Микра экз. Билет 1 Генетические и биохимические механизмы Лекарственной устойчивости. Путь преодоления лекарственной устойчивости бактерий

• Название: Билет 1 Генетические и биохимические механизмы Лекарственной устойчивости. Путь преодоления лекарственной устойчивости бактерий
• Анкор: Микра экз
• Дата: 25.01.2020
• Размер: 0.84 Mb.
• Имя файла: mikra_bilety1.docx
• Тип: Документы; #105758
• страница: 6 из 13

Физические методы стерилизации.

1. Воздействие температуры:

а) Стерилизация сухим жаром (воздушная)

Используются воздушные и глассперленовые стерилизаторы. Температурные

режимы: 1600С, 1800С, 2000 С, 2300С. Чем выше температура, тем короче время

стерилизации. Механизм гибели микроорганизмов - коагуляция белка. Данному виду стерилизации нельзя подвергать жидкости и объекты из термолабильных материалов.

б) Стерилизация паром.

Используются паровые стерилизаторы (автоклавы).

*Текучий пар.Температурный режим 1000С, время экспозиции зависит от природы

стерилизуемого объекта. Механизм гибели микробной клетки - коагуляция белка.

Возможно использование дробного метода – тиндализации - для стерилизации объектов, не выдерживающих высоких температур (питательных сред, термолабильных растворов и пр.): в течении 3-х дней объект по 30 минут обрабатывается паром, в результате чего гибнут вегетативные формы бактерий. В промежутках между стерилизацией объект выдерживают в термостате для прорастания спор.

*Пар под давлением. Стерилизация достигается в результате совокупного действия пара, температуры и давления. Режимы:1120С (0,5 атм), 1210С (1 атм), 1300С (1,5 атм).

Время экспозиции зависит от природы стерилизуемого объекта. Механизм гибели

микробной клетки - гидролиз белка. Данному виду стерилизации нельзя подвергать порошки, так как они будут становиться влажными; объекты из полимеров, не выдерживающих данные температуры; металлические инструменты, так как они будут подвергаться коррозии.

в) Кипячение.

Температура не выше 1000С. Кипятят обычно вспомогательные инструменты,

мембранные фильтры. Механизм гибели микробной клетки - коагуляция белка.

Недостатком метода является то, что температура кипения недостаточна для уничтожения спор бактерий и некоторых вирусов (гепатита В, ВИЧ); увеличение времени кипячения приведёт к испарению воды.

г) Прокаливание на огне.

Таким способом стерилизуют металлические инструменты: бактериологические

петли, пинцеты, ножницы. Механизм гибели микроорганизмов – сгорание.

д) Инфракрасные лучи.

Температура более 2000С. Используемая аппаратура – инфракрасные печи. Метод

используется преимущественно в заводском производстве лекарственных препаратов и медицинского оборудования.

Существует ещё один метод температурного воздействия – пастеризация,

заключающийся в кратковременном (5-10 минут) воздействии температуры 75-800С. Цель - уничтожение вегетативных форм бактерий. Метод применяется в пищевой промышленности (пастеризация молока).

2. Лучевая стерилизация. Механизм гибели микробной клетки - изменение

генетического аппарата (летальные мутации):

а) Использование ультрафиолетовых лучей.

Таким методом стерилизуют преимущественно воздух помещений, ламинарных боксов. Так как УФ-лучи не обладают проникающей способностью, их не применяют для стерилизации лекарственных препаратов, оборудования, инструментов.

б) Использование радиоактивного излучения (гамма-лучи).

Так как гамма-лучи обладают проникающей способностью, их используют для

промышленной стерилизации изделий однократного применения (катетеров, систем для внутривенных инфузий и пр.), перевязочного материала, лекарственных средств и растительного сырья.

3.Использование ультразвука.

Механизм гибели микробной клетки - образование микроскопических полостей в

цитоплазме. Ультразвук действует только в жидкой среде.

Химические методы стерилизации.

1.Газовая стерилизация (пары формалина, оксид этилена).

Используется для стерилизации разовых медицинских инструментов, крупного

оборудования, которое невозможно стерилизовать другими методами (аппараты искусственной вентиляции лёгких, искусственно кровообращения и пр.), лекарственных препаратов, которые нельзя стерилизовать другими методами, бактериальных фильтров.

Метод требует проведения дегазации стерильного объекта.

2.Погружение в растворы химических веществ (спирт этиловый 960, перекись водорода).

Используется преимущественно для стерилизации медицинских инструментов, которые нельзя стерилизовать термическими и другими методами. Имеет ограниченное применение.

Механический метод стерилизации – фильтрация.

Используется для стерилизации растворов (например: питательных сред, буферов) и лекарственных средств, которые нельзя стерилизовать другими методами (особенно

растворы термолабильных веществ). Заключается в применении бактериальных фильтров – фильтров, размер пор которых должен быть меньше размеров бактерий. Существуют керамические (свечи Шамберлана), стеклянные (мелкопористое стекло), асбестовые (фильтры Зейтца), мембранные (коллоидные) фильтры, фильтры из нитроцеллюлозы.

Выделяют, так называемые, ультрафильтры, которые имеют размер пор, позволяющий задерживать не только бактерии, но вирусы и пирогенны.

Контроль работы стерилизационной аппаратуры и эффективности

стерилизации.

Существует несколько методов контроля процесса стерилизации:

1.Физический метод (использование максимальных термометров);

2.Химический метод (использование химических веществ с определенной точкой

плавления, термохимических индикаторов);

3.Микробиологический метод:

а). Помещение в питательную среду стерильных объектов (аэробные и анаэробные условия) с последующей инкубацией до 14 суток (метод прямого посева);

б). Использование термостойкого тест-штамма: одновременное помещение его со

стерилизуемыми объектами и последующей инкубацией в термостате.

Физический и химический методы контроля позволяют зарегистрировать

температуру, которая была достигнута при данном режиме стерилизации, но не могут свидетельствовать о продолжительности её воздействия на объект. Наиболее адекватным является микробиологический метод, так как позволяет оценить конечный результат: стерилен или нет данный объект (метод прямого посева); или свидетельствовать о гибели наиболее резистентных к физическим факторам воздействия споровых микроорганизмов

2. 
   Факторы патогенности микроорганизмов: адгезины, факторы инвазии и агрессии. Тропизм микробов. Взаимосвязь структуры микробной клетки и факторов патогенности.
   

Возбудитель обладает тропизмом – способностью поражать определенные ткани, т.е. имеет рецепторы, для распознавания клеток-мишеней (биологическое узнавание)

Факторы патогенности:

Адгезины (ворсинки, адгезивные структуры оболочки)

Капсула (микрокапсула, макрокапсула)

ЛПС

Пептидогликан, тейхоевые кислоты

Ферменты (инвазии, агрессии)

Токсины (эндотоксины и экзотоксины)

Основные факторы патогенности микроорганизмов - адгезины, ферменты патогенности, подавляющие фагоцитоз вещества, микробные токсины, в определенных условиях- капсула, подвижность микробов.

Адгезины и факторы колонизации- чаще поверхностные структуры бактериальной клетки, с помощью которых бактерии распознают рецепторы на мембранах клеток, прикрепляются к ним и колонизируют ткани. Функцию адгезии выполняют пили, белки наружной мембраны, ЛПС, тейхоевые кислоты, гемагглютинины вирусов. Адгезия - пусковой механизм реализации патогенных свойств возбудителей.

Факторы инвазии, проникновения в клетки и ткани хозяина. Микроорганизмы могут размножаться вне клеток, на мембранах клеток, внутри клеток. Бактерии выделяют вещества, способствующие преодолению барьеров хозяина, их проникновению и размножению. У грамотрицательных бактерий это обычно белки наружной мембраны. К этим же факторам относятся ферменты патогенности.

Ферменты инвазии:

гиалуронидаза – расщепляет гиалуроновую кислоту, входящую в состав соединительной ткани, что приводит к повышению её проницаемости, а также к повышению проницаемости слизистых оболочек;

нейраминидаза (сиалидаза) – разрушает гликозидные связи в олигосахаридах,

гликоконъюгатах, тем самым увеличивая проницаемость тканей;

лецитиназа (лецитовителлаза) – разрушает лецитин, входящий в состав оболочек клеток, что ведет к их разрушению;

ДНК-аза, РНК-аза – ферменты расщепляющие нуклеиновые кислоты;

плазмокоагулаза (коагулаза) – обеспечивает свертывание плазмы, что формирует защитную оболочку вокруг бактерий в тканях, тем самым, защищая возбудитель от иммунных механизмов;

фибринолизин – фермент, обеспечивающий разрушение сгустка плазмы;

коллагеназа и пр. – ферменты, разрушающие коллагеновые волокна.

Ферменты патогенности - это факторы агрессии и защиты микроорганизмов. Способность к образованию экзоферментов во многом определяет инвазивность бактерий- возможность проникать через слизистые, соединительнотканные и другие барьеры. К ним относятся различные литические ферменты- гиалуронидаза, коллагеназа, лецитиназа, нейраминидаза, коагулаза, протеазы. Более подробно их характеристика дана в лекции по физиологии микроорганизмов.

3. 
   Микоплазмы. Классификация. Морфология и химический состав. Факторы патогенности и вирулентности. Патогенез микоплазменной инфекции, эпидемиология, лабораторная диагностика. Микоплазмы – возбудители пневмонии, острых респираторных заболеваний, уретритов, эндокардитов. Роль микоплазм в патологии беременности и поражении плода. Микоплазмы ротовой полости. Патогенез и иммунитет. Лабораторная диагностика. Этиотропная терапия.
   

Антропонозные бактериальные инфекции человека, поражающие органы дыхания или мочеполовой тракт. Микоплазмы относятся к классу Mollicutes, который включает 3 порядка: Acholeplasmatales, Mycoplasmatales, Anaeroplasmatales.

Морфология: Отсутствие ригидной клеточной стенки, полиморфизм клеток, пластичность, осмотическую чувствительность, резистентность к различным агентам, подавляющим синтез клеточной стенки, в том числе к пенициллину и его производным. Грам «-», лучше окрашиваются по Романовскому—Гимзе; различают подвижные и неподвижные виды. Клеточная мембрана находится в жидкокристаллическом состоянии; включает белки, погруженные в два липидных слоя, основной компонент которых — холестерин.

Культуральные свойства. Хемоорганотрофы, основной источник энергии — глюкоза или аргинин. Растут при температуре 30С. Большинство видов — факультативные анаэробы; чрезвычайно требовательны к питательным средам и условиям культивирования. Питательные среды (экстракт говяжьего сердца, дрожжевой экстракт, пептон, ДНК, глюкоза, аргинин). Культивируют на жидких, полужидких и плотных питательных средах.

Биохимическая активность: Низкая. Выделяют 2 группы микоплазм: 1. разлагающие с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, маннозу, фруктозу, крахмал и гликоген; 2.окисляющие глутамат и лактат, но не ферментирующие углеводы. Все виды не гидролизуют мочевину.

Антигенная структура: Сложная, имеет видовые различия; основные АГ представлены фосфо- и гликолипидами, полисахаридами и белками; наиболее иммунногенны поверхностные АГ, включающие углеводы в составе сложных гликолипидных, липогликановых и гликопротеиновых комплексов.

Факторы патогенности: адгезины, токсины, ферменты агрессии и продукты метаболизма. Адгезины входят в состав поверхностных АГ и обуславливают адгезию на клетках хозяина. Предполагают наличие нейротоксина у некоторых штаммов М. pneumoniae, так как часто инфекции дыхательных путей сопровождают поражения нервной системы. Эндотоксины выделены у многих патогенных микоплазм. У некоторых видов встречаются гемолизины. Среди ферментов агрессии основными факторами патогенности являются фосфолипаза А и аминопептидазы, гидролизующие фосфолипиды мембраны 82 клетки. Протеазы, вызывающие дегрануляцию клеток, в том числе и тучных, расщепление молекул AT и незаменимых аминокислот.

Эпидемиология: М. pneumoniaeколонизирует слизистую оболочку респираторного тракта; M. hominis, M. genitaliumuU. urealyticum— «урогенитальные микоплазмы» — обитают в урогенитальном тракте. Источник инфекции — больной человек. Механизм передачи — аэрогенный, основной путь передачи — воздушно-капельный.

Патогенез: Проникают в организм, мигрируют через слизистые оболочки, прикрепляются к эпителию через гликопротеиновые рецепторы. Микробы не проявляют выраженного цитопатогенного действия, но вызывают нарушения свойств клеток с развитием местных воспалительных реакций.

Клиника: Респираторный микоплазмоз - в форме инфекции верхних дыхательных путей, бронхита, пневмонии. Внереспираторные проявления: гемолитическая анемия, неврологические расстройства, осложнения со стороны ССС.

Иммунитет: для респираторного и урогенитального микоплазмоза характерны случаи повторного заражения.

Микробиологическая диагностика: мазки из носоглотки, мокрота, бронхиальные смывы. При урогенитальных инфекциях исследуют мочу, соскобы с уретры, влагалища. Для лабораторной диагностики микоплазменных инфекций используют культуральный, серологический и молекулярногенетический методы. При серодиагностике материалом для исследования служат мазки-отпечатки тканей, соскобы из уретры, влагалиша, в которых можно обнаружить АГ микоплазм в прямой и непрямой РИФ. Микоплазмы и уреаплазмы выявляются в виде зеленых гранул. АГ микоплазм могут быть обнаружены также в сыворотке крови больных. Для этого используют ИФА. Для серодиагностики респираторного микоплазмоза определяют специфические AT в парных сыворотках больного. При урогенитальных микоплазмозах в ряде случаев проводят серодиагностику, AT определяют чаше всего в РПГА и ИФА.

Лечение. Антибиотики. Этиотропная химиотерапия. Профилактика. Неспецифическая.

Микоплазмы. Сем.: Mycoplasmataceae, род Mycoplasma – 69 видов, род Ureaplasma – 2вида.

Это микроорганизмы, лишенные клеточной стенки.

Грамотрицательные, пролиморфные – овоидной, круглой формы, способны образовывать ветвящиеся формы.

По Романовскому-Гимза окрашиваются в розовый цвет.

Растут на сложных питательных средах с добавлением холестерина микроэлементов, витаминов. Растут медленно, в течение 3-7 суток, на плотных средах образуют характерные колонии – очень мелкие, по виду напоминающие яичницу-глазунью.

Обладают рядом биохимических свойств (ферментация глюкозы, аргинина, мочевины), которые используют при идентификации.

Факторы патогенности. Адгезины, эндотоксинЮ гемолизины, токсические метаболиты (аммиак, перекись Н2).

Неустойчивы во внешней среде. Вызывают хронически воспалительные заболевания мочеполовой системы, внутриутробную инфекцию, генерализованную инфекцию взрослых и детей, пневмонии, артриты и др.

Диагностика.

Бактериологический, серологический, собственно иммунологический методы, ПЦР.

БИЛЕТ 14

1. 
   Актиномицеты (лучистые грибы) – это бактерии, относящиеся к отд. Firmicutes, сем. Actynomycetaceae.
   

Клетки в виде ветвящихся нитей (гиф) без поперечных перегородок. Гифы переплетаются и образуют мицелий (как грибы). Мицелий бывает субстратный (врастает в питательную среду) и воздушный (на поверхности среды).

Как и все бактерии, актиномицеты - прокариотами (не имеют оформленного ядра), а по Граму окрашиваются положительно, т.е. клеточная стенка у них как у грам «+» бактерий. Размножение: распад нитей на отдельные клетки (палочки, кокки) и спорами, которые образуются на концах воздушных гиф.

К нокардиоподобным актиномицетам относится группа палочковидных или неправильной формы бактерий, иногда ветвящихся форм ( р. Corynebacterium, р. Mycobacterium, р. Nocardia). Они содержат в стенке миколовые кислоты и большое количество жиров и восков. Это придает им кислотоустойчивые свойства, поэтому они не обесцвечиваются серной кислотой. Их окрашивают по методу Циля-Нильсена. Для окраски используют 5% карболовый фуксин Циля, 5% раствор серной кислоты и метиленовый синий по Леффлеру. Сущность метода: кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет (цвет фуксина), т.к. миколовая кислота взаимодействует с карболовым фуксином и затем не происходит обесцвечивания серной кислотой. Остальные (некислотоустойчивые) бактерии обесцвечиваются и докрашиваются в синий цвет метиленовым синим. Таким образом, кислотоустойчивые бактерии можно отличить от других.

Медицинское значение актиномицетов: 1) образуют антибиотики (стрептомицин, тетрациклин); 2) вызывают инфекционные заболевания (актиномикозы, туберкулез, дифтерию, нокардиозы).

2. 
   Иммуноферментный анализ. Компоненты реакции, варианты её использования в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний
   

Метод основан на использовании в качестве метки антител ферментов, способных разлагать субстрат и приводить к образованию окрашенных продуктов (хромогена). Конъюгированные с ферментом антитела сохраняют способность соединяться с гомологичным АГ. Интенсивность окраски хромогена соответствует количеству образовавшихся комплексов АГ-АТ + фермент.

Субстратом для пероксидазы является перекись водорода, а хромогеном служат 5- аминосалициловая кислота, ортофенилендиамин и другие вещества. Антитела или антигены фиксируются на внутренней поверхности полистироловых планшетов для иммунологических реакций; реакция учитывается визуально, после добавления в лунку субстрата для данного фермента.

Для объективной оценки результатов ИФА можно использовать простейшие фотометры (ридеры) с вертикальным ходом лучей.

Определение неизвестных антигенов состоит из таких этапов:

1) связывание антител, специфичных для искомого антигена, с пластиком лунки планшета;

2) внесение антигенсодержащего материала;

3) внесение антител той же специфичности, меченых ферментом

4) внесение хромогенного субстрата.

Это вариант постановки называется - прямой метод

Определение неизвестных антигенов непрямым методом состоит из таких этапов:

1) связывание антител, специфичных для искомого антигена, с пластиком лунки планшета;

2) внесение антигенсодержащего материала;

3) внесение антител той же специфичности (но без ферментной метки!)

4) внесение конъюгата (меченой ферментом антиглобулиновой сыворотки – сыворотки против иммуноглобулинов, в данном случае – против кроличьих глобулинов, так как диагностические сыворотки преимущественно получают от кроликов);

5) внесение хромогенного субстрата.

Определение неизвестных антител включает в себя следующие этапы:

1) связывание известного антигена с пластиком лунки планшета;

2) внесение испытуемой сыворотки;

3) внесение конъюгата (меченой ферментом антиглобулиновой сыворотки – в данном случае

– против человеческого глобулина);

4) внесение хромогенного субстрата.

В настоящее время в микробиологии чаще всего используется твердофазная модификация ИФА. Ее суть заключается в том, что вначале на каком-либо твердом материале сорбируют АГ (или АТ) и лишь после этого добавляют остальные ингредиенты серологической реакции.

Количество присоединенного к твердой фазе фермента соответствует количеству антител (при выявлении антител в серологическом методе).).

В качестве твердофазного носителя АТ или АГ обычно используют пластиковые планшеты, шарики, пленки или пробирки, изготовленные из различных синтетических инертных материалов — полистирола, метакрила и др. Будучи адсорбированными на поверхности таких материалов, АТ или АГ даже в высушенном состоянии длительное время сохраняют свою иммунологическую специфичность и способность вступать в серологические реакции.

В настоящее время ИФА широко применяют для диагностики инфекционных болезней бактериальной, грибковой этиологии, протозойных инфекций и гельминтозов. Наиболее важное значение метод имеет в диагностике вирусных инфекций — особенно вирусных гепатитов, ВИЧ- инфекции, герпесвирусной, ротавирусной, аденовирусной инфекции и др.

3. 
   Роль ротавирусов в кишечной патологии взрослых и детей. Характеристика вирусов, патогенез ротавирусной инфекции, диагностика.
   

Ротавирусы.

Семейство Reoviridae

Род Rotavirus

Морфология, химический состав. Вирус имеет сферическую форму. Эти вирусы имеют двунитевую фрагментированную РНК, окруженную капсидом с двуслойной оболочкой (наружный и внутренний капсид). Ротавирусы свое название получили в связи со своеобразием морфологии вируса (лат. rota - колесо). Наружная липопротеидная оболочка отсутствует.

Культивирование. Вирусы удается культивировать при определенных условиях в культуре клетки. Лаборато

Резистентность. Ротовирусы сохраняют жизнеспособность в окружающей среде в течении нескольких месяцев.

Антигенная структура. Имеются внутренний группоспецефический и наружные типоспецефические агенты, по которым ротовирусы классифицируют на 4 серотипа.

Впервые ротавирусы выявлены у детей с острым гастроэнтеритом их эпителиальных клеток слизистой оболочки двенадцатиперсной кишки. Вирионы при электронно - микроскопическом исследовании имеют вид колес диаметром 70 нм с круговым ободком по периферии и отходящими внутрь “спицами”. Имеют наружный и внутренний капсид, внутри которого содержится двунитевая фрагментированная РНК. К ротавирусам человека серологически близки ротавирус телят (Небраски) и обезьян, которые легче культивировать в клеточных культурах и которые используют в качестве антигенных препаратов для серодиагностики ротавирусной инфекции у людей. Ротавирус человека - фекально - оральный вирус. Он вызывает гастроэнтериты у новорожденных (внутрибольничные вспышки), дошкольников и младших школьников. В мире ежегодно регистрируют до нескольких миллионов летальных исходов ротавирусного гастроэнтерита у детей. Наиболее опасны больные в первые 3-5 дней заболевания в связи с интенсивным выделением вируса с фекалиями.

Иммунитет. Обусловлен образованием сывороточных, секреторных антител и интерферона. Пассивный естественный иммунитет сохраняется на протяжении первых 6 мес жизни ребенка.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служит – фекалии. Экспресс диагностика основана на выявлении вирусов или антигенов с помощью ЭМ, ИЭМ, ИФА, РИА. Выделение вирусов не проводят из за отсутствия методов, доступных для практических лабораторий. Серодиагностика осуществляется с помощью РН, РСК, РТГА с парными сыворотками больных.

Специфическая профилактика и лечение. Разработана инактивированная вакцина. Лечение симптоматическое.

БИЛЕТ 15

1. 
   Дисбактериоз. Факторы, влияющие на его формирование. Стадии дисбактериоза. Лабораторная диагностика дисбактериозов. Препараты, применяемые, для профилактики и лечения дисбактериозов.
   

Дисбактериоз кишечника - не является самостоятельным заболеванием; это не специфическая реакция организма на неблагоприятное воздействие различных факторов, вследствие которой происходит нарушение нормальной микрофлоры кишечника.

Факторы, влияющие на его формирование.

Длительно протекающие инфекции и расстройства, при которых не удается выделить патогенные энтеробактерии; затяжной период реконвалесценции после перенесенной кишечной инфекции; дисфункции ЖКТ на фоне или после проведенной антибиотикотерапии или у лиц, постоянно контактирующих с антимикробными препаратами. Исследования также следует проводить при болезнях злокачественного роста, у страдающих диспептическими расстройствами, лиц подготавливаемых к операциям на органах брюшной полости, недоношенных или травмированных новорожденных, а также при наличии бактериемий и гнойных процессов, трудно поддающихся лечению (язвенные колиты и энтероколиты, пиелиты, холециститы и др.).

Стадии дисбактериоза.

Степени изменения аутомикрофлоры при

дисбактериозе кишечника:

• 1степень (компенсаторная форма). Изменяется количественно 1 вид аэробной флоры или 1 вид микроорганизмов.

• 2 степень («группа риска») Выявляются количественные и качественные изменения кишечной палочки (т.е. изменения в облигатной микрофлоре). Это субкомпенсированная форма.

• 3 степень. Значительное снижение бифидобактерий (10х5, 10х7), лактобактерий, кишечной палочки. Снижается иммунологическая реактивность организма.

• 4 степень. Отсутствие бифидобактерий, единичные клетки лактофлоры, возрастание числа не свойственной для здорового человека микроорганизмов. Снижается защитная, витаминообразующая функция, изменяются ферментативные

процессы, увеличиваются нежелательные продукты метаболизма. Могут возникать очаги дополнительного инфекционного процесса, септические состояния.

Лабораторная диагностика.

Отбор и доставка материала на дисбактериоз
Материалом для исследования является кал не позже 2 часов после дефекации.
Для получения достоверного результата стул должен быть обязательно утренним, самостоятельным, не на фоне лечения. У грудных детей забирать материал не с памперсов  и пеленок.
Одну столовую ложку фекалий помещают в прокипяченную стеклянную баночку.

Лабораторная диагностика дисбактериоза кишечника
Метод исследования - бактериологический: мерный посев исследуемого материала с целью определения количества микроорганизмов наиболее значимых групп.
Этапы исследования:

• 
  приготовление серийных разведений суспензии испражнений;
  
• 
  посев на питательные среды из разведений;
  
• 
  учет результатов посева и ориентировочная идентификация микроорганизмов;
  
• 
  оценка результатов.
  

2. 
   Гуморальные факторы врожденного иммунитета: комплемент, лизоцим, пропердин, бета-лизины, противовирусные ингибиторы, интерфероны, их биологические свойства, механизмы действия, методы выявления.
   

Лактоферрин -Лейкоциты →Подавляет рост бактерий, связывая Fe2+ Трансферрин- Печень →Подавляет рост бактерий, связывая Fe2 Интерфероны-Лейкоциты, фибробласты, клетки, инфицированные вирусом→ Ингибируют размножение вирусов, участвуют в регуляции защитных реакций

Интерлейкины (ИЛ-1, ИЛ-6, Ил-8) Фагоциты, эндотелиоциты Вызывают развитие лихорадочной реакции, образование белков острой фазы, усиливают фагоцитоз и другие защитные реакции

Интерфероны (ИФ) - противовирусные агенты, имеют иммунорегулирующие свойства. Существует три разновидности ИФ: α, β относимые к первому классу, и ИФ-γ, относимый к второму классу.

ИФ-α, продуцируемый лейкоцитами, обладает преимущественно противовирусным, антипролиферативным и противоопухолевым действием. Он вырабатывается во всех клетках под действием вируса. Под влиянием ИФ-α клетка начинает вырабатывать ферменты, которые расщепляют вирусную нукл.кислоту или нарушает трансляцию с вирусн.нукл. кислоты на рибосомы. Больше всего этого интерферона вырабатывается клетками мозга, меньше всего клетками скелетной мускулатуры и миокарда, котрые чаще всего и страдают при вирусных инфекциях.

ИФ-β, образуемый фибробластами, обладает преимущественно противоопухолевым, а также антивирусным действием.

ИФ-γ - продукт Т- хелперных (Тх0 и Txl), а также CD8+ Т-лимфоцитов - именуется лимфоцитарным и иммунным. Он обладает преимущественно иммуномодулирующим и слабым противовирусным эффектом. γ-ИНФ продуцируется Т-хелперами и почти всеми супрессорами. Является активатором мононуклеарных фагоцитов, стимулирует процесс переваривания поглощенных микробов и опухолевых клеток.

Продукцию интерферонов I класса индуцируют вирусы и препараты двунитчатой ДНК,

продукцию ИФ-γ - антигены и митогенные препараты.

Система комплемента- комплекс белков и гликопротеидов сыворотки крови человека и позвоночных животных (их более 20). Отдельные компоненты опосредуют процессы воспаления, опсонизацию чужеродных фрагментов для последующего фагоцитоза, участвуют наряду с макрофагами в непосредственном уничтожении микроорганизмов и других чужеродных клеток (лизис бактерий и вирусов). В условиях физиологической нормы компоненты системы комплемента находятся в неактивной форме.

Система комплемента- вырабатывает печень, макрофаги→ вызывает Гибель микробной клетки (бактерицидный эффект), усиление фагоцитоза, повышение проницаемости сосудов. Спазм гладкой мускулатуры.

Пропердин- активатор системы комлимента

Лизоцим →вырабатывают фагоциты гидролиз →муреина (антимикробное

действие).

Лизоцим:

- фермент муромедазы

- содержится во всех жидкостях организма, кроме мочи. Желудочного сока, спинномозговой жидкости.

- много его в слюне

-разрушает связи в молекуле пептидогликана

-активен против Гр+ клеток, сапрофитов

-против клеток микробов действует с другими ферментами.

Вирус ингибиторы

-рецепторы слизистых клеток

- продуцируется в избытке

-циркулирует в сыворотке крови

-взаимодействует с рецепторами вирусов и блокирование рецепторов препятствует адгезии вирусов на чувствительных клетках.

3. 
   Клостридии ботулизма. Экология. Свойства микробов, характеристик ботулотоксинов. Лабораторная диагностика, эпидемиология, специфическая терапия и профилактика ботулизма.
   

Ботулизм— острое инфекционное заболевание, ха­рактеризующееся интоксикацией организма с пре­имущественным поражением центральной нервной системы. Болезнь возникает в результате употреб­ления пищевых продуктов, содержащих токсиныClostridiumbotulinum.

Таксономия.Возбудитель ботулизма относится к отделуFirmicutes, родуClostridium.

Морфологические и тинкториальные свойства.C.botulinum— грамположительные палочки с закругленными концами, образуют споры и имеют вид веретена. Капсулой не обладают, перитрихи.

Культуральные свойства.Строгий анаэроб. Оптимальными для его роста являются температура 30С. На кровяном агаре образует небольшие прозрачные колонии. В столбике сахарного агара можно обнаружитьR-формы формы зерен чечевицы иS-формы – пушинок.

Биохимическая активность. Выделяют 4 группы: бактерииIгруппы – выраженные протеолитические свойства, гидролизуют желатину, ферментируют глк. и мальтозу;IIгруппы – проявляют сахаролитическую активность, протеолитической – нет.IIIгруппа – проявляют липазную активность, гидролизуют желатину.VI– гидролизуют желатину, не проявляют сахаролитических свойств.

Все типы образуют желатиназу, лецитиназу, H₂S.Бактерии типа А,В,Е,F– ферментируют глк., фруктозу, мальтозу, сахарозу. Типа С,D– глк, мальтозу.

Антигенные свойства.Имеются группоспецифические жгутиковые – Н и типоспецифические О-АГ бактерий ,не проявляющие токсических свойств. По структуре экзотоксинов бактерии разделяют на 8 сероваров: А, В, С1,С2,D,E,FиG.

Факторы патогенности. Выделяет экзоток­син, самый сильный из всех биологических ядов. Ботулинический эк­зотоксин обладает нейротоксическим действием. Его особенностью является высокая устойчивость к нагреванию (сохраняется в течение 10—15 мин при 100 °С), к кислой среде, высоким концентрациям поваренной соли, замораживанию, пищевари­тельным ферментам.

Резистентность.Споры обладают очень боль­шой резистентностью к высокой температуре (выдерживают ки­пячение в течение 3—5 ч).

Эпидемиология. Широко распро­странен в природе. Его обнаруживают в организме животных, рыб, откуда он попадает в почву и воду. В почвеC.botulinumдолгое время сохраняется в виде спор и даже может размножаться, что позволяет отнести ботулизм к сапронозным инфекциям. Из почвы возбудитель попадает в пищевые продукты и при наличии анаэробных условий раз­множается там и выделяет экзотоксин. Путь заражения боту­лизмом — пищевой. Чаще всего фактором передачи этой ин­фекции являются консервы (как правило, домашнего приго­товления) — грибные, овощные, мясные, рыбные.

Патогенез.Ботулинический токсин попадает с пищей в ЖКТ. Устойчивый к действию пищеварительных ферментов и хлористоводородной кислоты, токсин всасывается через стенку кишечника в кровь и обусловливает длительную токсинемию. Токсин связывается нервными клетками и блокирует передачу импульсов через нервно-мышечные синапсы. В результате разви­вается паралич мышц гортани, глотки, дыхательных мышц, что приводит к нарушению глотания и дыхания; наблюдаются изменения со стороны органа зрения.

Клиника.Инкубационный период продолжается от 6—24 ч до 2—6 дней и более. Чем короче инкубационный период, тем тяжелее протекает болезнь. Обычно болезнь начинается остро, но температура тела остается нормальной. Возможны различные варианты ботулизма — с преобладанием симптомов поражения ЖКТ, зрения, глотания, речи или дыхательной функции. В первом случае болезнь начинается с появления сухости во рту, тошно­ты, рвоты, поноса, во втором — начальные проявления болезни связаны с нарушениями со стороны зрения (снижение остроты зрения, двоение). В результате паралича мышц гортани появляется осиплость, а затем голос пропадает.

Иммунитет.После перенесенной болезни иммунитет не фор­мируется. Однако введение ботулинических анатоксинов создает прочный искусственный вариантоспецифический антитоксичес­кий иммунитет.

Микробиологическая диагностика.Исследуют про­мывные воды желудка, рвотные массы, остатки пищи, кровь. Применяют бактериологический метод, биологический (реакцию нейтрализации токсина антитокси­ном), с помощью реакции обратной непрямой гемагглютинации, и серологический (РПГА) методы, позволяющие выявить в исследуемом материале ботулинический токсин.

Лечение.Ан­титоксические противоботулинические гетерологичные сыворот­ки и гомологичные иммуноглобулины.

Профилактика.Соблюдение правил приготовления продуктов, домашних консервов. Для специфической актив­ной профилактики ботулизма разработаны и применяются по показаниям тетра- и трианатоксины, в состав которых входят ботулинические анатоксины типов А, В и Е. Для экстренной пассивной профилактики используют противоботулинические антитоксические сыворотки.

Поливалентная и монорецепторные типов А, В, Е противоботулинические антитоксические сыворотки – сыворотки крови лошадей. Используются для серотерапии и экстренной профилактики ботулизма.Содержат антитела к токсинам ботулизма, создают пассивный иммунитет.

2).Иммуноглобулины противоботулинические человека. Существует два вида препарата. Первый – для в/м введения, используется для лечения и экстренной профилактики ботулизма., содержит антитела к токсинам ботулизма типов А, В, Е. Второй препарат предназначен для в/в введения, используется для лечения ботулизма, также содержит антитела к токсинам ботулизма типов А, В, Е.

БИЛЕТ 16

1. 
   Особенности строения риккетсий Риккетсии – это бактерии, которые относятся к отд. Gracilicutes, сем. Ricketsiaceae. Свое название получили в честь американского ученого Х.Т. Риккетса. Мелкие грамотрицательные палочки или кокки (полиморфные). Не имеют жгутиков, спор и капсул. Размножаются бинарным делением.
   

Риккетсии – это облигатные внутриклеточные паразиты. Они размножаются только в живых клетках. Это свойство сближает их с вирусами. Но в отличие от вирусов их можно наблюдать в обычном световом микроскопе. Они выращиваются в желточном мешке куриного эмбриона, культурах живых клеток и тканях животных.

Риккетсии окрашиваются по методу Романовского-Гимзы в розово-красный цвет. При окраске по П.Ф. Здродовскому риккетсии окрашиваются в рубиново-красный цвет, а клеточные элементы – в голубой (цитоплазма) или синий (ядро) цвет.

Большинство риккетсий - паразиты членистоногих (свыше 40 видов). Некоторые виды вызывают заболевания у человека (риккетсиозы) Например, эпидемический сыпной тиф (переносчики этого заболевания – вши).

Риккетсии - мелкие Гр- микроорганизмы, характер-ся выраженным полиморфизмом – образуют кокковидные, палочковидные и нитевидные формы. Размеры от 0,5 до 3-4 мкм, длина нитевидных форм – 10-40мкм.

Спор и капсул не образуют. Окрашиваются по Здродовскому в красный цвет

2. 
   Иммунофлюоресценция в диагностике инфекционных заболеваний. Прямой и непрямой варианты. Необходимые препараты.
   

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Разработана А. Кунсом и носит его имя (метод Кунса). Это один из методов исследования, в котором используются меченные антитела. В качестве метки используется краситель, дающий свечение в ультрафиолетовых лучах (изоцианат флюоресцеина или просто флюорохром).

Риф используется в двух модификациях: прямой метод Кунса и непрямой метод Кунса. Прямой метод: исследуемый материал, зафиксированный на предметном стекле, обрабатывается меченой флюорохромом диагностической сывороткой; обязательный этап реакции – отмывка от непрореагировавших антител; если в исследуемом материале есть искомый антиген, меченные антитела фиксируются на антигене и после отмывки такой комплекс выявляется по свечению при просматривании препарата под люминесцентным микроскопом.

Непрямой метод: в этом случае реакция идет в два этапа – на первом этапе используется немеченая диагностическая сыворотка, на втором этапе используется меченая флюорохромом антиглобулиновая сыворотка; с помощью непрямого метода можно выявлять в исследуемом материале как наличие антигена, так и наличие и титр специфических антител.

Люминесцирующие (флюоресцирующие) сыворотки представляют собой иммунные сыворотки, содержащие специфические антитела, меченые флюоресцирующими красителями. При приготовлении люминесцирующих сывороток проводят присоединение к глобулиновой фракции иммунной сыворотки флюорохромов путем прочной химической связи. Люминес цирующие сыворотки используют при постановке РИФ.

Антиглобулиновые сыворотки (АГС) содержат антитела к иммуноглобулинам сыворотки человека или кролика - в зависимости оттого, какая иммунная сыворотка используется в реакции. АГС получают путем иммунизации животных иммуноглобулинами человека или кролика. Такие сыворотки используют для постановки непрямой РИФ, реакции ИФА, реакции Кумбса.

3. 
   Сальмонеллы, свойства, антигенная структура сальмонелл по Кауфману- Уайту. Возбудители брюшного тифа и паратифов, патогенез брюшного тифа, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия
   

Брюшной тиф и паратифы А и В — инфекционные болезни, вызываемые соответственно Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Salmonella schottmuelleri, сопровождающиеся сходными патогенетическими и клиническими проявлениями, характеризующиеся

поражением лимфатической системы кишечника, выраженной интоксикацией. Название рода Salmonella связано с именем Д. Сальмона.

Таксономия.Возбудители брюшного тифа и паратифов А и В относятся к отделу Gracilicutes, семейству Enterobacteriaceae, роду Salmonella, включающему более 2000 видов.

Морфология и тинкториальные свойства. Сальмонеллы — мелкие, длиной 2—3 мкм, шириной 0,5—0,7 мкм, грамотрицательные палочки с закругленными концами (см. рис. 10.1). В мазках располагаются беспорядочно. Не образуют спор, имеют микрокапсулу, перитрихи.

Культивирование.Сальмонеллы — факультативные анаэробы. Они неприхотливы и растут без всяких особенностей на простых питательных средах при температуре 37 °С и рН среды 7,2— 7,4. Элективной средой является, например, желчный бульон. При диагностике брюшного тифа, как и других кишечных инфекций, используют дифференциально-диагностические среды: Эндо, Левина, висмут-сульфитный агар и др.

Ферментативная активность. Биохимическая активность сальмонелл достаточно высока, но они обладают меньшим набором ферментов, чем Е. coli, в частности не сбраживают лактозу. S. typhi менее активна, чем возбудители паратифов: она

ферментирует ряд углеводов без образования газа.

Антигенные свойства. Сальмонеллы имеют О- и Н-антигены, состоящие из ряда фракций, или рецепторов. Каждый вид имеет определенный набор фракций. Ф. Кауфман и П.Уайт предложили схему классификации сальмонелл по антигенной структуре, в основу которой положено строение О-антигена. Все виды сальмонелл, имеющие общий, так называемый групповой, рецептор О-антигена, объединены в одну группу. Таких групп насчитывается в настоящее время 65. В схеме также указано строение Н-антигена. Некоторые виды сальмонелл, в том числе S. typhi, имеют поверхностный Vi-антиген — антиген вирулентности, с которым связана устойчивость бактерий к фагоцитозу.

Факторы патогенности. Сальмонеллы образуют эндотоксин, оказывающий энтеротропное, нейротропное и пирогенное действие. Белки наружной мембраны обусловливают адгезивные свойства, устойчивость к фагоцитозу связана с микрокапсулой.

Резистентность. Сальмонеллы довольно устойчивы к низкой температуре — в холодной чистой воде могут сохраняться до полутора лет; очень чувствительны к дезинфицирующим средствам, высокой температуре, УФ-лучам. В пищевых продуктах (мясе, молоке и др.) сальмонеллы могут не только долго сохраняться, но и размножаться.

Эпидемиология. Источником брюшного тифа и паратифов являются больные люди и носители. Механизм передачи инфекции — фекально-оральный. Преобладает водный путь передачи, реже встречаются пищевой и контактно-бытовой пути. Брюшной тиф и паратифы — заболевания, которые регистрируются в разных странах мира. Чаще болеют люди в возрасте от 15 до 30 лет. Наиболее высокая заболеваемость отмечается летом и осенью.

Патогенез.Возбудители попадают в организм через рот, достигают тонкой кишки, в лимфатических образованиях которой размножаются, а затем попадают в кровь. Током крови они разносятся по всему организму, внедряясь в паренхиматозные органы (селезенку, печень, почки, костный мозг). При гибели бактерий освобождается эндотоксин, вызывающий интоксикацию. Из желчного пузыря, где сальмонеллы могут длительно, даже в течение всей жизни сохраняться, они вновь попадают в те же лимфатические образования тонкой кишки. В результате повторного поступления сальмонелл может развиться своеобразная аллергическая реакция, проявляющаяся в виде воспаления, а затем некроза лимфатических образований. Выводятся сальмонеллы из организма с мочой и испражнениями.

Клиническая картина. Клинически брюшной тиф и паратифы не отличимы. Инкубационный период продолжается 12—14 дней. Заболевание обычно начинается остро с повышения температуры тела, проявления слабости, утомляемости, нарушаются сон, аппетит. Для брюшного тифа характерны помрачение сознания (от греч. typhus — дым, туман), бред, галлюцинации, наличие сыпи. Очень тяжелыми осложнениями заболевания являются перитонит, кишечное кровотечение в результате некроза лимфатических образований тонкой кишки.

Иммунитет.После перенесенного заболевания вырабатывается прочный и продолжительный иммунитет.

Микробиологическая диагностика. В качестве материала для исследования используют кровь, мочу, испражнения. Основным методом диагностики является бактериологический, завершающийся внутривидовой идентификацией вьщеленнои чистой культуры возбудителя — определением фаговара. Применяют также серологический метод — реакцию агглютинации Видаля, РИГА.

Лечение. Назначают антибиотики. Применяют также иммуноантибиотикотерапию (см. главу 7).

Профилактика. Для профилактики проводят санитарно-гигиенические мероприятия, а также используют вакцинацию в районах с неблагополучной эпидемической обстановкой. Применяют брюшнотифозную химическую и брюшнотифозную спиртовую вакцины, последняя обогащена Vi-антигеном. Для экстренной профилактики в очагах инфекции используют брюшнотифозный бактериофаг (в виде таблеток с кислотоустойчивой оболочкой и в жидком виде).

Вакцина брюшнотифозная спиртовая сухая. Препарат представляет собой инактивированные этиловым спиртом и лиофильно высушенные микробные клетки S. thyphi. Вакцина создает активный антимикробный иммунитет. Препарат предназначен для профилактики брюш ного тифа у взрослых.

2) Вакцина брюшнотифозная Ви-полисахаридная жидкая. Вакцина состоит капсулярного полисахарида S. typhi, стимулирует клеточный иммунитет и образование антител к О- и Ви-антигенам возбудителя брюшного тифа. Препарат предназначен для профилактики брюшного тифа у детей в возрасте от 3 лет и у взрослых.

БИЛЕТ 17

1. 
   Особенности строения микоплазм
   

Род Mycoplasma

Микоплазмы - самые мелкие прокариотические микроорганизмы, кокковидной формы, не имеющие клеточной стенки и способные к паразитированию на мембранах эукариотических клеток. Способность персистировать на мембранах клеток связана с наличием сходства структуры и состава цитоплазматической мембраны микоплазм с мембранами клеток эукариот и использовании микоплазмами их компонентов (прежде всего холестерина и фосфолипидов) для построения собственных структур. Микоплазмы имеют трехслойную цитоплазматическую мембрану, обеспечивающую целостность микробных клеток и частично замещающую в функциональном отношении отсутствующую клеточную стенку.

Современная систематика относит представителей семейства Mycoplasmatacea к классу Mollicutes (молликут - “мягкокожих”).

Растут на плотных средах в виде мелких врастающих в агар колоний с приподнятым центром (“яичница - глазунья”). Характеризуются малым размером генома, низким содержанием Г+Ц в ДНК. Микоплазмы прихотливы к условиям культивирования. Культивируют на средах , богатых белками, отвар из сердец КРС + соль, пептонная сыворотка.

2. 
   Вакцины живые, убитые, химические, анатоксины, синтетические, современные рекомбинантные вакцины. Принципы получения, механизмы создаваемого иммунитета. Адъюванты в вакцинах.
   

I. Живые вакцины.

Живые вакцины содержат жизнеспособные штаммы патогенных микробов, ослабленные до степени, исключающей возникновение заболевания, но полностью сохранившие антигенные и иммуногенные свойства. Это аттенуированные в естественных или искусственных условиях штаммы микроорганизмов. Аттенуированные штаммы вирусов и бактерий получают путем инактивации генов, ответственных за образование факторов вирулентности, или за счет мутаций в генах, неспецифически снижающих эту вирулентность. Вакцинные штаммы микроорганизмов, сохраняя способность размножаться, вызывают развитие бессимптомной вакцинальной инфекции. Реакцию организма на введение живой вакцины расценивают не как болезнь, а как вакцинальный процесс. Вакцинальный процесс продолжается несколько недель и приводит к формированию

иммунитета к патогенным штаммам микроорганизмов.

Живые вакцины имеют ряд преимуществ перед убитыми и химическими вакцинами. Живые вакцины создают прочный и длительный иммунитет, по напряженности приближающийся к постинфекционному. Для создания прочного иммунитета во многих случаях достаточно одного введения вакцины, причем, такие вакцины могут вводиться в организм достаточно простым методом – например, скарификационным или пероральным.

Живые вакцины используют для профилактики таких заболеваний, как полиомиелит, корь, паротит, грипп, чума, туберкулез, бруцеллез, сибирская язва и др. (см. табл.).

2) Создание вакцинных штаммов микроорганизмов с помощью методов генной инженерии путем рекомбинации геномов вирулентного и невирулентного штаммов.

Недостатки живых вакцин:

- остаточная вирулентность

- высокая реактогенность

- генетическая нестабильность – ревертирование к дикому типу, т.е. восстановление вирулентных свойств

- способность вызывать тяжелые осложнения, в том числе эецефалиты и генерализацию вакцинного процесса.

1.2. Убитые вакцины.

Убитые (корпускулярные) вакцины содержат взвесь цельных микробных клеток, инактивированных физическими и химическими методами. Для инактивации используют нагревание, ультрафиолетовое облучение, формалин, фенол, спирт, ацетон, мертиолят и др. Убитые вакцины обладают более низкой эффективностью по сравнению с живыми вакцинами, но при повторном введении создают достаточно стойкий иммунитет. Вводятся парентерально. Корпускулярные вакцины применяют для профилактики таких заболеваний, как брюшной тиф, холера, коклюш и др.

1.3. Химические вакцины.

Химические (субъединичные) вакцины содержат специфические антигены, извлеченные из микробной клетки с помощью химических веществ. Из микробных клеток извлекают протективные антигены, представляющие собой иммунологически активные вещества, способные при введении в организм обеспечивать формирование специфического иммунитета. Протективные антигены находятся либо на поверхности микробных клеток, либо в клеточной стенке, либо на клеточной мембране. По химической структуре они представляют собой либо гликопротеиды, либо белково-полисахаридно-липидные комплексы. Извлечение антигенов из микробных клеток осуществляется различными способами: экстрагированием кислотой, гидроксиламином, осаждением антигенов спиртом, сернокислым аммонием, фракционированием. Полученная таким путем вакцина содержит специфические антигены в высокой концентрации и не содержит балластных и токсических субстанций. Химические вакцины обладают низкой иммуногенностью, поэтому вводятся с адъювантами. Адъюванты - это вещества, которые сами по себе не обладают антигенными свойствами, но при введениии с каким-либо антигеном усиливают иммунный ответ на данный антиген. Такие вакцины используются для профилактики менингококковой инфекции, холеры и др.

1.4. Расщепленные (сплит) вакцины.

Расщепленные вакцины готовятся обычно из вирусов и содержат отдельные антигены вирусной частицы. Они, также, как и химические, обладают низкой иммуногенностью, поэтому вводятся с адьювантом. Примером подобной вакцины является вакцина против гриппа.

1.3.Анатоксины.

Анатоксины получают из бактериальных экзотоксинов путем обработки их формалином и теплом. При такой обработке токсины утрачивают токсичность, но сохраняют антигенные и иммуногенные свойства. Анатоксины адсорбируют на гидроокиси аллюминия и в таком виде ис-пользуют. Гидроокись аллюминия является примером адъюванта. Анатоксины применяют для создания искусственного антитоксического иммунитета. Подобные вакцины используют для профилактики дифтерии, столбняка, газовой гангрены, стафилококковой инфекции и др.

1.4.Искусственные вакцины.

1.4.1. Коньюгированные вакцины.

В качестве специфического антигенного компонента такая вакцина содержит полисахарид, выделенный из возбудителя инфекции. Полисахарид обладает слабой иммуногенностью.

Иммуногенные свойства полисахарида усиливаются, если его коньюгировать с белковым носителем. В качестве белкового носителя используется дифтерийный или столбнячный анатоксин. Концентрация носителя в вакцине низкая и не вызывает сильной иммунной реакции на себя. Подобные вакцины используются для профилактики гемофильной инфекции типа b, менингококковой инфекции, пневмококковой инфекции. Разрабатывается коньюгированная брюшнотифозная вакцина (Vi-антиген + столбнячный анатоксин) и коньюгированная дизентерийная вакцина.

1.4.2. Вакцины с искусственными адьювантами.

Принцип создания таких вакцин заключается в использовании естественных антигенов в сочетании с искусственными адьювантами (полиэлектролитами). Одним из примеров такой вакцины является гриппозная вакцина, состоящая из белков вируса гриппа (гемагглютинина и нейраминидазы) и искусственного стимулятора полиоксидония, обладающего выраженными адьювантными совйствами.

1.5.Рекомбинантные вакцины.

Рекомбинантные вакцины - это вакцины, разработанные на основе генно-инженерных методов. Принцип создания генно-инженерных вакцин включает выделение природных генов антигенов или их активных фрагментов, встройку этих генов в геном простых биологических объектов (бактерии, например, кишечная палочка, дрожжи, крупные вирусы). Необходимые для приготовления вакцины антигены получают при культивировании биологического объекта, который является продуцентом антигена. Подобная вакцина используется для профилактики гепатита В.

1.6. Комбинированные вакцины. Комбинированные вакцины (синоним – ассоциированные или комплексные вакцины) применяются во многих странах, в том числе и с России. Комплексная вакцина может содержать живые аттенуированные штаммы микроорганизмов, либо может быть убитая, либо может содержать анатоксины. Антигены в ассоциированных вакцинах часто оказывают стимулирующее действие друг на друга. Недостатком комплексных вакцин является их высокая реактогенность. Примером комплексных вакцин, применяемых в нашей стране, является вакцина АКДС, живая дивакцина для профилактики кори и паротита, живая комплексная вакцина для профилактики кори, паротита и краснухи, живая трехвалентная полиомиелитная вакцина и др.

Кроме профилактических вакцин в практике используются лечебные вакцины (гонококковая, бруцеллезная, стафилококковая). Это убитые вакцины. Также используются аутовакцины.

3. 
   Вирусы-возбудители острых респираторных заболеваний. Парамиксовирусы, общая характеристика семейства, вызываемые заболевания. Патогенез кори, специфическая профилактика
   

ВИРУСЫ ПАРАГРИППА Таксономия Вирусы парагриппа человека типов 1 -4 относятся к семейству Paramyxoviridae, роду Paramyxovirus. Биологические особенности вируса парагриппа Это вирусы сферической формы со спиральным типом симметрии. Средний размер вириона 100–800 нм. Имеют суперкапсидную оболочку с шиповидными отростками. Геном представлен линейной несегментированной молекулой РНК. РНК связана с мажорным (NP) белком.

Оболочка содержит три гликопротеида: 1) HN, обладающий гемагглютинирующей и нейраминидазной активностью; 2) F, ответственный за слияние и проявляющий гемолитическую и цитотоксическую активность; 3) М-белок, формирующий внутренний слой вирусной оболочки. На основании различий антигенной структуры HN, F и NP-белков вирусов парагриппа человека выделяют четыре основных серотипа. Типы 1, 2 и 3 антигенно родственны и перекрестно реагируют с антигеном к вирусу эпидемического паротита. Вирусы типа 4 не имеют выраженного антигенного родства. Репликация вирусов полностью реализуется в цитоплазме клеток хозяина. Для вирусов характерно наличие собственной РНК-зависимой РНК-полимеразы (транскриптазы).

Клиническое значение Вирусы парагриппа человека (ВПГЧ) передаются воздушно-капельным путём, выделяются больным во внешнюю среду в первые 3-10 дней после начала заболевания. Возбудитель репродуцируется в эпителии верхних отделов дыхательных путей, откуда проникает в кровоток, вызывая вирусемию. Ведущими симптомами парагриппа являются ринит и кашель. У взрослых часто развивается ларингит, у детей - интоксикация. Вирусы типов 1 и 2 вызывают круп, типа 3 – бронхиолит и очаговую пневмонию. Инфекции, вызванные ВПГЧ-3, протекают наиболее тяжело, особенно у детей первого года жизни, и по летальности занимают второе место после инфекций, вызванных респираторно-синцитиальным вирусом. Инфекции, обусловленные ВПГЧ-4, встречаются реже и протекают легче. Вирусы вызывают локальные вспышки, чаще в осенне-зимне-весенний период. Основной путь передачи вируса парагриппа – воздушно-капельный. Источником инфекции является больной (или вирусоноситель).

Лабораторная диагностика 1) экспресс-диагностика – выявление антигенов в клетках носовых ходов с помощью ИФА; 2) выделение возбудителя в монослоях культур почек эмбриона человека или обезьян; 3) серодиагностика (РСК, РН, РТГА с парными сыворотками больных людей).

Лечение: средства специфической лекарственной терапии отсутствуют. Специфическая профилактика не применяется. РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНЫЙ ВИРУС (РС-вирус) Таксономия Респираторно-синциальный вирус входит в состав семейства Paramyxoviridae и относится к роду Pneumovirus. Биологические особенности РС-вируса Характеризуется низкой устойчивостью, вирионы склонны к самораспаду, в очищенном виде проявляют выраженный полиморфизм. Выделяют три малых типа PC-вируса, антигенные различия между которыми обуславливает специфический поверхностный антиген. Клиническое значение PC-вирус – основной возбудитель заболеваний нижних дыхательных путей у новорожденных и детей раннего возраста. Возбудитель реплицируется в эпителии воздухоносных путей, вызывая гибель зараженных клеток, проявляет выраженные иммуносупрессивные свойства, что объясняет высокую частоту вторичных бактериальных инфекций. PC-вирус вызывает ежегодные эпидемические инфекции дыхательных путей у новорожденных и детей раннего возраста; заражение взрослых возможно, но течение инфекции у них легкое или бессимптомное. Основной путь передачи – воздушно-капельный. Вспышки инфекции возникают в осенне-зимний период. После выздоровления формируется нестойкий иммунитет.

Лабораторная диагностика 1) экспресс-диагностика – определение антигенов вируса в носовом отделяемом с помощью ИФА; 2) специфические антигены выявляют в РСК и РН. Этиотропная терапия не разработана.

ВИРУС КОРИ Таксономия Вирус кори входит в состав семейства Paramyxoviridae и относится к роду Morbillivirus. Биологические особенности вируса кори Вирионы имеют сферическую форму диаметром 150–200 нм. В центре вириона расположен нуклеокапсид со спиральным типом симметрии, окруженный внешней оболочкой с шиповидными отростками. Вирусная РНК представлена односпиральной минус-нитью. Нуклеокапсид покрыт матриксным белком, который состоит из двух липидных слоев и трех вирусных специфических белков.

Антигенная структура: 1) гемагглютинин (Н); 2) пептид F; 3) нуклеокапсидный белок (NP). Клиническое значение Источником инфекции при кори является больной человек. Вирус кори передаётся воздушно-капельным путём, реже контактно и проникает в организм через слизистые оболочки верхних дыхательных путей. Первоначально вирус размножается в эпителии верхних отделов дыхательных путей и регионарных лимфатических узлах, а затем проникает в кровоток. Вирусемия носит кратковременный характер. Возбудитель гематогенно разносится по всему организму, фиксируясь в ретикулоэндотелиальной системе. Активность иммунных механизмов, направленных на уничтожение инфицированных клеток, приводит к высвобождению вируса и развитию второй волны вирусемии. Тропность возбудителя к эпителиальным клеткам приводит к вторичному инфицированию конъюнктивы, слизистых оболочек дыхательных путей и полости рта. Циркуляция в кровотоке и формирующиеся защитные реакции обуславливают повреждение стенок сосудов, отек тканей и некротические изменения в них. В течении заболевания выделяют 3 периода: катаральный период, период высыпания и период пигментации сыпи. Обычно корью заболевают дети в возрасте от 5 до 10 лет, но в последнее время часто регистрируются случаи заболевания среди взрослого населения. Наиболее опасны осложнения кори с поражением центральной нервной системы: энцефалит, энцефаломиелит и смертельное заболевание - подострый склерозирующий панэнцефалит.

Лабораторная диагностика 1) Обнаружение многоядерных клеток и антигенов возбудителя (в реакции иммунофлюоресценции) в отделяемом носоглотки. 2) Выделение вируса на первично-трипсинизированных культурах клеток почек обезьян или эмбриона человека. 3) Выявление нарастания титров антигенов в период реконвалесценции. Лечение: средства специфической терапии отсутствуют. Специфическая профилактика: 1) противокоревой иммуноглобулин человека; 2) живая аттенуированная вакцина.

БИЛЕТ 18

1. 
   Особенности строения хламидий
   

Хламидии и риккетсии относятся к облигатным внутриклеточным паразитам.

Хламидии- мелкие неподвижные бескапсульные Гр-бактерии. Имеют шаровидную, овоидную или палочковидную фрму. Размеры 0,2-1,5 мкм. Морфология и размеры зависят от стадии их внутриклеточного развития, для которого характерно превращение небольшого шаровидного элементарного образования в крупное инициальное тельце с бинарным делением. Перед делением частицы хламидий обволакиваются образованием, напоминающем бактериальную капсулу.

Окрашиваются по Романовскому –Гимзе. Гр-. Хорошо видны в прижизненных препаратах при фазово-контрастной микроскопии.

Хламидии не растут на питательных средах самого сложного состава (это сближает их по свойствам с риккетсиями и особенно - с вирусами), для их культивирования могут быть использованы лабораторные животные и куриные эмбрионы (биопроба) и особенно чувствительные линии клеток животных - чаще клетки McCoy (чаще с обработкой цитостатиками для повышения чувствительности), которые считались “золотым стандартом” диагностики. Не растут на искусственных питательных средах.

Хламидии – это бактерии, которые относятся к отд. Gracilicutes, сем. Chlamydiaceae. Они имеют различную форму (шаровидную, овоидную, палочковидную) и  размеры от 0,2 до 1,5 мкм . Грам «-». Хламидии – это облигатные внутриклеточные паразиты. У них  не образуется АТФ. Хламидии – это энергетические паразиты.

 Выделяют 2 формы хламидий: 1) элементарные тельца (0,3 мкм) – вне клетки; способны заражать другие клетки;2) ретикулярные тельца (до 1,5 мкм) – внутри клетки,  они способные к бинарному делению. В результате этого в клетке образуются  микроколонии хламидий, которые находятся в вакуоли. Затем они распадаются на элементарные тельца и покидают клетку. Клетка погибает, а элементарные тельца заражают новые клетки.

 Хламидии окрашиваются по методу Романовского-Гимзы. В живом состоянии обнаруживают при фазово-контрастной микроскопии. Вызывают у человека заболевания: трахому, орнитоз, конъюнктивит и др.

2. 
   Понятие «ИНФЕКЦИИ», « инфекционный процесс», « инфекционная болезнь». Условия возникновения инфекционной болезни. Этапы и механизмы инфекционного процесса.
   

Инфекция(инфекционный процесс) - совокупность всех биологических явлений и процессов, возникающих в организме при внедрении и размножении в нем патогенных микробов.

Может приводить к развитию скрытого или явного патологического процесса, к микробоносительству или длительному персистированию микробов в организме.

Инфекционный процесс может быть:

по длительности- острый и хронический.

Острая циклическая инфекция заканчивается элиминацией (удалением) возбудителя или смертью больного.

При хронической инфекции возбудитель длительно сохраняется в организме (это состояние называется персистенция).

Для персистенции микроорганизмы имеют ряд механизмов- внутриклеточная локализация (укрываются в клетке), переход в не имеющие клеточной стенки L- формы, антигенная мимикрия (совпадение по химическому составу антигенных детерминант микроба и клеток хозяина ), укрытие в локальных очагах и забарьерных органах (головной мозг),

Для вирусов дополнительными факторами персистенции является интеграция генома вируса с хромосомой клетки- мишени, недоступность действию антител, наличие дефектных вирусных частиц и слабая индукция иммунного ответа и др. Персистенция в организме и периодическая смена хозяина- два основных механизма поддержания микробных популяций.

по степени распространения- локальный и генерализованный.

Локальный инфекционный процесс- возбудитель сосредоточен в определенном очаге, не выходя за его пределы(например в одном органе или ткани) , что сдерживает механизмы защиты.

Если микроорганизм способен диссеминировать по организму, возникает генерализованный процесс. Существует два основных пути распространения- лимфогенный (по лимфатической системе) и гематогенный (по кровяным сосудам).

по выраженности- манифестный и инаппарантный.

Манифестный (ярко выраженный) инфекционный процесс- инфекционная болезнь- типичная, атипичная, хроническая и т.д.

Бессимптомный (инаппарантный) инфекционный процесс характерен для латентной инфекции. Размножение возбудителя в организме не сопровождается клиническими проявлениями, а только иммунными реакциями.

Инфекционные заболевания имеют ряд отличий от соматических, в том числе- наличие возбудителя, заразность, цикличность течения.

Инфекционная болезнь- крайняя степень инфекционного процесса всегда сопровождаемая клин.симптомами

Условия возникновения инфекционной болезни:

1. Наличие вирулентного микроба

2. Критическая доза

3. Входные ворота инфекции

4. Состояния организма

5. Окружающая среда и социальные факторы

Основные этапы инфекционного процесса.

1.Адгезия- прикрепление микроорганизма к соответствующим клеткам хозяина.

2.Колонизация- закрепление микроорганизмов в соответствующем участке.

3.Размножение (увеличение количества- мультипликация).

4.Пенетрация- проникновение в нижележащие слои и распространение инфекта.

5. Агрессия: 1) способность противостоять защитным факторам организма 2) токсичность

Адгезия

Адгезия может быть неспецифическая, осуществляется за счет Ван-дер-ваальсовых силых; гидрофобности микробной клетки, водородных связей и пр.

Главную роль играет специфическая адгезия, которая осуществляется за счет специфических химических структур на поверхности микробных клеток, взаимодействующих с рецепторами

клеток-мишеней организма; разнообразных по химической структуре и локализации в микробной клетки:

1. ворсинки (пили) – у грам «-» преимущественно

2. белки и тейхоевые кислоты – у грам «+» преимущественно

3. капсула (микрокапсула)

Инвазия

Это процесс проникновения через слизистые, соединительнотканные и другие барьеры вглубь тканей и распространение по организму. Инвазия обеспечивается ферментами

Ферменты инвазии:

гиалуронидаза – расщепляет гиалуроновую кислоту, входящую в состав соединительной ткани, что приводит к повышению её проницаемости, а также к повышению проницаемости слизистых оболочек;

нейраминидаза (сиалидаза) – разрушает гликозидные связи в олигосахаридах,

гликоконъюгатах, тем самым увеличивая проницаемость тканей;

лецитиназа (лецитовителлаза) – разрушает лецитин, входящий в состав оболочек клеток, что ведет к их разрушению;

ДНК-аза, РНК-аза – ферменты расщепляющие нуклеиновые кислоты;

плазмокоагулаза (коагулаза) – обеспечивает свертывание плазмы, что формирует защитную оболочку вокруг бактерий в тканях, тем самым, защищая возбудитель от иммунных механизмов;

фибринолизин – фермент, обеспечивающий разрушение сгустка плазмы;

коллагеназа и пр. – ферменты, разрушающие коллагеновые волокна.

Пути распространения возбудителей в организме:

1. гематогенный

2. лимфогенный

3. по нервным стволам (для вирусов)

Пенетрация.

Проникновение внутрь эпителиальных клеток, лейкоцитов, лимфоцитов у бактерий происходит путем связывания с мембранными белками клетки. В результате этого изменяется конформация микротрубочек, и мембрана впячивается – бактерии оказываются внутри клетки.

Размножаясь внутри клетки, бактерии могут проникать в соседние клетки без выхода в окружающую среду. При этом происходит разрушение клеток. Например, размножение шигелл (возбудителей дизентерии) в эпителии толстой кишки приводит к нарушению целостности слизистой оболочки, способствует проникновению микроба в подслизистый слой и развитию воспаления. Способность к внутриклеточному размножению свойственна не всем бактериям и связана с устойчивостью к лизосомальным ферментам. Но есть бактерии, которые не могут размножаться вне клеток, так как не способны обеспечить энергией процессы биосинтеза. Такие бактерии называют облигатными (обязательными) внутриклеточными паразитами. К ним относятся хламидии и риккетсии. Находясь внутри клетки, бактерии, как правило, становятся недоступными для действия защитных факторов

Агрессия.

Под агрессией понимают:

I. Способность противостоять защитным факторам организма.

II. Способность вызывать интоксикацию организма:

Способность противостоять защитным факторам организма, главным образом, и определяет возможность персистенции микроба в организме. Защиту от иммунных механизмов осуществляют как структуры микроорганизма, так и ферменты.

· Структуры микроба – капсула препятствует фагоцитозу; белок А у стафилококков связывает иммуноглобулины, тем самым также препятствует фагоцитозу и пр.;

· Ферменты микроба:

протеазы - разрушают иммуноглобулины, комплемент, лизоцим;

каталаза, пероксидаза - инактивируют перекисные соединения фагоцитов, что позволяет микробу выживать внутри фагоцитов и, в ряде случаев, размножаться;

плазмокоагулаза - вызывает свёртывание плазмы (см. выше текст).

Токсичность микроба связана с эндо- и экзотоксинами, а также с ферментами:

декарбоксилазы, уреаза - расщепляют субстрат с накоплением токсических продуктов – аммиака, биогенных аминов и пр

3. 
   Клостридии столбняка, экология. Свойства микробов, токсинов и их патогенетическое действие. Столбняк новорожденных. Специфическая терапия и профилактик столбняка.
   

Столбняк — тяжелая раневая инфекция, вызываемая Clostridiumtetani, характеризуется поражением нервной системы, приступами тонических и клонических судорог.

Таксономия. С. tetani относится к отделу Firmicutes, роду Clostridium.

Морфологические свойства. Возбудитель - подвижная (перитрих) грамположительная палочка, образует споры, чаще круглые, реже овальные, споры расположены терминально. В культуре старше 24 ч бактерии становятся грамотрицательными. Капсул не образуют.

Культуральные свойства. Облигатный анаэроб. На жидких питательных средах бактерии растут придонно, продуцируя сильный экзотоксин. На плотных питательных средах образуют прозрачные или слегка сероватые колонии с шероховатой поверхностью. Не расщепляют углеводов, обладают слабым протеолитическим действием.

Антигенная структура и токсинообразование. По жгутиковому Н-антигену делится на 10 сероваров; О-антиген является общим для всех представителей вида. Возбудитель продуцирует два патогенных растворимых антигена — тетанолизин и тетаноспазмин, составляющих две фракции столбнячного экзотоксина.

Факторы патогенности. Основным фактором патогенности является экзотоксин. Тетанолизин и тетаноспазмин оказывают соответственно гемолитическое (вызывает лизис эритроцитов) и спастическое (вызывает непроизвольное сокращение мышц) действие.

Резистентность. Являясь нормальным обитателем кишечника животных, человека, клостридии попадают в окружающую среду, в почву с фекалиями, ще в виде спор могут сохраняться годами. Споры столбнячной палочки отличаются термоустойчивостью: при кипячении погибают лишь через 50—60 мин..

Эпидемиология и патогенез. Заражение происходит при проникновении возбудителя в организм через дефекты кожи и слизистых оболочек при ранениях (боевых, производственных, бытовых), ожогах, обморожениях, через операционные раны, после инъекций. При инфицировании пуповины возможно развитие столбняка у новорожденных («пупочный столбняк»).

Патогенез. Главным патогенетическим фактором является столбнячный токсин. Палочки столбняка остаются в раневой ткани, т.е. на месте внедрения, и не распространяются по организму. От места размножения возбудителя токсин распространяется по кровеносным и лимфатическим сосудам, по нервным стволам, достигает спинного и продолговатого мозга и поражает нервные окончания синапсов, секретирующих медиаторы (ацетилхолин), в результате чего нарушается проведение импульсов по нервным волокнам.

Клиника. Инкубационный период составляет в среднем 6— 14 дней. У больных наблюдаются спазм жевательных мышц, затрудненное глотание, напряжение мышц затылка, спины (туловище принимает дугообразное положение — опистотонус), груди и живота. Характерны постоянные мышечные боли, повышенная чувствительность к различным раздражителям, частые генерализованные судороги. Болезнь протекает при повышенной температуре тела и ясном сознании.

Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет не вырабатывается. От матери, вакцинированной против столбняка, новорожденным передается непродолжительный пассивный антитоксический иммунитет.

Микробиологическая диагностика. Для бактериологического исследования берут материал из раны и очагов воспаления, а также кровь. В культурах выявляют столбнячный токсин, проводя опыт на мышах, у которых развивается характерная клиническая картина. Обнаружение столбнячного токсина при наличии грамположительных палочек с круглыми терминальными спорами позволяет сделать заключение, что в исследуемом материале присутствует С. tetani.

Лечение.Адсорбированный столбнячный анатоксин. Получен путем обезвреживания формалином столбнячного токсина с последующей его очисткой, концентрацией и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Входит в состав ассоциированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакцины и других препаратов. Применяется для активной иммунизации против столбняка.

Противостолбнячная сыворотка. Получена из крови лошадей, гинериммунизированных столбнячным анатоксином. Применяется для профилактики и лечения столбняка..

Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный. Получен из гамма-глобулиновой фракции крови людей-доноров, ревакцинированных очищенным столбнячным анатоксином. Применяется для пассивной экстренной профилактики столбняка в сочетании со столбнячным анатоксином при повреждениях кожных покровов, а также для лечения начавшегося заболевания.

Профилактика: При обширных травмах необходимо обратиться к врачу. Проводится хирургическая обработка раны. Надежным способом защиты от столбняка является специфическая профилактика, которая состоит в проведении плановой и экстренной иммунизации. Экстренная пассивная иммунизация осуществляется у привитых детей и взрослых в случаях травм, ожогов и обморожений путем введения 0,5 мл сорбированного столбнячного анатоксина; непривитым вводят 1 мл столбнячного анатоксина и человеческий иммуноглобулин. Для создания искусственного активного иммунитета применяют адсорбированный столбнячный анатоксин в составе вакцин АКДС и АДС или секстанатоксина. Вакцинацию начинают с 3—5-месячного возраста и затем периодически проводят ревакцинации.

Стобняк (tetanus) – тяжёлая раневая инфекция, вызываемая Clostridium tetani, характеризующаяся поражением нервной системы, приступами тонических и клонических судорог.

Морфология и культивирование

• Столбнячная палочка - строгий анаэроб, грамположительная, перетрих, образует споры

• Продуцирует сильный экзотоксин при выращивании на жидких питательных средах. На плотных питательных средах образует прозрачные и слегка сероватые колонии с шероховатой поверхностью.

• Не расщепляет углеводы, обладает протеолитическими свойствами

Антигенная структура

• По Н-антигены выделяют 10 сероваров, О-антиген является общим у всех сероваров.

• Все серовары продуцируют однородный столбнячный экзотоксин

Факторы патогенности

• Столбнячный токсин – основной фактор патогенности. Это белок около 150 кД, состоит из тетанолизина и тетаноспазмина, оказывающих гемолитическое и спастическое действие. К столбнячному токсину чувствительны человек, мыши, морские свинки, кролики и другие животные.

Резистентность и экология

• C.tetaniнормальный обитатель кишечника человека и животных, попадает в почву, где в виде спор может сохраняться десятилетиями.

• Споры устойчивы к дезинфектантам, при кипячении погибают через 50- 60 минут.

Эпидемиология

• Столбняк распространён повсеместно, вызывает спорадическую заболеваемость с высокой летальностью

• Заражение происходит при попадании спор при ранениях (боевых, производственных, бытовых), обморожениях, ожогах, через операционные раны, при инфицировании пуповины (столбняк новорождённых).

• Больной не заразен для окружающих.

при родах,у новорожденныхчерез пуповину, обрезанную нестерильным инструментом, развивающуюся в течение первых 10 дней после рождения. К числу ранних признаков заболевания относятся затрудненное сосание, раздражительность и повышенная плаксивость, сочетающаяся с гримасой, сопровождающейся особым сжиманием мышц лица и нижней челюсти. При нарастании напряжения мышц появляется выгибание позвоночника, сгибание рук, сжатие кисти в кулак, разгибание ног и подошвенное сгибание стопы. При малейшем раздражении наступают судороги.

Основой лечения является введение противостолбнячной сыворотки или введение противостолбнячного человеческого иммуноглобулина, наркотических средств для уменьшения судорог, перевод малыша на аппаратное дыхание.

Патогенез

• Главный патогенетический фактор – столбнячный токсин. Из места размножения возбудителя (рана) он распространяется по кровеносным, лимфатическим сосудам, нервным стволам, вызывая поражение нервной системы. Поражаются нервные окончания синапсов, секретирующие медиаторы (ацетилхолин и другие вещества), нарушая проведение импульсов по нервным волокнам. При столбняке поражается не только нервная система, в патологический процесс вовлекаются практически все системы организма.

Клиническая картина

• Инкубационный период составляет 6 -14 дней. У больных наблюдается спазм жевательных мышц, затруднённое глотание, напряжение мышц затылка, спины (туловище принимает дугообразное положение – опистотонус), судороги мышц всего тела, повышенная чувствительность к различным раздражителям.

Заболевание протекает при повышенной температуре тела и ясном сознании.

Иммунитет

• После перенесения инфекции иммунитет не вырабатывается.

• От матери к плоду передаётся непродолжительный пассивный антитоксический иммунитет.

Микробиологическая диагностика

• При столбняке яркая клиническая картина. Бактериологические исследования проводят лишь для подтверждения клинического диагноза.

Исследуют материал из раны, воспалительных очагов, кровь, секционный материал; с профилактичекой целью исследуют шовный и перевязочный материал.

• Биопроба на мышах.

Лечение и профилактика

• Для лечения применяют противостолбнячную антитоксическую сыворотку или противостолбнячный иммуноглобулин человека

• Для профилактики проводят: хирургическую обработку раны, введение столбнячного анатоксина и человеческого противостолбнячного иммуноглобулина

Лечение.Адсорбированный столбнячный анатоксин. Получен путем обезвреживания формалином столбнячного токсина с последующей его очисткой, концентрацией и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Входит в состав ассоциированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакцины и других препаратов. Применяется для активной иммунизации против столбняка.

Противостолбнячная сыворотка. Получена из крови лошадей, гинериммунизированных столбнячным анатоксином. Применяется для профилактики и лечения столбняка..

Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный. Получен из гамма-глобулиновой фракции крови людей-доноров, ревакцинированных очищенным столбнячным анатоксином. Применяется для пассивной экстренной профилактики столбняка в сочетании со столбнячным анатоксином при повреждениях кожных покровов, а также для лечения начавшегося заболевания.

Профилактика: При обширных травмах необходимо обратиться к врачу. Проводится хирургическая обработка раны. Надежным способом защиты от столбняка является специфическая профилактика, которая состоит в проведении плановой и экстренной иммунизации. Экстренная пассивная иммунизация осуществляется у привитых детей и взрослых в случаях травм, ожогов и обморожений путем введения 0,5 мл сорбированного столбнячного анатоксина; непривитым вводят 1 мл столбнячного анатоксина и человеческий иммуноглобулин. Для создания искусственного активного иммунитета применяют адсорбированный столбнячный анатоксин в составе вакцин АКДС и АДС или секстанатоксина. Вакцинацию начинают с 3—5-месячного возраста и затем периодически проводят ревакцинации.

Препараты для активной иммунизации.

1). Вакцина коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная жидкая - АКДС-вакцина. Препарат представляет собой смесь коклюшной убитой вакцины и очищенных дифтерийного и столбнячного анатоксинов, адсорбированных на гидроокиси аллюминия. Препарат предназначен для профилактики коклюша, дифтерии и столбняка у детей в возрасте от 3 месяцев. Курс вакцинации состоит из 3 прививок с интервалом 1,5 месяца. Вакцина создает активный иммунитет против всех трех инфекций. Ревакцинацию АКДС-вакциной проводят в 18 мес., в 7 и 14 лет – АДС-М анатоксином.

2). Анатоксин дифтерийно-столбнячный очищенный адсорбированный - АДС-анатоксин. Препарат представляет собой смесь очищенных дифтерийного и столбнячного анатоксинов, адсорбированных на гидроокиси алюминия. Препарат предназначен для профилактики дифтерии и столбняка у детей до 6-летнего возраста, т.е. для ревакцинации.

3). Анатоксин дифтерийно-столбнячный очищенный адсорбированный с уменьшенным содержанием антигенов - АДС-М-анатоксин. Препарат содержит смесь очищенных дифтерийного и столбнячного анатоксинов, адсорбированных на гидроокиси алюминия. Препарат предназначен для профилактики дифтерии и столбняка у детей с 6-летнего возраста, у подростков и взрослых.

4). Вакцина Тетракок (фирма Пастер-Мерье, Франция)также зарегистрирована в России. Вакцина содержит смесь дифтерийного и столбнячного анатоксинов, адсорбированных на гидроокиси алюминия, коклюшную суспензию и инактивированную полиомиелитную вакцину 1, 2 и 3 типов. Препарат предназначен для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка и полиомиелита. Вакцина обладает более выраженной реактогенностью, чем отечественная АКДС-вакцина: сильные темпера турные реакции могут развиваться после введения Тетракок-вакцины у7-8% привитых. Курс вакцинации состоит из 3 прививок с интерваломв 1-2 месяца с последующей ревакцинацией через год.

5). Анатоксин дифтерийный очищенный адсорбированный с уменьшенным содержанием антигена - АД-М-анатоксин. Препарат содержит очищенный дифтерийный анатоксин, адсорбированный на гидроокиси алюминия. Препарат предназначен для профилактики дифтерии у детей с 6-летнего возраста, подростков и взрослых.

6). Для профилактики столбняка используется адсорбированный столбнячный анатоксин (АС-анатоксин). Иммунизацию против столбняка проводят в плановом порядке в соответствии с возрастом одновременно с иммунизацией против дифтерии и коклюша (АКДС-вак-циной) или одновременно с иммунизацией против дифтерии (АДС- или АДС-М- анатоксином).

БИЛЕТ 19

1. 
   Роль отечественных ученых в развитие микробиологии( И.И. Мечников, Г.И. Габричевский, Л.К. Заболотный, Н.Ф. Гамалея, Л.А. Зильбер, Э.В. Ермольева, П.Ф. Здродовский, В.Д. Тимаков, А.А. Смородинцев, В.И Иоффе)
   

• 
  Мечников- разработал фагоцитарную теорию иммунитета – невосприимчивости организма к заразным болезням. Ему принадлежит идея использования антагонистических отношений между микроорганизмами , что легло в основу современного учения об антибиотиках , организовал первую бактериологическую лабораторию в Одессе.
  

Введение в России прививок в против сибирской язвы открыло дорогу вакцинации против бешенства.

• 
  Габричевский – глава московской бактериологической школы.Работал в области специфического лечения и профилактики скарлатины, возвратного тифа. «Стрептококковая теория» течения скарлатины.
  

Ввел в России серотерапию. Изучал механизмы невосприимчивости к возвратному тифу,Ю дифтерии ,скарлатине.

• 
  Заболотный – заведовал в отделом в петербугской лаборатории.
  

- работы по микробиологии и эпидемиологи чумы, холеры ,брюшного тифа и экспериментального тифа.

Им были установлены пути передачи чумы от грызунов, роль тарбаганов как носителей возбудителя, природная очаговость чумы. Это положило начало развитию отечественной микробиологии.

• 
  Гамалея- в 1886 г. Работал у Пастера по бешенству и совместно с Мечниковым и Бардахом основал первую в России бактериологическую пастеровскую станцию, где изготавливалась антибарическая вакцина и проводилась вакцинация людей против бешенства.
  

Автор научных работ ,посвященных бешенству ,холере и др.

• 
  Зильбер – является основателем вирусной теории происхождения опухолей, выделил возбудителя дальневосточного клещевого энцефалита.
  
• 
  Ермольева – российский микробиолог.
  

Получила первые отечественные образцы антибиотиков- пенициллина, стрептомицина , препарат интерферон.

• 
  Здродовский – занимался проблемой риккетсиозов, малярии , бруцеллеза и регуляции иммунитета.
  
• 
  Тимаков – является одним из основателей учения о микоплазмах и L-формах бактерий , занимался генетикой микроорганизмов , бактериофагией , профилактикой инфекционных болезней.
  
• 
  Смородинцев – создание вакцины для спецефич. Профилактики клещевого энцефалита, вакцины для профилактики гриппа ,кори , краснухи, паротита, полиомиелита. (совместно с Чумаковым)
  

Иоффе – вклад в развитии микробиологии , вирусологии и иммунологии.

2. 
   Антигенная структура токсинов, анатоксины. Антигены вирусов.
   

Токсины:

Эндотоксины высвобождаются только при гибели бактерий, характерны для грамотрицательных бактерий, представляют собой сложные химические соединения клеточной стенки (ЛПС)- подробнее смотри лекцию по химическому составу бактерий. Токсичность определяется липидом А, токсин относительно термостоек; иммуногенные и токсические свойства выражены более слабо, чем у экзотоксинов.

Химическая природа: ЛПС, пептидогликан, тейхоевые кислоты

• Связаны с оболочкой клетки

• Грам «-»

• Мало чувствительны к температуре

• Неспецифическое действие

• Опосредованное действие (через цитокины)

• Низкая иммуногенность

• Нельзя получить анатоксин

Эндотоксины не обладают выраженной специфичностью действия. При введении в организм животного они вызывают более или менее однотипную реакцию: падение давления, одышка, снижение ССС, повышение температуры. У людей при попадании в кровоток возникает лихорадочная (пирогенная) реакция. Действия эндотоксинов на организм опосредованное – через клетки крови (гранулоциты, моноциты), которые под действием эндотоксинов выделяют биологически активные вещества, оказывающие воздействие на ткани.

Экзотоксины продуцируются во внешнюю среду (организм хозяина), обычно белковой природы, могут проявлять ферментативную активность, могут секретировать как гр+ , так и гр- бактериями. Они обладают очень высокой токсичностью, термически нестойки, часто проявляют антиметаболитные свойства.

Химическая природа: белки

• Чаще секретируется наружу

• Чаще у Грам «+»

• Чувствительные к температуре (термически нестойки)

• Специфичность действия

• Прямое действие на клетки

• Высокая иммуногенность

• Можно получить анатоксин (вещ-во, которое не обладает токсичностью, но сохраняет его антигенные и имуногенные св-ва)

Специфичность токсического действия экзотоксина определяется избирательной фиксацией его на рецепторах «клеток-мишеней» определенных тканей организма человека и животных (эпителии кишечника, нервных ганглиях и пр.). Действие экзотоксина обусловлено определенной частью молекулы – рецепторно-токсической, разрушение этой части под действием формалина лишает молекулу экзотоксина возможности связаться с «клеткой-мишенью». При этом вполне сохраняется способность молекулы вызвать иммунный ответ в организме. Это нашло применение в создании иммунных профилактических препаратов – анатоксинов, используемых для профилактики инфекционных заболеваний, стимулирующих формирование антитоксического иммунитета (дифтерийный анатоксин, столбнячный анатоксин)

Вирусными антигенами называются продукты вирусспецифического синтеза, несущие признаки чужеродной генетической информации и вызывающие иммунный ответ.

К ним относятся структурные и неструктурные вирусные белки. Защита от вирусной инфекции зависит от выраженности иммунного ответа на антигены, расположенные на поверхности вирионов.Например, белки герпесвирусов эксперссируются каскадно и большинство нестук-турных белков синтезируется на ранней стадии репликации вируса. После про-цессинга они презентируются МНС классом I (главным комплексом гистосов-местимости, класс I) на плазматической мембране инфицированных клеток и распознаются специфическими цитотоксическими Т-клетками. Поэтому инфицированные клетки могут различаться эффекторными цитотоксическими Т-лимфоцитами до завершения цикла вирусной репликации. Каждый вирус представляет собой сложную смесь антигенов, определяемую в первую очередь структурными белками. Являясь сложными корпускулярными антигенами вирусы обычно вызывают выраженный иммунный ответ и большая часть их белков способна вызывать синтез специфических антител. Вирусные белки неравнозначны по своей антигенной активности. Наиболее явные и доступные мишени для иммунного ответа — белки, расположенные на поверхности вирусных частиц. Это прежде всего относится к вирусным гликопротеинам, расположенным на поверхности вирусных частиц, и экспрессированным на поверхности зараженных клеток. Гликопротеины поверхности оболочечных вирусов и капсидные белки безоболочечных вирусов являются главными протективными антигенами.

Под специфичностью вирусного антигена подразумевают его способность избирательно реагировать с антителами или сенсибилизированными лимфоцитами, являющимися ответом на введение данного антигена. Участок антигена, который узнается специфическим лимфоцитом, и с которым впоследствии взаимодействует специфическое антитело, называется антигенной детерминантой. Иммунологическая специфичность определяется не всей молекулой антигена, а лишь входящими в ее состав антигенными детерминантами (эпитопами). Участки вирусного белка, индуцирующие образование антител и специфически связывающиеся с ними, принято называть антигенными участками (доменами). Антитела соответствующей специфичности образуются к каждой антигенной детерминанте. Антитела к определенной детерминанте реагируют только с ней или с другой очень сходной структурой. Специфичность антигена определяется совокупностью детерминант, а его валентность — количеством однородных антигенных детерминант. Антигенность детерминант зависит от их пространственной структуры и размера молекулы антигена. Антигенные детерминанты состоят обычно из 10—20 аминокислотных остатков и содержат гидрофильные группы. Наиболее гидрофильными

аминокислотами являются лизин, аргинин, аспарагиновая кислота и глютаминовая кислота. Считается, что те участки молекулы белка, в которых их содержание относительно велико, предпочитают водное окружение и поэтому располагаются на поверхности. Различают линейные (непрерывные) и конформационные (прерывистые) детерминанты. Антитела образуются преимущественно к конформационным детерминантам, расположенным, как правило, на поверхности вирионов, и зависят от третичной структуры молекулы антигена

Вирионные белки разных вирусов различаются типоспецифичностью и вариабельностью. Одни из них обладают высокой вариабельностью, другие характеризуются консервативностью. Группоспецифические антигены являются высококонсервтивными, находятся обычно внутри вирионов и могут быть сходными у нескольких представителей рода данного семейства вирусов. Например, субвирусные частицы 12S вируса ящура содержат высококонсервативный белок, который выявляется моноклональными антителами одной специфичности у шести из семи известных типов вируса. Однако иммунизация ими не сопровождалась образованием ВН-антител. Типоспецифические антигены связаны с вариабельными областями белков, обычно расположенными в наружных частях вирионов, и обладают узкой специфичностью, присущей одной группе вирусов

3. 
   Шигеллы, характеристика, возбудителей, классификация, патогенез и эпидемиология (связь с вирулентностью). Эволюция в связи с особенностями возбудителей, изменения этиологической структуры и эпидемиологические особенности. Клиника, лабораторная диагностика, общая и специфическая профилактика. Терапия.
   

Морфологияи другие биологические свойства. Шигеллы представляют собой короткие неподвижные грамотрицательные палочки. Не образуют капсул и спор. Факультативные анаэробы. Растут в широком диапазоне температур (от 10 до 45°С), оптимальная температура - 37°С, оптимальная рН 6,7 – 7,2. К составу питательных сред не требовательны. На плотных средах образуют мелкие (диаметром около 2 мм) гладкие, с ровными краями, выпуклые, блестящие, полупрозрачные  колонии. На плотных дифференциально-диагностических средах с лактозой (Плоскирева, Эндо, Левина) колонии бесцветные. На жидких средах вызывают равномерное помутнение.  Углеводы ферментируют до кислоты. Не ферментируют лактозу (за исключениемSh. sonnei,которая способна ферментировать лактозу замедленно, в течение 48 - 120 часов). Не продуцируют сероводород, не разжижают желатин. Могут образовывать индол. Содержат соматический О- и капсульные К-антигены. В зависимости от осособенностей строения О-антигена делятся на 4 подгруппы или вида:   подгруппа А –Sh. dysenteriae(13 сероваров); подгруппа В –Sh. flexneri(6 сероваров); подгруппа С –Sh. boydii(18 сероваров); подгруппа D –Sh. sonnei.