Микра экз. Билет 1 Генетические и биохимические механизмы Лекарственной устойчивости. Путь преодоления лекарственной устойчивости бактерий

• Название: Билет 1 Генетические и биохимические механизмы Лекарственной устойчивости. Путь преодоления лекарственной устойчивости бактерий
• Анкор: Микра экз
• Дата: 25.01.2020
• Размер: 0.84 Mb.
• Имя файла: mikra_bilety1.docx
• Тип: Документы; #105758
• страница: 10 из 13

Штамм – микроорганизмы одного вида, которые выделенные из разных источников, в разное время или путем изменения свойств клетки исходной культуры.

Штамм- любой конкретный образец (изолят) данного вида. Штаммы одного вида, различающиеся по антигенным характеристикам, называют серотипами (серовариантами- сокращенно сероварами), по чувствительности к специфическим фагам- фаготипами, биохимическим свойствам- хемоварами, по биологическим свойствам- биоварами и т.д.

Колония- потомство из одной или нескольких родительских клеток.

Клон – генетически однородное потомство одной клетки

Культура- вся совокупность микроорганизмов одного вида, выросших на плотной или жидкой питательной среде.

Популя́ция (от лат. populatio — население) — это совокупность организмов одного вида, длительное время обитающих на одной территории (занимающих определённый ареал).

2. 
   Реакция агглютинации в диагностике инфекций. Механизмы. Диагностическое значение. Агглютинирующие сыворотки (комплексные и монорецепторные), диагностикумы. Нагрузочные реакции иммунитета (РНГА).
   

Реакция агглютинации (РА) - «Склеивание» корпускулярного антигена под действием

антител в присутствии электролита

• Механизм реакции - «феномен решетки»

• Корпускулярные антигены:

* клетки бактерий; фрагменты бактериальной клетки

* эритроциты, тромбоциты и пр.

* латекс, уголь, целлюлоза и пр.

Область применения:

* бактериологический метод диагностики: изучение антигенной структуры бактерий с целью идентификации (ориентировочная РА на стекле)

* серологический метод диагностики (развернутая РА)

Ориентировочная РА на стекле

О- агглютинация: мелкозернистая, протекает медленно

• Н- агглютинация: крупнозернистая, протекает быстро

• Осуществляется с помощью диагностических сывороток:

* по составу: полирецепторные, поливалентные (комплексные), монорецепторные, моновалентные

* по содержанию антител к антигенам бактерий:

О-сыворотки; Н-сыворотки; К-сыворотки

* по принадлежности к группе, виду, типу: групповые, видовые, типовые

Диагностические сыворотки

• Источник – животное (кролик, лошадь)

Получение монорецепторных сывороток:

• О-сыворотки: иммунизация инактивированной бактериальной культурой--- выработка Ат на многие Аг ---адсорбция «ненужных» Ат на поверхности бактерий (адсорбция по Кастеллани)

• Н-сыворотки: получение Н-Аг (фрагментация жгутиков и фильтрация взвеси) иммунизация животного

Развернутая РА

• Исследуемую сыворотку титруют – делают последовательные разведения (2-х, 10-ти кратные и пр.)

• Вносят Аг – диагностикум

• Определяют титр сыворотки – максимальное разведение, при котором ещё наблюдается агглютинация

Разновидность РА – нагрузочная РА: на носитель (корпускулярный) адсорбируют Аг или Ат

Носителями могут быть:

* эритроциты – р-ция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА или РПГА)

* бактериальные клетки – (стафилококк – коагглютинация)

* уголь (угольная агглютинация)

* латекс (латексная агглютинация)

* целлюлоза (целлюлозная агглютиация)

Нагрузочная РА

• Область применения:

* серологический метод диагностики – поиск Ат в сыворотке больного (антигенные диагностикумы)

* выявление растворенного Аг в патологическом материале – (антительные диагностикумы)

Вариант РА – проба Кумбса

Выявление неполных (одновалентных)антител. Они образуются тогда, когда у антитела оказывается сформирована одна валентность.

Антирезусные антитела

• Прямая: выявление Ат, адсорбированных на Rh+ эритроцитах (у ребёнка)

(Rh+Эр)-Ат + антиглобулиновая сыворотка à агглютинация

• Непрямая: выявление антирезусных Ат в сыворотке матери

сыворотка матери (Ат) + (Rh+ Эр) + антиглобулиновая сыворотка à агглютинация

3. 
   Вирусы группы ВИЧ. История открытия, общая характеристика. СПИД. Патогенез и эпидемиология СПИДа. Лабораторная диагностика, проблема специфической профилактики.
   

бщая характеристика. Геном ретровирусов уникален - он представлен двумя идентичными молекулами позитивной РНК, т.е. это РНК - вирусы с диплоидным геномом. Свое название ретровирусы получили за отличительные особенности репродукции (РНК à ДНК à иРНК à геномная РНК). Особенности репродукции связаны с функциями фермента обратной транскриптазы (ревертазы или РНК - зависимой ДНК - полимеразы), обладающей тремя видами активности - обратной транскриптазы, РНК - азы и ДНК - полимеразы.

Семейство Retroviridae подсемейства Lentivirinae - возбудители медленных вирусных инфекций, в т.ч. ВИЧ.

История изучения и происхождения ВИЧ.

Синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) впервые выделен как самостоятельное заболевание в США в 1981г. Возбудитель (ВИЧ-1) был описан почти одновременно в 1983г. французом Л.Монтанье и американцем Р.Галло. Эпидемиология нового вида патологии поражала своей необычностью. Почти 100% больных были мужчинами в возрасте 25-49 лет, 94% - гомо- или бисексуалами, отмечалась высокая летальность. У больных были выявлены дефекты клеточного иммунитета, развитие пневмоцистозной пневмонии, кандидоза и саркомы Капоши у них было расценено как оппортунистические заболевания. СПИД окрестили болезнью четырех “H”- по первым буквам английских вариантов слов гомосексуалы, гемофилия, гаитяне и героин. В 1986г. был идентифицирован еще один вирус - ВИЧ-2.

Окончательного ответа на вопрос о месте, времени и условиях возникновения ВИЧ нет. Ретроспективные исследования показали циркуляцию этого вируса по крайней мере с конца 50-х - начала 60-х годов. Прародительницей ВИЧ считают тропическую Африку, где широко распространен ВИО (близкородственный ВИЧ-2) среди обезьян. Первые известные серологические находки ВИЧ отмечены в Африке, здесь же - наибольшая интенсивность передачи ВИЧ наиболее естественным

гетеросексуальным путем. Однако эпидемическое распространение ВИЧ - инфекция получила с конца 70-х - начала 80-х годов. В 1987г. выявлен первый случай в России, в настоящее время счет идет на десятки тысяч инфицированных в год. В мире регистрируют десятки миллионов инфицированных ВИЧ в год, ежегодно число вновь инфицированных увеличивается, т.е. налицо пандемия ВИЧ - инфекции.

Структура вириона ВИЧ.

ВИЧ имеет сферическую форму и размеры 100-120 нм в диаметре. Наружная оболочка образована двойным липидным слоем с гликопротеиновыми “шипами”, состоящими из трансмембранного белка gp41 (пронизывает липидный слой) и наружного белка gp120. Эти оболочечные белки кодируются геном env и участвуют в прикреплении вириона к мембранам клеток хозяина. С внутренней стороны липидной оболочки находится матричный каркас, образованный белком р17. Он окружает внутреннюю структуру вириона - нуклеокапсид или сердцевину (англ. - core). Собственная оболочка сердцевины образована “коровским” белком р24. Внутри нуклеокапсида находится геном вируса в виде двух цепочек, связанных белками р7 и р9, полимеразный комплекс ревертазы, протеаза, интеграза (эндонуклеаза), затравочная т - РНК. Наиболее распространен ВИЧ-1, который в зависимости от строения гена env имеет субтипы. Субтипы A-H составляют доминирующую группу M (major), наиболее распространены субтипы С и Е.

Жизненный цикл ВИЧ.

Инфекционный процесс при заражении ВИЧ носит последовательный фазовый характер и начинается с проникновения вируса через слизистую оболочку половых путей или с непосредственного поступления в кровоток. Проникнув в организм, вирус в первую очередь атакует клетки, имеющие специфичный для него рецептор CD4. Этот рецептор имеют в большом количестве Т - хелперы, в меньшем - макрофаги и моноциты, нейроны, клетки нейроглии и некоторые другие клетки (см. лекции по общей иммунологии). Вирус распознает CD4 - рецепторы с помощью своего белка gp120. Процесс инфицирования клетки вирусом осуществляется в два этапа : прикрепления и слияния. Прикрепленный через белок gp120 к рецептору CD4 клетки - мишени вирус белком оболочки gp41 сливается с мембраной клетки. Белок gp41 обеспечивает не только слияние вирусной и клеточной мембран, но и слияние мембран клеток с образованием синцития (многоядерных клеток), обреченного на гибель. Нуклеокапсид, освобожденный от суперкапсида при слиянии мембран, попадает в цитоплазму. На пути к ядру освобождается геномная РНК и ассоциированные с ней компоненты сердцевины. Обратная транскриптаза синтезирует на вирионной РНК минус - цепь ДНК, РНК-аза разрушает вирионную РНК, а вирусная ДНК - полимераза синтезирует на минус - цепи плюс - цепь ДНК.

Двунитевая ДНК транспортируется в ядро клетки, где приобретает кольцевую форму и интегрируется под действием эндонуклеазы (интегразы) с ядром клетки, превращаясь в ДНК - провирус.Последующие этапы жизненного цикла ВИЧ - латентная фаза, фаза активации транскрипции с ДНК- провируса и последующая трансляция белков вируса, наработка компонентов вируса и формирование новых вирионов, их выход из клетки, сопровождающийся цитопатическим эффектом для клетки - мишени.

ДНК - провирус может длительно находиться в неактивном состоянии (персистентное инфицирование). В этот период вирус можно выявить только с

помощью ПЦР. Активация транскрипции особым ядерным фактором в результате действия иммунокомпетентных клеток или микробных антигенов приводит к продуктивной фазе - активному размножению ВИЧ. Факторы экспрессии генов ВИЧ - специфические антигены (прежде всего - герпес - вирусы), неспецифические митогены (фитогемагглютинин), цитокины (фактор некроза опухолей, интерфероны, гамма - интерферон), бактериальные иммуномодуляторы (фосфолипиды сальмонелл), глюкокортикостероиды.

Антигенные свойства ВИЧ.

Функция обратной транскриптазы не подвергается контролю, что обусловливает высокую частоту генетических ошибок при репликации и мутации структурных белков вируса. С учетом частоты изменчивости ни один ВИЧ не производит при репликации вирион, в точности соответствующий родительскому. Высокая генетическая изменчивость реализуется в вариабельности антигенных и биологических свойств ВИЧ. Высокой изменчивостью характеризуется продукт гена env - оболочечный белок gp120, особенно петлеобразный V3 - домен (из 35 аминокислот), к которому образуется до 90-95% всех вируснейтрализующих антител.

ВИЧ-1 и ВИЧ-2 имеют существенные отличия в строении, гомология первичной структуры геномов составляет только около 42%, перекрестного иммунитета между этими вирусами нет. Антигенными свойствами обладают все основные структурные элементы вириона, прежде всего - белки. Исключительная генетическая и антигенная изменчивость позволяет вирусу выживать в инфицированном организме.

Наряду с генетическими особенностями, ВИЧ-1 имеет фенотипические различия по ряду свойств - эффективности репликации, характеру цитопатического действия и способности образовывать синцитий (этот признак связан с вирулентностью), преимущественному тропизму к клеткам - моноцитотропные изоляты (начальные этапы болезни) и лимфотропные изоляты (разгар болезни).

Патогенез СПИДа.

Рецептором для ВИЧ является дифференцировочный антиген CD4, имеющий гомологичные участки с иммуноглобулинами и белком gp120 ВИЧ. Расположенный на мембранах Т- хелперов и Т- индукторов, рецептор CD4 в комплексе с белками HLA II класса выполняет функцию распознавания антигенов. Фиксация вируса через gp120 ВИЧ-1 (или gp105 ВИЧ-2) с мембранным рецептором CD4 блокирует основную функцию этих иммунокомпетентных клеток - восприятие сигналов от антиген- представляющих клеток. Последующая репликация вируса ведет к гибели этих клеток и выпадению их функций, т.е. к развитию иммунодефицита. Чем активнее CD4+ клетки, тем активнее процесс репродукции вируса. ВИЧ угнетает преимущественно Т- хелперы -1 (связанные с многими цитокинами клеточного иммунитета), что способствует развитию вирусных инфекций и опухолей.

Сродство вирусного gp120 (gp105 в случае ВИЧ-2) к этому рецептору определяет высокую избирательность поражения клеток. В патологический процесс вовлекаются в первую очередь и в наибольшей степени CD4+ лимфоциты, моноциты крови и макрофаги тканей, дендритные клетки крови, лимфоузлов, селезенки, кожи, альвеолярные и интерстициальные макрофаги легких, микроглия и другие клетки нервной системы, имеющие CD4+ рецепторы. Поражаются также В- и 0- лимфоциты,

ретикулярные клетки, эпителиальные клетки кишечника. Большое значение в распространении ВИЧ и длительному сохранению в организме придают клеткам Лангерганса.

В патогенезе ВИЧ - инфекции большое значение имеют механизмы иммунного повреждения. Наличие сходных участков в структуре белков gp120, HLA класса II и CD4 - рецепторов определяет перекрестное реагирование антител к ВИЧ с этими структурами с рядом патологических эффектов (блокада кооперации CD4+ лимфоцитов и HLA класса II, неадекватная стимуляция CD4+ клеток и др.).

Поражение иммунной системы при ВИЧ - инфекции носит системный характер, проявляясь глубокой супрессией Т- и В- звеньев иммунитета. Происходят изменения гиперчувствительности немедленного и замедленного типа, гуморального иммунитета и факторов неспецифической защиты. Наряду с дефицитом CD4+ лимфоцитов в динамике болезни нарастает функциональная недостаточность CD8+ лимфоцитов, NK клеток, нейтрофилов. Нарушение иммунного статуса проявляется рядом синдромов - инфекционным, аллергическим, аутоиммунным, лимфопролиферативным.

Манифестный синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) проявляется в трех основных клинических формах: нейроСПИД, онкоСПИД, инфектоСПИД (оппортунистические инфекции). Это зависит от путей внедрения ВИЧ, его преимущественного тропизма к CD4 Т- лимфоцитам или макрофагам, наличия кофакторов (цитомегаловирус, вирус Эпштейна- Барр), дозы инфекта, иммунного статуса организма и др.

В динамике ВИЧ- инфекции можно выделить следующие основные стадии: заражение, латентный период, появление лабораторных признаков инфекции, первичная клиника острой вирусной (ретровирусной) инфекции (эта стадия может отсутствовать), клинический СПИД (иммунодефицит плюс индикаторные болезни). Особое значение имеет выявление лабораторных признаков ВИЧ- инфекции.

Можно выделить три типа инкубации:

- вирусологическую ( от инфицирования до определения в крови вируса или его антигенов) - в среднем 2 - 4 недели;

- серологическую (от заражения до сероконверсии - появления положительных серологических результатов) - в среднем 8 - 12 недель;

- СПИД - инкубацию (равно или более 10 лет). Безусловный иммунологический критерий СПИДа - снижение CD4+ лимфоцитов до 200 клеток в микролитре.

Лабораторная диагностика.

Лабораторная диагностика ВИЧ - инфекции методически базируется на ИФА, иммуноблоте и ПЦР. Основными ее направлениями являются:

- выявление антител к ВИЧ;

- выявление ВИЧ или его антигенов;

- определение изменений в иммунном статусе.

Для выявления антител применяют ИФА с различными тест - системами (лизатными, рекомбинантными, пептидными антигенами ВИЧ-1 и ВИЧ-2). Основная проблема - ложноположительные результаты (перекрестная реактивность gp120, CD4+ рецепторов, белков HLA II класса и др.). Поэтому исследования в ИФА проводят как правило с использованием параллельно нескольких различных тест - систем.

Иммуноблот чаще применяют как подтверждающий тест для выявления антител к отдельным белкам ВИЧ. Антитела к основным внутренним белкам (р17, р24) обнаруживают у 70% инфицированных и примерно у половины больных СПИДом. В иммуноблоте чаще всего выявляются антитела к gp41 (до 85%) и gp160 (до 100%).

В ранние сроки используют выявление в ИФА антигена р24. Наиболее чувствительным методом выявления ВИЧ является ПЦР - диагностика.

Основным клинико - лабораторным показателем диагностики СПИДа у ВИЧ - инфицированных является определение количества CD4+ лимфоцитов. Уровень ниже 200 клеток/мкл является основным критерием СПИДа.

Лечение является одним из наиболее актуальных и до настоящего времени не решенных проблем ВИЧ - инфекции. Теоретически наиболее оправдано применение препаратов, ингибирующих обратную транскрипцию - зидовудин, азидотимидин, диданозин, ставудин и др. Вакцины против ВИЧ находятся в стадии разработки. С учетом высокой изменчивости вируса это очень сложная задача.

БИЛЕТ 40

1. 
   Микрофлора новорожденных, её становление в течении первого года жизни. Влияние грудного и искусственного вскармливания на состав микрофлоры ребенка.
   

Ребенок развивается в организме матери в норме в стерильных условиях. Формирование новой экологической системы “организм человека + населяющая его микрофлора” начинается в момент рождения, причем основой ее является микрофлора матери и окружающей ребенка внешней среды (прежде всего воздуха). В течение короткого времени кожные покровы и слизистые оболочки, сообщающиеся со внешней средой, заселяются разнообразными микроорганизмами. В формировании микрофлоры детей первого года (главным образом- бифидобактерии и лактобактерии) существенную роль имеет естественное (грудное) вскармливание.

Нормальная (т.е. в условиях здорового организма) микрофлора в количественном и качественном отношении представлена на различных участках тела (экотопах) неодинаково. Причины- неодинаковые условия обитания.

Физиологическое развитие лимфоидного аппарата новорожденного характеризуется быстрыми темпами заселения лимфоцитами брыжеечных, мезентериальных и других периферических лимфоузлов, увеличением их массы и нарастанием их функциональной активности. В них резко возрастает концентрация плазматических клеток, синтезирующих иммуноглобулины.

Отставание в развитии лимфоидной системы наблюдается у детей, рожденных при помощи кесарева сечения. При этом заселение полостей организма миерофлорой происходит с существенной задержкой, к тому же качество этой микрофлоры отличается от приобретенной в нормальных условиях.

Интересно отметить то, что количество Т- и В-клеток в крови новорожденных чаще всего соответствует их содержанию у взрослых.

Для периода новорожденности характерен слабый иммунный ответ на антигены из-за незрелости Т- и В-лимфоцитов, а также в связи с функциональной слабостью фагоцитоза. Еще недостаточно развиты естественные киллеры (ЕК-клетки). Этим, в частности, объясняется низкий уровень гамма-интерферона.

В силу несостоятельности иммунной системы ребенка раннего возраста основные защитные функции выполняют пассивно приобретенные сывороточные (Ig G) и секреторные антитела(IgA).

Второй критический период в иммунном статусе ребенка происходит в возрасте 3-6мес. Он характеризуется постепенным ослабление пассивного гуморального иммунитета из-за уменьшения концентрации материнских иммуноглобулинов, полученных еще эмбрионально. Полное исчезновение материнских антител происходит значительно позднее(обычно их обнаруживают до 18мес)

Из-за отсутствия местного иммунитета слизистых и слабого Т-клеточного иммунного ответа дети остаются высокочувствительны ко многим вирусам, особенно поражающим дыхательные пути.

Постепенное совершенствование иммунной системы организма приводит к тому, что концу 1-го года жизни ряд ее функций нормализуется. В частности, концентрация лимфоцитов в крови достигает максимума, хелперная функция уже доминирует над суппрессорной, начинается более активный синтез собственного Ig G(полноценный его синтез появляется только к 4-6 годам)

Если говорить о микрофлоре полости рта в разные возрастные периоды, то следует отметить следующее. Через 4-12 часов после рождения в составе резидентной микрофлоры обнаруживаются альфа-гемолитические и негемолитические стрептококки, которые сопутствуют человеку в течение всей жизни. В первые дни жизни к стрептококкам присоединяются вейллонеллы(оказывают антикариесогенное действие) и коагулазоотрицательные стафилококки, нейссерии, дифтероиды, лактобациллы. С 5 месяца добавляются фузобактерии, дрожжеподобные грибы. С появлением зубов микрофлора полости рта несколько меняется, начинают обнаруживаться облигатно анаэробные микроорганизмы – бактероиды, спирохеты, актиномицеты. Наличие зубных альвеол и крипт создает анаэробные условия, необходимые для размножения этих микроорганизмо

2. 
   Роль микроорганизмов в инфекционном процессе. Патогенность и вирулентность микробов, определение, единицы измерения.
   

В общебиологическом плане взаимоотношения микро- и макроорганизмов представляют собой симбиоз (т.е. сожительство), так как все живые существа сосуществуют в природе. Человек сосуществует на планете Земля с микроорганизмами, растениями, животными. Основными формами взаимодействия микро- и макроорганизмов (их симбиоза) являются: мутуализм, комменсализм, паразитизм.

Мутуализм- взаимовыгодные отношения (оба симбионта оказывают друг другу известную пользу). (пример- нормальная микрофлора).

Комменсализм- выгоду извлекает один партнер (микроб), не причиняя особого вреда другому. Необходимо отметить, что при любом типе взаимоотношений микроорганизм может проявить свои патогенные свойства (пример- условно- патогенные микробы- комменсалы в иммунодефицитном хозяине).

Паразитизм- крайняя форма антогонистического симбиоза, когда микроорганизм питается за счет хозяина, т.е. извлекает выгоду, нанося при этом вред хозяину.

Микробный паразитизм носит эволюционный характер. В процессе перехода от свободноживущего к паразитическому типу жизнедеятельности микроорганизмы теряют ряд ферментных систем, необходимых для существования во внешней среде, но приобретают ряд свойств, обеспечивающих возможность паразитизма.

Патогенность – потенциальная, генетически детерминированная способность микроба вызывать инфекционный процесс в восприимчивом организме

Критерии патогенности:

Инфективность – способность сохранятся во внешней среде и передаваться от одного организма к другому (процесс активного размножения возбудителя).

Примеры: споры, клеточная стенка

Инвазивность – способность размножаться и распространятся в организме

Токсигенность – способность вызывать интоксикацию организма (выделяя экзо- и эндотоксины, ферменты, вызывающие образование токсических веществ: уреаза разрушая мочевину, приводит к накоплению аммиака, который обладает токсическим действием на ткани,

декарбоксилазы аминокислот способствуют накоплению токсических биогенных аминов).

Факторы патогенности контролируются:

- генами хромосомы;

- генами плазмид;

- генами, привнесенными умеренными фагами.

Вирулентность – реализованная патогенность: степень выраженности факторов патогенности; мера патогенности.

Единицы измерения вирулентности:

Минимальная летальная (смертельная) доза (Dosis Letalis Minima -DLM ) – минимальное количество возбудителя или его токсинов, вызывающее при определенном пути введения за определенное время гибель 95% чувствительных животных одного вида, пола, веса.

DL50 – 50% животных – половинная смертельная доза, вызывает гибель 50% использованных в эксперементе животных.

DСL100 (certae) – 100% животных – абсолютная смертельная доза.

3. 
   Иерсиниозы, возбудитель чумы, возбудитель псевдотуберкулеза, возбудитель иерсиниозного энтероколита. Дифференциальная диагностика, патогенез инфекций, методы лабораторной диагностики, профилактика.
   

ЧУМА Чума (лат. pestis — зараза) — острое природно-очаговое инфекционное заболевание группы карантинных инфекций, протекающее с исключительно тяжёлым общим состоянием, лихорадкой, поражением лимфоузлов, лёгких и других внутренних органов, часто с развитием сепсиса. Заболевание характеризуется высокой летальностью и крайне высокой заразностью. Возбудитель – Yersinia pestis. Оносится к семейству Enterobacteriaceae.

Морфология возбудителя чумы

Источником инфекции служат грызуны и зайцеобразные разных видов, около 250 видов животных. В каждом природном очаге существует характерный для данной территории паразитоценоз, включающий основных и второстепенных носителей (млекопитающих) и их эктопаразитов – переносчиков. Больной человек может быть источником инфекции при легочной форме чумы, заражение может произойти при контакте с гнойным содержимым чумного бубона. Восприимчивость человека к чуме очень высокая во всех возрастных группах.

Факторы патогенности:

• Белки клеточной стенки F1, V, W – обеспечивают инвазивные свойства, подавляют фагоцитоз;

• «Мышиный токсин» - блокирует гормоны, различные метаболиты, разрушает митохондрии, способствует образованию тромбов;

• Ферменты агрессии (плазмокоагулаза, фибринолизин, протеазы и др.);

• Эндотоксин

Патогенез чумы

Механизм развития чумы включает три стадии:

1. Лимфогенный перенос возбудителя чумы от места проникновения до лимфатических барьеров.

2. Распространение возбудителя чумы из лимфатических узлов в кровоток - бактериемия. 3. Распространение чумы до забарьерных клеточных систем (генерализованная септицемия). Проникшие бактерии чумы активно поглощаются фагоцитами, фагоцитоз носит незавершённый характер, что способствует распространению возбудителя. Одновременно чумная палочка распространяется лимфогенно, вызывая множественный лимфаденит. Затем возбудитель чумы проникает в кровоток и диссеминирует в различные органы и ткани.

Клинические формы чумы

• Локальная (кожная, кожно-бубонная и бубонная)

• Первично- и вторично-септические

• Первично и вторично лёгочная, кишечная

Микробиологическая диагностика чумы

Предварительный диагноз чумы ставиться путём микроскопии исследуемого материала (кровь, мокрота, отёчная жидкость, пунктат бубонов) с окраской микропрепарата по Грамму или метиленовым синим. Обнаружение овоидных палочек с характерным биполярным окрашиванием позволяет поставить предварительный диагноз. Окончательным подтверждением заболевания служит выделение и идентификация культуры возбудителя (бактериологический метод, основной) и постановка биологической пробы.

Экспресс диагностика - для быстрого обнаружения чумного микроба в исследуемом материале от человека, животных или объектов окружающей среды используют:

• ПЦР;

• ИФА с моно- и поликлональными антителами;

• РПГА;

• РИФ;

• метод фаговой «дорожки» - внесение бактериофага в исследуемый материал в момент посева его на агар с генцианфиолетовым позволяет под микроскопом через 3-4 часа увидеть «стерильные пятна».

Иммунобиологические препараты для специфической профилактики и лечения чумы:

• Чумная живая сухая вакцина;

• Противочумная сыворотка;

• Противочумной гамма-глобулин;

• Противочумной бактериофаг

• Антибиотики.

ПСЕВДОТУБЕРКУЛЁЗ

Псевдотуберкулёз (pseudotuberculosis; греч. pseudēs ложный + туберкулез) - инфекционная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, интоксикацией, сыпью (чаще скарлатиноподобной), поражением желудочно-кишечного тракта и суставов, а также катаральными явлениями. Название «псевдотуберкулез» было дано, потому что в органах больных животных наблюдаются бугорки, имеющие внешнее сходство с туберкулезными. Возбудитель – Yersinia pseudotuberculosis.

Относится к семейству Enterobacteriaceae. Грамотрицательные, подвижные овоидные палочки. В молодых культурах биполярное окрашивание. Капсула слабо выражена.

Растут на среде ЭНДО (48 ч при 37 °С), образуют бесцветные S- и R-формы колоний.

Источником инфекции являются грызуны.

Путь передачи – пищевой. Типичная городская инфекция. Заражение происходит чаще всего в сети общепита при употреблении в пищу продуктов, не прошедших термическую обработку (овощные, фруктовые салаты и др.). Возбудитель попадает в продукты с мочой и фекалиями грызунов. Больной человек редко является источником инфекции.

Факторы патогенности:

• Эндотоксин;

• Энтеротоксин;

• Цитотоксин;

• Ферменты агрессии (уреазная активность и др.);

• Подвижность возбудителя

Клиника при псевдотуберкулёзе разнообразная, поэтому большое значение придаётся микробиологической диагностике.

Микробиологическая диагностика. Исследуют испражнения, желчь, суставную жидкость, кровь. Методы дигностики: бактериологический, серологический – РПГА, РА, ИФА.

Специфическая профилактика не разработана, вакцин нет.

Таксономия:Y.pestisвызывает чуму; отдел Gracilicutes, семейство Enterobacteriaceae, род Yersinia. Возбудитель – Yersiniapestis.

Морфологические свойства: грамотрицательные палочки, овоидной формы, окрашиваются биполярно. Подвижны, имеют

капсулу, спор не образуют.

Культуральные свойства.

Факультативные анаэробы. Температурный оптимум +25С. Хорошо культивируются на простых питательных средах.

Ферментируют большинство углеводов без образования газа. Психофилы - способны менять свой метаболизм в зависимости от

температуры и размножаться при низких температурах. Вирулентные штаммы образуют шероховатые (R) колонии, переходные

(RS) и сероватые слизистые гладкие авирулентные(S) формы.

69

Два типа колоний - молодые и зрелые. Молодые с неровными краями. Зрелые колонии крупные, с бурым зернистым центром и

неровными краями. На скошенном агаре черед двое суток при +28 С образуют серовато - белый налет, врастающий в среду, на

бульоне - нежную поверхностную пленку и хлопковидный осадок.

Биохимические свойства: фенментативная активнсть высокая: ферментация до кислоты ксилозу, синтез плазмокоагулазы,

фибринолизина, гемолизина, лецитиназу, сероводород. Рамнозу, мочевину не ферментирует.

Антигенная структура.

Группа белково - полисахаридных и липополисахаридных антигенов: термостабильный соматический О-антиген и

термолабильный капсульный V,W антигены. С W-антигеном связывают вирулентность бактерий. Продуцирует факторы

патогенности: фибринолизин, плазмокоагулазу, эндотоксин, экзотоксин, капсулу, V,W антигены.

Резистентность: чувствителен к антибиотикам (особенно стрептомицин), нестоек к окружающей среде при высокой

температуре.

Патогенные свойства.

Обладает патогенным потенциалом, подавляет функции фагоцитарной системы, подавляет окислительный взрыв в фагоцитах и

беспрепятственно в них размножается. Факторы патогенности контролируются плазмидами трех классов. В патогенезе

выделяют три основных стадии - лимфогенного заноса, бактеремии, генерализованной септицемии. Имеют адгезины и

инвазины, низкомолекулярные протеины (ингибируют бактерицидные факторы), энтеротоксин. Часть факторов контролируется

плазмидами вирулентности.

Клинические особенности: Инкубационный период – несколько часов до 8 сут. Различают локальные – кожно-бубонная,

бубонная; внешне-диссеминированные – первично-легочная, вторично-легочная и кишечная; генерализованная – первичносептическая, вторично-септическая формы чумы. Региональная лимфоаденопатия, энтероколиты, реактивные артриты,

спондилит, лихорадка.

Эпидемиология: Чума - классический природноочаговый зооноз диких животных. Основные носители в природе - сурки,

суслики, в городских условиях - крысы. В передаче возбудителя - блохи животных, способные заражать человека.

Иммунитет: клеточно-гуморальный, ограничен по длительности и напряженности.

Микробиологическая диагностика:

Бактериоскопическое исследование. Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по Граму и водным раствором

метиленового синего. Бактерии чумы представляют собой грамотрицательные палочки овоидной формы Бактериологическое

исследование.Исследуемый материал засевают на чашки с питательным агаром. Посевы инкубируют при 25С. Первичное

изучение посевов производят через 10ч. К этому сроку появляются колонии, которые образованы вирулентными R-формами.

Мало- и авирулентные бактерии формируют S-формы колоний. Идентификацию чистой культуры проводят по морфологии бактериальных клеток, характеру роста, антигенным и биохимическим свойствам, чувствительности к специфическому фагу и

биопробе.

На бульоне бактерии образуют пленку; ферментируют многие сахара до кислоты, индола не образуют, желатин не разжижают.

Содержат групповой термостабильный соматический антиген и специфический термолабильный капсульный антиген.

Биопроба.Проводится для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой. Наиболее

чувствительными лабораторными животными являются морские свинки, которым материал вводят подкожно.

Внутрибрюшинно материал вводят в том случае, если он не загрязнен другими бактериями. После гибели животных отмечают

патологические изменения органов и проводят бактериологическое исследование

Экспресс-методы лабораторной диагностики:

1.Иммунофлюоресцентный метод позволяет обнаружить присутствие возбудителя как в патологическом материале, так и в объектах окружающей среды (вода, воздух), а также в пищевых продуктах и эктопаразитах. С этой целью используют люминесцентную видоспецифическую противочумную сыворотку, люминесцентные противокапсульную и противосоматическую

сыворотку.

2.РПГА - для обнаружения антигенов бактерий в материале с помощью стандартной противочумной сыворотки, антитела

которой нагружены на эритроциты.

Лечение: антибиотики –стрептомицин, препараты тетрациклинового ряда.

Профилактика: специфическая профилактика - живая ослабленная чумная вакцина EV. Имеется сухая таблетированная вакцина

для перорального применения. Для оценки иммунитета к чуме (естественного постинфекционного и вакцинального) может

применяться внутрикожная аллергическая проба с пестином.

Чумной бактериофаг – при идентификации Y.pestis.

Чумная сухая вакцина – высушенная живая культура Y.pestis вакцинного штамма EV, используется для профилактики чумы.

Кишечный иерсиниоз — острая инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением ЖКТ, тенденцией к генерализации с различных органов и систем. Возбудитель кишечного иерсиниоза Yersiniaenterocolitica.

Таксономия.Y.enterocolitica относится к отделу Gracilicutes, семейству Enterobacteriaceae, роду Yersinia.

Морфологические и тинкториальные свойства. Возбудитель полиморфен: он может иметь форму либо палочки с закругленными концами, либо овоидную с биполярным окрашиванием. Спор не имеет, иногда образует капсулу. Перитрих есть. Некоторые штаммы имеют пили. Грамотрицателен.

Культуральные свойства.Y.enterocolitica — факультативный анаэроб. Наиб. благоприятная темп. 25С. Возбудитель неприхотлив и растет на простых питательных средах.

Биохимическая активность. Биохимическая активность возбудителя высокая. Внутри вида по спектру б/х активности: индолообразованию, утилизации эскулина, реакции Фогеса – Проскауэра подразделяются на 5 хемоваров. Основные б/х признаки: расщепление мочевины, ферментация сахарозы, отсутствие ферментации рамнозы, продукция орнитиндекарбоксилазы.

Антигенная структура. О- и Н-антигены, у некоторых штаммов обнаружен К-антиген. По 0-антигену различают более 30 серогрупп, из которых от больных чаще всего выделяют представителей серогрупп 03, 09, 05.

Факторы патогенности. Образует термостабильный эндотоксин. Некоторые штаммы выделяют вещество, соответствующее экзотоксину и обладающее энтеро- и цитотоксическим действием. У иерсиний обнаружены также инвазивный белок и белки, препятствующие фагоцитозу. Адгезивная активность иерсиний связана с пилями и белками наружной мембраны.

Резистентность. Чувствителен к высокой температуре, солнечным лучам, дезинфицирующим веществам, но очень устойчив к действию низких температур: хорошо переносит температуру -20 °С.

Эпидемиология. Источники болезни для человека - крысы, мыши, животные и птицы,. Механизм заражения иерсиниозом фекально-оральный, основным путем передачи является алиментарный: болезнь может возникнуть при употреблении фруктов, овощей, молока, мяса. Но возможны также контактный (при контакте людей с больными животными) и водный пути передачи.

Патогенез. Возбудитель попадает в организм через рот, в нижних отделах тонкой кишки прикрепляется к эпителию слизистой оболочки, внедряется в клетки эпителия, вызывая воспаление. Под действием токсинов усиливается перистальтика кишечника и возникает диарея. Иногда в патологический процесс вовлекается аппендикс, развивается аппендицит. Незавершенный фагоцитоз способствует генерализации процесса. У людей со сниженным иммунитетом могут развиться сепсис с образованием вторичных гнойных очагов в мозге, печени и селезенке.

Клиника. Различают гастроэнтероколитическую, аппендикулярную и септическую формы. Инкубационный период составляет от 1 до 4 дней. Болезнь начинается остро с повышения температуры тела до 39С, общей интоксикации, рвоты, болей в животе, поноса. Течение продолжительное.

Микробиологическая диагностика. Используют бактериологический и серологический методы исследования. Цель бактериологического метода являются идентификация возбудителя, определение антибиотикограммы, внутривидовая идентификация (установление серовара, биохимического варианта, фаговара).Материалом для бактериологического метода исследования служат испражнения, ликвор, кровь, моча, иногда червеобразный отросток. Материал для исследования помешают в фосфатный буфер и подвергают холодовому обогащению. Серологическая диагностика проводится постановкой РНГА, с диагностическим титром 1:160. Важное диагностическое значение имеет наблюдение за нарастанием титра антител в динамике.

Лечение. Этиотропная антибиотикотерапия.

БИЛЕТ 41

1. 
   Особенности строения актиномицетов
   

Актиномицеты (лучистые грибы) – это бактерии, относящиеся к отд. Firmicutes, сем. Actynomycetaceae.

Клетки в виде ветвящихся нитей (гиф) без поперечных перегородок. Гифы переплетаются и образуют мицелий (как грибы). Мицелий бывает субстратный (врастает в питательную среду) и воздушный (на поверхности среды).

Как и все бактерии, актиномицеты - прокариотами (не имеют оформленного ядра), а по Граму окрашиваются положительно, т.е. клеточная стенка у них как у грам «+» бактерий. Размножение: распад нитей на отдельные клетки (палочки, кокки) и спорами, которые образуются на концах воздушных гиф.

К нокардиоподобным актиномицетам относится группа палочковидных или неправильной формы бактерий, иногда ветвящихся форм ( р. Corynebacterium, р. Mycobacterium, р. Nocardia). Они содержат в стенке миколовые кислоты и большое количество жиров и восков. Это придает им кислотоустойчивые свойства, поэтому они не обесцвечиваются серной кислотой. Их окрашивают по методу Циля-Нильсена. Для окраски используют 5% карболовый фуксин Циля, 5% раствор серной кислоты и метиленовый синий по Леффлеру. Сущность метода: кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет (цвет фуксина), т.к. миколовая кислота взаимодействует с карболовым фуксином и затем не происходит обесцвечивания серной кислотой. Остальные (некислотоустойчивые) бактерии обесцвечиваются и докрашиваются в синий цвет метиленовым синим. Таким образом, кислотоустойчивые бактерии можно отличить от других.

Медицинское значение актиномицетов: 1) образуют антибиотики (стрептомицин, тетрациклин); 2) вызывают инфекционные заболевания (актиномикозы, туберкулез, дифтерию, нокардиозы).

2. 
    Иммуноферментный анализ. Компоненты реакции, варианты её использования в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний.
   

Метод основан на использовании в качестве метки антител ферментов, способных разлагать субстрат и приводить к образованию окрашенных продуктов (хромогена). Конъюгированные с ферментом антитела сохраняют способность соединяться с гомологичным АГ. Интенсивность окраски хромогена соответствует количеству образовавшихся комплексов АГ-АТ + фермент.

Субстратом для пероксидазы является перекись водорода, а хромогеном служат 5- аминосалициловая кислота, ортофенилендиамин и другие вещества. Антитела или антигены фиксируются на внутренней поверхности полистироловых планшетов для иммунологических реакций; реакция учитывается визуально, после добавления в лунку субстрата для данного фермента.

Для объективной оценки результатов ИФА можно использовать простейшие фотометры (ридеры) с вертикальным ходом лучей.

Определение неизвестных антигенов состоит из таких этапов:

1) связывание антител, специфичных для искомого антигена, с пластиком лунки планшета;

2) внесение антигенсодержащего материала;

3) внесение антител той же специфичности, меченых ферментом

4) внесение хромогенного субстрата.

Это вариант постановки называется - прямой метод

Определение неизвестных антигенов непрямым методом состоит из таких этапов:

1) связывание антител, специфичных для искомого антигена, с пластиком лунки планшета;

2) внесение антигенсодержащего материала;

3) внесение антител той же специфичности (но без ферментной метки!)

4) внесение конъюгата (меченой ферментом антиглобулиновой сыворотки – сыворотки против иммуноглобулинов, в данном случае – против кроличьих глобулинов, так как диагностические сыворотки преимущественно получают от кроликов);

5) внесение хромогенного субстрата.

Определение неизвестных антител включает в себя следующие этапы:

1) связывание известного антигена с пластиком лунки планшета;

2) внесение испытуемой сыворотки;

3) внесение конъюгата (меченой ферментом антиглобулиновой сыворотки – в данном случае

– против человеческого глобулина);

4) внесение хромогенного субстрата.

В настоящее время в микробиологии чаще всего используется твердофазная модификация ИФА. Ее суть заключается в том, что вначале на каком-либо твердом материале сорбируют АГ (или АТ) и лишь после этого добавляют остальные ингредиенты серологической реакции.

Количество присоединенного к твердой фазе фермента соответствует количеству антител (при выявлении антител в серологическом методе).).

В качестве твердофазного носителя АТ или АГ обычно используют пластиковые планшеты, шарики, пленки или пробирки, изготовленные из различных синтетических инертных материалов — полистирола, метакрила и др. Будучи адсорбированными на поверхности таких материалов, АТ или АГ даже в высушенном состоянии длительное время сохраняют свою иммунологическую специфичность и способность вступать в серологические реакции.

В настоящее время ИФА широко применяют для диагностики инфекционных болезней бактериальной, грибковой этиологии, протозойных инфекций и гельминтозов. Наиболее важное значение метод имеет в диагностике вирусных инфекций — особенно вирусных гепатитов, ВИЧ- инфекции, герпесвирусной, ротавирусной, аденовирусной инфекции и др.

3. 
   Роль ратавирусов в кишечной патологии взрослых и детей. Характеристика вирусов, патогенез ротавирусной инфекции, диагностика.
   

Ротавирусы.

Семейство Reoviridae

Род Rotavirus

Морфология, химический состав. Вирус имеет сферическую форму. Эти вирусы имеют двунитевую фрагментированную РНК, окруженную капсидом с двуслойной оболочкой (наружный и внутренний капсид). Ротавирусы свое название получили в связи со своеобразием морфологии вируса (лат. rota - колесо). Наружная липопротеидная оболочка отсутствует.

Культивирование. Вирусы удается культивировать при определенных условиях в культуре клетки. Лаборато

Резистентность. Ротовирусы сохраняют жизнеспособность в окружающей среде в течении нескольких месяцев.

Антигенная структура. Имеются внутренний группоспецефический и наружные типоспецефические агенты, по которым ротовирусы классифицируют на 4 серотипа.

Впервые ротавирусы выявлены у детей с острым гастроэнтеритом их эпителиальных клеток слизистой оболочки двенадцатиперсной кишки. Вирионы при электронно - микроскопическом исследовании имеют вид колес диаметром 70 нм с круговым ободком по периферии и отходящими внутрь “спицами”. Имеют наружный и внутренний капсид, внутри которого содержится двунитевая фрагментированная РНК. К ротавирусам человека серологически близки ротавирус телят (Небраски) и обезьян, которые легче культивировать в клеточных культурах и которые используют в качестве антигенных препаратов для серодиагностики ротавирусной инфекции у людей. Ротавирус человека - фекально - оральный вирус. Он вызывает гастроэнтериты у новорожденных (внутрибольничные вспышки), дошкольников и младших школьников. В мире ежегодно регистрируют до нескольких миллионов летальных исходов ротавирусного гастроэнтерита у детей. Наиболее опасны больные в первые 3-5 дней заболевания в связи с интенсивным выделением вируса с фекалиями.

Иммунитет. Обусловлен образованием сывороточных, секреторных антител и интерферона. Пассивный естественный иммунитет сохраняется на протяжении первых 6 мес жизни ребенка.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служит – фекалии. Экспресс диагностика основана на выявлении вирусов или антигенов с помощью ЭМ, ИЭМ, ИФА, РИА. Выделение вирусов не проводят из за отсутствия методов, доступных для практических лабораторий. Серодиагностика осуществляется с помощью РН, РСК, РТГА с парными сыворотками больных.

Специфическая профилактика и лечение. Разработана инактивированная вакцина. Лечение симптоматическое.

БИЛЕТ 42

1. 
   Спирохеты. Особенности строения, способы выявления. Роль в патологии человека
   

Спирохеты- имеют различное число завитков, аксостиль- совокупность фибрилл.

Спирохеты - тонкие, спирально завитые бактерии длиной от нескольких до нескольких сотен микрометров, подвижные, Гр-, хемоорганотрофы. Выделяют три основных типа движений - быстрое вращение вокруг продольной оси, сгибательные, штопорообразные (винтообразные). Медицинское значение имеют представители родов Treponema, Borrelia, Leptospira и Spirillum.

Род Treponema.Род представлен туго закрученными спиралевидными бактериями длиной 5 - 20 мкм. Наиболее известный - T. pallidum (бледная трепонема), подвид T. pallidum pallidum - возбудитель сифилиса.

Морфология. Возбудитель сифилиса имеет спиралевидную форму с одинаковыми по высоте завитками (более 10). Характер подвижности - плавные винтообразные и сгибательные движения (Treponema -с лат. - сгибающаяся нить). По Романовскому - Гимзе окрашиваются в бледно - розовый цвет (pallidum - с лат.- бледная). Легко выявить при помощи темнопольной микроскопии и после инпрегнации серебром.

Культуральные и биохимические свойства.Бледная трепонема чрезвычайно прихотлива к условиям культивирования и не способна длительно расти на питательных средах. Отличается очень медленным темпом размножения. В лабораторных условиях можно культивировать на кроликах, заражая их интратестикулярно (орхит с накоплением трепонем)..
Род Borrelia. Спиральные, имеющие до 10 неправильной формы крупных завитков, ГР- бактерии с вращательно- поступательным характером движений. Анаэробы, часто требующие сложных сред для культивирования.
Патогенные для человека боррелии являются возбудителями возвратных тифов (рекуррентных лихорадок) или боррелиозов.

Культуральные свойства. Представители этого рода взыскательны к условиям культивирования, особенно боррелии группы ИКБ. Для них необходимы факультативно - анаэробные условия, температура плюс 33 градуса Цельсия, специальные среды (BSK-2), содержащие среду 199, глюкозу, альбумин, цистеин, кроличью сыворотку, желатин и другие компоненты.

Род Leptospira Спиральные ГР- бактерии с прямолинейным и винтообразным движением, часто с изогнутыми концами (в виде крючков). Род включает свободоживущие и паразитические виды. Основной патогенный для человека и животных вид - L.interrogans.

Культуральные и биохимические свойства. Хемоорганотрофы, аэробы. Лептоспиры - типичные гидрофилы, долго сохраняются во влажных субстратах, воде, влажной почве. 4. Культивируют преимущественно на жидких средах с добавлением сыворотки крови кролика (среда Терских).

Морфологию трепонем и лептоспир изучают путем микроскопии живых организмов в препаратах «раздавленная» или «висячая» капля в темнопольном или фазово-контрастном микроскопе. Окрашиваются по Романовскому-Гимзе

2. 
   Реакция нейтрализации вирусов. Применение для идентификации вирусов и для серологической диагностики инфекций. Варианты вирусной нейтрализации.
   

Реакция нейтрализации вируса основана на способности специфических вируснейтрализующих антител блокировать инфекционные, гемагглютинирующие, гемадсорбирующие, цитопатические, бляшкообразующие и др. свойства вирусов.

Она применяется в двух направлениях: 1) для идентификации вирусов; 2) для серодиагностики вирусных инфекций, т.е. для определения нарастания титра вируснейтрализующих антител в «парных» сыворотках. Компоненты: 1. Исследуемый вирус (при идентификации выделенною вируса) или исследуемая сыворотка (при серодиагностике инфекции). 2. Диагностическая (группе-, видо-, типоспецифическая) сыворотка (при идентификации вируса) или известный вирус — диагностикум (при серодиагностике). 3. Индикаторный объект: животные, куриные эмбрионы, культуры тканей или эритроциты.

Реакции нейтрализации т У!УО ставят в культурах клеток, куриных эмбрионах и на лабораторных животных.

Принцип. Смесью вирус (исследуемый или известный) + сыворотка (диагностическая или исследуемая), выдержанной в течение определенного времени, заражают культуру клеток, куриный эмбрион или лабораторное животное. При (+} реакции, т.е. при нейтрализации вируса антителами индикаторные объекты продолжают нормально существовать, а в контроле — гибель или характерные изменения.

Реакция нейтрализации — реакция торможения гемагглютинации (РТГА).

РТГА применяется: -для серотипирования вирусов; -для серодиагностики инфекций. Выделяют два способа постановки: - капельный способ на стекле (ориентировочная реакция), применяется для серо копирования вирусов; - развернутый в пробирках.

Механизм. У некоторых вирусов (например, гриппа) есть гемагглютинин, вызывающий агглютинацию эритроцитов различных животных, в зависимости от вида вируса. При наличии в сыворотке антител — антигемагглютининов наблюдаются инги-бирования активности вирусов. РТГА. Цель: серотипирование вируса гриппа А

Компоненты: 1. Исследуемый материал — аллантоисная жидкость куриного эмбриона, 2. Диагностические противогриппозные типоспецифиче-ские сыворотки,

3. 5 % взвесь куриных эритроцитов. 4. Физиологический раствор.

Реакция ставится на стекле капельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток и исследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, а при отрицательной выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.

1. Метод парных сывороток: выявление нарастания титра противовирусных антител

не менее, чем в 4 раза

Используют реакции нейтрализации: нейтрализующим действием в данном варианте

реакций будут обладать антитела сыворотки больного.

Титром сыворотки в данных

реакциях будет являться максимальное разведение сыворотки, при котором нейтрализуется

биологический эффект вируса (вирусного диагностикума – живого эталонного штамма

вируса):

• отсутствует агглютинация эритроцитов,

1.Агглютинация эритроцитов под действием вирусов

2.Отсутствие агглютинации (торможение) за счет блокирования

вирусных гемагглютининов антителами

• отсутствует ЦПД,

• цвет среды изменяется с красного на желтый (т.к. изменяется рН среды под

действием продуктов метаболизма неповрежденных клеток ткани) и пр.

2. Выявление иммуноглобулинов класса М (IgM):с помощью иммуноферментного

анализа

3. 
   Пикорнавирусы, общая характеристика семейства. Вирусы коксаки и экхо - все про них, заболевания, которые они вызывают. Методы диагностики
   

Семейство Picornaviridae объединяет четыре рода - Enterovirus

Вирусы Коксаки.

Они образуют группу, близкую к полиовирусам. Вирусы Коксаки групп А и В в отличии от полиовирусов патогенны для новорожденных мышей, отличаясь друг от друга характером вызываемых у них поражений (группа А - преимущественные поражения скелетной мускулатуры, группы В - преимущественные поражения центральной нервной системы).

Антигенная структура. Вирусы Коксаки не дают перекрестных серологических реакций с полиовирусами, группа А имеет 24 серовара, группа В - 6 сероваров. Серовары не содержат группоспецифического антигена, однако обладают некоторой перекрестной реактивностью. Наличие у возбудителей типоспецифических антигенов обусловливает синтез типоспецифических антител. Серовары Коксаки В и некоторые серовары Коксаки А обладают в отличии от полиовирусов гемагглютинирующими свойствами.

Клинические проявления.

Среди всех энтеровирусов вирусы Коксаки (особенно группы В) обладают наибольшей кардиотропностью, вызывая миокардиты. Наиболее часто они поражают детей, вызывают в большинстве случаев легкие формы преимущественно с “простудной” симптоматикой. Наряду с полиомиелитоподобными заболеваниями (вялыми параличами) и миокардитами, вирусы этой группы способны вызывать ОРЗ, гастроэнтериты, герпангины и пузырчатку полости рта и конечностей.

Лабораторная диагностика - как у всех энтеровирусов. Принадлежность к сероварам определяют в РСК или РН с типоспецифическими сыворотками.

Эффективных методов специфической профилактики и противовирусной терапии не разработано.

ECHO - вирусы получили свое название от слов Enteric (кишечные) Cytopathogenic (цитопатогенные) Human (человеческие) Orphan (сиротские) вирусы. Они были выделены из кишечника человека, по ряду признаков оказались схожими с полиовирусами и вирусами Коксаки, однако первоначально не были связаны с какими - либо заболеваниями (т.е. оказались “сиротскими”).

Классификация и антигенная структура.

В настоящее время кишечная группа ECHO- вирусов насчитывает 34 серовара. Разделение основано на типоспецифичности антигенов вирусного капсида. Некоторые антигены обладают перекрестной реактивностью, 12 серотипов способно к гемагглютинации.

Патогенез заболеваний, вызываемых ECHO- вирусами сходет с патогенезом полиомиелита. Заражение происходит преимущественно фекально - оральным путем. Размножение вирусов происходит в эпителиальных клетках слизистых, а также в лимфоидной ткани. Способны вызывать “простудные заболевания” (по типу ОРВИ), некоторые серотипы (11, 18 и особенно 19) - кишечные диспепсии, более редко -менингиты, восходящие параличи и энцефалиты, отдельные серотипы - гепатиты, конъюнктивиты, увеиты (серотипы 11 и 19).

БИЛЕТ 43

1. 
   Методы обнаружения вирусов при культивировании их в культуре ткани, в организме чувствительных лабораторных животных, в курином эмбрионе. Методы титрования вирусов
   

Индикация вирусов при разных методах культивирования.
При заражении чувствительных животных:

- гибель животного

- проявление клинических симптомов

- обнаружение телец включений в тканях пораженного органа организма животного

При заражении куриного эмбриона (4 – 12-дневного):

- гибель эмбриона

- появление «бляшек» на хорион-аллантоисной оболочке

- реакция гемагглютинации (с аллантоисной жидкостью)

- цитопатическое действие в тканях эмбриона

При заражении культур клеток:

- цитопатическое действие (ЦПД)

- бляшкообразование

- тельца включений

- феномен гемадсорбции

- реакция гемагглютинации с культуральной жидкостью

- цветная реакция (при поражении ткани вирусом индикатор не меняет цвет, так как изменение рН среды не происходит)
Индикация (обнаружение) вирусов

Цитопатическое действие (ЦПД): образование симпластов, синцитиев; изменение формы клеток; разрушение ядра; метахромазия (изменение способности фиксировать красители); внутриклеточные включения

Цветная реакция (проба): изменение цвета индикатора питательной среды при сохранении жизнеспособности клеток

Реакция вирусной гемагглютинации: агглютинация эритроцитов под действием вирусов, имеющих рецепторы-гемагглютинины (аллантоисная жидкость, культуральная жидкость)

Титрование вирусов (определение количества (титра) вируса для реакций идентификации):

титрование проводят в тех же реакциях, с помощью которых обнаруживают вирус

(индикация вирусов): ЦПД, гемадсорбция, гемагглютинация, цветная проба биологическая проба и пр.

Титром вируса называют максимальное разведение вируссодержащего

материала, при котором происходит вызываемый вирусом эффект:
Цветная проба: максимальное разведение, при котором цвет среды не меняется

ЦПД: максимальное разведение, при котором в ткани выявляются специфические

изменения

Гемагглютинация: максимальное разведение, при котором происходит агглютинация эритроцитов

Гемадсорбция: максимальное разведение, при котором происходит адсорбция

эритроцитов на культуре ткани

Биологическая проба: максимальное разведение, при введении которого в организм животного происходит его гибель.

2. 
   Серотерапия и серопрофилактика. Характеристика антитоксических, антимикробных сывороток и иммуноглобулинов. Их приготовление и титрование.
   

Серотерапия и серопрофилактика основана на пассивной иммунизации, основанная на введении в организм человека препаратов, содержащих специфические антитела, широко применяется при проведении экстренной профилактики тех инфекционных болезней, при которых ведущим фактором невосприимчивости является гуморальный иммунитет (антитоксический, противовирусный, антибактериальный), а также для специфической терапии этих заболеваний.

Анатоксины.

Анатоксины получают из бактериальных экзотоксинов путем обработки их формалином и теплом. При такой обработке токсины утрачивают токсичность, но сохраняют антигенные и иммуногенные свойства. Анатоксины адсорбируют на гидроокиси аллюминия и в таком виде ис-пользуют. Гидроокись аллюминия является примером адъюванта. Анатоксины применяют для создания искусственного антитоксического иммунитета. Подобные вакцины используют для профилактики дифтерии, столбняка, газовой гангрены, стафилококковой инфекции и др.

Антимикробные

Антимикробные сыворотки получают гипериммуннзацией лошадей соответствующими убитыми бактериями или антигенами и содержат антитела с агглютинирующими, литическими и опсонизирующими свойствами. Они не нашли широкого применения в силу их малой эффективности. Антибактериальные сыворотки относятся к нетитруемым препаратам, так как общепринятой единицы измерения их лечебной силы нe существует поэтому антибактериальные лечебные сыворотки дозируются в объемных единицах, непосредственно у постели больного, исходя из степени тяжести заболевания.для очистки и концентрации антибактериальных сывороток и некоторых антивирусных используют метод, основанный на разделении белковых фракций нативных сывороток и выделении активных иммуноглобулинов этиловым спиртом при низкой температуре (метод водно-спиртового осаждения на холоду).

Иммуноглобулины:

1. Гетерологичные сывороточные препараты.

Для изготовления гетерологичных сывороточных препаратов используют в основном крупных животных лошадей. Лошади обладают высокой иммунологической реактивностью, от них в срав-нительно короткий срок можно получить сыворотку, содержащую антитела в высоком титре.

Кроме этого, введение лошадиного белка человеку дает наименьшее количество побочных реакций. Животные других видов используются редко. Годные к эксплуатации в возрасте от 3 лет и выше животные подвергаются гипериммунизации, т.е. процессу многократного введения возрастающих доз антигена с целью накопления в крови животных максимального количества антител и поддержания его на достаточном уровне в течение возможно более длительного време-ни. В период максимального нарастания титра специфических антител

Использование цельной гетерологичной сыворотки сопровождается аллергическими реакциями в форме сывороточной болезни и анафилаксии. Одним из путей уменьшения побочных реакций сывороточных препаратов, а также повышения их эффективности является их очистка и концентрация

Содержание антитоксина в антитоксических сыворотках выражается в международных единицах (ME), принятых ВОЗ. Например, 1 ME противостолбнячной сыворотки соответствует ее минимальному количеству, нейтрализующему 1000 минимальных смертельных доз (DLm)

В препаратах иммуноглобулинов IgG является основным компонентом (до 97%). lgA, IgM, IgD входят в препарат в очень малых количествах.

Гетерологичные сывороточные препараты применяют для лечения и профилактики инфекционных заболеваний, вызываемых бактериями, их токсинами, вирусами.

Существенный недостаток- возникновение сенсибилизации организма к чужеродному белку (анафилактический шок). Перед введением лечебной сыворотки пациенту внутрикожно на сгибательную поверхность предплечья вводят 0,1 мл разведенной лошадиной сыворотки и наблюдают за реакцией в течение 20 минут.

2. Гомологичные сывороточные препараты из крови доноров.

Гомологичные сывороточные препараты получают из крови доноров, специально иммунизированных против определенного возбудителя или его токсинов. При введении таких препаратов в организм человека антитела циркулируют в организме несколько дольше, обес-печивая пассивный иммунитет или лечебный эффект в течение 4-5 недель. В настоящее время применяют донорские иммуноглобулины нормальные и специфические и донорскую плазму. Выделение иммунологически активных фракций из донорских сывороток производят с использованием спиртового метода осаждения.

Гомологичные иммуноглобулины практически ареактогенны, поэтому реакции анафилактического типа при повторных введениях гомологичных сывороточных препаратов возникают редко.

3. 
   Иерсиниозы, возбудитель чумы, возбудитель псевдотуберкулеза, возбудитель иерсиниозного энтероколита. Дифференциальная диагностика, патогенез инфекций, методы лабораторной диагностики, профилактика.
   

ЧУМА Чума (лат. pestis — зараза) — острое природно-очаговое инфекционное заболевание группы карантинных инфекций, протекающее с исключительно тяжёлым общим состоянием, лихорадкой, поражением лимфоузлов, лёгких и других внутренних органов, часто с развитием сепсиса. Заболевание характеризуется высокой летальностью и крайне высокой заразностью. Возбудитель – Yersinia pestis. Оносится к семейству Enterobacteriaceae.

Морфология возбудителя чумы

Источником инфекции служат грызуны и зайцеобразные разных видов, около 250 видов животных. В каждом природном очаге существует характерный для данной территории паразитоценоз, включающий основных и второстепенных носителей (млекопитающих) и их эктопаразитов – переносчиков. Больной человек может быть источником инфекции при легочной форме чумы, заражение может произойти при контакте с гнойным содержимым чумного бубона. Восприимчивость человека к чуме очень высокая во всех возрастных группах.

Факторы патогенности:

• Белки клеточной стенки F1, V, W – обеспечивают инвазивные свойства, подавляют фагоцитоз;

• «Мышиный токсин» - блокирует гормоны, различные метаболиты, разрушает митохондрии, способствует образованию тромбов;

• Ферменты агрессии (плазмокоагулаза, фибринолизин, протеазы и др.);

• Эндотоксин

Патогенез чумы

Механизм развития чумы включает три стадии:

1. Лимфогенный перенос возбудителя чумы от места проникновения до лимфатических барьеров.

2. Распространение возбудителя чумы из лимфатических узлов в кровоток - бактериемия. 3. Распространение чумы до забарьерных клеточных систем (генерализованная септицемия). Проникшие бактерии чумы активно поглощаются фагоцитами, фагоцитоз носит незавершённый характер, что способствует распространению возбудителя. Одновременно чумная палочка распространяется лимфогенно, вызывая множественный лимфаденит. Затем возбудитель чумы проникает в кровоток и диссеминирует в различные органы и ткани.

Клинические формы чумы

• Локальная (кожная, кожно-бубонная и бубонная)

• Первично- и вторично-септические

• Первично и вторично лёгочная, кишечная

Микробиологическая диагностика чумы

Предварительный диагноз чумы ставиться путём микроскопии исследуемого материала (кровь, мокрота, отёчная жидкость, пунктат бубонов) с окраской микропрепарата по Грамму или метиленовым синим. Обнаружение овоидных палочек с характерным биполярным окрашиванием позволяет поставить предварительный диагноз. Окончательным подтверждением заболевания служит выделение и идентификация культуры возбудителя (бактериологический метод, основной) и постановка биологической пробы.

Экспресс диагностика - для быстрого обнаружения чумного микроба в исследуемом материале от человека, животных или объектов окружающей среды используют:

• ПЦР;

• ИФА с моно- и поликлональными антителами;

• РПГА;

• РИФ;

• метод фаговой «дорожки» - внесение бактериофага в исследуемый материал в момент посева его на агар с генцианфиолетовым позволяет под микроскопом через 3-4 часа увидеть «стерильные пятна».

Иммунобиологические препараты для специфической профилактики и лечения чумы:

• Чумная живая сухая вакцина;

• Противочумная сыворотка;

• Противочумной гамма-глобулин;

• Противочумной бактериофаг

• Антибиотики.

ПСЕВДОТУБЕРКУЛЁЗ

Псевдотуберкулёз (pseudotuberculosis; греч. pseudēs ложный + туберкулез) - инфекционная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, интоксикацией, сыпью (чаще скарлатиноподобной), поражением желудочно-кишечного тракта и суставов, а также катаральными явлениями. Название «псевдотуберкулез» было дано, потому что в органах больных животных наблюдаются бугорки, имеющие внешнее сходство с туберкулезными. Возбудитель – Yersinia pseudotuberculosis.

Относится к семейству Enterobacteriaceae. Грамотрицательные, подвижные овоидные палочки. В молодых культурах биполярное окрашивание. Капсула слабо выражена.

Растут на среде ЭНДО (48 ч при 37 °С), образуют бесцветные S- и R-формы колоний.

Источником инфекции являются грызуны.

Путь передачи – пищевой. Типичная городская инфекция. Заражение происходит чаще всего в сети общепита при употреблении в пищу продуктов, не прошедших термическую обработку (овощные, фруктовые салаты и др.). Возбудитель попадает в продукты с мочой и фекалиями грызунов. Больной человек редко является источником инфекции.

Факторы патогенности:

• Эндотоксин;

• Энтеротоксин;

• Цитотоксин;

• Ферменты агрессии (уреазная активность и др.);

• Подвижность возбудителя

Клиника при псевдотуберкулёзе разнообразная, поэтому большое значение придаётся микробиологической диагностике.

Микробиологическая диагностика. Исследуют испражнения, желчь, суставную жидкость, кровь. Методы дигностики: бактериологический, серологический – РПГА, РА, ИФА.

Специфическая профилактика не разработана, вакцин нет.

Таксономия:Y.pestisвызывает чуму; отдел Gracilicutes, семейство Enterobacteriaceae, род Yersinia. Возбудитель – Yersiniapestis.

Морфологические свойства: грамотрицательные палочки, овоидной формы, окрашиваются биполярно. Подвижны, имеют

капсулу, спор не образуют.

Культуральные свойства.

Факультативные анаэробы. Температурный оптимум +25С. Хорошо культивируются на простых питательных средах.

Ферментируют большинство углеводов без образования газа. Психофилы - способны менять свой метаболизм в зависимости от

температуры и размножаться при низких температурах. Вирулентные штаммы образуют шероховатые (R) колонии, переходные

(RS) и сероватые слизистые гладкие авирулентные(S) формы.

69

Два типа колоний - молодые и зрелые. Молодые с неровными краями. Зрелые колонии крупные, с бурым зернистым центром и

неровными краями. На скошенном агаре черед двое суток при +28 С образуют серовато - белый налет, врастающий в среду, на

бульоне - нежную поверхностную пленку и хлопковидный осадок.

Биохимические свойства: фенментативная активнсть высокая: ферментация до кислоты ксилозу, синтез плазмокоагулазы,

фибринолизина, гемолизина, лецитиназу, сероводород. Рамнозу, мочевину не ферментирует.

Антигенная структура.

Группа белково - полисахаридных и липополисахаридных антигенов: термостабильный соматический О-антиген и

термолабильный капсульный V,W антигены. С W-антигеном связывают вирулентность бактерий. Продуцирует факторы

патогенности: фибринолизин, плазмокоагулазу, эндотоксин, экзотоксин, капсулу, V,W антигены.

Резистентность: чувствителен к антибиотикам (особенно стрептомицин), нестоек к окружающей среде при высокой

температуре.

Патогенные свойства.

Обладает патогенным потенциалом, подавляет функции фагоцитарной системы, подавляет окислительный взрыв в фагоцитах и

беспрепятственно в них размножается. Факторы патогенности контролируются плазмидами трех классов. В патогенезе

выделяют три основных стадии - лимфогенного заноса, бактеремии, генерализованной септицемии. Имеют адгезины и

инвазины, низкомолекулярные протеины (ингибируют бактерицидные факторы), энтеротоксин. Часть факторов контролируется

плазмидами вирулентности.

Клинические особенности: Инкубационный период – несколько часов до 8 сут. Различают локальные – кожно-бубонная,

бубонная; внешне-диссеминированные – первично-легочная, вторично-легочная и кишечная; генерализованная – первичносептическая, вторично-септическая формы чумы. Региональная лимфоаденопатия, энтероколиты, реактивные артриты,

спондилит, лихорадка.

Эпидемиология: Чума - классический природноочаговый зооноз диких животных. Основные носители в природе - сурки,

суслики, в городских условиях - крысы. В передаче возбудителя - блохи животных, способные заражать человека.

Иммунитет: клеточно-гуморальный, ограничен по длительности и напряженности.

Микробиологическая диагностика:

Бактериоскопическое исследование. Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по Граму и водным раствором

метиленового синего. Бактерии чумы представляют собой грамотрицательные палочки овоидной формы Бактериологическое

исследование.Исследуемый материал засевают на чашки с питательным агаром. Посевы инкубируют при 25С. Первичное

изучение посевов производят через 10ч. К этому сроку появляются колонии, которые образованы вирулентными R-формами.

Мало- и авирулентные бактерии формируют S-формы колоний. Идентификацию чистой культуры проводят по морфологии бактериальных клеток, характеру роста, антигенным и биохимическим свойствам, чувствительности к специфическому фагу и

биопробе.

На бульоне бактерии образуют пленку; ферментируют многие сахара до кислоты, индола не образуют, желатин не разжижают.

Содержат групповой термостабильный соматический антиген и специфический термолабильный капсульный антиген.

Биопроба.Проводится для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой. Наиболее

чувствительными лабораторными животными являются морские свинки, которым материал вводят подкожно.

Внутрибрюшинно материал вводят в том случае, если он не загрязнен другими бактериями. После гибели животных отмечают

патологические изменения органов и проводят бактериологическое исследование

Экспресс-методы лабораторной диагностики:

1.Иммунофлюоресцентный метод позволяет обнаружить присутствие возбудителя как в патологическом материале, так и в объектах окружающей среды (вода, воздух), а также в пищевых продуктах и эктопаразитах. С этой целью используют люминесцентную видоспецифическую противочумную сыворотку, люминесцентные противокапсульную и противосоматическую

сыворотку.

2.РПГА - для обнаружения антигенов бактерий в материале с помощью стандартной противочумной сыворотки, антитела

которой нагружены на эритроциты.

Лечение: антибиотики –стрептомицин, препараты тетрациклинового ряда.

Профилактика: специфическая профилактика - живая ослабленная чумная вакцина EV. Имеется сухая таблетированная вакцина

для перорального применения. Для оценки иммунитета к чуме (естественного постинфекционного и вакцинального) может

применяться внутрикожная аллергическая проба с пестином.

Чумной бактериофаг – при идентификации Y.pestis.

Чумная сухая вакцина – высушенная живая культура Y.pestis вакцинного штамма EV, используется для профилактики чумы.

Кишечный иерсиниоз — острая инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением ЖКТ, тенденцией к генерализации с различных органов и систем. Возбудитель кишечного иерсиниоза Yersiniaenterocolitica.

Таксономия.Y.enterocolitica относится к отделу Gracilicutes, семейству Enterobacteriaceae, роду Yersinia.

Морфологические и тинкториальные свойства. Возбудитель полиморфен: он может иметь форму либо палочки с закругленными концами, либо овоидную с биполярным окрашиванием. Спор не имеет, иногда образует капсулу. Перитрих есть. Некоторые штаммы имеют пили. Грамотрицателен.

Культуральные свойства.Y.enterocolitica — факультативный анаэроб. Наиб. благоприятная темп. 25С. Возбудитель неприхотлив и растет на простых питательных средах.

Биохимическая активность. Биохимическая активность возбудителя высокая. Внутри вида по спектру б/х активности: индолообразованию, утилизации эскулина, реакции Фогеса – Проскауэра подразделяются на 5 хемоваров. Основные б/х признаки: расщепление мочевины, ферментация сахарозы, отсутствие ферментации рамнозы, продукция орнитиндекарбоксилазы.

Антигенная структура. О- и Н-антигены, у некоторых штаммов обнаружен К-антиген. По 0-антигену различают более 30 серогрупп, из которых от больных чаще всего выделяют представителей серогрупп 03, 09, 05.

Факторы патогенности. Образует термостабильный эндотоксин. Некоторые штаммы выделяют вещество, соответствующее экзотоксину и обладающее энтеро- и цитотоксическим действием. У иерсиний обнаружены также инвазивный белок и белки, препятствующие фагоцитозу. Адгезивная активность иерсиний связана с пилями и белками наружной мембраны.

Резистентность. Чувствителен к высокой температуре, солнечным лучам, дезинфицирующим веществам, но очень устойчив к действию низких температур: хорошо переносит температуру -20 °С.

Эпидемиология. Источники болезни для человека - крысы, мыши, животные и птицы,. Механизм заражения иерсиниозом фекально-оральный, основным путем передачи является алиментарный: болезнь может возникнуть при употреблении фруктов, овощей, молока, мяса. Но возможны также контактный (при контакте людей с больными животными) и водный пути передачи.

Патогенез. Возбудитель попадает в организм через рот, в нижних отделах тонкой кишки прикрепляется к эпителию слизистой оболочки, внедряется в клетки эпителия, вызывая воспаление. Под действием токсинов усиливается перистальтика кишечника и возникает диарея. Иногда в патологический процесс вовлекается аппендикс, развивается аппендицит. Незавершенный фагоцитоз способствует генерализации процесса. У людей со сниженным иммунитетом могут развиться сепсис с образованием вторичных гнойных очагов в мозге, печени и селезенке.

Клиника. Различают гастроэнтероколитическую, аппендикулярную и септическую формы. Инкубационный период составляет от 1 до 4 дней. Болезнь начинается остро с повышения температуры тела до 39С, общей интоксикации, рвоты, болей в животе, поноса. Течение продолжительное.

Микробиологическая диагностика. Используют бактериологический и серологический методы исследования. Цель бактериологического метода являются идентификация возбудителя, определение антибиотикограммы, внутривидовая идентификация (установление серовара, биохимического варианта, фаговара).Материалом для бактериологического метода исследования служат испражнения, ликвор, кровь, моча, иногда червеобразный отросток. Материал для исследования помешают в фосфатный буфер и подвергают холодовому обогащению. Серологическая диагностика проводится постановкой РНГА, с диагностическим титром 1:160. Важное диагностическое значение имеет наблюдение за нарастанием титра антител в динамике.

Лечение. Этиотропная антибиотикотерапия.

БИЛЕТ 44

1. 
   Вирус бешенства, характеристика вируса, внутриклеточные включения, патогенез заболевания. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика.
   

Таксономия: РНК-содержащий вирус, семейство Rhabdoviride, род Lyssavirus.

Морфология и антигенные свойства. Вирион имеет форму пули, состоит из сердцевины (РНП(рибонуклеопротеин) спирального типа и матриксного белка), окруженной липопротеиновой оболочкой с гликопротеиновыми шипами. Гликопротеин G отвечает за адсорбцию и внедрение вируса в клетку, обладает антигенными (типоспецифический антиген) и иммуногенными свойствами. Антитела к нему нейтрализуют вирус и выявляются в РН(рекция нейтрализации). РНП состоит из геномной однонитевой линейной минус-РНК и белков: N-белка, L-белка и NS-белка. РНП является группоспецифическим антигеном; выявляется в РСК, РИФ, РП. 92 Различают два вируса бешенства:дикий вирус, циркулирующий среди животных, патогенный для человека; фиксированный – не патогенный для человека.

Культивирование.Вирус культивируют путем внутримозгового заражения лабораторных животных (мышей, крыс) и в культуре клеток: фибробластов человека, куриного эмбриона. В нейронах головного мозга зараженных животных образуются цитоплазматические включения, содержащие антигены вируса (тела Бабеша-Негри – эозинофильные включения).

Резистентность:Вирус бешенства неустойчив: быстро погибает под действием солнечных и УФ-лучей, а также при нагревании до 60С. Чувствителен к дезинфицирующим веществам, жирорастворителям, щелочам и протеолитическим ферментам.

Эпидемиология. Источниками инфекции в природных очагах являются волки, грызуны. Вирус бешенства накапливается в слюнных железах больного животного и выделяется со слюной. Животное заразно в последние дни инкубационного периода (за 2—10 дней до клинических проявлений болезни). Механизм передачи возбудителя — контактный при укусах. Иногда заболевание развивается при употреблении мяса больных животных или при трансплантации инфицированных тканей (роговицы глаза). У собаки после инкубационного периода (14дн.) появляются возбуждение, обильное слюнотечение, рвота, водобоязнь. Она грызет место укуса, бросается на людей, животных. Через 1—3 дня наступают паралич и смерть животного.

Патогенез и клиника.Вирус, попав со слюной больного животного в поврежденные наружные покровы, реплицируется и персистирует в месте внедрения. Затем возбудитель распространяется по аксонам периферических нервов, достигает клеток головного и спинного мозга, где размножается. Клетки претерпевают дистрофические, воспалительные и дегенеративные изменения. Размножившийся вирус попадает из мозга по центробежным нейронам в различные ткани, в том числе в слюнные железы. Инкубационный период у человека при бешенстве — от 10 дней до 3 месяцев. В начале заболевания появляются недомогание, страх, беспокойство, бессонница, затем развиваются рефлекторная возбудимость, спазматические сокращения мышц глотки и гортани.

Иммунитет:Человек относительно устойчив к бешенству. Постинфекционный иммунитет не изучен, так как больной обычно погибает. Введение людям, укушенным бешеным животным, инактивированной антирабической вакцины вызывает выработку антител, интерферонов и активацию клеточного иммунитета.

Микробиологическая диагностика: Постмортальная диагностика включает обнаружение телец Бабеша—Негри в мазкахотпечатках или срезах из ткани мозга, а также выделение вируса из мозга и подчелюстных слюнных желез. Тельца Бабеша— Негри выявляют методами окраски по Романовскому—Гимзе. Вирусные антигены в клетках обнаруживают с помощью РИФ. Выделяют вирус из патологического материала путем биопробы на мышах: заражают интрацеребрально. Идентификацию вирусов проводят с помощью ИФА, а также в РН на мышах, используя для нейтрализации вируса антирабический иммуноглобулин. Прижизненная диагностика основана на исследовании: отпечатков роговицы, биоптатов кожи с помощью РИФ; выделении вируса из слюны, цереброспинальной и слезной жидкости путем интрацеребрального инфицирования мышей. Возможно определение антител у больных с помощью РСК, ИФА.

Лечение.Симптоматическое; эффективное лечение отсутствует.

Профилактика.Выявление, уничтожение животных. Иммунизация антирабической вакциной собак. Специфическую профилактику проводят антирабической вакциной и антирабической сывороткой или иммуноглобулином. Инактивированная УФ- или гамма лучами культуральная вакцина. С лечебно–профилактической целью иммунизируют людей; формируется активный иммунитет

2. 
   )Основные принципы и методы культивирования бактерий. Питательные среды и их классификация. Колонии у различных видов бактерий, культуральные свойства.
   

Культуральные свойства микроорганизмов – характер роста на искусственных питательных средах. На жидких средах микробы могут расти диффузно, пристеночно, придонно, поверхностно или формировать пленку. На плотных средах микроорганизмы образуют колонии.

Исключение составляют микробы рода Proteus, которые, являясь перитрихами, не формируют колонии на плотной питательной среде, а демонстрируют «ползучий» рост («феномен роения»)

Методы культивирования микроорганизмов.

При выращивании бактерий применяют стационарный способ, способ глубинного

культивирования с аэрацией и метод проточных питательных сред.

Стационарный способ — наиболее часто используемый в лабораторной практике. Состав сред не пополняется субстратом, не проводится дополнительная аэрация ( усиление снабжения микробов кислородом ) Микроорганизмы развиваются в «замкнутой среде», проходя все стадии развития, завершающиеся гибелью клеток при истощении питательной среды.

I ЛАГ-фаза, II ЛОГ-фаза,III Стационарная фаза,IV Фаза гибели

Способ глубинного культивирования применяют при промышленном выращивании бактериальной биомассы, для чего используют специальные котлы-реакторы. Они снабжены системами поддержания температуры, подачи в бульон различных питательных веществ, перемешивания биомассы и постоянной подачи кислорода. Создание аэробных условий по всей толще среды способствует протеканию энергетических процессов по аэробному пути, что способствует максимальной утилизации энергетического потенциала глюкозы и, следовательно, максимальному выходу биомассы.

Метод проточных сред (промышленный способ культивирования) позволяет постоянно поддерживать бактериальную культуру в экспоненциальной фазе роста, что достигают постоянным внесением питательных веществ и удалением определённого числа бактериальных клеток.

Пребывание бактерий в экспоненциальной стадии роста обеспечивает максимальный выход различных БАВ (витамины, антибиотики и др.)

Культвирование аэробов.

Посевы аэробных бактерий культивируют в простых термостатах. Некоторые факультативно анаэробные виды также можно культивировать при атмосферном воздухе, но более оптимально помещение посевов в термостаты с дозированной подачей кислорода.

Культивирование анаэробов.

Посевы анаэробных бактерий в жидких средах заливают вазелиновым или другим маслом. При использовании плотных сред посевы культивируют в специальных устройствах — анаэростатах(откуда откачивают воздух) либо заливают посевы тонким слоем агара. Анаэробные условия можно создать химическим путём, поместив посевы в эксикаторы, на дно которых заливают щелочной

раствор пирогаллола, поглощающего кислород. Иногда посевы помещают в эксикаторы, куда вносят горящую свечу; после её выгорания в атмосфере снижается содержание кислорода и повышается содержание С02.

По температурному оптимуму роста выделяют три основные группы микроорганизмов.

1.Психрофилы- растут при температурах ниже +20 градусов Цельсия.

2.Мезофилы- растут в диапозоне температур от 20 до 45 градусов (часто оптимум- при 37 градусах С).

3.Термофилы- растут при температурах выше плюс 45 градусов.

Питательные среды для культивирования бактерий.

Питательные среды необходимы для получения чистых культур микроорганизмов, изучения особенностей их морфологии и физиологии, а также для сохранения микроорганизмов в виде чистых культур в лабораторных и производственных условиях.

Питательные среды должны отвечать следующим требованиям:

1.Должны содержать источники органогенов (азота, углерода, кислорода, водорода), факторы роста (аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания, витамины, липиды, железопорфирины и пр.) и микроэлементы (калий, натрий, магний, кальций, сера, фосфор, железо,марганец, медь и пр.);

2.Должны быть изотоничны - содержать набор солей для поддержания осмотическогодавления;

3.Должны иметь оптимальный показатель рН (для большинства бактерий 7,2-7,6);

4.Должны иметь оптимальный окислительно-восстановительный (редокс) потенциал - высокий для аэробов, низкий для анаэробов;

5.Большинство сред должны быть прозрачны (чтобы был виден рост бактерий);

6.Должны быть стерильны.

Питательные среды готовят на основе мясных отваров (причем, используется только мякоть – без жира, костей и сухожилий), пептонов (продуктов гидролиза белков – смесь олиго- полипептидов и до 30% аминокислот), полученных промышленным путем гидролизатов из рыбы и мяса (в виде сухих полуфабрикатов или паст)

Для придания плотности питательным средам в них добавляют агар-агар (полисахариды, полученные из морских водорослей). Существуют готовые сухие среды определенного состава.

Классификация сред.

По происхождению среды подразделяют на естественные (природные или натуральные), искусственные и синтетические.

Естественные среды могут состоять из компонентов животного (например, кровь, сыворотка, молоко) или растительного (например, кусочки овощей и фруктов) происхождения.

Искусственные среды изготовлены по определённым рецептам из различных настоев или отваров животного или растительного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ.

Синтетические среды – содержат определённые химические соединения в точно указанных концентрациях.

По консистенцииции среды бывают жидкие(бульоны) полужидкие(менее 1% агара) , плотные(2%агар), сыпучие(для длительного хранения культур), сухие.

По составу среды делят на простые: 1%-ная пептонная вода, мясопептонный бульон/агар, бульон/агар Хоттингера; и сложные: сахарный бульон/агар, сывороточный бульон/агар, кровяной агар, желчный бульон, желточно-солевой агар и пр.

По назначению среды подразделяют на основные – на которых культивируют большинство микроорганизмов (мясо-пептонный агар, мясо-пептонный бульон и пр.), и специальные –используемые для различных целей; среди них выделяют:

элективные – среды, на которых растут определенные группы или виды микроорганизмов в результате подавления сопутствующей микрофлоры (солевой агар для стафилококков): содержат различные ингибиторы роста микробов (соли желчных кислот, тетратионат Na⁺, теллурит K⁺; антибиотики, фуксин, генциановый фиолетовый, бриллиантовый зеленый и др.), имеют иныепоказатели рН, особый состав питательных веществ в среде и др.

среды обогащения – используются для накопления «прихотливых» микроорганизмов или микроорганизмов, присутствующих в патологическом материале в небольших количествах сывороточный бульон или свернутая сыворотка для дифтерийной палочки)

дифференциально-диагностические – самая большая группа сред; используются для выявления определенных свойств микроорганизмов с целью идентификации. В состав этих сред, кроме питательных веществ, обычно включают субстрат, по отношению к которому дифференцируются бактерии, и индикатор. Если микроб ферментирует субстрат, входящий в состав среды, то сдвигается рН среды, и изменяется цвет индикатора (среда Эндо с лактозой для выявления лактозоположительных бактерий, среды Гисса с углеводами для выявления сахаролитических свойств бактерий и пр.)

консервирующие (среды для хранения), транспортные – среды, используемые для транспортировки патологического материала, содержащего «прихотливые» микроорганизмы; для кратковременного или долгосрочного хранения чистых культур микроорганизмов.

селективные – среды, используемые для выявления среди бактерий одного вида особей с измененными свойствами (устойчивость к антибиотикам, способность утилизировать субстрат); Т.е. в этой среде созданы условия для выращивания одного вида микробов.

эти среды содержат компонент, в отношении которого выявляются изменения, и в случае с субстратами – индикатор, позволяющий обнаружить колонии изменившихся бактерий.

Большинство питательных сред специального назначения обладают свойствами как элективными, так и дифференциально-диагностическими:

среда Плоскирева содержит соли желчных кислот, бриллиантовый зеленый – как факторы, подавляющие рост кишечной палочки, и тем самым способствующие росту сальмонелл и шигелл; а также лактозу и индикатор, позволяющие отличить шигеллы и сальмонеллы (лактозоотрицательные) от колоний кишечной палочки (лактозоположительной);

желточно-солевой агар – являясь элективной средой для стафилококков (по причине повышенного содержания хлорида натрия), одновременно позволяет выявить у них лецитиназную активность – способность расщеплять лецитин, входящий в среду в составе яичного желтка

3. 
   )Клеточный иммунный ответ в антиинфекционной защите. Способы его выявления. Аллергический метод диагностики.
   

В формировании иммунного ответа включаются все звенья иммунной системы- системы макрофагов, Т- и В- лимфоцитов, комплемента, интерферонов и главная система гистосовместимости.

В кратком виде можно выделить следующие этапы.

1. Поглощение Аг макрофагом.

2. Представление Аг макрофагом Т- хелперам.

3. Узнавание Аг Т- хелперами и их активация.

4. Узнавание Аг и активация В- лимфоцитов.

5. Дифференциация В- лимфоцитов в плазматические клетки, синтез антител.

6.Аг+Ат, активация систем комплемента и макрофагов, интерферонов.

7. Разрушение инфицированных чужеродными Аг клеток Т- киллерами.

8. Индукция Т- и В- клеток иммунной памяти, способных специфически распознавать Аг и … участвовать во вторичном иммунном ответе ( антигенстимулированные лимфоциты).

Аллергический метод.Основан на выявлении сенсибилизированого организма с помощью аллерг. проб на аллергены (туберкулин, бруцеллин, тулярин, антраксин, грибковые). Кож-ные пробы (in vivo) – Манту (тубик), Бюрне (бруцеллез), in vitro, р-ция бласт-трансформации, р-ция тормож. и миграции лейкоцитов.

Клеточный иммунный ответ – накопление цитотоксических Т-лимфоцитов (Т-киллеров), Т-лимфоцитов гиперчувствительности замедленного типа (Т-гзт): уничтожение пораженной возбудителем клетки (Т-киллеры), привлечение фагоцитов в патологический очаг (Т-гзт).

Выявляется в аллергическом методе диагностики: туберкулиновая проба Манту (при диагностике туберкулеза).

При многих инфекционных заболеваниях развивается состояние повышенной чувствительности к повторному введению возбудителя или продуктов его жизнедеятельности - которое называется инфекционной аллергией.

Для выявления инфекционной аллергии применяют аллергические диагностические пробы, для чего строго внутрикожно вводят соответствующий аллерген.

Наличие гиперемии и инфильтрата указывает на положительный результат реакции, т. е. на наличие инфекционной аллергии.

Аллергический метод диагностики инфекций

• Выявление клеточного иммунного ответа -

гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)

* Введение внутрикожно Аг бактерий

* Через 48 – 72 часа появляется воспаление

* Измеряют величину покраснения и папулы

Аг →Тхелперы выделяют → лимфокины → Т киллеры →Тцтл- активация фагоцитоза →воспаление.

В реакциях ГЗТ участвуют: Т-хелперы (стимулируют образование Т-эффекторов

через ИЛ-2) → Т-эффекторы (продуцируют лимфокины - хемоаттрактанты и привлекают

макрофаги в очаг воспаления) → макрофаги (продуцируют медиаторы-монокины) →

мононуклеарный инфильтрат на месте введения аллергена → величина инфильтрата

зависит от степени сенсибилизации организма и достигает максимума через 24-48 ч.

Аллергические диагностические пробы позволяют диагностировать туберкулез

(реакция Манту), бруцеллез (проба Бюрне), туляремию (проба с тулярином), сибирскую

язву (проба с антраксином), мягкий шанкр (реакция Дюкрея), проказу (реакция Мицуды),

а последняя - даже дифференцировать туберкулоидную (лепромин-положительную)

форму от лепроматозной (лепромин-отрицательной).

Положительная кожная аллергическая проба указывает, что введение аллергена

при постановке пробы является повторным, т. е. индивидуум в прошлом имел контакт с

микробным агентом. Здесь сказывается основной недостаток диагностической ценности

кожно-аллергических проб, так как они могут быть положительными не только у

инфицированных, но и у привитых против этих болезней, а также у лиц, переболевших

много лет назад, в том числе и у носителей, т. е. положительный тест у здоровых лиц

указывает только на контакт с микробным антигеном

БИЛЕТ 45

1. 
   БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ