I. общая часть (бактериология, микология, вирусология, микробная экология, санитарная микробиология)
 Скачать 5.14 Mb.
|
29. Санитарно-бактериологическое исследование водных объектов: методы и критерии оценки (микробное число и индекс БГКП).Микрофлора делится на 2 группы: Автохтонная = собственная микрофлора: МО, которые постоянно живут и размножаются в воде Аллохтонная = заносная микрофлора: МО, которые попали в открытые водоемы из почвы, воздуха, организмом животных и человека и резко изменяет микробный биоценоз и санитарный режим Вода может распространять: холеру, брюшной тиф, паратиф, дизентерия, гепатит А, полиомиелит, лептоспироз, сибирская язва, туляремия, туберкулез, Ку-лихорадка, грибковые заболевания В зависимости от концентрации м.о. и стадии самоочищения воды различают 3 зоны: • 1.Полисапробные зоны-( зоны сильного загрязнения)- содержат большое количество органических веществ, но бедны кислородом. Количество м.о. в 1 мл достигает 1 миллиона микробных клеток и выше.Видовой состав ограничен анаэробами, грибами, актиномицетами, кишечными палочками. • 2.Мезосапробные зоны(зоны умеренного загрязнения)-преобладают окислительные и нитрификационные процессы.МЧ-сотни тысябактерий в 1мл. Видовой состав разнообразен. Преобладают нитрифицирующие и облигатно аэробные бактерии, а также представители родов Candida, Pseudomonas, Clostridium и др. • 3. Олигосапробные зоны(зоны чистой воды)- характеризуются закончившимися процессами самоочищения, небольшим содержанием органических соединений. Количество бактерий от 10 до 1000 микробных клеток в 1мл. Патогенные м.о. достаточно обильны в полисапробных зонах, постепенно отмирают в мезосапробных зонах и практически не обнаруживаются в олигосапробных зонах. Регулярно санитарно-микробиологическому надзору подвергают: - вода питьевая - вода плавательных бассейнов, лед медицинский и хозяйственный - сточные воды: хозяйственно-фекальные, промышленные, смешанные, талые и ливневые Питьевую воду исследуют по следующим микробиологическим показателям: • Общее микробное число (ОМЧ)-кол-во мезофильных бактерий в 1мл воды • Содержание бактерий группы кишечных палочек (БГКП). Определяют коли-титр и коли- индекс. - Коли-титр – это наименьшее количество воды, в котором обнаруживается одна бактерия группы кишечных палочек (БГКП) – для централизованного водоснабжения - Коли-индекс – количество БГПК в 1 л исследуемой воды – для открытых источников • Кол-во спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды • Число колифагов в 100мл воды • Число цист лямблий (в 50 л не должно быть) Определение микробного числа воды: Это число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных МО, способных образовывать на питательном агаре при 37 градусах в течение 24 ч колонии, видимые при двукратном увеличении Для взятия проб воды используют стерильную посуду. Перед взятием проб из водопровода кран протирают тампоном, смоченным спиртом, и обжигают, после чего 10-15 мин сливают застоявшуюся в трубах воду и только затем отбирают образец для исследования. Анализ проводят сразу после взятия проб. При необходимости транспортировки воду сохраняют при температуре 1-5° С и анализируют не позднее чем через 2-6 ч с момента ее забора. Водопроводную воду засевают в объеме 1 мл, Воду открытых водоемов - в объемах 1; 0,1 и 0,01 мл. Все пробы вносят в стерильные чашки Петри, после чего их заливают 10-12 мл расплавленного и остуженного до 45-50°С питательного агара, который тщательно перемешивают с водой. Посевы инкубируют при 37°С в течение 1-2 суток. Воду из открытых водоемов засевают параллельно на две серии чашек, одну из которых инкубируют при 37°C в течение 1 сут, а другую - 2 сут при 20°C. Затем подсчитывают количество выросших на поверхности и в глубине среды колоний и вычисляют микробное число воды - количество микроорганизмов в 1 мл. окончательный результат выражают в колониеобразующих единицах (КОЕ) В 1 мл питьевой воды должно быть не более 50 КОЕ Для взятия проб из глубины открытых водоемов используют специальный аппарат - батометр. Он состоит из металлического каркаса, в который вставляется бутылка для воды, закрывающаяся плотной пробкой с приспособлением для ее открывания. Батометр укреплен на тросе, позволяющим опускать его на нужную глубину. Определение БГКП: Определяют ОКБ (общие колиморфные бактерии) и ТКБ (термотолерантные колиморфные бактерии) ОКБ – Г-, спор нет, ферментируют лактозу до кислоты и газа при 37 градусах за 24-48 ч ТКБ – входят в число ОКБ, но они могут ферментировать лактозу до кислоты и газа при 44 градусах за 24 часа Норма для питьевой воды: в 300 мл не должно быть ОКБ и ТКБ Метод мембранных фильтров: - Анализируют 3 объема по 100 мл, пропуская каждый объем воды через мембранные фильтры №3 (диаметры пор не более 0,3 мкм), фильтры берут стерильным пинцетом и помещают на среду Эндо таким образом, чтобы сторона, через которую пропускали воду, была обращена вверх. - Чашки инкубируют в термостате дном вверх при температуре 37 °С в течение 24 часов. - Если на фильтрах нет роста или выросли пленчатые, губчатые, плесневые или прозрачные колонии, то выдают отрицательный ответ об отсутствии ОКБ и ТКБ в 100 мл исследуемой воды. - Если колонии лактозопозитивные (темно-красные /красные с металлическим блеском), то производят подсчет типичных колоний БГКП и их тестирование на принадлежность к ОКБ или ТКБ по параметрам:  - Подсчитывают на всех фильтрах и определяют число КОЕ в 100 мл по формуле: число колоний = (суммарное число подсчитанных колоний на фильтрах*100)/объем воды, пропущенный через все фильтры Титрационный метод = бродильный тест - Применяют при отсутствии оборудования для мембранных фильтров и при анализе воды с большим содержанием взвешенных веществ и посторонней флоры - Метод основан на накоплении бактерий в жидкой лактозо-пептонной среде после посева в нее определенного объема воды, последующий пересев на плотную среду Эндо и идентификация бактерий в колониях по культуральным и б/х тестам - Качественный анализ: для текущего или производственного санэпиднадзора; в жидкую ЛПС засевают 3 объема по 100 мл. если ОКБ и ТКБ обнаруживается хотя бы в 1 из 3 объемов, то дают заключение – обнаружены в 100 мл - Количественный анализ – более детальный: посев 333 мл воды – 3 по 100 мл, 3 по 10 мл, 3 по 1 мл в ЛПС, пересев на среду Эндо и идентификация культуры. Для оценки результатов использую специальные таблицы  - Затем инкубация при 37 градусах за 48 ч - Результаты: Если помутнения нет, то ответ ОКБ в данном объеме отсутствуют Помутнение с газообразованием (далее выполняют только оксидазный тест и мазок по Граму) Помутнение без газообразования - Посев на сектора среды Эндо 18-20 ч. Если есть лактозопозитивные колонии, то проводят тестирование типичных колоний БГКП на принадлежность к ОКБ или ТКБ, как в фильтрационном методе - Отрицательный ответ, если все колонии оксадазоположительные, Г- палочки, при повторной пробе на ЛПС нет газообразования Определение спор сульфитредуцирующих клостридий: Споры этих бактерий более устойчивы к действию неблагоприятных факторов окружающей среды. Поэтому данный показатель рекомендован для оценки эффективности процессов очистки воды. Обнаружение клостридий в воде перед поступлением ее в распределительную сеть указывает на недостаточную очистку Метод заключается в посеве в железо-сульфитный агар 20 мл питьевой воды, прогретой на бане при температуре 75 °С в течение 15 минут. Чашку с посевом инкубируют при 44 С и течение 16-18 часов. Норматив: споры должны отсутствовать в 20 мл воды Определение колифагов (бактериофаги кишечной палочки): Определяют титрационным методом по способности формировать зоны лизиса (бляшки) на микробном газоне, выросшем на питательном агаре через 18 часов при 37 градусах после посева кишечной палочки Норматив: в 100 мл не должно быть БОЕ (бляшкообразующие единицы) колифагов |