исследование вымени коровы. курсач. "Методы исследования вымени и ранней диагностики субклинических маститов"
 Скачать 59.54 Kb.
|
Косвенные методы определения соматических клетокКосвенно соматические клетки определяют с помощью диагностических реактивов мастидина, димастина, мастоприма, пробы Уайтсайда, содержащих поверхностно-активные вещества (ПАВ). ПАВ разрушают мембраны клеток, высвобождают из ядер ДНК и вступают с ней в реакцию, образуя желе. По степени образования желеобразного сгустка косвенно судят о количестве соматических клеток в молоке. Реакцию молока с диагностическим реактивом проводят на молочно-контрольных пластинках ПМК-1 или ПМК-2, имеющих 4луночки, соответственно долям вымени коровы, определение соматических клеток с помощью диагностических реактивов проводят в молоке из отдельных долей вымени или удоя коровы для диагностики субклинического мастита и пробах сборного молока для определения в нем примеси анормального. Для диагностики мастита по молоку из каждой доли вымени используют диагностические реактивы малой концентрации: мастидин 2%,димастин 5%, мастоприм I%,в пробе Уайт-Сайда 4%раствор едкого натра. Для диагностики мастита у коров по молоку разового или суточного удоя используют 10% раствор димастидина и 20%димастина, а для определения примеси анормального молока в сборном -2,5% раствор мастоприма и маститодиагност (реактив Загаевского). Наличие в составе мастидина, кроме ПАВ, индикатора бромкрезолпурина, а в димастине фенолового красного, позволяет судить по изменению цвета смеси о величине рН исследуемого молока. При использовании этих реактивов для диагностики субклинического мастита основным диагностическим признаком является образование желеобразного сгустка, а изменение цвета смеси –ориентирующим. Проба с 2% раствором мастидина.Для приготовления 2% раствора мастидина к 100мл 10% раствора, выпускаемого отечественной промышленностью, прибавляют 400мл дистиллированной или прокипяченной воды. В луночки молочно-контрольной пластинки (ПМК-1, ПМК-2) из соответствующих долей вымени надаивают по 1мл молока и добавляют1мл приготовленного 2% раствора мастидина с помощью пипетки-автомата или дозатора жидкости. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой луночке ПМК-1 поочередно в течение 10-15 с. При использовании ПМК-2 смешивание молока с реактивом проводят одновременно во всех луночках, путем ротационного вращения пластинки в горизонтальной плоскости. Реакцию учитывают по густоте желе: отрицательная реакция (-) -однородная жидкость: сомнительная реакция (±) -следы образования желе; положительная реакция (+) -ясно видимый сгусток, который можно выбросить из луночки палочкой при перемешивании. На пластинке ПМК-2 при отрицательной реакции (-)образуется однородная смесь. При сомнительной реакции (±) во время вращения пластинки на дне луночки заметны тонкие нити (тяжи) без тенденции образования сгустка. Положительная реакция (+) -отчетливое появление слабого или быстро образующегося плотного сгустка, концентрирующегося при вращении пластинки в центре луночки. Определение рН молока по цвету: светло-сиреневый, дымчатый -рН молока нормальная (6,5-6,8); почти белый -повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5); темно-сиреневый -повышенная щелочность молока (рН больше 8). Проба с 5% раствором димастина. Раствор димастина готовят на дистиллированной или прокипяченной теплой воде. Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина. Определения рН молока по цвету: оранжевый, оранжево-красный (красно-оранжевый) –нормальная реакция молока (рН 6,5-6,8); желтый -повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5); красный -повышенная щелочность молока (рН больше 6,8); алый и малиновый -ярко выраженная щелочность молока (рН больше 7,0). Проба с I% раствором мастоприма. Препарат мастоприм представляет собой порошок желтоватого цвета, состоящий из смеси сульфанола (4части) с едким натром (1 часть). Раствор мастоприма готовят на дистиллированной воде. Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2%раствором мастидина. Проба Уайтсайда.Готовят 4%раствор едкого натра на дистиллированной воде, который добавляют по 2,5мл к молоку (по 1мл) в каждую луночку молочно-контрольной пластинки. Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2%раствором мастидина. Спустя 30с. признаки желеобразования могут исчезнуть. Проба с 10% раствором мастидина. Диагностику мастита у коров по молоку разового или суточного удоя проводят при контрольных дойках и взятии проб для определения жира и других показателей молока. Молоко в количестве 1мл берут из молокомера или суточной пробы и выливают в луночку молочно-контрольной пластинки. Затем добавляют 1мл 10% раствора мастидина. Техника постановки пробы на пластинках ПМК-1 и ПМК-2 и учет реакции по образованию желе и цвету проводят как указано раньше. Для определения пораженной доли вымени от животных, давших положительную и сомнительную реакцию с 10%раствором мастидина, отбирают пробы молока из каждой четверти и исследуют с 2%раствором мастидина, или 5% раствором димастина, или 1%раствором мастоприма, или пробой Уайтсайда. Проба с 20% растворам димастина. Постановку пробы и учет реакции проводят как с 5% раствором. Соответствие количества соматических клеток (млн./мл), подсчитанных по методу Прэскотта-Брида, показаниям реакции молока из долей вымени коров с 2%раствором мастидина и 5%раствором димастина по данным А.И.Ивашуры, представлены в таблице 2: Таблица. 2. Соответствие количества соматических клеток показаниям реакции молока
Проба с 2,5% раствором мастоприма. Примесь анормального молока в сборном определяют на молокоперерабатывающих предприятиях. В луночки молочно-контрольной пластинки ПМК-1вносят 1 мл тщательно перемешанного молока и добавляют к нему 1мл 2,5%раствора мастоприма. Молоко с реактивом перемешивают в течение 10 -15с и учитывают реакцию. На пластинке ПМК-1 при отрицательной реакции жидкость однородная, желе не образуется. Такое молоко не имеет примеси анормального молока или примесь незначительная (2-З%). Положительная реакция -образуется желеобразный сгусток, степень которого оценивается в крестах. Один крест (+) -слабое желе, смесь молока с реактивом тянется за палочкой в виде нити, на дне уже заметна небольшая выемка. Такое молоко содержит в среднем 4-б%анормального молока и до500тыс./мл соматических клеток. Два креста (++) -более выраженный желеобразный сгусток, при перемешивании которого хорошо видна выемка, но желе из луночки еще не удается выбросить. Такое молоко содержит в среднем 9-10% анормального молока и от 500тыс. до 1млн./мл соматических клеток. Три креста (+++) -хорошо сформированный желеобразный сгусток, который легко можно выбросить палочкой из луночки пластинки. Такое молоко содержит выше 15%анормального молока и свыше1млн./мл соматических клеток. Проба с маститодиагностом (реактив Загаевского). Для приготовления маститодиагноста 300г сульфанола и 50г триполифосфата натрия растворяют в 1л дистиллированной воды при температуре 70-75°С. После полного растворения смеси и охлаждения до 20-25°С добавляют 0,2г бромтимолового синего и 3мл 1% спиртово-водного раствора розоловой кислоты и тщательно перемешивают в течение 3-5мин, после чего реактив фильтруют через ватный фильтр. Срок хранения приготовленного реактива - 3-3,5месяца при температуре 5°С. Для исследования берут 2 мл тщательно перемешанного сборного молока, вносят в луночку молочно-контрольной пластинки ПМК-1, добавляют 1мл маститодиагноста и перемешивают палочкой в течение5-10с. Учет реакции проводят по изменению консистенции и цвета смеси молока с реактивом. Гомогенная смесь молока с реактивом (-) -отсутствие примеси анормального молока в сборном. Наличие единичных слизистых тяжей и хлопьев (±) -примесь анормального молока 1-5%. Умеренное содержание жидкой слизи и хлопьев (+) - примесь анормального молока 5-10%. Наличие слизи жидкой консистенции (++) -примесь анормального молока 10-15%. Умеренный сгусток в виде белка куриного яйца (+++) -примесь анормального молока 20-25%. Плотный желеобразный сгусток, зеленоватого цвета (++++)-примесь анормального молока свыше 25%. Примесь более 10% анормального молока к сборному влияет на его технологическую переработку, качество изготовляемых из него кисломолочных продуктов и сыров. Биохимические методы исследования: |