Микра экз. Билет 1 Генетические и биохимические механизмы Лекарственной устойчивости. Путь преодоления лекарственной устойчивости бактерий

• Название: Билет 1 Генетические и биохимические механизмы Лекарственной устойчивости. Путь преодоления лекарственной устойчивости бактерий
• Анкор: Микра экз
• Дата: 25.01.2020
• Размер: 0.84 Mb.
• Имя файла: mikra_bilety1.docx
• Тип: Документы; #105758
• страница: 8 из 13

Центральные и периферические органы иммунной системы

Иммунная системы человека обеспечивает специфическую защиту организма от генетически чужеродных молекул и клеток, в том числе инфекционных агентов – бактерий, вирусов, грибов, простейших.

Лимфоидные клетки созревают и функционируют в определенных органах.

Органы иммунной системы делят на:

1) первичные (центральные); вилочковая железа, костный мозг являются местами дифференцировки популяций лимфоцитов;

2) вторичные (периферические); селезенка, лимфатические узлы, миндалины, ассоциированная с кишечником и бронхами лимфоидная ткань заселяются В– и Т-лимфоцитами из центральных органов иммунной системы; после контакта с антигеном в этих органах лимфоциты включаются в рециркуляцию.

Вилочковая железа (тимус) играет ведущую роль в регуляции популяции Т-лимфоцитов. Тимус поставляет лимфоциты, в которых для роста и развития лимфоидных органов и клеточных популяций в различных тканях нуждается эмбрион.

Дифференцируясь, лимфоциты благодаря освобождению гуморальных веществ получают антигенные маркеры.

Корковый слой густо заполнен лимфоцитами, на которые воздействуют тимические факторы. В мозговом слое находятся зрелые Т-лимфоциты, покидающие вилочковую железу и включающиеся в циркуляцию в качестве Т-хелперов, Т-киллеров, Т-супрессоров.

Костный мозг поставляет клетки-предшественники для различных популяций лимфоцитов и макрофагов, в нем протекают специфические иммунные реакции. Он служит основным источником сывороточных иммуноглобулинов.

Селезенка заселяется лимфоцитами в позднем эмбриональном периоде после рождения. В белой пульпе имеются тимусзависимые и тимуснезависимые зоны, которые заселяются Т– и В-лимфоцитами. Попадающие в организм антигены индуцируют образование лимфобластов в тимусзависимой зоне селезенки, а в тимуснезависимой зоне отмечаются пролиферация лимфоцитов и образование плазматических клеток.

Лимфоциты поступают в лимфатические узлы по афферентным лимфатическим сосудам. Перемещение лимфоцитов между тканями, кровеносным руслом и лимфоузлами позволяет антиген-чувствительным клеткам обнаруживать антиген и скапливаться в тех местах, где происходит иммунная реакция, а распространение по организму клеток памяти и их потомков позволяет лимфоидной системе организовать генерализованный иммунный ответ.

Лимфатические фолликулы пищеварительного тракта и дыхательной системы служат главными входными воротами для антигенов. В этих органах наблюдается тесная связь между лимфоидными клетками и эндотелием, как и в центральных органах иммунной системы.

3. 
   Дисбактериоз. Факторы, влияющие на его формирование. Стадии дисбактериоза. Лабораторная диагностика дисбактериозов. Препараты, применяемые, для профилактики и лечения дисбактериозов.
   

Дисбактериоз кишечника - не является самостоятельным заболеванием; это не специфическая реакция организма на неблагоприятное воздействие различных факторов, вследствие которой происходит нарушение нормальной микрофлоры кишечника.

Факторы, влияющие на его формирование.

Длительно протекающие инфекции и расстройства, при которых не удается выделить патогенные энтеробактерии; затяжной период реконвалесценции после перенесенной кишечной инфекции; дисфункции ЖКТ на фоне или после проведенной антибиотикотерапии или у лиц, постоянно контактирующих с антимикробными препаратами. Исследования также следует проводить при болезнях злокачественного роста, у страдающих диспептическими расстройствами, лиц подготавливаемых к операциям на органах брюшной полости, недоношенных или травмированных новорожденных, а также при наличии бактериемий и гнойных процессов, трудно поддающихся лечению (язвенные колиты и энтероколиты, пиелиты, холециститы и др.).

Стадии дисбактериоза.

Степени изменения аутомикрофлоры при дисбактериозе кишечника:

• 1степень (компенсаторная форма). Изменяется количественно 1 вид аэробной флоры или 1 вид микроорганизмов.

• 2 степень («группа риска») Выявляются количественные и качественные изменения кишечной палочки (т.е. изменения в облигатной микрофлоре). Это субкомпенсированная форма.

• 3 степень. Значительное снижение бифидобактерий (10х5, 10х7), лактобактерий, кишечной палочки. Снижается иммунологическая реактивность организма.

• 4 степень. Отсутствие бифидобактерий, единичные клетки лактофлоры, возрастание числа не свойственной для здорового человека микроорганизмов. Снижается защитная, витаминообразующая функция, изменяются ферментативныепроцессы, увеличиваются нежелательные продукты метаболизма. Могут возникать очаги дополнительного инфекционного процесса, септические состояния.

Лабораторная диагностика.

Отбор и доставка материала на дисбактериоз
Материалом для исследования является кал не позже 2 часов после дефекации.
Для получения достоверного результата стул должен быть обязательно утренним, самостоятельным, не на фоне лечения. У грудных детей забирать материал не с памперсов  и пеленок.
Одну столовую ложку фекалий помещают в прокипяченную стеклянную баночку.

Лабораторная диагностика дисбактериоза кишечника
Метод исследования - бактериологический: мерный посев исследуемого материала с целью определения количества микроорганизмов наиболее значимых групп.
Этапы исследования:

• 
  приготовление серийных разведений суспензии испражнений;
  
• 
  посев на питательные среды из разведений;
  
• 
  учет результатов посева и ориентировочная идентификация микроорганизмов;
  
• 
  оценка результатов.
  

БИЛЕТ 28

1. 
   Виды изменчивости у бактерий: модификационная и генотипическая изменчивость. Мутации, виды мутаций, механизмы мутаций, мутагены.
   

Изменчивость бактерий.

1. Фенотипическая (модификационная)

2. Генотипическая

Модификационная изменчивость.

Модификации – это изменение одного или нескольких признаков.

Адаптационная изменчивость, генетически не закрепляется, не связана с изменением структуры ДНК, носит временный характер.

Это процессы приспособления микроорганизмов к изменившимся условиям; обеспечивают сохранение микробной популяции. При устранении фактора, приведшего к изменениям свойств бактерий, происходит реверсия в исходную форму.

Примеры:

Адаптивные (индуцибельные) ферменты( пример. киш.палочка только в присутствии глюкозы синтезирует ферменты, необходимые для ее утилизации)

Нестабильные L-формы бактерий(в присутствии антибиотиков)

Диссоциации - разделение однородной микробной популяции на два или более типов колоний: S- гладкие (smooth), R- шероховатые (rough), M –слизистые (mucoid), D карликовые (dwarf).

Причины диссоциаций:

Старение культуры

Неблагоприятные условия: повышенная концентрация ионов, щелочная среда, неоптимальная температура и пр.

Действие фагов и пр.

Генотипическая изменчивость.

Изменчивость, затрагивающая изменения в структуре генома:

1. Мутационная

2. Рекомбинационная

Мутации

Изменения в первичной структуре ДНК, которые ведут к утрате или изменению признака или группы признаков; закрепляется генетически!

Классификация мутаций

I.По происхождению:

Спонтанные – неуправляемые мутации (возникают без влияния человека), под действием различных факторов (мутагенов); Частота: 1:106 – 1:107.

Индуцированные – индуцируются в эксперименте (то есть управляемые мутации) действием различных мутагенов; Частота: 1:103 – 1:104.

Мутагены – факторы, вызывающие мутации.

Химические:

1. Аналоги оснований (аналог тимина – бромурацил) – препятствует соединению

комплиментарного основания

2. Алкилирующие агенты (этилметансульфонат – этилирует атом азота гуанина) –

меняется структура основания, что препятствует соединению с комплементарным

основанием

3. Интеркалирующие агенты (акридиновые красители) – увеличивают расстояние между основаниями, что приводит к утрате нуклеотидов или включению дополнительной пары нуклеотидов

Нитрозосоединения – супермутагены, дают высокую частоту мутаций

Физические:

1. Ультрафиолетовое излучение (длина волны260 нм) – вызывают образование димеров тимина, что приводит к нарушению симметрии ДНК и препятствует правильной репликации;

2. Ионизирующее излучение.__

II.По количеству мутировавших генов

1.Генные (точковые) – затрагивает чаще всего один ген(или одну пару азотистых оснований). Чаще они бывают «молчащими» и не проявляются в фенотипе. Или проявляются, когда одна и та же мутация накопилась в течение нескольких поколений.

Молчание обусловлено вырожденностью ген.кода и неравнозначностью АК для характеристики функций белка.

Механизм:

а) соответствует действию химических мутагенов

б) замена, выпадение или вставка пары азотистых оснований или одного азотистого основания происходит «сдвиг» считывания изменение всех последующих кодонов

2.Хромосомные – затрагивает несколько генов

Механизм: происходят крупные перестройки фрагментов ДНК, чаще всего под действием транспозонов и IS-последовательностей:

а) делеция – выпадение фрагмента ДНК;

б) инверсия – поворот фрагмента ДНК на 1800;

в) дупликация – удвоение участков ДНК.

Г) инсерция – вставка фарагмента ДНК

Д) транслоккация – перенос фрагмента ДНК

III.По последствиям для микробной популяции

1.Нейтральные – практически не проявляются фенотипически, так как может быть прямая (вызывает повреждение в гене) и обратная мутация (компенсируют эффект прямой мутации), то есть признак не утратился;

2.Условно-летальные – признак не утрачивается, но происходит его изменение; например: активность фермента в результате мутации зависит от температуры, тогда как у исходного штамма фермент активен в любых диапазонах температуры;

3.Летальные – несовместимые с жизнью мутации: полная утрата способности синтезировать белки (например, ферменты) или синтез дефектных белков, неспособных выполнять свои функции.

Механизмы репарации мутаций у бактерий (для тебя, мой друг, вдруг спросят, а ты не ку-ку))

Осуществляется ферментами.

Этапы восстановительного процесса:

Определение локализации поврежденного участка ДНК «Вырезание» поврежденного участка

На матрице сохранившейся нити ДНК синтезируется новый фрагмент

Встраивание нового фрагмента в молекулу репарируемой ДНК

«SOS»-репарация.

Особый механизм: множественные дефекты («бреши») в ДНК, возникшие в результате «вырезания» поврежденных участков, хаотично заполняются нуклеотидами. В результате синтезируется белок, который все-таки может функционировать!

2. 
   Неспецифические факторы противовирусного иммунитета: противовирусные ингибиторы, интерфероны, их классификация и механизм действия.
   

Интерферон относится к важным защитным белкам иммунной системы. Открыт при изучении интерференции вирусов, т. е. явления, когда животные или культуры клеток, инфициро­ванные одним вирусом, становились нечувс­твительными к заражению другим вирусом. Оказалось, что интерференция обусловлена образующимся при этом белком, обладаю­щим защитным противовирусным свойством. Этот белок назвали интерфероном.

Интерферон представляет собой семейство белков-гликопротеидов, которые синтезируются клетками иммунной системы и соединитель­ной ткани. В зависимости от того, какими клетками синтезируется интерферон, выделя­ют три типа: α, β и γ-интерфероны.

Альфа-интерферон вырабатывается лейко­цитами и он получил название лейкоцитар­ного; бета-интерферонназывают фибробластным, поскольку он синтезируется фибробластами — клетками соединительной ткани, а гамма-интерферон — иммунным, так как он вырабатывается активированными Т-лимфоцитами, макрофагами, естественными киллерами, т. е. иммунными клетками.

Интерферон синтезируется в организме постоянно, и его концентрация в крови де­ржится на уровне примерно 2 МЕ/мл (1 меж­дународная единица — ME — это количество интерферона, защищающее культуру клеток от 1 ЦПД₅₀вируса). Выработка интерферона резко возрастает при инфицировании виру­сами, а также при воздействии индукторов интерферона, например РНК, ДНК, сложных полимеров. Такие индукторы интерферона получили название интерфероногенов.

Помимо противовирусного действия интер­ферон обладает противоопухолевой защитой, так как задерживает пролиферацию (размноже­ние) опухолевых клеток, а также иммуномодулирующей активностью, стимулируя фагоцитоз, естественные киллеры, регулируя антителообразование В-клетками, активируя экспрессию главного комплекса гистосовместимости.

Механизм действия интерферона сложен. Интерферон непосредственно на вирус вне клетки не действует, а связывается со спе­циальными рецепторами клеток и оказыва­ет влияние на процесс репродукции вируса внутри клетки на стадии синтеза белков.

Применение интерферона. Действие интерферона тем эффективнее, чем раньше он начинает синтезироваться или пос­тупать в организм извне. Поэтому его использу­ют с профилактической целью при многих ви­русных инфекциях, например гриппе, а также с лечебной целью при хронических вирусных инфекциях, таких как парентеральные гепати­ты (В, С, D), герпес, рассеянный склероз и др. Интерферон дает положительные результаты при лечении злокачественных опухолей и забо­леваний, связанных с иммунодефицитами.

Интерфероны обладают видоспецифичностью, т. е. интерферон человека менее эффек­тивен для животных и наоборот. Однако эта видоспецифичность относительна.

Получение интерферона. Получают интерферон двумя способами: а) путем инфи­цирования лейкоцитов или лимфоцитов кро­ви человека безопасным вирусом, в результате чего инфицированные клетки синтезируют интерферон, который затем выделяют и конс­труируют из него препараты интерферона; б) генно-инженерным способом — путем выра­щивания в производственных условиях рекомбинантных штаммов бактерий, способных продуцировать интерферон. Обычно используют рекомбинантные штаммы псевдомонад, кишечной палочки со встроенными в их ДНК генами интерферона. Интерферон, получен­ный генно-инженерным способом, носит на­звание рекомбинантного. В нашей стране рекомбинантный интерферон получил офици­альное название «Реаферон». Производство этого препарата во многом эффективнее и дешевле, чем лейкоцитарного.

Рекомбинантный интерферон нашел ши­рокое применение в медицине как профилак­тическое и лечебное средство при вирусных инфекциях, новообразованиях и при иммунодефицитах

3. 
   Вирусы гепатитов: С
   

Вирус гепатита С.

Семейство Flaviviridae

Род Hepacivirus

Гепатит С - инфекция, вызываемая вирусом гепатита С (HCV). Раньше эту инфекцию обозначали как “гепатит ни - А, ни - В, передающийся парентерально”. Вирус HCV является РНК - содержащим вирусом семейства флавивирусов.

Морфология.

HCV - оболочечный вирус со средним размером вириона 35 - 50 нм. Геном образует однонитевая позитивная РНК. Различные гены кодируют структурные (капсидный, мембранный и оболочечный) и неструктурные белки. Различия в генотипе определяют тяжесть заболевания, ответную реакцию на лечение, взаимодействие вируса с хозяином.

Клинико - эпидемиологические особенности.

Эпидемиология вирусного гепатита С напоминает эпидемиологию гепатита В. Несмотря на относительно легкое течение, около половины случаев приводит к хроническим гепатитам, в ряде случаев заканчивающихся циррозом и карциномой печени.

Вирус более редко (по сравнению с HBV) передается вертикально и половым путем, преобладает парантеральное заражение (особо - наркоманы). Показана общность групп риска инфицирования HBV и HCV. Выявлены географически преобладающие варианты (генотипы) HCV. В Европейской части России преобладает “западный” генотип, в Азиатской части - “восточный” (близкий к китайскому и японскому).

Лабораторная диагностика.

В настоящее время лабораторная диагностика вирусного гепатита С основана на определении сывороточных маркеров инфицирования - антител суммарных (анти - HCV) и анти - HCV IgM, а также детекции РНК HCV.

Во все тест - системы, начиная с тест - систем “второго поколения” включены аминокислотные последовательности структурного сердцевинного нуклеокапсидного белка (HCc Ag). Антитела к HCc Ag являются самими ранними маркерами инфицирования HCV. С целью повышения эффективности и специфичности ИФА применяют подтверждающие тесты - рекомбинантный иммуноблоттинг или вестерн - блоттинг, позволяющие определить антитела к различным структурным и неструктурным белкам HCV. Анти-HCV - IgM антитела свидетельствуют о репликативной активности вируса гепатита С. Снижение титров IgM - антител свидетельствует о благоприятном течении заболевания.

Определение РНК HCV методом ПЦР свидетельствует об виремии, которая может быть транзиторной (острый гепатит с последующим выздоровлением), персистирующей (хронические гепатиты) и прерывающейся (повторное выявление).

Специфическая профилактика. В настоящее время проводится работа по созданию вакцин.

БИЛЕТ 29

1. 
   Вирусы бактерий – бактериофаги. Морфология и строение бактериофагов, их химический состав. Фаги вирулентные и умеренные, стадии их взаимодействия с бактериальной клеткой. Явление лизогении, фаговая конверсия, значение этих явлений.
   

Формы существования фагов

1. Вирион – вне клетки бактерий

2. Вегетативный фаг – внутри клетки и размножается

3. Профаг – в составе генома клетки бактерий

Бактериофаг не имеет клеточного строения



Размер фаговых частиц от 20 до 200 нм

Строение фагов

1. Головка, в которую заключена нуклеиновая кислота (ДНК или РНК).

Головка состоит из белков. Головка выполняет защитную функцию:

упаковка и хранение генетической информации фага.

2. Воротничок – отграничивает головку от хвостового отростка.

3. Хвостовой отросток - это полый цилиндр, через который проходит

нуклеиновая кислота. Хвостовой отросток покрыт чехлом, способным

сокращаться. Хвостовой отросток и чехол состоят из белков. Хвостовой отросток необходим для введения нуклеиновой кислоты фага в клетку бактерий.

4. Базальная пластинка, на которой расположены шипы и фибриллы. На шипах может быть фермент лизоцим. Шипы необходимы, чтобы механически прокалывать и с помощью лизоцима растворять клеточную стенку бактерий. Длинные нити фибриллы осуществляют адсорбцию фага на поверхности клеток бактерий.
Классификация фагов

Фаги недостаточно изучены, поэтому нет единой классификации.

Все существующие классификации базируются на строении фагов.

Различают следующие морфологические типы фагов:

1 тип – нитевидные фаги.

2 тип – имеют головку и зачаток хвостового отростка (мелкие РНК- содержащие фаги).

3 тип – имеют головку и короткий хвостовой отросток

4 тип имеют головку и длинный несокращающийся хвостовой отросток.

5 тип имеет головку и длинный сокращающийся хвостовой отросток.

Например, фаги кишечной палочки принято делить на Т-чётные и Т-нечётные, по количеству фибрилл на базальной пластинке.

Взаимодействие фагов с бактериальной клеткой характеризуется определённой специфичностью. По специфичности действия различают поливалентные фаги, способные взаимодействовать с родственными видами бактерий, моновалентные - взаимодействующие с бактериями определённого вида, и типовые фаги - взаимодействующие с отдельными вариантами (типами) данного вида бактерий.

По характеру взаимодействия с клеткой бактерий фаги делят на вирулентные и умеренные.

Вирулентные фаги

Взаимодействие вирулентного фага с бактериальной культурой заканчивается ее лизисом.

Формы существования вирулентного фага: вирион, вегетативный фаг.

Литический цикл развития вирулентных фагов:

1. Адсорбция – прикрепление фага на поверхности чувствительной клетки бактерий. На первых этапах адсорбции реализуется электростатическое притяжение фага к клетке, а затем рецепторное узнавание.

2. Проникновение нуклеиновой кислоты фага в цитоплазму клетки бактерий. Нуклеиновая кислота фага проникает в цитоплазму клетки по типу инъекции. Белки капсида, хвостовой отросток остаются снаружи клетки.

3. Репродукция фага внутри клетки: эклипс, синтез ранних фаговых белков (ферменты фага), репликация нуклеиновой кислоты фага, синтез поздних фаговых белков (структурные белки), сборка фаговых частиц – морфогенез.

4. Выход фага из клетки путем ее лизиса.

Умеренные фаги

Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой не всегда заканчивается ее лизисом.

Формы существования умеренного фага: вирион, профаг, вегетативный фаг.

Лизогенный цикл развития умеренного фага:

1. Адсорбция

2. Проникновение нуклеиновой кислоты фага в цитоплазму клетки

3. Встраивание нуклеиновой кислоты фага в геном клетки бактерий и существование в форме профага.

Все клетки бактерий, несущие в геноме копию профага, будут лизогенными. Это явление получило название лизогении.

Умеренные фаги могут вносить в геном бактерий новые свойства (устойчивость к антибиотикам, токсинообразование и т. д.) – это явление фаговой конверсии.

Индукция профага – при условиях, неблагоприятных для клетки (облучение культуры УФЛ, старение культуры, истощение питательной среды, содержание в питательной среде анитибиотиков и т. д.), профаг может выйти из состава бактериальной хромосомы и перейти на литический цикл развития, который заканчивается лизисом бактериальной культуры.

Умеренные фаги могут нанести вред микробиологическому производству. Так, если микроорганизмы, используемые в качестве продуцентов вакцин, антибиотиков и других биологических веществ, оказываются лизогенными, существует опасность перехода умеренного фага в вирулентную форму, что неминуемо приведёт к лизису производственного штамма.

2. 
   Клеточный иммунный ответ в антиинфекционной защите. Способы его выявления. Аллерг метод
   

В формировании иммунного ответа включаются все звенья иммунной системы- системы макрофагов, Т- и В- лимфоцитов, комплемента, интерферонов и главная система гистосовместимости.

В кратком виде можно выделить следующие этапы.

1. Поглощение Аг макрофагом.

2. Представление Аг макрофагом Т- хелперам.

3. Узнавание Аг Т- хелперами и их активация.

4. Узнавание Аг и активация В- лимфоцитов.

5. Дифференциация В- лимфоцитов в плазматические клетки, синтез антител.

6.Аг+Ат, активация систем комплемента и макрофагов, интерферонов.

7. Разрушение инфицированных чужеродными Аг клеток Т- киллерами.

8. Индукция Т- и В- клеток иммунной памяти, способных специфически распознавать Аг и … участвовать во вторичном иммунном ответе ( антигенстимулированные лимфоциты).

Аллергический метод.Основан на выявлении сенсибилизированого организма с помощью аллерг. проб на аллергены (туберкулин, бруцеллин, тулярин, антраксин, грибковые). Кож-ные пробы (in vivo) – Манту (тубик), Бюрне (бруцеллез), in vitro, р-ция бласт-трансформации, р-ция тормож. и миграции лейкоцитов.

Клеточный иммунный ответ – накопление цитотоксических Т-лимфоцитов (Т-киллеров), Т-лимфоцитов гиперчувствительности замедленного типа (Т-гзт): уничтожение пораженной возбудителем клетки (Т-киллеры), привлечение фагоцитов в патологический очаг (Т-гзт).

Выявляется в аллергическом методе диагностики: туберкулиновая проба Манту (при диагностике туберкулеза).

При многих инфекционных заболеваниях развивается состояние повышенной чувствительности к повторному введению возбудителя или продуктов его жизнедеятельности - которое называется инфекционной аллергией.

Для выявления инфекционной аллергии применяют аллергические диагностические пробы, для чего строго внутрикожно вводят соответствующий аллерген.

Наличие гиперемии и инфильтрата указывает на положительный результат реакции, т. е. на наличие инфекционной аллергии.

Аллергический метод диагностики инфекций

• Выявление клеточного иммунного ответа -

гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)

* Введение внутрикожно Аг бактерий

* Через 48 – 72 часа появляется воспаление

* Измеряют величину покраснения и папулы

Аг →Тхелперы выделяют → лимфокины → Т киллеры →Тцтл- активация фагоцитоза →воспаление.

В реакциях ГЗТ участвуют: Т-хелперы (стимулируют образование Т-эффекторов

через ИЛ-2) → Т-эффекторы (продуцируют лимфокины - хемоаттрактанты и привлекают

макрофаги в очаг воспаления) → макрофаги (продуцируют медиаторы-монокины) →

мононуклеарный инфильтрат на месте введения аллергена → величина инфильтрата

зависит от степени сенсибилизации организма и достигает максимума через 24-48 ч.

Аллергические диагностические пробы позволяют диагностировать туберкулез

(реакция Манту), бруцеллез (проба Бюрне), туляремию (проба с тулярином), сибирскую

язву (проба с антраксином), мягкий шанкр (реакция Дюкрея), проказу (реакция Мицуды),

а последняя - даже дифференцировать туберкулоидную (лепромин-положительную)

форму от лепроматозной (лепромин-отрицательной).

Положительная кожная аллергическая проба указывает, что введение аллергена при постановке пробы является повторным, т. е. индивидуум в прошлом имел контакт с микробным агентом. Здесь сказывается основной недостаток диагностической ценности кожно-аллергических проб, так как они могут быть положительными не только у инфицированных, но и у привитых против этих болезней, а также у лиц, переболевших много лет назад, в том числе и у носителей, т. е. положительный тест у здоровых лиц указывает только на контакт с микробным антигеном

3. 
   Гепатит Е
   

Вирус гепатита Е

Общая характеристика.

Гепатит Е - инфекция, имеющая эпидемиологическое сходство с гепатитом А, известная ранее как “гепатит ни -А, ни -В с фекально - оральным механизмом передачи”. Возбудитель - вирус гепатита Е (HEV) относится к семейству калицивирусов, однако в последние годы это ставится под сомнение. Он имеет сферическую форму, диаметр вириона около 30 нм, суперкапсида не имеет. Геном представлен однонитевой

нефрагменторованной позитивной РНК. Антигенного родства с HAV не имеет, отличается меньшей вирулентностью для человека. Свое название они получили от лат. calix - чаша за счет наличия чашеобразных углублений на поверхности капсида. Среди представителей семейства - возбудители гастроэнтеритов животных (например, вирус Норфолк), вирус гепатита Е.

Эпидемиология.

Вирус имеет фекально - оральный механизм распространения, реализуемый преимущественно при употреблении инфицированной воды. Широко распространен в странах с жарким климатом и плохим водоснабжением, при употреблении некачественной воды (из арыков, оросительных каналов, загрязнении грунтовыми водами и т.д.) происходит заражение. Вспышки наблюдают в Юго - Восточной Азии, Африке, Южной Америке. Инфекция распространена в Среднеазиатском регионе бывшего СССР. Особенность - высокая летальность HEV- инфекции у беременных во второй половине беременности.

Лабораторная диагностика.

Разработаны тест - системы ИФА и иммуноблота для выявления антител к HEV классов IgM и IgG, пригодные для диагностики в острой стадии болезни и в период реконвалесценции.

Профилактика ВГЕ. Для спецефической профилактики беременной женщине можно вводить иммуноглобулины. Созданы инактивированные вакцины, разрабатываются рекомбинантные и живые вакцины.

Иммунитет - прочный, обусловлен вируснейтрализующими антителами и клетками памяти.

БИЛЕТ 30

1. 
   Цитоплазматическая мембрана бактерий, её строение функции.
   

Цитоплазматическая мембрана при электронной микроскопии ультратонких срезов представляет собой трехслойную мембрану (2 темных слоя толщиной по 2,5 нм разделены светлым - промежуточным). По структуре она похожа на плазмалемму клеток животных и состоит из двойного слоя фосфолипидов с внедренными поверхностными, а также интегральными белками, как бы пронизывающими насквозь структуру мембраны. При избыточном росте (по сравнению с ростом клеточной стенки) цитоплазматическая мембрана образует инвагинаты — впячивания в виде сложно закрученных мембранных структур, называемые мезосомами. Менее сложно закрученные структуры называются внутрицитоплазматическими мембранами.

НУ строение ты сам знаешь: 2 слоя фсофолипидов , пронизанных белками+углеводы и всякое такое.

Ограничивает с наружной стороны цитоплазму, имеет трехслойное строение и выполняет ряд важнейших функций - барьерную (создает и поддерживает осмотическое давление), энергетическую (содержит многие ферментные системы- дыхательные, окислительно- восстановительные, осуществляет перенос электронов), транспортную (перенос различных веществ в клетку и из клетки).

2. 
   Антитела, основные классы иммуноглобулинов, их структурные и функциональные особенности. Защитная роль антител в приобретенном антиинфекционном иммунитете.
   

Антитела - специфические белки гамма- глобулиновой природы, образующиеся в организме в ответ на антигенную стимуляцию и способные специфически взаимодействовать с антигеном (in vivo, in vitro). В соответствии с международной классификацией совокупность сывороточных белков, обладающих свойствами антител, называют иммуноглобулинами.

Уникальность антител заключается в том, что они способны специфически взаимодействовать только с тем антигеном, который вызвал их образование.

Иммуноглобулины ( Ig ) разделены в зависимости от локализации на три группы:

- сывороточные (в крови);

- секреторные ( в секретах- содержимом желудочно- кишечного тракта, слезном секрете, слюне, особенно- в грудном молоке) обеспечивают местный иммунитет (иммунитет слизистых);

- поверхностные ( на поверхности иммунокомпетентных клеток, особенно В- лимфоцитов).

Любая молекула антител имеет сходное строение ( Y- образную форму) и состоит из двух тяжелых ( Н ) и двух легких ( L ) цепей, связанных дисульфидными мостиками. Каждая молекула антител имеет два одинаковых антигенсвязывающих фрагмента Fab ( fragment antigen binding ), определяющих антительную специфичность, и один Fc ( fragment constant ) фрагмент, который не связывает антиген, но обладает эффекторными биологическими функциями. Он взаимодействует со “своим” рецептором в мембране различных типов клеток ( макрофаг, тучная клетка, нейтрофил).

Концевые участки легких и тяжелых цепей молекулы иммуноглобулина вариабельны по составу ( аминокислотным последовательностям ) и обозначаются как VL и VH области. В их составе выделяют гипервариабельные участки, которые определяют структуру активного центра антител (антигенсвязывающий центр или паратоп). Именно с ним взаимодействует антигенная детерминанта (эпитоп) антигена. Антигенсвязывающий центр антител комплементарен эпитопу антигена по принципу “ключ - замок” и образован гипервариабельными областями L- и Н- цепей. Антитело свяжется антигеном (ключ попадет в замок) только в том случае, если детерминантная группа антигена полностью вместится в щель активного центра антител. Л-цепи имеют одинковую

структуру, а Н-цепи – специфичны для каждого имунноглобулина.

Существуют легкие цепи двух типов- каппа и лямбда, они встречаются в различных пропорциях в составе различных (всех) классов иммуноглобулинов.

Выявлено пять классов тяжелых цепей- альфа ( с двумя подклассами), гамма ( с четырьмя подклассами), эксилон, мю и дельта. Соответственно обозначению тяжелой цепи обозначается и класс молекул иммуноглобулинов- А, G, E, M и D.

Именно константные области тяжелых цепей, различаясь по аминокислотному составу у различных классов иммуноглобулинов, в конечном результате и определяют специфические свойства иммуноглобулинов каждого класса.

Известно пять классов иммуноглобулинов, отличающихся по строению тяжелых цепей, молекулярной массе, физико- химическим и биологическим характеристикам: IgG, IgM, IgA, IgE, IgD. В составе IgG выделяют 4 подкласса ( IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 ), в составе IgA- два подкласса (IgA1, IgA2 ).

Структурной единицей антител является мономер, состоящий из двух легких и двух тяжелых цепей. Мономерами являются IgG, IgA ( сывороточный), IgD и IgE. IgM- пентамер (полимерный Ig). У полимерных иммуноглобулинов имеется дополнительная j ( joint) полипептидная цепь, которая объединяет ( полимеризует) отдельные субъединицы (в составе пентамера IgM, ди- и тримера секреторного IgA).

Основные биологические характеристики антител.

1. Специфичность - способность взаимодействия с определенным (своим) антигеном (соответствие эпитопа антигена и активного центра антител).

2. Валентность- количество способных реагировать с антигеном активных центров ( это связано с молекулярной организацией- моно- или полимер). Иммуноглобулины могут быть двухвалентными ( IgG ) или поливалентными (пентамер IgM имеет 10 активных центров). Двух- и более валентные антитела навывают полными антителами. Неполные антитела имеют только один участвующий во взаимодействии с антигеном активный центр ( блокирующий эффект на иммунологические реакции, например, на агглютинационные тесты). Их выявляют в антиглобулиновой пробе Кумбса, реакции угнетения связывания комплемента.

3. Афинность - прочность связи между эпитопом антигена и активным центром антител, зависит от их пространственного соответствия.

4. Авидность - интегральная характеристика силы связи между антигеном и антителами, с учетом взаимодействия всех активных центров антител с эпитопами. Поскольку антигены часто поливалентны, связь между отдельными молекулами антигена осуществляется с помощью нескольких антител.

5. Гетерогенность - обусловлена антигенными свойствами антител, наличием у них антигенных детерминант

Характеристика основных классов иммуноглобулинов.

Ig G. Мономеры, включают четыре субкласса. Концентрация в крови 12г/л

Это основной класс иммуноглобулинов, защищающих организм от бактерий, токсинов и вирусов.

Взаимодействуют с мелкодисперсными антигенами.

В наибольшем количестве IgG- антитела вырабатываются на стадии выздоровления после инфекционного заболевания (поздние или 7S антитела), при вторичном иммунном ответе. IgG1 и IgG4 специфически (через Fab- фрагменты) связывают возбудителей (опсонизация), благодаря Fc- фрагментам IgG взаимодействуют с Fc- рецепторам фагоцитов, способствуя фагоцитозу и лизису микроорганизмов. IgG способны нейтрализовать бактериальные экзотоксины, связывать комплемент.

Только IgG способны транспортироваться через плаценту от матери к плоду (проходить через плацентарный барьер) и обеспечивать защиту материнскими антителами плода и новорожденного. В отличие от IgM- антител, IgG- антитела относятся к категории поздних- появляются позже и более длительно выявляются в крови.

IgM. Концентрация IgM в крови ниже, чем IgG- 0,5- 2,0 г/л .Молекула этого иммуноглобулина представляет собой полимерный Ig из пяти субъединиц, соединенных дисульфидными связями и дополнительной J- цепью, имеет 10 антиген- связывающих центров. Филогенетически это наиболее древний иммуноглобулин. IgM- наиболее ранний класс антител, образующихся при первичном попадании антигена в организм. Наличие IgM- антител к соответствующему возбудителю свидетельствует о свежем инфицировании (текущем инфекционном процессе).

Взаимодействуют с карпускулярным антигеном.

IgM- основной класс иммуноглобулинов, синтезируемых у новорожденных и младенцев. IgM у новорожденных- это показатель внутриутробного заражения (краснуха, ЦМВ, токсоплазмоз и другие внутриутробные инфекции), поскольку материнские IgM через плаценту не проходят.

IgM способны агглютинировать бактерии, нейтрализовать вирусы, активировать комплемент, активизировать фагоцитоз, связывать эндотоксины грамотрицательных бактерий. IgM обладают большей, чем IgG авидностью (10 активных центров), аффинность (сродство к антигену) меньше, чем у IgG.

IgA. Выделяют сывороточные IgA (мономер) и секреторные IgA (IgAs). Сывороточные IgA составляют 1,4- 4,2 г/л. Секреторные IgAs находятся в слюне, пищеварительных соках, секрете слизистой носа, в молозиве. Они являются первой линией защиты слизистых, обеспечивая их местный иммунитет. Секреторный компонент вырабатывается эпителиальными клетками слизистых оболочек и присоединяется к молекуле IgA в момент прохождения последней через эпителиальные клетки.

Секреторный компонент повышает устойчивость молекул IgAs к действию протеолитических ферментов. Основная роль IgA- обеспечение местного иммунитета слизистых. Они препятствуют прикреплению бактерий к слизистым, обеспечивают транспорт полимерных иммунных комплексов с IgA, нейтрализуют энтеротоксин, активируют фагоцитоз и систему комплемента.

Содержащийся секреторный иммуноглобулин А в молоке является фактором защиты ребенка, находящегося на естественном вскармливании. Взаимодействует с крупными(корпускулярными) и мелкодисперсными антигенами.

IgE. Представляет мономер, в сыворотке крови находится в низких концентрациях. Основная роль- своими Fc- фрагментами прикрепляется к тучным клеткам (мастоцитам) и базофилам и опосредует реакции гиперчувствительности немедленного типа. К IgE относятся “антитела аллергии”- реагины. Уровень IgE повышается при аллергических состояниях, гельминтозах. Антигенсвязывающие Fab- фрагменты молекулы IgE специфически взаимодействует с антигеном (аллергеном), сформировавшийся иммунный комплекс взаимодействует с рецепторами Fc- фрагментов IgE, встроенных в клеточную мембрану базофила или тучной клетки. Это является сигналом для выделения гистамина, других биологически активных веществ и развертывания острой аллергической реакции.

IgD. Мономеры IgD обнаруживают на поверхности развивающихся В- лимфоцитов, в сыворотке находятся в крайне низких концентрациях. Их биологическая роль точно не установлена. Полагают, что IgD участвуют в дифференциации В-клеток, способствуют развитию антиидиотипического ответа, участвуют в аутоиммунных процессах.(т.е. они являются антителами к собственным тканям)

3. 
   Хламидии, виды, свойства, факторы патогенности. Форма существования и жизненный цикл хламидий. Антигенная структура. Лабораторная диагностика. Возбудитель оргитоза. Патогенность для человека и птиц. Патогенез и иммунитет. Лабораторная диагностика. Антимикробные препараты. Возбудитель трахомы. Патогенность для человека. Роль в урогенитальной патологии. Конъ-юнктивит новорожденных (бленорея с включениями), элементарные тельца Провачека–Гальберштедтера. Венерический лимфогранулематоз. Патогенез. Лабораторная диагностика. Антимикробные препараты. Профилактика.
   

Таксономия: порядок Chlamydiales, семейство Chlamydaceae, род Chlamydia. Род представлен видами С.trachomatis, C.psittaci,C.pneumoniae. Болезни, вызываемые хламидиями, называют хламидиозами. Заболевания, вызываемые C. trachomatisuC. pneumoniae, — антропонозы. Орнитоз, возбудителем которого является С. psittaci, — зооантропонозная инфекция.

Морфология хламидий: мелкие, грам «-» бактерии, шаровидной формы. Не образуют спор, нет жгутиков и капсулы. Клеточная стенка: 2-х слойная мембрана. Имеют гликолипиды. По Граму – красный цвет. Основной метод окраски – по Романовскому – Гимзе. 2 формы существования: элементарные тельца (неактивные инфекционные частицы, вне клетки); ретикулярные тельца (внутри клеток, вегетативная форма).

Культивирование:Можно размножать только в живых клетках. В желточном мешке развивающихся куриных эмбрионов, организме чувствительных животных и в культуре клеток Ферментативная активность: небольшая.

Ферментируют пировиноградную кислоту, синтезируют липиды. Не способны синтезировать высокоэнергетические соединения.

Антигенная структура: Антигены трех типов: родоспецифический термостабильный липополисахарид (в клеточной стенке). Выявляют с помощью РСК; видоспецифический антиген белковой природы (в наружной мембране). Обнаруживают с помощью РИФ; вариантоспецифический антиген белковой природы.

Факторы патогенности.С белками наружной мембраны хламидий связаны их адгезивные свойства. Эти адгезины обнаруживают только у элементарных телец. Хламидии образуют эндотоксин. У некоторых хламидий обнаружен белок теплового шока, способный вызывать аутоиммунные реакции.

Резистентность. Высокаяк различным факторам внешней среды. Устойчивы к низким температурам, высушиванию. Чувствительны к нагреванию. С. trachomatis - возбудитель заболеваний мочеполовой системы, глаз и респираторного тракта человека.

Трахома — хроническое инфекционное заболевание, характеризующееся поражением конъюнктивы и роговицы глаз. Антропоноз. Передается контактно- бытовым путем.

Патогенез: поражает слизистую оболочку глаз. Он проникает в эпителий конъюнктивы и роговицы, где размножается, разрушая клетки. Развивается фолликулярный кератоконъюнктивит.

Диагностика: исследование соскоба с конъюнктивы. В пораженных клетках при окраске по Романовскому—Гимзе обнаруживают цитоплазматические включения фиолетового цвета, расположенные около ядра — тельца Провачека. Для выявления специфического хламидийного антигена в пораженных клетках применяют также РИФ и ИФА. Иногда прибегают к культивированию хламидий трахомы на куриных эмбрионах или культуре клеток.

Лечение: антибиотики (тетрациклин) и иммуностимуляторы (интерферон). Профилактика:Неспецифическая.

Урогенитальный хламидиоз — заболевание, передающееся половым путем. Это — острое/хроническое инфекционное заболевание, которое характеризуется преимущественным поражением мочеполового тракта. Заражение человека происходит через слизистые оболочки половых путей. Основной механизм заражения — контактный, путь передачи — половой.

Иммунитет: клеточный, с сыворотке инфицированных – специфические антитела. После перенесенного заболевания - не формируется.

Диагностика: При заболеваниях глаз применяют бактериоскопический метод — в соскобах с эпителия конъюнктивы выявляют внутриклеточные включения. Для выявления антигена хламидии в пораженных клетках применяют РИФ. При поражении мочеполового тракта может быть применен биологический метод, основанный на заражении исследуемым материалом (соскобы эпителия из уретры, влагалища) культуры клеток. Постановка РИФ, ИФА позволяют обнаружить антигены хламидии в исследуемом материале. Серологический метод - для обнаружения IgM против С. trachomatisпри диагностике пневмонии новорожденных.

Лечение.антибиотики (азитромицин из группы макролидов), иммуномодуляторы, эубиотики. Профилактика. Только неспецифическая (лечение больных), соблюдение личной гигиены.

Венерическая лимфогранулема — заболевание, передающееся половым путем, характеризуется поражением половых органов и регионарных лимфоузлов. Механизм заражения — контактный, путь передачи — половой.

Иммунитет: стойкий, клеточный и гуморальный иммунитет.

Диагностика:Материал для исследования - гной, биоптат из пораженных лимфоузлов, сыворотка крови. Бактериоскопический метод, биологический (культивирование в желточном мешке куриного эмбриона), серологический (РСК с парными сыворотками положительна) и аллергологический (внутрикожная проба с аллергеном хламидии) методы.

Лечение.Антибиотики — макролиды и тетрациклины.

Профилактика: Неспецифическая.

С. pneumoniae - возбудитель респираторного хламидиоза, вызывает острые и хронические бронхиты и пневмонии. Антропоноз. Заражение – воздушно-капельным путем. Попадают в легкие через верхние дыхательные пути. Вызывают воспаление.

Диагностика: постановка РСК для обнаружения специфических антител (серологический метод). При первичном заражении учитывают обнаружение IgM. Применяют также РИФ для обнаружения хламидийного антигена и ПЦР.

Лечение: Проводят с помощью антибиотиков (тетрациклины и макролиды). Профилактика:Неспецифическая.

С. psittaci - возбудитель орнитоза — острого инфекционного заболевания, которое характеризуется поражением легких, нервной системы и паренхиматозных органов (печени, селезенки) и интоксикацией. Зооантропоноз. Источники инфекции – птицы. Механизм заражения – аэрогенный, путь передачи – воздушно- капельный. Возбудитель – через слиз. оболочки дыхат. путей, в эпителий бронхов, альвеол, размножается, воспаление.

Диагностика:Материал для исследования - кровь, мокрота больного, сыворотка крови для серологического исследования. Применяют биологический метод — культивирование хламидий в желточном мешке куриного эмбриона, в культуре клеток. Серологический метод. Применяют РСК, РПГА, ИФА, используя парные сыворотки крови больного. Внутрикожная аллергическая проба с орнитином. Лечение: антибиотики (тетрациклины, макролиды).

БИЛЕТ 31

1. 
   Протопласты, сферопласты, Л-формы бактерий.
   

При обработке грамположительных бактерий ферментами, разрушающими пептидогликан, возникают полностью лишенные клеточной стенки структуры- протопласты. Обработка грамотрицательных бактерий лизоцимом разрушает только слой пептидогликана, не разрушая полностью внешней мембраны; такие структуры называют сферопластами.

Протопласты и сферопласты имеют сферическую форму (это свойство связано с осмотическим давлением и характерно для всех безклеточных форм бактерий).

L- формы бактерий.

Под действием ряда факторов, неблагоприятно действующих на бактериальную клетку (антибиотики, ферменты, антитела и др.), происходит L- трансформация бактерий, приводящая к постоянной или временной утрате клеточной стенки. L- трансформация является не только формой изменчивости, но и приспособления бактерий к неблагоприятным условиям существования.

В результате изменения антигенных свойств (утрата О- и К- антигенов), снижения вирулентности и других факторов L- формы приобретают способность длительно находиться (персистировать) в организме хозяина, поддерживая вяло текущий инфекционный процесс. Утрата клеточной стенки делает L- формы нечувствительными к антибиотикам, антителам и различным химиопрепаратам, точкой приложения которых является бактериальная клеточная стенка. Нестабильные L- формы способны реверсировать в классические (исходные) формы бактерий, имеющие клеточную стенку. Имеются также стабильные L- формы бактерий, отсутствие клеточной стенки и неспособность реверстровать которых в классические формы бактерий закреплены генетически. Они по ряду признаков очень напоминают микоплазмы и другие молликуты- бактерии, у которых клеточная стенка отсутствует как таксономический признак.

2. 
   Полные и неполные антитела, аутоантитела. Понятие о моноклональных антителах, гибридомы
   

Валентность- количество способных реагировать с антигеном активных центров ( это связано с молекулярной организацией- моно- или полимер). Иммуноглобулины могут быть двухвалентными ( IgG ) или поливалентными (пентамер IgM имеет 10 активных центров). Двух- и более валентные антитела навывают полными антителами. Неполные антитела имеют только один участвующий во взаимодействии с антигеном активный центр (блокирующий эффект на иммунологические реакции, например, на агглютинационные тесты). Их выявляют в антиглобулиновой пробе Кумбса, реакции угнетения связывания комплемента

Моноклональные антитела; гибридомы

• Антитела, полученные от одного клона гибридных клеток: однородны по строению и специфичности

• Любой Аг имеет несколько вариантов эпитопов ----к каждому эпитопу формируются несколько клонов лимфоцитов ---вырабатывается множество вариантов Ат к конкретному эпитопу

• У животного-продуцента антител в сыворотке содержатся Ат с разной специфичностью и не полностью идентичные

• При изготовлении диагностических сывороток используют смесь сывороток от разных особей одного вида -àнизкая специфичность и чувствительность препарата

Принцип получения моноклональных Ат

(Ц. Милштейн, Г. Кёлер )

• Клетки злокачественной опухоли (В-клеточная плазмацитома) + сенсибилизированный В-лимфоцит теоретически «бессмертная» клетка-продуцент идентичных молекул Ат (гибридома)

• Иммунизация животного --- извлечение плазматических клеток---- гибридизация с клетками плазмацитомы--- отбор гибридных клеток (на селективной среде) ---

выявление гибридом, синтезирующих «нужные»Ат: определённой специфичности и определённого класса (IgG, IgM)

Практическое использование моноклональных антител:

• Выявление и идентификация Аг возбудителей

• Выявление иммуноглобулинов разных классов

• Идентификация Т и В-лимфоцитов и их субпопуляций

• Идентификация опухолевых Аг; выявление в организме их локализации (метастазы);

• Доставка изотопов или цитостатиков к опухоли

• Создание иммуносорбентов для выявления и/или устранения определённых клеток или Аг

Менингококки. Серологические группы, свойства менингококков, факторы патогенности, патогенез инфекций. Лабораторная диагностика различных клинических форм Возбудитель менингококковой инфекции относится к семейству Neisseriaceae, роду Neisseria, вид - N. meningitidis. Менингококки – грамотрицательные диплококки в виде кофейного зерна, часто внутри лейкоцитов – незавершенный фагоцитоз. Спор и жгутиков не имеют, образуют капсулу. Они строгие аэробы. Растут на средах с добавлением сыворотки, при температуре 37⁰, образуя S формыколоний(мелкие, нежные, бесцветные). Ростстимулируется повышенной концентрацией СО2 и повышенной влажностью. Ферментируют глюкозу, мальтозу, оксидазоположительны.

Имеют капсульные полисахаридные антигены, по которым менингококки делятся на серогруппы, белковые типовые антигены, общий белковый видоспецифический антиген и липополисахаридные антигены – 8 серотипов.

Факторы патогенности:

1. Пили и белки наружной мембраны – факторы адгезии и колонизации

2. Гиалуронидаза и нейраминидаза – факторы инвазии

3. Капсула – защита от фагоцитоза

4. ЛПС – обладает токсичностью, пирогенностью, некротическим и летальным действием.

Патогенез Заражение происходит воздушно-капельным путем. Входные ворота – носоглотка, отсюда менингококки проникают в лимфатические сосуды и в кровь. Менингококки вызывают следующие клинические формы инфекции: назофарингит, менингококцемия, эпидемический цереброспинальный менингит, менингококковый эндокардит. После перенесенного заболевания формируется стойкий длительныйиммунитетпротив всех серогрупп менингококков.

Микробиологическая диагностика: Материал для исследования - кровь, спинномозговая жидкость, носоглоточные смывы. Бактериоскопический метод – окраска мазков из ликвора и крови по Граму для определения лейкоцитарной формулы, выявления менингококков и их количества. Наблюдают полинуклеарные лейкоциты, эритроциты, нити фибрина, менингококки – грам «-», окружены капсулой. Бактериологический метод – выделение чистой культуры. Носоглоточная слизь, кровь, ликвор. Посев на плотные, полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь. Культуры инкубируют в течение 20 ч. При 37С с повышенным содержанием СО2.Оксидазаположительные колонии – принадлежат в данному виду. Наличие N.meningitidis подтверждают образованием уксусной кислоты при ферментации глк. и мальтозы. Принадлежность к серогруппам – в реакции агглютинации (РА).

Серологический метод – используют для обнаружения растворимых бактериальных АГ в ликворе, или АТ в сыворотке крови. Для обнаружения АГ применяют ИФА,РИА. У больных, перенесших менингококк – в сыворотке специфические АТ: бактерицидные, аггютинины, гемаггютинины

Для лабораторной диагностикименингококковой инфекции применяют:

Бактериологический метод, при котором выделяют чистую культуру из патологического материала (кровь, ликвор, экссудат, слизь из зева и носоглотки).

Серологический– антитела выявляют в РПГА и ИФА.

Собственно иммунный– антиген выявляют в ИФА

Микроскопический- мазок, приготовленный из спинномозговой жидкости окрашивают по Граму. Нахождение в мазке большого количества лейкоцитов и наличие в них грамотрицательных диплококков позволяет подтвердить диагноз – менингококковый менингит.

В качестве специфической профилактикипредложены вакцины, содержащие полисахаридные антигены различных серогрупп, но они формируют лишь группоспецифический иммунитет.

Лечение– антибиотики(б-лактамы, пенициллины, цефалоспорины.)

Профилактика. Специфическую профилактику проводят менингококковой химической полисахаридной вакциной серогруппы А и дивакциной серогрупп А и С по эпидемическим показаниям. Неспецифическая профилактика сводится к соблюдению санитарно-противоэпидемического режима в дошкольных, школьных учреждениях и местах постоянного скопления людей.

Менингококковая инфекция — острая инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением слизистой оболочки носоглотки, оболочек головного мозга и септицемией; антропоноз.

Таксономия: возбудитель Neisseriameningitidis (менингококк) относится к отделу Gracilicutes, семейству Neisseriaceae, роду Neisseria.

Морфологические свойства. Мелкие диплококки. Характерно расположение в виде пары кофейных зерен, обращенных вогнутыми поверхностями друг к другу. Неподвижны, спор не образуют, грамотрицательные, имеют пили, капсула непостоянна.

Культуральные свойства. Относятся к аэробам, культивируются на средах, содержащих нормальную сыворотку или дефибринированную кровь лошади, растут на искусственных питательных средах, содержащих специальный набор аминокислот. Элективная среда должна содержать ристомицин. Повышенная концентрация СО2 в атмосфере стимулирует рост менингококков.

Антигенная структура: Имеет несколько АГ: родовые, общие для рода нейссерии (белковые и полисахаридные, которые представлены полимерами аминосахаров и сиаловых кислот); видовой (протеиновый); группоспецифические (гликопротеидный комплекс); типоспецифические (белки наружной мембраны), которые разграничивают серотипы внутри серогрупп В и С. По капсульным АГ выделяют девять серогрупп (А, В, С, D, X, Y, Z, W135 и Е). Капсульные АГ некоторых серогрупп иммуногенны для человека. Штаммы серогруппы А вызывают эпидемические вспышки. В, С и Y - спорадические случаи заболевания. На основании различий типоспецифических АГ выделяют серотипы, которые обозначают арабскими цифрами (серотипы выявлены в серогруппах В, С, Y, W135). Наличие АГ серотипа 2 рассматривается как фактор патогенности. Во время эпидемий преобладают менингококки групп А и С, которые являются наиболее патогенными.

Биохимическая активность: низкая. Разлагает мальтозу и глк. До кислоты, не образует индол и сероводород. Ферментация глк. и мальтозы – диф.-диагностический признак. Не образует крахмалоподобный полисахарид из сахарозы. Обладает цитохромоксидазой и каталазой. Отсутствие β-галактозидазы, наличие γ-глютаминтрансферазы.

Факторы патогенности: капсула – защищает от фагоцитоза. AT, образующиеся к полисахаридам капсулы, проявляют бактерицидные свойства. Токсические проявления менингококковой инфекции обусловлены высокотоксичным эндотоксином. Для генерализованных форм менингококковой инфекции характерны кожные высыпания, выраженное пирогенное действие, образование AT. Пили, белки наружной мембраны, наличие гиалуронидазы и нейроминидазы. Пили являются фактором адгезии к слизистой оболочке носоглотки и тканях мозговой оболочки. Менингококки выделяют IgA-протеазы, расщепляющие молекулы IgA, что защищает бактерии от действия Ig.

Резистентность. Малоустойчив во внешней среде, чувствителен к высушиванию и охлаждению. В течение нескольких минут погибает при повышении температуры более 50 °С и ниже 22 °С. Чувствительны к пенициллинам, тетрациклинам, эритромицину, устойчивы к ристомицину и сульфамидам. Чувствительны к 1 % раствору фенола, 0,2 % раствору хлорной извести, 1 % раствору хлорамина.

Эпидемиология, патогенез и клиника. Человек — единственный природный хозяин менингококков. Носоглотка служит входными воротами инфекции, здесь возбудитель может длительно существовать, не вызывая воспаления (носительство). Механизм передачи инфекции от больного или носителя воздушно-капельный. Инкубационный период составляет 1—10 дней (чаще 2—3 дня). Различают локализованные (назофарингит) и генерализованные (менингит, менингоэнцефалит) формы менингококковой инфекции. Из носоглотки бактерии попадают в кровяное русло (менингококкемия) и вызывают поражение мозговых и слизистых оболочек с развитием лихорадки, геморрагической сыпи, воспаления мозговых оболочек.

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет при генерализованных формах болезни стойкий, напряженный.

Микробиологическая диагностика: Материал для исследования - кровь, спинномозговая жидкость, носоглоточные смывы. Бактериоскопический метод – окраска мазков из ликвора и крови по Граму для определения лейкоцитарной формулы, выявления менингококков и их количества. Наблюдают полинуклеарные лейкоциты, эритроциты, нити фибрина, менингококки – грам «-», окружены капсулой.

Бактериологический метод – выделение чистой культуры. Носоглоточная слизь, кровь, ликвор. Посев на плотные, полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь. Культуры инкубируют в течение 20 ч. При 37С с повышенным содержанием СО2.Оксидазаположительные колонии – принадлежат в данному виду. Наличие N.meningitidis подтверждают образованием уксусной кислоты при ферментации глк. и мальтозы. Принадлежность к серогруппам – в реакции агглютинации (РА).

1. 
   Серологический метод – используют для обнаружения растворимых бактериальных АГ в ликворе, или АТ в сыворотке крови. Для обнаружения АГ применяют ИФА,РИА. У больных, перенесших менингококк – в сыворотке специфические АТ: бактерицидные, аггютинины, гемаггютинины. Лечение. В качестве этиотропной терапии используют антибиотики - бензилпенициллин (пенициллины, левомицетин, рифампицин), сульфамиды. Профилактика. Специфическую профилактику проводят менингококковой химической полисахаридной вакциной серогруппы А и дивакциной серогрупп А и С по эпидемическим показаниям. Неспецифическая профилактика сводится к соблюдению санитарно-противоэпидемического режима в дошкольных, школьных учреждениях и местах постоянного скопления людей.менингококковой инфекции, бактерионосительство. Специфическая профилактика.
   

БИЛЕТ 32

1. 
   Строение и химический состав клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. Механизм окраски по Граму