаза, фибринолизин. Структурные и химические компоненты клетки: пили I порядка, белки клеточной стенки, капсула. Резистентность. Хорошо сохраняется во внешней среде, особенно при низких температурах: · В воде, почве при +40С – сохраняют жизнеспособность до 4 месяцев; · На зерне при +10С – 9 месяцев, при 20-250С 1-2 мес; · В шкурах животных, погибших от туляремии – до 1 месяца. Чувствительны к повышенной температуре (до 600С – погибают за 20 минут, кипячение – 1-2 минуты), УФ лучам, дей-ствию дезинфиктантов (5% формалин убивают за 2-5 минут), антибиотикам (стрептомицину, тетрациклину, гентами-цину, канамицину). В окружающей среде бактерии могут долго сохраняться при низкой температуре, особенно в зерне и соломе. Они нестойки к высоким температурам и УФлучам. При 60 °С гибнут через 5-10 мин, а при кипячении - через 1-2 мин. При 0-4 °С сохраняются в воде и фураже до 6 мес. Чувствительны к большинству антибиотиков (стрептомицин, тетрациклин, левомицетин, эритромицин и др.). Высокочувствительны к обычно применяемым анти-септикам и дезинфектантам (лизол, хлорамин убивают через 3-5 мин). Эпидемиология. Экологическая ниша: резервуаром возбудителя в естественных условиях являются дикие животные (около 50 видов), главным образом мелкие грызуны и зайцы, среди домашних животных - овцы, свиньи, крупный рогатый скот. Туляремия - природно-очаговое заболевание. Источником инфекции в естественных условиях являются главным об-разом мелкие грызуны (полевые мыши, водяные крысы, ондатра, хомяки) и зайцы. На территории природных очагов туляремией могут заражаться овцы, свиньи, крупный рогатый скот. Передача возбудителя среди млекопитающих чаще всего происходит через кровососущих членистоногих: иксодовых клещей, комаров, в меньшей степени блох, слепней и гамазовых клещей. Человек заражается контактным, алиментарным, аэрозольным и трансмиссивным пу-тями. Восприимчивость человека очень высока. Туляремия распространена в Европе, Азии, Северной Америке, в России - встречается в виде спорадических случаев или эпидемических вспышек. Болеют чаще жители сельской местности и лица, имеющие профессиональный контакт с грызунами (сельскохозяйственные работы, охота и т.д.). Типичный зооноз. Резервуар и источник инфекции – многочисленные виды грызунов и другие животные (всего 82 вида). Механизмы передачи: · Трансмиссивный (при укусе кровососущими насекомыми – иксодовыми клещами, комарами, слепнями); · Фекально-оральный (путь – алиментарный и водный – через инфицированные продукты и воду); · Контактный (путь – прямой контактный –попадание возбудителя на поврежденные кожные или слизистые покро-вы при снятии шкур, сборе павших грызунов); · Аэрогенный (путь – воздушно-пылевой – описан при вдыхании содержащей возбудителей пыли от зерна, соломы). Инкубационный период – 2-8 дней. Патогенез и клинические особенности. Возбудитель туляремии попадает в организм человека через кожу, слизистые оболочки глаз, дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта. В патогенезе туляремии выделяют несколько фаз: внедрение и первичную адаптацию возбудителя, лимфогенное распространение, первичные регионарно-очаговые и общие реакции организма, гемато-генные метастазы и генерализацию, вторичные очаги, реактивно-аллергические изменения, обратный метаморфоз и выздоровление. Ведущее значение в патогенезе имеет фаза лимфогенного распространения возбудителя. В месте его внедрения нередко развивается первичный аффект с регионарным первичным лимфаденитом. Периаденит вы-ражен умеренно. Микроб и его токсины проникают в кровь, что приводит к бактериемии и генерализации процесса, метастазированию и развитию вторичных туляремийных бубонов. Инкубационный период длится от нескольких часов до 3 нед, в среднем 3-7 дней. Болезнь начинается остро, внезап-но, без продрома, с повышения температуры тела до 38-39 °С; появляются озноб, резкая головная боль, интоксика-ция. Клиническая картина обусловлена характером пораженных органов. Различают бубонную, язвенно-бубонную, глазобубонную, абдоминальную, легочную и генерализованную (септическую) клинические формы туляремии. Бо-лезнь протекает длительно (около месяца). Летальность при заражении неарктическим подвидом около 6%, при за-ражении другими подвидами - 0,1% и ниже. Возбудители проникают в организм человека через кожу, слизистые оболочки глаз, дыхательных путей или ЖКТ. В области входных ворот развивается первичный аффект в виде последовательно сменяющих друг друга пятна, папу-лы, везикулы, пустулы и язвочки. Затем возбудитель попадает в лимфоузлы, где поглощаются фагоцитами, внутри которых активно размножается. Из лимфоузлов F. tularensis попадает в кровь (бактериемия), при этом часть бактерий погибает, что обуславливает интоксикацию. Затем наступает стадия очаговых поражений с образованием гранулем в селезенке, печени, легких, костном мозге. Клиническое течение инфекции зависит от входных ворот, в соответствии с чем выделяют формы заболевания: · Бубонную; · Легочную; · Желудочно-кишечную; · Септическая. Иммунитет. Иммунитет после перенесенной инфекции сохраняется длительно, иногда пожизненно; развивается аллергизация организма к антигенам возбудителя. Постинфекционный иммунитет – гуморальный и клеточный, стойкий, пожизненный. Микробиологическая диагностика Для диагностики применяют все микробиологические методы. Исследование проводят в режимных лабораториях. Материал для исследования - кровь, пунктат из бубона, соскоб из язвы, отделяемое конъюнктивы, налет из зева, мокрота и др. - определяется клинической формой болезни. Кроме того, на исследование можно брать воду и пище-вые продукты. В природных очагах туляремии проводят плановые систематические исследования для выделения возбудителя туляремии от грызунов. Бактериологический метод диагностики туляремии у человека редко дает положительные результаты. Чистую куль-туру, как правило, выделяют после накопления ее на восприимчивых лабораторных животных. Для биопробы ис-пользуют белых мышей и морских свинок. Мышей заражают подкожно, морских свинок - внутрибрюшинно; живот-ные погибают на 3-6-е сутки, иногда позднее. Зараженных животных содержат в особых условиях (как при диагно-стике чумы) и наблюдают за ними в течение 6-14 дней. Если экспериментальные животные на протяжении 7-15 дней не погибают, их забивают на 15-20-й день и трупы вскрывают. При наличии туляремии обнаруживают патолого-анатомические изменения в виде продуктивного процесса с некрозом. Чистую культуру выделяют из внутренних органов на желточной среде, глюкозоцистеиновом кровяном агаре и др. При идентификации опираются на морфоло-гию и тинкториальные свойства возбудителя, отсутствие роста на МПА, агглютинацию гомологичной сывороткой, патогенность для белых мышей и морских свинок. Чистую культуру можно выделить, заражая 12-дневные куриные эмбрионы в желточный мешок. Для выделения чистой культуры возбудителя из воды ее центрифугируют или филь-труют через бактериальные фильтры и осадком заражают лабораторных животных. При исследовании пищевых про-дуктов их промывают МПБ, центрифугируют и осадком заражают лабораторных животных. Одновременно с бактериологическим исследованием из исследуемого материала готовят мазки-отпечатки и окра-шивают их по Романовскому-Гимзе. В мазках из органов можно обнаружить мелкие кокковидные и палочковидные бактерии, которые располагаются внутриклеточно и в виде скоплений, образуя нежную капсулу. Для серодиагностики используют развернутую реакцию агглютинации, РПГА, РИФ. Аллергические пробы применяют для ранней диагностики туляремии (с 5-го дня от начала болезни). Используют два вида тулярина и соответственно два способа их введения: накожный и внутрикожный. Так как концентрация аллер-гена в обоих видах тулярина различная, недопустимо использовать накожный тулярин для внутрикожной пробы и наоборот. Результаты аллергической реакции учитывают в динамике через 24, 36, 48 ч. За положительный результат принимают инфильтрат диаметром не менее 5 мм. У вакцинированных или переболевших туляремией лиц в течение ряда лет аллергические пробы остаются положительными (анамнестическая реакция). Специфическая профилактика. По эпидпоказаниям живой аттенуированной туляремийной вакциной. Для специфической профилактики применяют живую туляремийную вакцину, полученную в 1930 г. отечественными военными врачами Б.Я. Эльбертом и Н.А. Гайским из штамма 15. Вакцина обеспечивает прочный иммунитет на 5-6 лет при заражении европейским и голарктическим подвидами и эффективна против американской разновидности возбудителя. Вакцинацию проводят по эпидемиологическим показаниям, а также лицам, относящимся к группам риска. Допускается одновременная вакцинация против туляремии и бруцеллеза; туляремии и чумы, а также против туляремии и некоторых других инфекций. Неспецифическая профилактика такая же, как при других зоонозах, и направлена в первую очередь на борьбу с гры-зунами. Специфическое лечение – не разработано Для лечения применяют антибиотики аминогликозиды, макролиды и фторхинолоны. При затяжном течении прово-дят комбинированную антибиотикотерапию и вакцинотерапию с применением убитой лечебной вакцины, которую вводят различными путями в дозах от 1 до 15 млн микробных тел с интервалом 3-6 дней. Курс лечения 6-10 инъек-ций. 10.Возбудители бруцеллеза. Биологические свойства, факторы вирулентности. Особенности патогенеза. 11.Принципы лабораторной диагностики бруцеллеза. Аллергодиагностика бруцеллеза Семейство – Brucellaceae Род – Brucella Виды – наиболее патогенные для человека – В. melitensis, B. abortus, B. suis. Возбудители бруцеллеза относятся к роду Brucella с неясным систематическим положением, который включает в себя следующие виды: B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. ovis, B. canis, B. neotomae, относящиеся ко II группе патоген-ности. Название рода связано с именем Д. Брюса, открывшего в 1886 г. возбудителя бруцеллеза. Морфология. Мелкие кокковидные палочки размерами 0,5-0,7×0,6-1,5 мкм, грамотрицательные, в мазках располагаются беспоря-дочно, неподвижны, спор не образуют, свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу. Бруцеллы - мелкие грамотрицательные микробы (0,4-0,6x0,5-3 мкм) шаровидной, овоидной или палочковидной формы. Спор не образуют, неподвижны. При действии специфического бактериофага или при культивировании на среде с 10% иммунной сывороткой образуют нежную капсулу. Способны образовывать стабильные и нестабильные L-формы. Культуральные свойства. Аэробы, капнофилы. Требовательны к питательным средам, на простых питательных средах не растут, растут на сложных питательных средах (сывороточно-декстрозный и кровяной агар). Характеризуются медленным ростом на питательных средах, посевы инкубируют не менее 3 нед. В жидких средах вызывают равномерное помутнение с не-большим осадком, но без пленки на поверхности. На плотных средах формируют очень мелкие круглые выпуклые гладкие прозрачные голубовато-серые колонии. Гемолиза не дают, пигмента не образуют. Температурный оптимум роста 37 °С, оптимум рН 6,6-7,4. Под действием антибиотиков превращаются в L-формы. Хорошо культивируются в желточном мешке куриного эмбриона. Строгие аэробы. Оптимальные условия культивирования: температура – 370С, рН – 6,8-7,2. Особенностью бруцелл бычьего типа является их потребность в повышенном содержании в атмосфере углекислого газа (5-10% СО2). Харак-терен медленный рост бруцелл – первые генерации появляются через 1-3 недели и более. При пересеве лаборатор-ных культур рост наблюдается через 1-2 дня. Требовательны к питательным средам: хорошо растут на печеночном, сывороточном или кровяном агаре. В жидкой среде наблюдается рост в виде диффузного помутнения. На плотных питательных средах бруцеллы образуют перламутровые мелкие выпуклые гладкие колонии с нежной зернистостью (S-форы). Возможна диссоциация в R-формы. Биохимическая активность. Биохимическая активность очень низкая: бруцеллы содержат каталазу и оксидазу, нитраты редуцируют в нитриты, цитраты не утилизируют, реакция Фогеса-Проскауэра отрицательная, продуцируют сероводород, разлагают мочеви-ну. Выражена слабо. Ферментируют глюкозу и арабинозу до кислоты без газа. Восстанавливают нитраты, разлагают бел-ки с образованием Н2S, индол не образуют. Разделение на виды основано на биохимических и культуральных различиях. Видовые различия бруцелл Антигенная структура. Антигенная структура сложная и близкая у разных видов бруцелл. Имеют соматический О- и капсульный Vi-антигены. Различные виды бруцелл различаются количественным соотношением А- (абортус) и М- (мелитензис) антигенов; имеются G- и R-антигены. У бруцелл выявлено до 15 антигенных фракций: родовые и видовые поверхностные антигены. 1. Выделяют два соматических антигена – А и М, причем М-антиген доминирует у В. melitensis, А-антиген преоблада-ет у B. abortus и B. suis. 2. Третий – L(Vi)-антиген – поверхностно расположенный капсульный антиген вирулентности, термолабильный, име-ет сходство с Vi-антигеном сальмонелл. |