Фармакопея 12 - 1 часть. Научный центр экспертизы средств медицинского применения
 Скачать 3.93 Mb.
|
|
В качестве раствора сравнения используют контрольный раствор, приготовленный аналогичным образом из контрольной пробы. Калибровочный график строят в пределах содержания азота от 0,005 до 0,025 мг в 10 мл и воспроизводят при каждом анализе. 4. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА ПО АМИНОКИСЛОТНОМУ СОСТАВУ Метод включает кислотный гидролиз (обычно в 6 М растворе хлористоводородной кислоты при 110 град. C в течение 18-72 ч) белков до аминокислот, которые затем хроматографически разделяют в соответствии с инструкцией, прилагаемой к аминокислотному анализатору, и количественно определяют в сравнении со стандартами аминокислот. Необходимо учитывать, что при кислотном гидролизе разрушается триптофан и частично треонин и серин. Количество треонина и серина определяют путем экстраполяции данных к нулевому времени гидролиза. Пептидная связь между остатками валина, лейцина и изолейцина более устойчива к гидролизу, чем у других аминокислот, поэтому их количество определяют после гидролиза в течение 72 час. При определении цистеина и метионина необходимо их предварительно окислять соответственно в цистеиновую кислоту и метионинсульфон или использовать другие методы анализа: для цистина (1/2 цистеина) - гидразинолиз с последующим проведением цветной реакции с реактивом висмута, описанным в частной фармакопейной статье; для метионина - проведение гидролиза в отдельной навеске большой массы (около 0,5 г) с последующей цветной реакцией с натрия нитропруссидом. Триптофан определяют после щелочного гидролиза в отдельной навеске и проводят цветную реакцию с n-диметиламинобензальдегидом. Расчет содержания белка проводят следующим образом: зная содержание каждой аминокислоты (A ) в мкг/мг и мкМ/мг, рассчитывают сумму аминокислот. i Затем рассчитывают величину средней молекулярной массы аминокислот (M ), ср. поделив сумму аминокислот в мкг (SUM A ) на сумму аминокислот в мкМ : i1 (SUM A ): i2 SUM A i1 M = ----------. ср. SUM A i2 Из полученного значения M вычитают 18 (молекулярная масса воды, ср. которая присоединяется к пептидной связи во время гидролиза с ее разрывом и образованием концевых групп аминокислот), получают величину среднего аминокислотного остатка (A ): ср. A = M - 18. ср. ср. Затем полученное значение A умножают на сумму аминокислот в мг и ср. делят на значение M , в результате получают содержание белка в мг (Б): ср. A x SUM A cp. i1 Б = -----------------, 1000 x М ср. где 1000 - перевод мкг в мг. Для определения содержания белка (X) в мг в 1 мг образца лекарственного средства делят значение Б с учетом разведения (P), проводимого в ходе анализа, на навеску образца (m) в мг, которая обычно составляет около 10 мг: Б x P X = -------. m 20. НИТРИТОМЕТРИЯ (ОФС 42-0054-07) Нитритометрия - метод титриметрического анализа, при котором в качестве реактива для титрования используется раствор натрия нитрита. Применяется для количественного определения соединений, содержащих первичную или вторичную ароматическую аминогруппу, для определения гидразидов, а также ароматических нитросоединений после предварительного восстановления нитрогруппы до аминогруппы. Методика. Если не указано иначе, точную навеску образца лекарственного средства, указанную в частной фармакопейной статье, растворяют в смеси 10 мл воды и 10 мл хлористоводородной кислоты разведенной 8,3%. Прибавляют воду до общего объема 80 мл, 1 г калия бромида и при постоянном перемешивании титруют 0,1 М раствором натрия нитрита. В начале титрования прибавляют раствор натрия нитрита со скоростью 2 мл/мин., а в конце (за 0,5 мл до эквивалентного количества) - 0,05 мл/мин. Титрование проводят при температуре раствора 15-20 град. C, однако в некоторых случаях требуется охлаждение до 0-5 град. C. Точку эквивалентности определяют электрометрическими методами (потенциометрическое титрование, амперометрическое титрование) или с помощью внутренних индикаторов. При потенциометрическом титровании в качестве индикаторного применяют платиновый электрод, при этом в качестве электродов сравнения используют хлорсеребряный или насыщенный каломельный электрод. На электроды накладывают разность потенциалов 0,3-0,4 В, если не указано иначе в частной фармакопейной статье. В качестве внутренних индикаторов используют тропеолин 00 (4 капли раствора), тропеолин 00 в смеси с метиленовым синим (4 капли раствора тропеолина 00 и 2 капли раствора метиленового синего), нейтральный красный (2 капли в начале и 2 капли в конце титрования). Титрование с тропеолином 00 проводят до перехода окраски от красной к желтой, со смесью тропеолина 00 с метиленовым синим - от красно-фиолетовой к голубой, с нейтральным красным - от красно-фиолетовой к синей. Выдержку в конце титрования с нейтральным красным увеличивают до 2 мин. Параллельно проводят контрольный опыт. ИСПЫТАНИЕ НА ПРЕДЕЛЬНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ПРИМЕСЕЙ 21. ОБЩАЯ ЗОЛА (ОФС 42-0055-07) Около 1 г испытуемого вещества или 3-5 г измельченного лекарственного растительного сырья (точная навеска) помещают в предварительно прокаленный и точно взвешенный фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель, равномерно распределяя вещество по дну тигля. Затем тигель осторожно нагревают, давая сначала веществу сгореть или улетучиться при возможно более низкой температуре. Сжигание оставшихся частиц угля проводят также при возможно более низкой температуре; после того как уголь сгорит почти полностью, увеличивают пламя. При неполном сгорании частиц угля остаток охлаждают, смачивают водой или насыщенным раствором аммония нитрата, выпаривают на водяной бане и остаток прокаливают. В случае необходимости такую операцию повторяют несколько раз. Прокаливание проводят в муфельной печи при температуре около 600 град. C до постоянной массы, избегая появления пламени, сплавления золы и спекания ее со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждают в эксикаторе и взвешивают. 22. СУЛЬФАТНАЯ ЗОЛА (ОФС 42-0056-07) Точную навеску испытуемого вещества (около 1 г, если нет других указаний в частной фармакопейной статье) помещают в предварительно прокаленный и точно взвешенный фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель, смачивают 1 мл серной кислоты концентрированной и осторожно (избегая сильного вспенивания вещества) нагревают на пламени или песчаной бане до удаления паров серной кислоты. Продолжают нагревание при более высокой температуре до исчезновения темных частиц. Затем тигель помещают в муфельную печь и прокаливают при температуре около 600 град. C до постоянной массы, избегая появления пламени, сплавления золы и спекания ее со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждают в эксикаторе и взвешивают. В случае трудного сгорания, прибавление серной кислоты концентрированной и прокаливание повторяют. 23. ОСТАТОЧНЫЕ ОРГАНИЧЕСКИЕ РАСТВОРИТЕЛИ (ОФС 42-0057-07) Остаточные органические растворители - это растворители, которые используются на любой стадии производства лекарственного средства и полностью не удаляются после завершения технологического процесса. Контролю на содержание органических растворителей подвергаются лекарственные и вспомогательные вещества, а также лекарственные препараты независимо от способа применения, если при их получении или очистке используются органические растворители или они могут образоваться в процессе производства. Нормативная документация (НД), регламентирующая качество таких лекарственных и вспомогательных веществ, а также лекарственных препаратов, должна иметь раздел "Остаточные органические растворители". Отсутствие такого раздела в НД должно быть обосновано. Предельно допустимое содержание органических растворителей в лекарственных средствах определяется степенью их возможного риска для здоровья человека. Эти факторы положены в основу классификации органических растворителей: 1 класс - высокотоксичные растворители (генотоксичные канцерогены), применяемые в фармацевтическом производстве в исключительных случаях, когда нельзя избежать их использования (табл. 23.1); 2 класс - негенотоксичные растворители. Нормирование их в лекарственных средствах обусловлено максимально допустимым количеством, принимаемым в составе суточной дозы лекарственного средства (табл. 23.2); 3 класс - растворители низкой токсичности, содержание которых до 0,5% не требует подтверждения (табл. 23.3). Содержание таких растворителей допускается и в более высоких пределах, если это регламентировано правилами Надлежащей производственной практики или иными стандартами производства. Определение содержания остаточных органических растворителей может быть осуществлено любыми валидированными методами. Наиболее часто для этих целей используется метод газовой хроматографии. Содержание остаточных органических растворителей в лекарственных средствах регламентируется следующим образом: 1) при наличии растворителей 1 класса каждый из них должен быть идентифицирован и определен количественно; 2) при наличии растворителей 2 класса каждый из них должен быть идентифицирован и определен количественно; 3) при наличии растворителей 3 класса, если их содержание не превышает 0,5%, для определения допускается применение неспецифического метода "Потеря в массе при высушивании"; при наличии растворителей 3 класса, если их содержание превышает 0,5%, каждый из них должен быть идентифицирован и определен количественно. Условия проведения анализа на остаточные органические растворители должны быть описаны в соответствующих НД. Указание на необходимость определения в фармацевтической субстанции или готовой лекарственной форме иных органических растворителей и условия проведения их анализа должны содержаться в соответствующих НД. Таблица 23.1 Предельно допустимое содержание в лекарственных средствах остаточных органических растворителей 1 класса токсичности
Таблица 23.2 Предельно допустимое содержание в лекарственных средствах остаточных органических растворителей 2 класса токсичности
Таблица 23.3 Растворители 3 класса токсичности, которые подлежат нормированию в соответствии с требованиями настоящей ОФС
24. ИСПЫТАНИЯ НА ЧИСТОТУ И ДОПУСТИМЫЕ ПРЕДЕЛЫ ПРИМЕСЕЙ Определение примесей в лекарственных средствах и оценку их содержания проводят путем сравнения с эталонными растворами, устанавливающими предел содержания данной примеси, после проведения реакции. Окраска или опалесценция/муть испытуемого раствора должна быть не интенсивнее окраски или опалесценции/мути эталонного раствора. Общие замечания 1. Вода и все реактивы должны быть свободны от ионов, на содержание которых проводят испытания. 2. Пробирки, в которых проводят наблюдения, должны быть бесцветными и одинакового диаметра (около 1,5 см, если не указано иначе). 3. Если не указано иначе, навески для приготовления эталонных растворов отвешивают с точностью до 0,001 г. |