I. общая часть (бактериология, микология, вирусология, микробная экология, санитарная микробиология)
 Скачать 5.14 Mb.
|
21. Учение о микробном антагонизме. Антибиотики, их классификация и получение.Антагонизм микробный — угнетение роста одного микроба другим. Является одной из форм взаимоотношений между микроорганизмами в ассоциациях. Антагонистические свойства присущи многим почвенным споровым и гнилостным бактериям, актиномицетам, грибам. Механизм антагонистического действия микробов может быть связан с различными причинами: образованием токсических продуктов метаболизма, антибиотиков. Антибиотики (= антимикробный препарат)– это вещества биологического происхождения, способные в малых концентрациях подавлять рост и размножение микроорганизмов или вызывать их гибель. Самая обширная группа лекарств. Основоположник – А. Флеминг, а в нашей стороне Ермольева. Определение ввел Ваксман (стрептомицин – от туберкулеза) Особенности АБ: Мишень – микроорганизмы Избирательность действия (иногда на целый вид) Со временем снижается эффект и активность (резистентность) Классификация: I. По происхождению: a. Из бактерий (грамицидин, полимиксины) b. Актиномицеты (тетрациклин, стрептомицин) c.Грибы (пенициллины) – основной поставщик, препараты резервы d. Животные (лизоцим) e. Растения (фитонциды) II. По способу получения: a. Естественные (пенициллин G) b. Полусинтетические (оксациллин) – внос модификации в природный АБ (улучшение его свойств) c. Синтетические (левомицетин) – применяют в наше время III. По ширине действия: a. Узкого: пенициллин – G+ коки; леворин – грибы b. Широкого: доксициклин – G+, кокки, G- IV По группе чувствительности микроорганизмов: a. Антибактериальные (пенициллин, тетрациклин) b. Противогрибковые (леворин) c. Противопротозойные (инстатин) V. По эффекту: a. Бактериостатические - тетрациклин b. Бактерицидные – цефалоспорины VI По механизму действия (мишени): a.Искусственный синтез пептидогликаны клеточной стенки b. Повреждающие ЦПМ c. Нарушение синтеза белка на рибосомах d. Нарушение синтеза НК (рифампицин) VII.По химическому строению: a.Бета-лактамные: i.Пенициллины (природные – бензилпенициллин и полусинтетические- оксациллин) ii Цефалоспорины 5 поколений iii.Монобактамы iv.Карбапенемы b.Аминоглкозиды – стрептомицин c.Макролиды – азитромицин d.Тетрациклины e.Гликопептиды – ванкомицин f.Другие группы: хлорамфеникол, левомицетин, рифампицин, линкомицин, полимиксины Получение: 1. Микробиологический синтез на основе плесени и лучистых грибов (природные пенициллины, гликозидные антибиотики, макролиды). 2. Химический синтез (левомицетин и его препараты). 3. Сочетание первого и второго способов (полусинтетические пенициллины и цефалоспорины, тетрациклины). Промышленное получение антибиотиков включает стадии: 1. Выбор высокопроизводительных штаммов продуцента (до 45 000 ЕД/мл) и питательных сред для него; 2. Процесс биосинтеза; 3. Выделение из культуральной жидкости и его очистка 22. Определение чувствительности микробов к антибиотикам. Понятие о минимальной ингибирующей концентрации (МИК) и терапевтической дозе.Скрининговые методы: - диско-диффузный метод • Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар или среду АГВ в чашке Петри. • Среда АГВ: сухой питательный рыбный бульон, агар-агар, натрий фосфат двузамещенный. Среду готовят из сухого порошка в соответствии с инструкцией. • На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чувствительности к антибиотикам. • Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов. Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувствительность микроорганизмов методом серийных разведений. • При зоне задержки роста до 15 мм культура расценивается как нечувствительная или низко чувствительная, 15 - 24 мм - средняя чувствительность, 25 мм и более высокочувствительная. - диспенсер – автоматический учет результатов • Это полуавтомат, предназначенный для укладывания на засеянный агар 8 стандартных дисков с АБ (даже одной рукой) – позволяет облегчить и ускорить процедуру • Оценка результатов: на относительно прозрачных средах применяют специальные линейки- лекала для определения зон задержки роста Количественные методы: МИК (=минимальная ингибирующая концентрация) – наименьшее количество АБ, подавляющая визуальный рост микробов ин витро МБК (= минимальная бактерицидная концентрация) – наименьшая концентрация АБ, вызывающая гибель 99,9% микробов ин витро Терапевтическая доза – доза, вызывающая минимальный терапевтический эффект. Выделяют также среднюю (вызывает эффект у большинства больных), разовую, суточную, предельную терапевтические дозы. - метод серийных разведений в жидкой среде / плотной среде / бульоне • Определение МИК • Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 106— 107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). • Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. • Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика. • Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по специальной готовой таблице, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, а также значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов. - Е-тест • Используют полоску, на которой изображен градиент концентраций АБ от максимальной к минимальной. В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской – определяется МИК  |