I. общая часть (бактериология, микология, вирусология, микробная экология, санитарная микробиология)
 Скачать 5.14 Mb.
|
10. Микробные ферменты, их использование в культуральной и биохимической идентификации бактерий.По месту действия: - экзо – вне кл. – гидролазы б, л, ув - эндо – внутри кл. – овр ферменты - транспортные – в цпм и цитоплазматическом пространстве -пермиазы По механизму: - оксиредуктазы - трансферазы - гидролазы (наиболее важные) - лиазы - лигазы - изомеразы По постоянству действия: - конститутивные – ф., клеточного метаболизма - индуцибельные – только при наличии субстрата – адаптивные – ф., расщепляющие АБ По природе субстрата: - сахаролитические (наиболее важны для идентификации – образование кислых продуктов) - протеолитические (с образованием газа, H2S, индола, аммиака) - липолитические (помутнение среды) – лецитиназа - антиоксидантные Ферменты агрессии (патогенности) Свойственны только микроорганизмам экзоферменты для преодоления естественных защитных барьеров, факторы патогенности классификация: 1) повреждающие клетки и ткани: гемолизин (гамма – не дает гемолиз; бета – полный гемолиз; альфа – неполный гемолиз до метHb) – стафилококки, стрептококки лейкоцидин лецитиназа липиза (особенно тромбов) ДНК-аза 2) распространения и инвазии (генерализации инфекционного процессса): плазмокоагулаза (делает из плазмы кровяной чехол) – стафилококки протеаза фибринолизин – стафилококк гиалуронидаза (расщепляет межклеточное вещество) нейраминидаза (силаловые, нейраминовые кислоты) 3) приводящие к образованию токсичных продуктов: уреаза (мочевина с образованием аммика) декарбоксилаза (кадаверин) 4) сопутствующие патогенности ! не делают ничего плохого, но если у Б. есть этот фермент, то есть и факторы патогенности фермент, расщепляющий манит Значение микробных ферментов в идентификации бактерий. Методы изучения ферментативной активности микробов. Наличие экзоферментов можно определить при помощи дифференциально-диагностических сред, поэтому для идентификации бактерий разработаны специальные тест-системы, состоящие из набора дифференциально-диагностических сред. Среда Гисса; трехсахарный агар; кровяной агар Для обнаружения газообразования в жидкие среды опускают поплавки или используют полужидкие среды с 0,5% агара. 11. Понятие о чистой культуре микроба, штамме, клоне. Методы выделения чистых культур аэробных бактерий.Чистая культура – совокупность микроорганизмов одного вида или варианта, полученная из одного образца и содержащаяся в определенном объеме среды (например, в пробирке). Выделение чистых культур бактерий необходимо для их идентификации. После идентификации и определения свойств чистая культура становится штаммом. Штамм – чистая культура микроорганизмов, выделенная из одного определенного источника (организма, окружающей среды). Другими словами, штамм — конкретный образец (изолят) данного вида. Разные штаммы одного и того же вида бактерий могут отличаться друг от друга по ряду свойств (например, по чувствительности к антибиотикам, способности к образованию токсинов, ферментов). Штаммы имеют различия по месту и времени выделения. При описании нового штамма один образец культуры в жизнеспособном состоянии должен быть сдан в официально признанную коллекцию культур. Клон – генетически однородная чистая культура микроорганизмов, полученная из одной материнской клетки. Методы выделения чистых культур аэробных бактерий 1. Методы механического разобщения основаны на разъединении микробов путем последовательного растирания исследуемого материала по поверхности агара. а) Метод Пастера – имеет историческое значение, предусматривает последовательное разведение исследуемого материала в жидкой питательной среде методом переката б) Метод Коха – метод пластинчатых разводок – основан на последовательном разведении исследуемого материала мясо-пептонным агаром с последующей разливкой пробирок с разведенным материалом в чашки Петри в) Метод Дригальского – при посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой, используют 2–3 чашки для последовательного посева шпателем. г) Посев петлей параллельными штрихами. 2. Биологические методы основаны на биологических свойствах возбудителей. а) Биологический – заражение высокочувствительных животных, где микробы быстро размножаются и накапливаются. б) Химический – основан на кислотоустойчивости микобактерий. Для освобождения материала от сопутствующей флоры, его обрабатывают раствором кислоты. Вырастут только туберкулезные палочки, так как кислотоподатливые микробы погибли под действием кислоты. в) Физический метод основан на устойчивости спор к нагреванию. Для выделения культуры спорообразующих бактерий из смеси материал прогревают при 80°С и засевают на питательную среду. Вырастут только споровые бактерии, так как споры их остались живыми и дали рост. г) Метод Щукевича – основан на высокой подвижности вульгарного протея, способного давать ползучий рост. Этапы выделения чистой культуры аэробных бактерий по методу Коха-Дригальского. 1) посев материала больного на МПА шпателем Дригальского на 3 чашки, постепенно снижая концентрацию микробов 2) изучение морфологических, культуральных свойств; пересев одной колонии на скошенный агар и помещение в термостат 3) изучение характера роста и проверка чистоты выделенной культуры 4) идентификация б/х и антигенных свойств |