Экзаменационные вопросы по дисциплине Микробиология, вирусология
 Скачать 0.77 Mb.
|
|
Четвертая особенность характерна для ряда вирусных инфекций, таких как оспа, бешенство, герпес, корь, состоит в образовании внутриядерных или внутрицитоплазматических включений. Они имеют разную форму и величину. Одни из них являются базофильными включениями, такие как тельца Гварниери при оспе и тельца Бабеша-Негри при бешенстве и представляют собой внутриклеточные скопления вируса. Окрашиваются основными красителями и имеют диагностическое значение. 14. Формы вирусных инфекций: продуктивная и персистирующая. Формы персистенции (латентная, хроническая, медленная). Вирусоносительство. Продуктивная вирусная инфекция с образованием дочерних популяций и характерными клиническими проявлениями возможна лишь при наличии в заражённом организме чувствительных клеток, в которых осуществляется репродуктивный цикл возбудителя. Например, возбудитель полиомиелита может реплицировать только в клетках ЖКТ и ЦНС приматов и человека. Персистирующая вирусная инфекция возникает при таком взаимодействии между вирусом и заражённой клеткой, когда в последней продолжается выполнение собственных клеточных функций. Если заражённые клетки делятся, образуется инфицированный клон. Таким образом, увеличение числа заражённых клеток способствует увеличению общей популяции возбудителя в организме. Тем не менее персистирующие вирусные инфекции обычно нарушают функции клеток, что в конце концов приводит к клиническим проявлениям. У человека развитие персистирующих инфекций в определённой степени зависит от возраста. Например, внутриутробное заражение вирусом коревой краснухи или цитомегаловирусом (ЦМВ) приводит к ограниченному по времени персистированию возбудителя. Появление симптоматики связано с возможностью плода развивать иммунные реакции на инфекционный агент. Латентная инфекция — это скрытая инфекция, не сопровождающаяся выделением вирусов в окружающую среду. При латентных инфекциях вирус не всегда удается обнаружить либо в связи с его дефектным состоянием, либо в связи с персистенцией субвирусных компонентов, либо в связи с интеграцией клеточным геномом. При воздействии ряда активирующих инфекцию факторов может произойти активация вируса, и латентная инфекция может перейти в острую или хроническую. Латентные инфекции могут вызывать аденовирусы, вирусы герпеса, онкогенные вирусы, вирус СПИД и др. Хронической инфекцией называется длительно текущий патологический процесс, характеризующийся периодами ремиссий, перемежающимися с периодами обострения, когда вирус выделяется в окружающую среду. Примерами хронической инфекции являются герпетическая, аденовирусная инфекции, хроническая форма вирусных гепатитов и т. д. Медленные инфекции - это своеобразное взаимодействие определенных вирусов с организмом, характеризующееся длительным инкубационным периодом, тянущимся многие месяцы и даже годы, и последующим медленным, но неуклонным развитием симптомов заболевания, ведущим к тяжелому нарушению функций органов и летальному исходу. К медленным инфекциям относятся медленно прогрессирующие заболевания, в частности, заболевания ЦНС со спонгиоформными энцефалопатиями у человека - куру, болезнь Крейтцфельдта — Якоба (пресенильная деменция), а у животных - трансмиссивная энцефалопатия норок и скрепи у овец. К медленным инфекциям относят также подострый склерозирующий панэнцефалит, который вызывается вирусом кори, рассеянный склероз, амиотрофический боковой склероз и некоторые другие заболевания человека и животных. При некоторых медленных инфекциях существенную роль играют генетические механизмы (скрепи, куру, амиотрофический боковой склероз), при других - иммунопатологические механизмы (подострый склерозирующий панэнцефалит, алеутская болезнь норок, лимфоцитарный хориоменингит). Вирусоносительство - длительное пребывание вируса в организме человека при отсутствии признаков заболевания или при минимальных его проявлениях. Т.е. вирус в организме присутствует, размножается или, по крайней мере, воспроизводятся отдельные вирусные компоненты, проникая в те или иные клетки, паразитируя на них, но это не приводит к заметному разрушению этих клеток, изменению их функциональности. Вирусоносительство играет существенную роль в распространении инфекций, поскольку длительная изоляция вирусоносителей практически невозможна. 15. Источники, входные ворота, факторы и пути передачи инфекционных болезней: аэрогенный (воздушно-капельный и воздушно-пылевой), контактный (прямой и непрямой, контактно-бытовой), алиментарный, вертикальный, парентеральный, трансмиссивный. Примеры.
16. Биологический метод микробиологической диагностики, назначение и принцип метода. Заражение экспериментальных животных может производиться в целях: идентификации микроорганизмов по вирулентности; выделения чистой культуры возбудителя из различных материалов и ее идентификации; воспроизведения и изучения инфекционного процесса; испытания лечебного эффекта химиотерапевтических и иммунологических препаратов. получения иммунобиологических лечебно-профилактических и диагностических препаратов и др. В зависимости от цели исследования заражают различных животных (кроликов, морских свинок, белых мышей, белых крыс и др.) различными способами: накожно, внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутривенно, перорально, интраназально, внутритрахеально, интрацеребрально и внутрибрюшинно. Внутрибрюшинное заражение белых мышей с целью: идентификации выделенной чистой культуры S.aureus по вирулентности; установления формы инфекции по происхождению, локализации, длительности течениия, количеству возбудителя и др. План работы первого этапа: Суточную агаровую культуру S.aureus проверяют на чистоту (готовят мазок и окрашивают по Граму). Стерильным физ. раствором смывают культуру и готовят микробную взвесь соответствующей оптическому стандарту мутности (1мл – 1 млрд.мкр.тел) Взвесь микробов (0,5 мл) набирают в шприц. Заражают внутрибрюшинно белую мышь. Берут мышь левой рукой за хвост, фиксируют её в растянутом состоянии брюшком вверх, головой вниз, чтобы кишечник переместился к диафрагме. В левой нижней трети живота делают прокол кожи под острым углом, затем устанавливают шприц под прямым углом, толчкообразным движением прокалывают брюшину и вводят содержимое шприца. Зараженных животных маркируют и отправляют в лабораторию. Инструменты до и после заражения стерилизуют кипячением. Второй этап. Вскрытие трупа с целью обнаружения возбудителя и идентификации путем микроскопического исследования и выделения чистой культуры. План исследования: Мышь фиксируют брюшком вверх в специальной подставке. Шерсть и кожу обрабатывают спиртом. 1. Макроскопическое исследование. Тщательно осматривают наружные покровы. Затем делают разрез кожи по прямой линии от нижней челюсти до лобка и боковые разрезы к лапкам. Отсепаровывают кожу в обе стороны от разреза. Отметить состояние подкожной клетчатки и лимфатических узлов. Обращают внимание на внешний вид лёгких, сердца. Осмотреть органы брюшной полости, характер экссудата, величину, цвет и консистенцию печени и селезенки. 2. Микроскопическое исследование. Приготовить следующие мазки и окрасить их методом Грама: а) мазок из крови сердца; б) мазок-отпечаток легкого; в) мазок из асцитической жидкости (экссудата); г) мазок- отпечаток печени; д) мазок- отпечаток селезенки. При микроскопии отмечают присутствие микроба-возбудителя в различных органах и тканях и по результатам исследования мазков оформить предварительное заключение. 3.Бактериалогические исследование. Параллельно с приготовлением мазков сделать посевы из тех же органов на 5 пробирок с МПБ: а) для посева крови из сердца участок его поверхности прижигают раскалённым скальпелем и через прижжённый участок вводят капилляр стерильной пастеровской пипетки в полость сердца. Затем каплю крови из пипетки выдувают в пробирку с МПБ и на предметное стекло для приготовления мазка (мазок фиксируют спиртом в течение 3-5 минут); б) из ткани лёгкого делают посев кусочка ткани в МПБ и приготовляют мазок – отпечаток; в) разрезают брюшную стенку ножницами от диафрагмы до лобка. Обращают внимание на наличие экссудата, который собирают пастеровской пипеткой и засевают в МПБ. Каплю экссудата наносят на предметное стекло для окрашивания. Для приготовления мазков-отпечатков вырезают из печени, селезенки небольшие кусочки ткани, берут их пинцетом и прикасаются к предметному стеклу поверхностью разреза. Мазки-отпечатки фиксируют термическим способом; г) результат посевов учитывают на следующий день после инкубации в термостате. Труп животного после вскрытия подлежит уничтожению; д) учесть результаты посевов на питательных средах и оформить окончательное заключение 17.Методы выявления факторов вирулентности (адгезивности, капсулообразования, антигенов-ингибиторов фагоцитоза, токсигенности, α-, β-, γ-энтеро -и тиолзависимых гемолизинов, ферментов агрессии: плазмокоагулазы, лизоцима, гиалуронидазы, лецитовителлазы и др.). Адгезивность. Адгезины - поверхностные структуры микроорганизмов (пили, поверхностные белки, тейховые кислоты), способствующие прикреплению возбудителя к клеткам организма и являются обязательными, специфическими факторами, реализующими патогенность микроба на начальном этапе развития инфекционного процесса. Адгезивность оценивается по способности бактерий прилипать к эритроцитам. Эритроциты крови 1 группы человека смешивают на предметном стекле с чистой исследуемой культурой и инкубируют 30 минут при 37оС. Делают мазок и подсчитывают индекс адгезии (соотношение количества микробов, адгезированных на эритроцитах к количеству эритроцитов, участвующих в адгезии). Капсулообразование. Капсула у многих бактерий маскирует микробы от фагоцитов или подавляет фагоцитоз. Для определения капсулообразования применяются следующие методы: бактериоскопический метод. Мазки готовят из патологического материала (мокрота, гной, спинномозговая жидкость) и окрашивают по Граму. Например, S. рneumonia - грамположительные диплококки, окруженные неокрашенной капсулой. Можно покрасить по Бурри-Гинсу. Капсулообразующими являются также C.perfringens, К.рneumonia, B. anthracis, Y. pestis и др; Обнаружение капсул по методу Бурри-Гинса 1. Смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши и при помощи стекла со шлифовальным краем сделать мазок таким же образом, как мазок из крови, высушить и фиксировать. 2. На мазок нанести водный раствор фуксина на 1-2 мн. 3. Промыть водой, высушить на воздухе и микроскопировать. Бактерии окрашиваются в красный цвет, а неокрашенные капсулы контрастно выделяются на черно- розовом фоне биологический метод. Заражение наиболее чувствительных животных, например, для диагностики сибирской язвы заражают морских свинок, белых мышей или кроликов. После гибели животных, делают вскрытие, готовят мазки-отпечатки из органов. Неокрашенная капсула окружает грамположительных, крупных палочек или стрептобацилл; меченные серологические реакции (РИФ, ИФА и РИА). Например, для выявления капсульных палочек B.anthracis в экссудате, мазок из экссудата обрабатывают капсульной сибиреязвенной антисывороткой и меченной антииммуноглобулиновой сывороткой. Учет реакции проводится по свечению иммунного комплекса (АГ-АТ-меченное АТ) при люменесцетной микроскопии. Антигенов-ингибиторов фагоцитоза определяют иммунологическим методом с применением моноклониальных антител против конкретных антигенов бактерий (ИФА, РИФ). Например, принципиальная схема ИФА для выявления А-белка S.aureus в клиническом материале (гной, мокрота и др.) следующая. Моноклональные антитела против А-белка S.aureus фиксируется на твердой фазе. К нему добавляют исследуемый материал с предполагаемом антигеном (А-белок). После инкубации и промывки на фиксированных антителах остаются специфические к ним антигены, если таковые имелись в исследуемом материале. Для обнаружения комплекса АГ-АТ к нему добавляют антииммуноглобулиновую сыворотку (антитела против антител), меченную ферментом (пероксидазой). После второй инкубации и промывки образовавшийся комплекс (АГ-АТ-меченное АТ) можно обнаружить, добавив субстрат к ферменту. Индикатором реакции является способность ферментов давать цветные реакции при взаимодействии с соответствующими субстратами. Учет реакции проводится определением степени мутности реакции на ИФА-анализаторе (спектрофотометре). Методы идентификации бактерий по токсигенности (по способности синтезировать экзотоксин). 1. Биологический метод. Испытуемые культуры или токсины в определенных дозах вводят лабораторным животным с последующей регистрацией их гибели и расчетом летальных доз. 2. Иммунологические методы с применением стандартных антитоксических антител: реакция нейтрализации токсина, ИФА, РИА и РИФ; РН токсина антитоксической сывороткой на животных основан на способности специфических антител – антитоксинов подавлять биологическую активность бактериальных экзотоксинов. Компоненты: 1) исследуемый материал (экзотоксин С.рerfringens); 2) диагностические сыворотки с антитоксинами против С.рerfringens, C. novyi, C. septicum, C. histolyticum и др.; 3) мыши – индикатор реакции. Диагностические сыворотки получают путем гипериммунизации кроликов анатоксинами - инактивированными эзотоксинами (формальдегидом), но сохранившими свои иммуногенные свойства, то есть способность индуцировать выроботку антител. Принцип метода. К диагностическим видоспецифическим антитоксическим сывороткам добавляют исследуемого токсина, выдерживают в течение определенного времени и вводят внутрикожно животным. Учет реакции проводится по живой мышке. С. рerfringensпродуцирует шесть типов экзотоксина, различающихся по антигенной структуре (А, В, С, D, Е, F). Идентифицируют их с помощью диагностических типоспецифических сывороток. 3. ПЦР - выявление гена плазмид, детерминирующего синтез экзотоксина. Экзотоксины синтезируются в основном грамположительными (S.aureus, S.pyogenes, C.perfringens,C.tetani,C.botulinum, C diphtheriae и др.), также грамотрицательными бактериями (E.coli, V. сholerae и др.) |