ГФ №11, том 2. Общие методы анализа лекарственное растительное сырье редакционная коллегия
 Скачать 1.25 Mb.
|
|
Для стерилизации используют следующие методы: - термические - паровой и воздушный; - химические - газовый и стерилизацию растворами; - стерилизация фильтрованием; - радиационный метод стерилизации. Изделия из стекла, фарфора, металла, полимерных материалов перед стерилизацией подвергают предстерилизационнои очистке. Термические методы стерилизации Паровой метод стерилизации осуществляют насыщенным водяным паром при избыточном давлении 0,11 МПа (1,1 кгс/кв. см) и температуре 120 град. С; 0,20 МПа (2 кгс/кв. см) и температуре 132 град. С. Стерилизацию проводят в паровых стерилизаторах. Для достижения максимальной эффективности процесса стерилизации необходимо полное удаление воздуха из стерилизационной камеры и обрабатываемых объектов, а также правильное размещение последних, обеспечивающее свободное проникновение к ним пара. Стерилизация паром при температуре 120 град. С рекомендуется для растворов лекарственных веществ. Время стерилизационной выдержки зависит от физико - химических свойств препарата, объема раствора и используемого оборудования. Объем образца, мл Минимальное время стерилизационной выдержки, мин До 100 8 От 100 до 500 12 >> 500 >> 1000 15 Стерилизацию растворов лекарственных веществ для инъекций проводят в герметично укупоренных, предварительно простерилизованных флаконах или ампулах. Жиры и масла в герметично укупоренных сосудах стерилизуют при 120 град. С в течение 2 ч. Этим методом стерилизуют также изделия из стекла, фарфора, металла, перевязочные и вспомогательные материалы (вата, марля, бинты, фильтровальная бумага, пергамент, спецодежда и др.). Время стерилизационной выдержки при температуре 120 град. С - 45 мин, при 132 град. С - 20 мин. Для стерилизации изделий из резины следует использовать первый из указанных режимов. Стерилизацию перечисленных объектов проводят в стерилизационных коробках или в двухслойной упаковке из бязи, пергамента и др. В исключительных случаях допускается стерилизация при температуре ниже 120 град. С. Конкретизация отдельных режимов применительно к определенному объекту стерилизации должна быть обоснована и указана в нормативно - технической документации. Воздушный метод стерилизации осуществляют сухим горячим воздухом в воздушных стерилизаторах при температуре 160, 180 или 200 град. С. Эффективность этого метода стерилизации зависит от температуры, времени, степени теплопроводности стерилизуемых объектов и правильности расположения их внутри стерилизационной камеры для обеспечения свободной циркуляции горячего воздуха. Воздушный метод используют для стерилизации термостойких порошкообразных веществ (натрия хлорида, окиси цинка, талька, белой глины и др.). Масса образца, г Температура, Минимальное время град. С стерилизационной выдержки, мин До 25 180 30 200 10 От 25 до 100 180 40 200 20 >> 100 >> 200 180 60 200 30 Масса образца, г Температура, Минимальное время град. С стерилизационной выдержки, мин До 100 180 30 200 15 От 100 до 500 180 40 200 20 Изделия из стекла, металла, силиконовой резины, фарфора, установки для стерилизующего фильтрования с фильтрами и приемники фильтрата стерилизуют при 180 град.С в течение 60 мин или при 160 град. С в течение 2,5 ч. Допускается использование более высоких температур нагрева при соответствующем уменьшении времени стерилизационной выдержки, обеспечивающих стерильность и сохранность объекта. Режим должен быть обоснован и указан в нормативно - технической документации. Контроль параметров и эффективности термических методов стерилизации осуществляют с помощью контрольно - измерительных приборов, химических и биологических тестов. В качестве химического теста стерилизации используют вещества, изменяющие свой цвет или физическое состояние при определенных параметрах стерилизации. Бактериологический контроль осуществляют с помощью биотеста стерилизации. Биотест стерилизации - объект из установленного материала, обсемененный тест - микроорганизмами, предназначенный для контроля эффективности стерилизации определенным стерилизующим средством. Для приготовления биотестов могут быть использованы тест - микроорганизмы: чистые культуры спорообразующих микроорганизмов В. subtilis, В. stearothermophilus и др. Химические методы стерилизации Для газовой стерилизации используют окись этилена или ее смесь с различными флегматизаторами: бромистым метилом, двуокисью углерода, хладонами (фреонами) и др. Стерилизацию проводят в газовых стерилизаторах или микроанаэростатах (портативный аппарат) при следующих режимах: - окись этилена - стерилизующая доза 1200 мг/куб. дм, температура стерилизации не менее 18 град. С, относительная влажность 80%, время стерилизационной выдержки - 16 ч (портативный аппарат); - смесь ОБ (смесь окиси этилена и бромистого метила в весовом соотношении 1:2,5): а) стерилизующая доза 2000 мг/куб. дм, температура стерилизации 55 град. С, относительная влажность 80%, время стерилизационной выдержки - 4 ч; б) стерилизующая доза 2000 мг/куб. дм, температура стерилизации не менее 18 град. С, время стерилизационной выдержки - 16 ч при той же относительной влажности (портативный аппарат). Допускается использование других режимов газовой стерилизации, обеспечивающих стерильность и сохранность объекта. Режим должен быть обоснован и указан в нормативно - технической документации. Стерилизуемые изделия упаковывают в пакеты из полиэтиленовой пленки толщиной от 0,06 до 0,2 мм, пергамента и др. Метод рекомендован для изделий из резины, полимерных материалов, стекла, металла. В связи с токсичностью окиси этилена и бромистого метила применение стерилизованных этими газами изделий допускается только после их дегазации, т. е. выдержки в вентилируемом помещении до допустимых остаточных количеств, указанных в нормативно - технической документации. Условия дегазации зависят от назначения, способа применения, размеров изделий, материала изделия и упаковки и указываются в нормативно - технической документации на изделие. Контроль параметров и эффективности газовой стерилизации осуществляют с помощью контрольно - измерительных приборов, химических и биологических тестов. Для химической стерилизации растворами используют перекись водорода и надкислоты. Эффективность стерилизации растворами зависит от концентрации активно действующего вещества, времени стерилизационной выдержки и температуры стерилизующего раствора. При стерилизации 6% раствором перекиси водорода температура стерилизующего раствора должна быть не менее 18 град.С, время стерилизационной выдержки - 6 ч; при температуре 50 град. С - 3 ч. При стерилизации 1% раствором дезоксона-1 (по надуксусной кислоте) температура стерилизующего раствора должна быть не менее 18 град.С, время стерилизационной выдержки-45 мин. Допускается использование других стерилизующих средств, обеспечивающих стерильность и сохранность объекта. Режим должен быть обоснован и указан в нормативно - технической документации. Химическую стерилизацию растворами проводят в закрытых емкостях из стекла, пластмассы или емкостях, покрытых неповрежденной эмалью, при полном погружении изделия в раствор на время стерилизационной выдержки. После этого изделие должно быть промыто стерильной водой в асептических условиях. Метод рекомендуется для изделий из полимерных материалов, резины, стекла, коррозионно - стойких металлов. Контроль параметров стерилизации растворами химических препаратов проводят химическим и физическим методами, определяя содержание активного действующего вещества в исходном и рабочем растворах, а также температуру рабочего раствора. Стерилизация фильтрованием Растворы термолабильных веществ стерилизуют фильтрованием с помощью мембранных и глубинных фильтров, задерживающих микроорганизмы и их споры. Мембранные фильтры характеризуются ситовым механизмом задержания и постоянным размером пор при эксплуатации. Максимальный диаметр пор стерилизующего мембранного фильтра не превышает 0,3 мкм. Глубинные фильтры характеризуются сложным механизмом задержания (ситовым, адсорбционным, инерционным) и в большинстве случаев непостоянным размером пор. Для мембранных фильтров указывается в паспорте "точка пузырька" (минимальное давление газа, необходимое для вытеснения жидкости из фильтра) - величина, непосредственно связанная с максимальным диаметром пор в фильтре. При стерилизации фильтрованием перед стерилизующим фильтром помещают один или несколько префильтров. Поры префильтрата больше пор фильтра или равны им. Глубинные фильтры и префильтры, содержащие асбестовые и стеклянные волокна, как правило, не должны применяться для стерилизации лекарственных средств, вводимых парентерально. В случае их использования после них должен быть установлен стерилизующий мембранный фильтр. Перед началом фильтрования и после него проверяют герметичность собранной установки и целостность мембранного фильтра, например, путем определения "точки пузырька". Глубинные фильтры с помощью этого теста не проверяют. Фильтрование проводят, применяя положительное давление (до 0,7 МПа для мембранных фильтров) с нестерильной стороны установки. При использовании глубинных фильтров необходимо строго соблюдать указанные в паспорте температуру, рН, давление. Следует избегать гидравлических ударов. Продолжительность фильтрования не должна превышать 8 ч. Стерилизацию фильтрованием и розлив раствора проводят в асептических условиях. Эффективность стерилизации фильтрованием проверяют прямым посевом пробы фильтрата в питательную среду. Радиационный метод стерилизации Облучение объектов в конечной упаковке производят на гамма - установках, ускорителях электронов и других источниках ионизирующего излучения дозой 25 кГр (2,5 Мрад) или другими дозами в зависимости от конкретных условий (микробная обсемененность продукции до стерилизации, радиорезистентность контаминантов, величина коэффициента надежности стерилизации). Стерилизацию проводят в соответствии со "Сводом правил, регламентирующих проведение в странах - членах СЭВ радиационной стерилизации материалов и изделий медицинского назначения" и "Сводом правил, регламентирующих проведение в странах - членах СЭВ радиационной стерилизации лекарственных средств" и утвержденными инструкциями на каждый вид изделия. Радиационный метод стерилизации может быть рекомендован для изделий из пластмасс, изделий одноразового использования в упаковке, перевязочных материалов, некоторых лекарственных средств и других видов медицинской продукции. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЗОЛЫ Около 1 г препарата или 3-5 г измельченного лекарственного растительного сырья (точная навеска) помещают в предварительно прокаленный и точно взвешенный фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель, равномерно распределяя вещество по дну тигля. Затем тигель осторожно нагревают, давая сначала веществу сгореть или улетучиться при возможно более низкой температуре. Сжигание оставшихся частиц угля надо тоже вести при возможно более низкой температуре; после того как уголь сгорит почти полностью, увеличивают пламя. При неполном сгорании частиц угля остаток охлаждают, смачивают водой или насыщенным раствором аммония нитрата, выпаривают на водяной бане и остаток прокаливают. В случае необходимости такую операцию повторяют несколько раз. Прокаливание ведут при слабом красном калении (около 500 град. С) до постоянной массы, избегая сплавления золы и спекания ее со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждают в эксикаторе и взвешивают. Определение золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте К остатку в тигле, полученному после сжигания препарата или лекарственного растительного сырья, прибавляют 15 мл 10% раствора хлористоводородной кислоты, тигель накрывают часовым стеклом и нагревают 10 мин на кипящей водяной бане. К содержимому тигля прибавляют 5 мл горячей воды, обмывая ею часовое стекло. Жидкость фильтруют через беззольный фильтр, перенося на него остаток с помощью горячей воды. Фильтр с остатком промывают горячей водой до отрицательной реакции на хлориды в промывной воде, переносят его в тот же тигель, высушивают, сжигают, прокаливают, как указано выше, и взвешивают. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СУЛЬФАТНОЙ ЗОЛЫ Точную навеску препарата (около 1 г, если в соответствующей частной статье нет других указаний) помещают в предварительно прокаленный и точно взвешенный фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель, смачивают 1 мл концентрированной серной кислоты и осторожно нагревают на сетке или песчаной бане до удаления паров серной кислоты. Затем прокаливают при слабом калении (около 500 град. С) до постоянной массы, избегая сплавления золы и спекания ее со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждают в эксикаторе и взвешивают. В случае трудного сгорания прибавление концентрированной серной кислоты и прокаливание повторяют. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ Фермент - это белок, обладающий каталитическими свойствами. Принцип, положенный в основу всех методов определения активности фермента (Е), заключается в регистрации скорости исчезновения субстрата (S) (т.е. вещества, на которое действует фермент) или скорости образования продуков реакции ([Р]). Требования к условиям проведения ферментативной реакции Ферментативная реакция должна проводиться в строго определенных условиях с учетом следующих факторов. 1. Начальная скорость реакции (V0). Типичная кинетическая кривая ферментативной реакции приведена на рис. 1. <*> Для каждой ферментативной реакции могут быть подобраны условия, при которых начальный участок кривой линеен, т.е. зависимость концентрации образовавшегося продукта или израсходованного субстрата от времени наблюдения (t) имеет прямо пропорциональный характер. -------------------------------- <*> Рис. 1. Типичная кинетическая кривая. На оси абсцисс - время наблюдения, на оси ординат - концентрация образовавшегося продукта. (Рисунок не приводится). Под начальной скоростью реакции в этих условиях понимают скорость, соответствующую линейному участку, и определяют ее как тангенс угла наклона этого участка. Поскольку длительность прямолинейного участка кинетической кривой от опыта к опыту несколько изменяется, время инкубации должно составлять не более 70% и не менее 20% времени соответствующего прямолинейного участка. 2. Концентрация субстрата ([S]). Скорость реакции зависит от концентрации субстрата вплоть до его насыщающей концентрации. Под насыщающей концентрацией понимают такую концентрацию субстрата, при которой скорость реакции перестает повышаться при дальнейшем увеличении концентрации субстрата (Рис. 2, а). <*> При проведении ферментативной реакции реакционная смесь должна содержать такое количество субстрата, которое обеспечит насыщение фермента в течение всего хода определения (количество субстрата, взятого для проведения ферментативной реакции, должно быть примерно на 30% выше значения точки насыщения). После выбора насыщающей концентрации субстрата необходимо проверить, сохраняется ли при ней линейная зависимость [Р] от t. В случае фермента, для которого характерно ингибирование субстратом (Рис. 2, б), <*> оптимальной концентрацией субстрата является та концентрация, при которой скорость реакции максимальна (точка перегиба на экспериментальной кривой зависимости скорости реакции от концентрации субстрата). -------------------------------- <*> Рис. 2. Зависимость скорости реакции v от концентрации субстрата (S). а - концентрация субстрата; б - фермент, для которого |