I. общая часть (бактериология, микология, вирусология, микробная экология, санитарная микробиология)
 Скачать 5.14 Mb.
|
12. Выделение и культивирование строгих анаэробов и микроаэрофильных бактерий.Современные методы работы с анаэробами: Анаэростаты Анаэробные станции анаэробная станция Bactron – это изолированная система, обеспечивающая анаэробные условия на всех этапах исследования Анаэробный бокс   Среды для культивирования анаэробов: Сахарный МПБ, МПА, Китта-Тароцци (МПБ+глицерин+кусочки мяса), тиогликолиевая среда, сахарный кровяной агар Цейслера. Способы создания анаэробных условий: механические (высокий столбик пит.ср., вазелиновое масло) физические (анаэростат) химические (аппарат Аристовского, эксикатор) биологические (мет.Фортнера) Метод Цейсслера применяется для выделения чистых культур спорообразующих анаэробов. Для этого производят посев на среду Китт-Тароцци, прогревают 20 мин при 80 °C (для уничтожения вегетативной формы), заливают среду вазелиновым маслом и инкубируют 24 ч в термостате. Затем производят посев на сахарно-кровяной агар для получения чистых культур. После 24-часового культивирования интересующие колонии изучаются — их пересеивают на среду Китт-Тароцци (с последующим контролем чистоты выделенной культуры). Метод Фортнера — посевы производят на чашку Петри с утолщенным слоем среды, разделённым пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре. Одну половину засевают культуру аэробных бактерий, на другую — анаэробных. Края чашки заливают парафином и инкубируют в термостате. Первоначально наблюдают рост аэробной микрофлоры, а затем (после поглощения кислорода) — рост аэробной резко прекращается и начинается рост анаэробной. Метод Вейнберга используется для получения чистых культур облигатных анаэробов. Культуры, выращенные на среде Китта-Тароцци, переносят в сахарный бульон. Затем одноразовой пастеровской пипеткой материал переносят в узкие пробирки с сахарным мясо-пептонным агаром, погружая пипетку до дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлаждают, что позволяет фиксировать бактериальный материал в толще затвердевшего агара. Пробирки инкубируют в термостате, а затем изучают выросшие колонии. При обнаружении интересующей колонии на её месте делают распил, материал быстро отбирают и засеивают на среду Китта-Тароцци (с последующим контролем чистоты выделенной культуры). 13. Понятие об асептике, антисептике, стерилизации и дезинфекции. Асептические и дезинфицирующие вещества.Асептика – комплекс мер, направленных на предупреждение попадания возбудителя инфекции в рану, органы больного при операциях, лечебных и диагностических процедурах. Методы асептики применяют для борьбы с экзогенной инфекцией, источниками которой являются больные и бактерионосители. Антисептика – уменьшение числа патогенных микробов на коже и слизистых с целью снижения риска инфекционных заболеваний. Требования к антисептикам: выраженная антимикробная активность; не должны обладать раздражающим действием; не должны распространяться во внутренней среде Стерилизация – полное освобождение объекта от всех микроорганизмов. Дезинфекция — процедура, предусматривающая обработку загрязненного микробами предмета с целью их уничтожения до такой степени, чтобы они не смогли вызвать инфекцию при использовании данного предмета. споры и некоторые резистентные вирусы могут остаться в жизнеспособном состоянии. Химические вещества, применяемые для дезинфекции, относятся к следующим группам: 1) хлор и хлорсодержащие соединения; 2) йод, бром и их соединения; 3) перекисные соединения; 4) ПАВ; 5) альдегиды; 6) кислоты, надкислоты и некоторые их соли; 7) спирты; 8) фенолы, крезолы и их производные и др. Антисептические препараты: 1) неорганические соединения: галоиды, окислители, неорганические кислоты, щелочи, соли тяжелых металлов 2) органические соединения: спирты. Альдегиды, фенолы, нитрофураны. Красители, органические кислоты, ихтиол, нафталан, мазь Вишневского, бальзам Шостаковского, мыла, сульфанильамиды и др. 14. Действие физических факторов на микроорганизмы. Методы стерилизации.Температура: благоприятное действие оптимальной температуры используется при выращивании микроорганизмов с целью лабораторной диагностики, приготовления вакцин и других препаратов. Тормозящее действие низких температур используется при хранении продуктов и культур микроорганизмов в условиях холодильника. Низкая температура приостанавливает гнилостные и бродильные процессы. Механизм действия низких температур – затормаживание в клетке процессов метаболизма и переход в состояние анабиоза. Губительное действие высокой температуры (выше максимальной) используется при стерилизации. Механизм действия – денатурация белка (ферментов), повреждение рибосом, нарушение осмотического барьера. Излучения: Ионизирующее излучение обладает мощным проникающим действием и повреждает клеточный геном. Механизм повреждающего действия: ионизация макромолекул, что сопровождается развитием мутаций или гибелью клетки. При этом летальные дозы для микроорганизмов выше, чем для животных и растений. Механизм повреждающего действия УФ- лучей: образование димеров тимина в молекуле ДНК, что прекращает деление клеток и служит основной причиной их гибели. Ультразвук (звуковые волны 20 тыс. гц) обладает бактерицидным действием. Высушивание: Снижение влажности среды приводит к переходу клеток в состояние покоя, а затем и к гибели. Механизм губительного действия высушивания: обезвоживание цитоплазмы и денатурация белков. Высушивание из замороженного состояния под вакуумом – лиофилизация или лиофильная сушка. Ее используют для сохранения культур микроорганизмов, которые в таком состоянии годами (10-20 лет) не теряют жизнеспособности и не меняют свойств. Микроорганизмы находятся при этом в состоянии анабиоза.  |