1. Возбудители холеры. Биологические свойства, факторы вирулентности. Правила забора и транспортировки материала в лабораторию. Особенности патогенеза
 Скачать 79.01 Kb.
|
|
Факторы патогенности. Бруцеллы являются факультативными внутриклеточными паразитами млекопитающих, включая человека. Обладают высокой инвазивной способностью, образуют фермент агрессии гиалуронидазу. Основными факторами вирулентно-сти являются эндотоксин и капсула. Токсины. Бруцеллы обладают эндотоксином (ЛПС КС), имеющим высокую инвазивную способность. Ферменты – гиалуронидаза и нейроминидаза. Структурные и химические компоненты клетки: пили I порядка и белки клеточной стенки (адгезивные свойства), капсула. Считают, что бруцеллы обладают высокой инвазивностью: могут проникать в организм человека через неповре-жденные кожные и слизистые покровы. Также являются факультативными внутриклеточными паразитами. Резистентность. Бруцеллы длительно сохраняются в окружающей среде: в молоке - до 45 дней, в масле, сливках, простокваше и све-жих сырах - в течение всего периода их пищевой ценности, в брынзе - до 60 дней, в замороженном мясе - свыше 5 мес, в засоленных шкурах - 2 мес, в шерсти - до 3-4 мес, в воде - до 5 мес, в почве - до 3 мес. Малоустойчивы к высо-кой температуре, при кипячении погибают моментально, при 60 °С - в течение 30 мин. Чувствительны к большинству антибиотиков, действию обычно применяемых антисептиков и дезинфектантов в обычных концен- трациях. Бруцеллы довольно устойчивы во внешней среде: · В воде и влажной почве – они могут сохраняться до 5 месяцев; · В молоке – 9 месяцев; · В сыре – до 1 года; · Они устойчивы к низким температурам и в замороженном мясе выживают до 5 месяцев. Чувствительны к повышенной температуре (до 600С – погибают за 30 минут, кипячение – мгновенно), действию дез-инфиктантов (3% раствор хлорной извести, 1% хлорамин, 2% формалин убивают их за 5 минут), антибиотикам (стреп-томицину, тетрациклину, рифампицину). Эпидемиология. Резервуаром возбудителя в природе являются сельскохозяйственные и домашние животные - крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, реже олени, лошади, собаки, кошки. Бруцеллез распространен на всех континентах, особенно в странах с развитым животноводством. Источник инфекции - больные сельскохозяйственные и домашние животные. Возбудителями бруцеллеза крупного рогатого скота явля-ются B. abortus, мелкого рогатого скота - B. melitensis, свиней - B. suis, оленей - B. neotomae, собак - B. canis, баранов - B. ovis. Наибольшее эпидемическое значение для человека имеют B. melitensis, B. abortus и B. suis. Больной человек не заразен, является биологическим тупиком. Больные животные выделяют бруцеллы с молоком, мочой, калом, околоплодными водами и др. Человек заражается главным образом алиментарным путем (сырое молоко, молочные продукты, мясо и др.) и контактно при уходе за больными животными и т.п. Восприимчивость человека к бруцеллам высокая. Заболевание носит спорадический характер или возникает в виде отдельных вспышек, что зависит от видо-вой принадлежности возбудителей. От человека к человеку заболевание не передается. Типичный зооноз. Основной резервуар и источник инфекции – больные домашние животные: овцы, козы, свиньи, КРС. Механизмы передачи: · Фекально-оральный (путь – алиментарный – большую опасность представляет сырое молоко и молочные продук-ты, не подвергающиеся в процессе приготовления тепловой обработке, например, сыр, брынза); · Контактный (путь – прямой контактный – при попадании возбудителя на поврежденные кожные или слизистые покровы при уходе за больными животными); · Аэрогенный (путь – воздушно-пылевой – описан при вдыхании воздушно-пылевой смеси, содержащей инфициро-ванные частицы шерсти, навоза, земли во время уборки помещения). Для бруцеллеза свойственен выраженный профессиональный характер заболевания! Инкубационный период – 1-4 недели (может длиться до 2-3месяцев). Патогенез и клинические особенности. Бруцеллы проникают в организм через кожу или слизистые оболочки и распространяются по лимфатическим путям. В отличие от туляремии, сибирской язвы, при бруцеллезе на месте внедрения не развивается первичный аффект. Иногда наблюдается увеличение регионарных лимфатических узлов. Дальнейшая судьба возбудителя зависит от вирулентности, величины инфицирующей дозы, иммунореактивности организма. При попадании в организм боль-ших доз вирулентных бруцелл очень быстро может наступить диссеминация возбудителя. При малых инфицирующих дозах и пониженной вирулентности бруцеллы могут длительно задерживаться в регионарных лимфатических узлах, фаза генерализации запаздывает или вообще отсутствует. В основе развивающихся в ранний период бруцеллеза диффузных изменений сосудов и паренхиматозных органов лежит токсическое действие бруцелл. Из кровотока бруцеллы оседают в воспалительных очагах, лимфатических узлах, селезенке и костном мозгу, где длительно могут сохраняться, располагаясь внутриклеточно. При обострениях процесса бруцеллы вновь усиленно размножаются, по-падают в кровоток, вызывая повторные волны генерализации. Длительное пребывание возбудителя в организме приводит к его аллергизации. Со 2-3 нед, а иногда и с самого начала заболевания на первый план в патогенезе вы-двигаются аллергические поражения. Аллергия при бруцеллезе играет двоякую роль. С одной стороны, аллергиче-ское воспаление лежит в основе большинства клинических проявлений болезни, особенно в хронической стадии. С другой стороны, аллергическая реакция препятствует распространению бруцелл в организме, что имеет большое значение для предупреждения повторной генерализации процесса. Клиническая картина. Инкубационный период колеблется в пределах 1-3 нед, но может затягиваться и до нескольких месяцев. Болезнь начинается постепенно, иногда остро. Болезнь протекает с длительной лихорадкой, ознобом, пот-ливостью, болями в суставах, мышцах, с симптомами поражения сердечно-сосудистой, нервной, мочеполовой си-стем, опорно-двигательного аппарата и др. Клиническая картина бруцеллеза характеризуется большим полимор-физмом и зависит от характера пораженного органа. Бруцеллы проникают в организм человека через слизистые оболочки или кожные покровы, не оставляя никаких из-менений в области входных ворот. Лимфогенным путем возбудители заносятся в региональные лимфоузлы и под-вергаются незавершенному фагоцитозу. С макрофагами возбудители проникают в кровоток и диссеминируют в пе-чень, селезенку, почки, костный мозг, суставы, эндокард. В пораженных органах образуются очаги некроза, окружен-ные инфильтратами. Появляются признаки очаговых поражений со стороны опорно-двигательного аппарата, нерв-ной, сердечно-сосудистой, мочеполовой и других систем. Внутри фагоцитов бруцеллы способны формировать L-формы и длительно персистировать в организме. Переход в исходные формы обуславливает рецидив болезни. Иммунитет. Иммунитет при бруцеллезе клеточно-гуморальный, в основном нестерильный и относительный. После выздоровле-ния иммунитет угасает, возможна реинфекция. Ввиду относительности иммунитета большие инфицирующие дозы бруцелл могут вызвать его прорыв у больных хроническим или латентным бруцеллезом, что ведет к тяжелому тече-нию болезни. Постинфекционный иммунитет – гуморальный (образуются неполные антитела) и клеточный, нестойкий, нестериль-ный. Формируется ГЗТ. Микробиологическая диагностика Для диагностики используют методы: бактериологический, серологический, биологический, аллергологический. Се-родиагностику и аллергические пробы проводят в базовых лабораториях, чистую культуру бруцелл выделяют и иден-тифицируют в специальных лабораториях с соблюдением правил техники безопасности. Материалом для исследования служат кровь, пунктат красного костного мозга, моча, молоко и молочные продукты, кусочки органов. Посев крови для выделения гемокультуры проводят в первые дни болезни при наличии лихорадки, при отрицатель-ных результатах исследование многократно повторяют (бактериемия может наблюдаться в течение года и более). Учитывая медленный рост бруцелл, посевы выдерживают в термостате до 1 мес. Пунктат костного мозга засевают на те же среды; миелокультуру при бруцелл могут быть получены в остром, подостром и даже хроническом периоде заболевания. Мочу для выделения урино-культуры предварительно центрифугируют и из осадка делают посевы. Уринокультуры выделяют как при остром бруцеллезе, так и в период реконвалесценции. Биологический метод исследования используется для выделения бруцелл из материалов, контаминированных по-сторонней микрофлорой или содержащих небольшое количество возбудителей. Для биопробы используют белых мышей и морских свинок. Животных заражают кровью внутрибрюшинно, осадком мочи и молока - подкожно. Через 20-30 дней у зараженного животного берут кровь и ставят с ней реакцию агглюти-нации. Затем животных забивают, вскрывают и делают посевы крови из сердца, взвеси внутренних органов и лимфа-тических узлов. Выделенные чистые культуры бруцелл дифференцируют по способности роста при отсутствии повышенной концен-трации углекислого газа, по выделению сероводорода, чувствительности к бруцеллезному фагу и бактериостатиче-скому действию анилиновых красителей (фуксина и тионина). В сыворотке больных бруцеллезом накапливаются агглютинирующие (вначале IgM, затем IgG); неполные блокирую-щие (IgA, IgG) антитела. Для их выявления с диагностической целью используют реакцию Райта (развернутая агглю-тинация) и Хеддельсона (пластинчатая агглютинация), РПГА, ИФА, реакцию Кумбса. Реакция агглютинации - один из основных диагностических методов при бруцеллезе у людей и сельскохозяйственных животных. Агглютинины, как правило, появляются в крови в ранние сроки после заражения, поэтому наибольшую диагностиче-скую ценность реакция агглютинации представляет при остром бруцеллезе. При остром бруцеллезе высокий титр антител определяется также в РПГА и ИФА. Реакция Кумбса рекомендуется в качестве диагностического метода при хронических и латентных формах бруцеллеза. В условиях массового обследования на бруцеллез применяют пластин-чатую реакцию агглютинации Хеддельсона в сочетании с кожно-аллергической пробой Бюрне. Аллергологический метод применяют для выявления ГЗТ к бруцеллам, наблюдающееся у больных бруцеллезом, инфицированных бруцеллами лиц и привитых живой бруцеллезной вакциной. Ее ставят с 15-20-го дня болезни. Ал-лергическая реакция бывает положительной в течение многих лет после перенесенного заболевания и у привитых. Серологические реакции и кожноаллергическая проба по своему диагностическому значению неравноценны, вслед-ствие чего не могут заменить друг друга. Это обусловливает необходимость применения комплексного сероаллерги-ческого метода, являющегося наиболее надежным способом диагностики бруцеллеза. Специфическая профилактика. Проводят вакцинацию по эпидпоказаниям живой вакциной из аттенуированного штамма B. abortus. Для специфической профилактики применяют живую бруцеллезную вакцину, предложенную П.А. Вершиловой из штамма ВА-19А, полученную из B. abortus и создающую перекрестный иммунитет по отношению к другим видам бруцелл. Вакцинацию проводят по эпидемиологическим показаниям. Неспецифическая профилактика такая же, как и при других зоонозах, и сводится в основном к санитарно-ветеринарным мероприятиям. Специфическое лечение – противобруцеллезный иммуноглобулин, для лечения хронических форм заболевания применяется убитая бруцеллезная вакцина. При остром и хроническом бруцеллезе с выраженными признаками активности необходимо назначение антибиоти-ков широкого спектра (эритромицин, рифампицин). Антибиотики не действуют на бруцеллы, расположенные внутри-клеточно, поэтому их можно назначать только при наличии бактериемии, а при хроническом бруцеллезе они неэф-фективны. Кроме того, антибиотики не предупреждают рецидивов бруцеллеза, поэтому широко применяется специ-фическая иммунотерапия убитой лечебной бруцеллезной вакциной (5-7 внутривенных вливаний в нарастающих до-зах 1-2 раза в неделю) или бруцеллина (внутримышечно 2 раза в неделю). При острых и рецидивирующих формах назначают бруцеллезный иммуноглобулин. 12.Возбудитель сибирской язвы.Биологические свойства, факторы вирулентности. Особенности патогенеза. 13.Принципылабораторной диагностикисибирской язвы. Аллергодиагностика сибирской язвы Семейство – Bacillaceae Род – Bacillus Вид – Bacillus anthracis (от греч. аnthrax – уголек) Морфология. Сибиреязвенные бациллы - очень крупные (5-10*1-2 мкм) грамположительные палочки с обрубленными концами, в мазке из чистой культуры располагаются в виде длинных цепочек (стрептобациллы), слегка утолщенных на концах и образующих сочленения («бамбуковая трость»). Неподвижны. Образуют расположенные центрально споры, а также капсулу. В клиническом материале располагаются парами или короткими цепочками, окруженными общей капсулой. Капсулы образуются только у бактерий, выделенных из организма либо выращенных на питательной среде, содер-жащей животный белок (кровь, нативная сыворотка). Капсулы более устойчивы к действию гнилостной микрофлоры, чем бактериальные клетки, и в материале из гнилых трупов нередко можно обнаружить лишь пустые капсулы («те-ни» микробов). Для обнаружения капсул мазки окрашивают метиленовым синим Леффлера (клетки синие, капсулы малиново-красные). Споры сибиреязвенных бацилл овальной формы размером 0,8-1,0x1,5 мкм, располагаются цен-трально или субтерминально, не превышают диаметра клетки, сильно преломляют свет (могут быть выявлены в на-тивном виде при фазово-контрастной микроскопии). Спорообразование зависит от влажности, температуры (12-42 °С), наличия свободного кислорода, рН среды. Переход из бациллярной в споровую форму происходит при попада-нии микробов в окружающую среду. В живом организме и невскрытом трупе споры не образуются, что обусловлено поглощением свободного кислорода в процессе гниения. На питательных средах массовое появление спор наблюда-ется к концу первых суток культивирования. Очень крупные палочки с обрубленными концами размером 5-10×1-2 мкм; жгутики отсутствуют; в организме челове-ка и животных, а также на питательных средах с кровью образуют макрокапсулу белковой природы; в присутствии О2 формируют центрально расположенные овальной формы споры; грамположительные; в мазках располагаются це-почками с утолщениями на концах (напоминают «бамбуковую трость»); обработка культур пенициллином приводит к разрушению клеточной стенки и образованию цепочек, состоящих из протопластов (в виде «жемчужного ожере-лья»); споры окрашиваются по методу Ожешко в красный цвет; капсула выявляется по методу Бури-Гинса и Романов-ского-Гимзе. Культуральные свойства. Факультативный анаэроб, оптимальная температура культивирования 35-370С, рН 7,2-7,6, хорошо растет на обычных питательных средах (МПА, МПБ). Через 17-24 часа образует R-форму колоний – серебристые крупные зернистые ко-лонии, от краев отходят пучки нитей (в виде «головы Медузы» или «львиной гривы»), редко – S- и М-формы. На бу-льоне растет в виде ватных хлопьев, не вызывая помутнения среды. Дает характерный рост при посеве уколом в же-латин – в виде «перевернутой елочки». На кровяном агаре гемолиза не дает. Аэробы. Хорошо растут на простых питательных средах, бактерии можно выращивать на сыром или вареном карто-феле, настое соломы, экстрактах злаков и бобовых в диапазоне температур от 12 до 45 °С, температурный оптимум роста на плотной среде 35-37 °С, на жидкой 32-33 °С. Оптимум рН 7,2-8,6. На жидких средах дают придонный рост в виде комочка ваты, не вызывая помутнения среды; на плотных средах образуют крупные, с неровными краями, ше-роховатые матовые колонии (R-форма). Под лупой колонии имеют коричневый бугристый центр и более светлую пе- риферию, по краям окруженную светлой зернистой каймой, которая образована пучками нитей клеток. Напоминают гриву льва или голову медузы. На свернутой лошадиной сыворотке растут в виде гладких прозрачных S-форм коло-ний, тянущихся за петлей. R-форма патогенна для человека, S-форма авирулентна. На средах, содержащих 0,05-0,5 ЕД/мл пенициллина, сибиреязвенные бациллы через 3-6 ч роста образуют сферопласты, расположенные цепочкой и напоминающие в мазке жемчужное ожерелье (тест «жемчужное ожерелье»). Биохимическая активность. Биохимическая активность достаточно высокая: обладают выраженной сахаролитической, протеолитической и липо-литической активностью. Гидролизуют крахмал, образуют ацетилметилкарбинол. Выделяют желатиназу, в отличие от почвенных бацилл обладают слабой гемолитической, лецитиназной и фосфатазной активностью. Ферментирует большинство сахаров (глюкозу, сахарозу, декстрин, трегалозу, фруктозу, крахмал) до кислоты без газа. Положительная реакция Фогес-Проскауэра (образует ацетилметилкарбинол при ферментации глюкозы с окрашива-нием среды в красный цвет). Разжижает желатин, восстанавливает нитраты в нитриты, образует сероводород и ам-миак, индол не образует, пептонизирует молоко. Антигенная структура. Содержит родовой соматический полисахаридный антиген и видовой белковый капсульный антиген. Образует бел-ковый экзотоксин, обладающий антигенными свойствами. Капсульные антигены и экзотоксин кодируются плазми-дами, потеря которых делает бактерии авирулентными. Капсульные антигены представлены полипептидами, соеди-ненными с молекулами D-глутаминовой кислоты. По капсульным антигенам выделяют единственный серовар, анти-тела к капсульным антигенам не обладают протективным свойством. Соматический антиген представлен полисаха-ридами клеточной стенки, антитела к нему не обладают протективным свойством. Сибиреязвенный экзотоксин име-ет сложную структуру и включает в себя протективный антиген. 1. О-антиген – соматический, термостабильный липополисахарид клеточной стенки, группоспецефический (выявля-ется в реакции колцепреципитации по Асколи). 2. К-атиген – капсульный, полипептидный, видоспецифический. 3. Протективный антиген – белковый токсин – обладает выраженными иммуногенными свойствами, т.к. к нему обра-зуются антитела, обладающие защитными свойствами. |