Паталогоанатомическое вскрытие трупов животных (методичка). Место, обстановка и время вскрытия
 Скачать 0.7 Mb.
|
|
Выявление меди (методом Окомото). Фиксация в абсолютном спирте, можно и в нейтральном формалине. Срезы замороженные, парафиновые, целлоидиновые. Помещают сре  зы на 12—24 часа при 36° в реактив следующего состава: растворяют 0,1 г рубеановодородной кислоты в 100 см3 абсолютного спирта. Непосредственно перед употреблением смешивают 2—5 см3 основного раствора с 100 см3 10%-ного водного раствора уксуснокислого натрия. Затем ополаскивают в дистиллированной воде, ядерная окраска квасцовым кармином. Спирт, ксилол, бальзам.Результаты окраски: соединения, содержащие медь в виде зеленовато-черных гранул. Цитологические и цитогенетические методы В настоящее время широко используются в лабораторной практике цитологические и цитогенетические методы исследования. Существует много методов окраски цитологических препаратов, наилучшим является метод по Папенгейму. Окраска азур-эозииовой смесью по методу Папенгейма Необходимые материалы
Азур II в количестве 1 г растворяют в 1 л дистиллированной воды. Эозин желтоватый (ВА или К) в количестве 1 г растворяют в 1 л свежепрокипяченой дистиллированной воды. Рабочий раствор: на 1 мл дистиллированной воды при рН = 6,8 берется 4 капли основного раствора эозина и 4 капли основного раствора азур II. Количество воды отмеривается в зависимости от числа препаратов, подлежащих окраске. На каждый препарат расходуется около 3 мл красителя. 3. Дистиллированная вода. Ход окраски
Результаты окраски: ядра красновато-фиолетовые, цитоплазма лимфоидных клеток светло-синяя; лимфоидная азуровая зернистость ярко-пурпурно-красная; миэлоидная азуровая зернистость фиолетовая с коричневым оттенком; эритроциты розовые. Исследование хромосом в метафазе Наиболее подходящей стадией клеточного цикла для тонкого исследования хромосом является метафаза митоза. Материалом в этом случае служит источник ткани, обладающий достаточной митотической активностью (костный мозг, лимфатические узлы, эмбриональные ткани и др.)- Этот метод был разработан Фордом и с тех пор многократно видоизменялся. Ниже мы приведем один из вариантов метода для работы с лабораторными и другими животными. Необходимые материалы
Приготовление и окраска препаратов Примерно за 2 часа до убоя животного ему внутрибрюшинно или подкожно вводят водный раствор колхицина из расчета 1 гамма (миллионная доля грамма) колхицина на 1 г веса. Колхицин блокирует образование веретена деления на стадии метафазы, и поэтому в ткани накапливаются клетки, остановившиеся в своем делении на стадии метафазы. Животных убивают. Костный мозг из бедренных костей вымывают при помощи шприца 1%-ным или 1,12%-ным раствором лимоннокислого натрия. Ткани селезенки, лимфатических узлов, тимуса и др. тщательно измельчают в чашке Петри с гипотоническим раствором. Суспензию клеток собирают в центрифужные пробирки (вместе с гипотоническим раствором) и инкубируют в термостате при Т=37°С 20—40 мин. Затем взвесь осаждают центрифугированием 3—5 мин при 800—1000 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют фиксатор, состоящий из смеси метилового спирта и ледяной уксусной кислоты в пропорции 3:1. Фиксируют 1,5—2 часа. Во время фиксации фиксатор меняют 2—3 раза. Меняя фиксатор, следят, чтобы глыбка клеток не разбивалась, а слой клеток был тонким для лучшей фиксации. Фиксатор наливают каждый раз по 1,5—2 мл. По окончании фиксации взвесь клеток ресуспензируют в небольшом объеме фиксатора (0,5 мл). 2—3 капли суспензии наносят на предметные стекла, предварительно охлажденные сухим льдом или хранящиеся в дистиллированной воде в холодильнике. Затем стекло подсушивают над пламенем горелки. Фиксатор высыхает, а клетки прочно приклеиваются к стеклу. Мазки окрашивают 1%-ным расвором ацетоорсеина в течение 5—10 мин, после чего краску смывают водой и высушивают при комнатной температуре. Анализ препаратов хромосом проводят на микроскопе при увеличении 7X90, соблюдая следующие условия: 1) изучают клетки, находящиеся на стадии метафазы, хромосомы которых расположены в одной плоскости и могут быть легко сосчитаны; 2) исследуют лишь разрушенные метафазные пластинки с сохранившимися контурами клетки. Пластинки фотографируют и составляют идиограммы из вырезанных хромосом метафазных пластинок; гомологичные хромосомы располагают попарно в направлении уменьшения размеров их плечей, длина которых предварительно измеряется. Исследование хромосом в стадии анафазы Исследование хромосом в стадии анафазы проводят с целью получения количественных и некоторых качественных данных относительно митотической активности, хромосомных и геномных перестроек. Необходимые материалы
Приготовление и окраска препаратов. Материал для исследования берут немедленно после убоя животного и фиксируют 3—4 часа в жидкости Карнуа. После фиксации материал переносят в 96° этиловый спирт, где он хранится. Мелко расщепленная ткань окрашивается в ацетокармине 5—24 часа. Окрашенная ткань помещается в каплю раствора хлоралгидрата на предметном стекле, где дополнительно расщепляется. Затем окрашенный и расщепленный материал накрывают покровным стеклом и через несколько слоев фильтровальной бумаги пальцем или другим предметом строго перпендикулярно к предметному стеклу давят на покровное стекло. Окрашенная ткань распластывается широким веером клеток. Лишняя краска удаляется фильтровальной бумагой, а края покровного стекла заливают парафином, предохраняющим от высыхания окрашенные клетки. Полученные тотальные, но временные, ацетокарминовые препараты используются в течение 2—3 суток при хранении их в холодильнике. Анализ препаратов и подсчет клеток проводятся при 400-кратном увеличении микроскопа. При этом выявляют все клетки, находящиеся на стадии деления—метафазы, анафазы и ранней телофазы. Кроме того, подсчитывают клетки с различными хромосомными реорганизациями — мосты, фрагменты и др., и геномными перестройками — многополюсные метафазы и анафазы, метафазы с фрагментами и др. Данные подсчетов каждого случая протоколируются, а затем вычисляются показатели цитогенетичес-кого анализа: индекс митотической активности в % (можно вычислять и в промиллях %0 как отношение всех делящихся клеток к общему их числу; индекс хромосомной изменчивости в % как отношение числа измененных хромосом к общему числу анафаз; индекс геномных изменений в % как отношение числа клеток с 3-х и 4-полюсными метафазами и анафа-в % как отношение числа измененных хромосом к общему числу анафаз; индекс мутационного давления в % как отношение хромосомных перестроек и генотипических изменений к общему числу анафаз. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Бактериологическое исследование трупа играет очень большую, а иногда и решающую роль, особенно при инфекционных заболеваниях. Наиболее надежные результаты получаются, когда бактериологическое исследование производится вскоре после смерти, во всяком случае не позднее 24 часов. По прошествии суток исследование может быть затруднено кишечной палочкой и гнилостными бактериями, распространившимися из кишечника по трупу. Бактериоскопическое исследование для исключения некоторых инфекций (например, сибирской язвы, рожи свиней и др.) рекомендуется производить при наличии соответствующих условий до начала каждого вскрытия, взяв мазки крови из вен уха или конечностей. Материал для бактериологических посевов и мазков следует брать до извлечения органов. Посевы и мазки обычно делают из сердца, желчного пузыря и селезенки, а если труп полежал — из периферических вен (уха или конечности). При отсутствии условий для бактериологического исследования на месте, направляют материал с подробным протоколом патологоанатомического вскрытия в ближайшую лабораторию. Посылают обычно ухо, трубчатые кости, голову (на бешенство), паренхиматозные органы (печень, селезенку и др.). При подозрении на сибирскую язву вскрытия не производят, а готовят несколько мазков крови, тонких — для бактериоскопического и толстых — для бактериологического исследований. Мазки подсушивают на воздухе, тщательно упаковывают и пересылают в лабораторию, а место разреза кожи обжигают на пламени. Материал пересылают в стерильной, хорошо закрытой посуде и, во избежание его разложения, — лучше с нарочным. По почте можно пересылать материал только в фиксированном виде и соответствующим образом упакованным, например кусочки мозга (аммонов рог, мозжечок, кора), фиксированные в ацетоне или спирт-эфире для исследования на бешенство (тельца Негри). Иногда возникает необходимость пересылки для исследования целого трупа животного или плода. Плод с плодовыми оболочками и последом тщательно завертывают в непромокаемый материал (клеенку), упаковывают в деревянный ящик и в таком виде отправляют с нарочным. ОБЩИЕ УКАЗАНИЯ О МЕТОДИКЕ И ПОРЯДКЕ ВСКРЫТИЯ Порядок вскрытия больших полостей тела, извлечения и исследования органов зависит от ряда условий и дает видовые и индивидуальные отклонения от общепринятой схемы. Анатомические соотношения различных частей тела, данные анамнеза и предварительного осмотра органов на месте, роль различных систем организма в патологии того или другого вида животных обусловливают вариации секционной техники. Когда желают составить четкое суждение о степени наполнения полостей сердца, вскрытие грудной полости должно предшествовать извлечению органов брюшной полости; в противном случае вытекшая из задней полой вены кровь вызовет опорожнение полости правого сердца. Особенно часто приходится делать отступления от общей схемы при наличии между органами различных патологических сращений, вызванных опухолями, травмами (фистула между сеткой и сердцем — жвачные), воспалениями, при которых сращенные органы извлекаются совместно, без нарушения спаек и сращений. Брюшную полость обычно вскрывают и осматривают ранее грудной. Такой порядок имеет преимущества. Если начать с грудной полости, то при отделении грудной кости приходится перерезать диафрагму по месту ее прикрепления к последней, что влечет изменение первоначального положения кишечника, а при наличии в брюшной полости жидкости — переход ее в грудную. С другой стороны, вскрытие брюшной полости и осмотр ее органов (без извлечения их) не отражается на состоянии органов грудной полости и, в частности, на степени наполнения полостей сердца, так как разрез брюшной стенки не связан с перерезкой крупных сосудов. Рекомендуемый ниже порядок вскрытия приводится лишь как основная схема. Наиболее существенные отклонения от нее будут приведены по ходу изложения фактического материала. Основной порядок вскрытия I. Наружный осмотр трупа. II. Внутренний осмотр.
Следует отметить, что во всех случаях быстрой смерти животного, когда не удалось произвести достаточно подробное клиническое обследование, вскрывающий обязан до начала вкрытия исключить сибирскую язву. НАРУЖНЫЙ ОСМОТР Приступая к вскрытию трупа, необходимо предварительно ознакомиться с клиническим течением болезни павшего животного и с прижизненным диагнозом. Вскрытию полостей тела, как правило, предшествует наружный осмотр трупа, который во многих случаях дает важные показания для суждения о причине смерти, а иногда непосредственно определяет патологоанатомический диагноз, например на сап, сибирскую язву, оспу и др. Наконец, наружный осмотр нередко дает направление всему дальнейшему ходу вскрытия и этим облегчает исследование. Наружный осмотр начинают до снятия кожи, так как при отделении кожи изменяется картина трупного окоченения; естественные отверстия и сама кожа могут оказаться запачканными кровью, вытекающей из сосудов; ушная раковина, абсцессы, язвы, свищи, раны — перерезанными. Поэтому исследование некоторых трупных явлений (окоченение), состояния естественных отверстий и наружных покровов (кожи), а также ран, свищей, абсцессов предпринимают до снятия кожи. Наружный осмотр трупа включает следующие моменты: а) общий обзор внешности трупа (трупные явления, наружные покровы, подкожная клетчатка); б) исследование отдельных поверхностных частей трупа (естественных отверстий, скелетной мускулатуры, некоторых лимфатических узлов, вымени, наружных половых органов). Общий осмотр внешности трупа Общий обзор внешности трупа начинают с определения рода, пола животного, его возраста, породы, масти и отметин, размеров (длина и высота тела), веса (если возможно). Возраст животного определяют по зубам. Точная регистрация возраста необходима при судебно-ветеринарных вскрытиях, во всех же остальных случаях его определяют приблизительно. При сильно выраженном трупном окоченении головы более точное суждение о возрасте выносят после извлечения органов шеи. Вес животного. В связи с тем, что размеры органов у различных пород одного и того же вида животных сильно колеблются, определение веса животного необходимо для последующего перечисления веса органов в процентах к общему весу тела. Далее отмечают телосложение, состояние упитанности и останавливаются на общем виде — архитектуре трупа. Все это вместе взятое даёт представление о физиономии трупа — его габитусе. Телосложение определяют как «пропорциональное», «правильное», «крепкое», и наоборот, «непропорциональное», «неправильное», «слабое». Если находят какие-либо отклонения или неправильности в телосложении, то регистрируют, в чем они состоят (например, несоразмерное развитие тех или других частей тела, искривление позвоночника или конечностей и другие моменты). Далее обращают внимание на конфигурацию грудной клетки и живота («подтянутый», «увеличенный»). Очень важно зарегистрировать моменты, относящиеся к характеру эксплуатации животного (выездная лошадь, тяжеловоз, служебная собака и т. д.). У лошадей, а в особенности у жвачных, следует обратить внимание на увеличение (вздутие) живота — один из признаков тимпании (жвачные) и колик (лошадь). Наиболее существенным различием является распределение крови в трупе. При прижизненном вздутии кровь из брюшной полости перемещается в переднюю половину тела и наружные покровы, тогда как сосуды органов брюшной полости малокровны. Упитанность определяется после снятия кожи, по состоянию подкожного жира и мускулатуры. У истощенных трупов, кроме отсутствия жира в подкожной клетчатке, резко выступают ребра, позвоночник, наружные углы подвздошной кости, бугры седалищных костей, что является следствием атрофического состояния мускулатуры. Отмечают цвет жира, его консистенцию. У старых животных жир желтого, желто-коричневого цвета. При сильном истощении (исхудании) он пропитывается серозной жидкостью и становится слизисто-студенистым (серозная атрофия жира). В заключении говорят о «хорошей», «плохой», «средней» упитанности, об «ожирении» или «истощении» животного. Следующим моментом наружного осмотра является регистрация трупных явлений. Охлаждение трупа развивается постепенно. У лошадей температура сравнивается с окружающей средой примерно через 63 часа, а у собак — через 46 часов. Холод, несомненно, ускоряет, а тепло задерживает процесс охлаждения трупа. Сюда следует еще добавить, что при некоторых заболеваниях (например, желтухе) температура иногда падает у животных еще при жизни до 32°. Таким образом, степень трупного охлаждения, перечисленная на время, важна для приблизительного суждения о времени смерти, особенно при судебно-ветеринарных вскрытиях. Трупное окоченение. Под трупным окоченением понимают наступающие после смерти неподвижность и затвердение скелетной, сердечной и гладкой мускулатуры. В мышцах скелета трупное окоченение начинается с жевательных мышц примерно через 3—5 часов после смерти и постепенно распространяется на грудные и тазовые конечности, оставаясь выраженным во всех мышечных группах от 10 до 20 часов. Оно исчезает в том же порядке по истечении 1—2 суток. Время наступления и степень трупного окоченения подвержены большим колебаниям и зависят от многих условий, что важно в практическом отношении и должно быть учтено при вскрытии. У крепких животных, с хорошо развитой мускулатурой, при внезапной смерти при быстро протекавшем заболевании окоченение обычно хорошо и длительно выражено. Наоборот, при длительных заболеваниях, сопровождавшихся общим упадком питания (кахексия, гнилокровие), окоченение бывает вялым, скоропроходящим, а иногда и полностью отсутствует. Степень трупного окоченения определяют по подвижности челюстей, легкости сгибания и разгибания конечностей в суставах. Трупные пятна у животных становятся заметными только после снятия кожи (исключение — свиньи и некоторые породы собак) на внутренней ее поверхности, со стороны подкожной клетчатки. Они имеют вид сине-красных, мелких и крупных полос или пятен и образуются в результате перемещения (стекания) крови по венам, в силу ее тяжести, в нижележащие части трупа. Следовательно, локализация их зависит от положения трупа после смерти. В полнокровных трупах, а также у животных, павших от причин, понижающих свертываемость крови (некоторые инфекции, отравление окисью углерода и т. д.), трупные пятна обычно бывают резко выражены. Трупные пятна не следует смешивать с различного рода кровоизлияниями, от которых они отличаются своим неясным очертанием, появлением побледнения при надавливании пальцами на какой-либо участок и вытеканием крови из сосудов при надрезе кожи (чего не бывает при кровоизлияниях или геморрагических выпотах). Позднее гемоглобин красных кровяных телец начинает переходить в плазму крови (так называемый трупный гемолиз) и диффундирует вместе с ней через стенки сосудов в окружающую ткань, отчего последняя принимает диффузный вишнево-красный, буровато-красный (грязно-фиолетовый) цвет — явление трупной имбибиции. Она особенно резко проявляется на внутренней поверхности полостей сердца и сосудов. В отличие от гипостатической красноты, имбибиционное окрашивание не исчезает от надавливания пальцем, а в сравнении с воспалительной гиперемией при ней отсутствует увеличение объема ткани; весь участок имбибированной ткани представляется диффузнокрасным, так как в нем незаметна сеть налитых кровью мелких сосудов. От старых кровоизлияний трупную имбибицию отличает отсутствие в ткани эритроцитов, содержащих гемоглобин (гистологическое исследование в сомнительных случаях). Трупное разложение характеризуется распадом тканей в результате совершающихся в них ферментативных процессов и главным образом действия микроорганизмов. Распадающийся при трупном разложении гемоглобин крови становится источником образования сернистого метгемоглобина. Последний придает тканям серо-зеленое, грязно-зеленое окрашивание. В первую очередь оно появляется на брюшных покровах и в межреберных пространствах, распространяясь впоследствии на все части трупа. В значительно полежавших трупах находят сильно выраженное разложение, при котором ткани превращаются в зловонную грязносеро-зеленую мягкую массу, нередко пронизанную большим количеством газовых пузырьков, — явление, называемое трупной эмфиземой. Под влиянием того же разложения кровь в сосудах становится пенистой, зеленовато-красного цвета. Быстрота наступления трупного разложения зависит от условий (среды), в которых находится труп, и от причины, вызвавшей смерть. Тепло, влажность воздуха ускоряют процесс трупного разложения; холод, сухая среда задерживают его. Трупное разложение наступает особенно быстро после смерти, вызванной септическим процессом, когда уже при жизни присутствуют в крови и тканях гноеродные и гнилостные микроорганизмы. Осмотр кожи. При этом учитывают, насколько прочно удерживаются волосы в коже, блеск или тусклость, а также взъерошенность их, отмечают наличие и характер участков, лишенных волос. Определяют цвет самой кожи (наличие пигментации или отсутствие пигмента), толщину, упругость ее, различные повреждения (операционные раны, рубцы, язвы и т. д.). Особого внимания заслуживают сыпи (пятна, папулы, пузырьки, пустулы), инфильтраты, кровоизлияния, часто встречающиеся при инфекционных заболеваниях (например, при оспе, ящуре, сибирской язве, чуме свиней и собак). Различные припухания кожи обычно определяются по снятии ее при осмотре со стороны подкожной клетчатки и путем надрезов. Кроме отеков, опухания кожи могут вызываться также эмфиземой подкожной клетчатки, что узнается по крепитации (особый треск) при надавливании пальцем и присутствию пузырьков газа в клетчатке. Необходимо отличать эмфизему прижизненного происхождения от трупной, при которой наличие пузырьков газа совпадает с признаками разложения трупа. Прижизненная эмфизема подкожной клетчатки может быть травматического происхождения (трахеотомия, травма грудной клетки и т. п.), и тогда изменений самой подкожной клетчатки не отмечают; очень резкие формы эмфиземы подкожной клетчатки наблюдаются у птиц при разрыве воздухоносных мешков (Pneumoderma). Прижизненную эмфизему подкожной клетчатки вызывают также возбудители эмфизематозного карбункула и злокачественного отека. В этих случаях наблюдаются студенисто-геморрагические инфильтраты подкожной и межмышечной клетчатки, пронизанные пузырьками газа. |