ГФ №11, том 2. Общие методы анализа лекарственное растительное сырье редакционная коллегия
 Скачать 1.25 Mb.
|
|
животные считаются непригодными для опыта. Не позднее чем за 18 ч до опыта кроликов переводят в помещение, в котором осуществляют испытание на пирогенность. Оно должно проводиться в отдельной комнате с постоянной температурой, не отличающейся от температуры помещения, в котором кролики постоянно содержались до опыта, более чем на +/-2 град. С, и с колебаниями во время испытания, не превышающими 2 град. С, изолированной от шума, в спокойной обстановке. Вечером накануне опыта у животных отбирают остаток корма. До и во время опыта животные корма не получают (воду дают без ограничения). Если нет других указаний в частной статье, для испытания отбирают не менее 2 флаконов или ампул от каждой серии, содержащей от 1000 до 10000 флаконов или ампул. При количестве в серии флаконов или ампул более 10000 отбирают по 3 флакона или ампулы от каждой серии. Из отобранных флаконов или ампул готовят общий раствор (смешанная проба). От серии, содержащей до 1000 флаконов или ампул, для испытания отбирают по 1 флакону или ампуле. Вода для инъекций или другие применяемые растворители, а также шприцы и иглы должны быть стерильными и непирогенными. Испытуемые лекарственные средства должны быть стерильными. Их вводят кроликам в ушную вену. Другие пути введения указывают в частной статье на лекарственное средство. Для каждого кролика берут отдельную иглу. Растворы испытуемых лекарственных средств, подогретые до 37 град. С (при отсутствии других указаний в частных статьях), вводят в количествах и растворителях, предусмотренных соответствующими частными статьями. Для испытания на пирогенность воды для инъекций предварительно готовят из нее изотонический 0,9% раствор натрия хлорида. Натрия хлорид должен быть стерильным и непирогенным, что обеспечивается воздушным методом его стерилизации при температуре 180 или 200 град. С в течение от 30 до 60 мин в зависимости от массы образца. Шприцы, иглы и необходимую стеклянную посуду стерилизуют этим же методом при температуре 180 град. С в течение 60 мин. Количество вводимого изотонического 0,9% раствора натрия хлорида составляет 10 мл на 1 кг массы кролика. Все количество раствора, предварительно нагретого до 37 град. С, вводят в течение 2 мин. Испытуемый раствор проверяют на 3 кроликах. Группа должна состоять из животных, близких по массе (отличающихся не более чем на 0,5 кг). Перед введением раствора у кролика дважды с интервалом 30 мин измеряют температуру. Различия в показателях температуры не должны превышать 0,2 град. С. В противном случае кролик для испытания не используется. Результат последнего измерения принимают за исходную температуру. Раствор вводят не позднее чем через 15-30 мин после последнего измерения температуры. Последующее измерение температуры при внутривенном введении испытуемого раствора проводят 3 раза с промежутками в один час. При других путях введения - 5 раз с промежутками в один час, если в частной статье нет других указаний. Воду для инъекций или раствор лекарственного средства считают непирогенными, если сумма повышений температуры у 3 кроликов меньше или равна 1,4 град. С. Если эта сумма превышает 2,2 град. С, то воду для инъекций или раствор лекарственного средства считают пирогенными. В случаях, когда сумма повышений температуры у 3 кроликов находится в пределах от 1,5 до 2,2 град. С, испытание повторяют дополнительно на 5 кроликах. В этом случае воду для инъекций или раствор лекарственного средства считают непирогенными, если сумма повышений температуры у всех 8 кроликов не превышает 3,7 град. С. Если же эта сумма равна 3,8 град. С или больше, воду для инъекций или раствор лекарственного средства считают пирогенными. В частной фармакопейной статье могут быть указаны другие пределы отклонения температуры. Если в частной статье на лекарственное средство нет других указаний, случаи понижения температуры у кроликов принимают за нуль. Кролики, бывшие в опыте, могут быть использованы для определения пирогенности повторно, но не ранее чем через 3 сут, если введенный им до этого раствор лекарственного средства или вода для инъекций были непирогенными. Если же введенный раствор лекарственного средства или вода для инъекций оказались пирогенными, кролики могут быть использованы для дальнейших опытов через 2 нед. При повышении температуры у кроликов в подобных случаях на 1,2 град. С и более они используются через 3 нед. Если исследуемые вещества обладают антигенными свойствами, то одних и тех же кроликов нельзя использовать для испытания повторно (если нет специальных указаний в частной статье). Примечания. На основании опыта контроля на пирогенность медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП) допускаются следующие особенности при испытании этих препаратов. 1. Испытание МИБП проводят на кроликах массой 1,5-2,5 кг. 2. Проверка реактивности кроликов является необязательной. 3. Термометр вводят в прямую кишку на глубину 5-7 см (в зависимости от массы кролика). 4. Понижение температуры учитывают так же, как ее повышение. 5. Кролики, бывшие в опыте, могут быть использованы для определения пирогенности повторно (но не более 3 раз) с интервалом 2-3 сут, если ранее введенный препарат был непирогенным. Если введенный препарат оказался пирогенным, кролики не могут быть использованы повторно. ИСПЫТАНИЕ НА СОДЕРЖАНИЕ ВЕЩЕСТВ ГИСТАМИНОПОДОБНОГО ДЕЙСТВИЯ Настоящая фармакопейная статья является общей и касается метода испытания на содержание веществ гистаминоподобного действия лекарственных средств, предназначенных для парентерального применения. Испытание проводят на кошках обоего пола массой не менее 2 кг под уретановым наркозом. Уретан вводят внутрибрюшинно из расчета 1-1,2 г на 1 кг массы животного в 3-5 мл дистиллированной воды. В случае недостаточной глубины наркоза вводят дополнительно внутривенно уретан в количестве 1 г в 3 мл воды на животное или этаминал - натрий в виде 2% раствора в количестве 0,2 мл/кг внутривенно. Скорость введения указанных растворов 0,1 мл в секунду. Допускается также применение в качестве наркотического средства гексенала в дозе 350-400 мг/кг в 2-3 мл воды под кожу или внутримышечно. Для регистрации артериального давления в отпрепарированную сонную артерию вставляют канюлю, заполненную раствором, предупреждающим свертывание крови (насыщенный раствор натрия гидрокарбоната, 25% раствор магния сульфата, раствор гепарина, содержащий 50 ЕД в 1 мл, и др.), и соединяют ее с ртутным манометром. Запись давления производят на ленте кимографа. Испытуемые растворы вводят внутривенно. Вначале проверяют чувствительность животного к гистамину. Для приготовления основного раствора гистамина, содержащего 1 мг гистамина - основания в 1 мл воды, около 138,1 мг (точная навеска) гистамина фосфата или около 82,8 мг (точная навеска) гистамина дигидрохлорида растворяют в 50 мл дистиллированной воды. Раствор хранят не более 1 мес в склянке из темного стекла с притертой пробкой в защищенном от света месте при температуре от 4 до 10 град. С. В качестве основного раствора гистамина можно использовать также 0,1% раствор гистамина дигидрохлорида в ампулах, в 1 мл которого содержится 0,6038 мг гистамина - основания. Из основного раствора гистамина непосредственно перед опытом путем последовательных разведений в воде или в растворе натрия хлорида изотонического 0,9% для инъекций в зависимости от растворителя для испытуемого препарата, указанного в соответствующей статье, готовят стандартные растворы, содержащие 0,5 и 1 мкг/мл гистамина - основания. Для проверки реакции животного на гистамин в вену последовательно вводят указанные стандартные растворы с промежутками не менее 5 мин в дозах 0,1 и 0,2 мкг гистамина - основания в 0,2 мл на 1 кг массы. Скорость введения раствора 0,1 мл в секунду. Животных, у которых при введении гистамина в дозе 0,2 мкг на 1 кг массы артериальное давление снизится менее чем на 20 мм рт. ст., из опыта исключают. После проверки чувствительности животного к гистамину уточняют величину гипотензивной реакции посредством повторного введения стандартного раствора гистамина в дозе 0,1 мкг (0,2 мл раствора) на 1 кг массы со скоростью 0,1 мл в секунду. Введение гистамина с интервалом 5 мин повторяют несколько раз, пока при двух последовательных введениях не будет получено одинаковое снижение артериального давления, которое принимается за стандартное в данных условиях опыта. Затем с интервалом не менее 5 мин животному вводят испытуемый раствор лекарственного средства с той же скоростью, с которой вводили раствор гистамина. Растворитель и концентрация испытуемого раствора (тест - доза) указаны в соответствующей фармакопейной статье. Препарат считают выдержавшим испытание, если снижение артериального давления после введения тест - дозы не превышает реакции на введение 0,1 мкг/кг гистамина в стандартном растворе. При испытании в одном опыте разных лекарственных средств необходимо проводить дополнительное определение реакции животного на введение стандартного раствора гистамина в дозе 0,1 мкг/кг. Отмеченная при этом величина реакции принимается как стандартная для последующего испытания препарата. В случае значительного уменьшения величины реакции по сравнению с наблюдаемой в начале опыта необходимо вновь проверить чувствительность животного к действию гистамина в дозе 0,2 мкг/кг. Если снижение артериального давления при этом будет не менее 20 мм рт. ст., испытание препаратов продолжают в соответствии с указанными выше требованиями, Для испытания на содержание веществ гистаминоподобного действия отбирают по 2 флакона или ампулы от каждой серии, содержащей не более 10000 флаконов или ампул. При количестве в серии флаконов или ампул более 10000 отбирают по 3 флакона или ампулы от каждой серии. Из отобранных флаконов или ампул готовят общий раствор (смешанная проба) для испытаний. МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ИСПЫТАНИЕ НА СТЕРИЛЬНОСТЬ Лекарственные средства для инъекций, глазные капли, мази, пленки, другие лекарственные средства, в отношении которых имеются соответствующие указания в нормативно - технической документации (НТД), должны быть стерильными. Стерильность лекарственных средств достигается соблюдением необходимых санитарно - гигиенических условий их изготовления и режима стерилизации. Методы контроля стерильности, изложенные в данной статье, применяют для испытания всех лекарственных средств независимо от их природы и лекарственной формы, если нет других указаний в частных фармакопейных статьях. Отбор образцов для анализа. Образцы готовых лекарственных средств отбирают для контроля от каждой серии в количествах, зависящих от вида стерилизации и числа единиц (ампул, флаконов и т.д.) в серии. В случае, если лекарственное средство стерилизуют насыщенным паром при избыточном давлении 0,11 +/- 0,02 МПа (1,1 +/- 0,2 кгс/кв. см) и температуре (121 +/- 1) град. С, образец состоит из 10 единиц. При других видах стерилизации минимальное количество --- образцов для анализа определяют по формуле n = 0,4 \/ N , где n - число единиц в образце, а N - число единиц в исследуемой серии препарата, при этом n должно быть не менее 3 и не более 40. Определение антимикробного действия лекарственного средства. Во избежание неправильной оценки результатов анализа необходимо определить однократно для каждого наименования лекарственного средства, обладает ли оно антимикробным действием. Для этого в две пробирки с 10 мл тиогликолевой среды и в две - с 10 мл среды Сабуро добавляют соответствующее количество исследуемого лекарственного средства (табл. 12) и вносят в каждую пробирку по 0,1 мл микробной взвеси соответствующего тест - штамма, содержащей 1000 клеток в 1 мл. Посевы в тиогликолевой среде инкубируют при температуре от 30 до 35 град. С в течение 48 ч, а на среде Сабуро - при температуре от 20 до 25 град. С в течение 72 ч. Контролем служат пробирки с питательными средами, в которые вместо данного лекарственного средства вносят аналогичное количество дистиллированной воды или соответствующего растворителя. Для проверки антибактериального действия лекарственных средств используют тест - микроорганизмы: Staphylococcus aureus АТСС 6538 Р, Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 25922, а противогрибкового действия - Candida albicans ATCC 885-653 (см. табл. 13). При отсутствии антимикробного действия лекарственного средства в контрольных и опытных пробирках (колбах) должен наблюдаться рост перечисленных тест - микроорганизмов. При наличии антимикробного действия лекарственных средств используют соответствующие инактиваторы, указанные в частных фармакопейных статьях: (напр.: пара - аминобензойная кислота для сульфаниламидов, пенициллиназа - для пенициллинов и цефалоспоринов и т.д.). При отсутствии инактиватора препарат разводят, изменяя соотношение объемов посевного материала и питательной среды. Первоначально, не изменяя количества посевного материала, указанного в табл. 12, увеличивают объем питательной среды до 250 мл. Если при этом сохраняется антимикробное действие лекарственного средства, уменьшают объем посевного материала до 1 мл. В случае неэффективности разведения лекарственного средства используют метод мембранной фильтрации. Посев лекарственных средств. Для контроля стерильности лекарственных средств применяют тиогликолевую среду и жидкую среду Сабуро. При этом используют метод прямого посева на питательные среды или метод мембранной фильтрации. Метод прямого посева. Испытуемый препарат, если необходимо, растворяют в соответствующем растворителе и высевают в количествах, указанных в табл. 12. При испытании лекарственных средств посевы в тиогликолевой среде инкубируют при температуре от 30 до 35 град. С, а в среде Сабуро - от 20 до 25 град. С. Продолжительность инкубации посевов в обеих питательных средах составляет 14 сут. Таблица 12 Количество испытуемого препарата для посева в зависимости от объема содержимого единиц (ампул, флаконов и др.), составляющих серию ------------------------------------------------------------------ |Объем содержимого| Объем | Объем питательной среды | |одной единицы, мл|лекарственного| | | | средства для | | | | посева, мл | | |-----------------+--------------+-------------------------------| |Менее 1 |Весь объем |В 10 раз больше объема образца | |1 - 4 |1 |для посева | |5 - 19 |2 | | |20 - 100 |2 - 4 | | |Более 100 <*> |10 | | ------------------------------------------------------------------ -------------------------------- <*> Если объем содержимого единицы превышает 100 мл, предпочтительнее использовать метод мембранной фильтрации. В случае помутнения питательной среды после внесения в нее испытуемого препарата следует в интервале от 3 до 7 сут. после посева сделать пересев на свежие аналогичные среды и инкубировать их при соответствующей температуре 14 сут от начала испытания. При испытании мазей и растворов лекарственных средств в маслах отбирают асептически по 0,1 г (мл) от каждой единицы и вносят в стерильную колбу вместимостью 250 мл, содержащую стеклянные бусы, 100 мл 1/15 мол фосфатного буферного раствора (рН 6,8-7,0) и эмульгатор. Перед проведением испытания содержимое колбы подогревают до температуры (41 +/-1) град. С. Колбу с испытуемым образцом встряхивают не более 30 мин до получения однородной эмульсии. Полученную эмульсию в количестве 5 мл переносят в колбу с 40 мл тиогликолевой среды и 5 мл - в колбу с 40 мл среды Сабуро. Посевы инкубируют 14 сут при соответствующей температуре для каждой питательной среды. Примечания. 1. Выбор эмульгатора и его количество зависят от |