Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
часть исс-го мат-ла засевают на бульн Хоттингера с 0,5% глюкозой, козеиново -грибную среду и инкубируют посевы в анаэробных условиях. Вторую часть вводят мышам(5шт). Первого заражают только исследуемым материалом, остальных — исследуемым материалом с введением 2 мл 200 ME антитоксической сыворотки типов А, В, С и Е. При наличии в материале токсина выживает животное, получившее антисыворотку, нейтрализовавшую токсин соответствующего типа.. 2 – дни- осмотр животных. Посевы просматривают, подозрительные пересевают на ср К-Т для получения чист культуры и ставят р-ию нейтрализации. 5-день- изучают биологические св- 10 билет 1. Патогенность и вирулентность. Факторы патогенности. Единицы измерения вирулентности (способ определения). ПАТОГЕННОСТЬ – потенциальная способность определенных видов м.о. вызывать инфекционный процесс. ПАТОГЕННОСТЬ ХАРАКТЕРИЗУЕТСЯ сложным комплексом болезнетворных свойств м.о., которые сформировались в процессе борьбы за существование и приспособление к паразитированию в живом организме. Генетически обусловленный видовой признак. В большинстве случаев патогенные микроорганизмы характеризуются специфичностью действия. СПЕЦИФИЧНОСТЬ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА является важным признаком, который проявляется в локализации возбудителя, избирательном поражении тканей и органов, клинической картине болезни, механизмах выделения возбудителя из макроорганизма, формировании иммунитета. Степень патогенности может различаться у штаммов одного и того же вида. Степень или мера патогенности называется ВИРУЛЕНТНОСТЬЮ. Вирулентность является показателем качественного, индивидуального признака патогенности м.о. ВИРУЛЕНТНОСТЬ – это способность микроорганизма проникать в ткани. Как количественный признак вирулентность, в отличие от качественного — патогенности, имеет единицы измерения: она измеряется количеством, т. е. дозой микроорганизмов, вызывающих определенной биологический эффект: • DCL (dosiscertaeletalis) — абсолютно летальная доза — минимальное количество возбудителя, которое вызывает гибель 100% взятых в опыт лабораторных животных; • DLM (dosisletalisminima) — минимальная летальная доза — минимальное количество возбудителя, вызывающее гибель 95% взятых в опыт лабораторных животных; например, чтобы вызвать дизентерию, необходимо около миллиона микробов, брюшной тиф – лишь сотня. 2. Возбудители бактериальных зооантропонозных инфекций. Чума. Характеристика биологических свойств возбудителей чумы. Организация и режим работы лаборатории ООИ. Методы лабораторной диагностики чумы. Морфология - палочки овоидной формы; - размер 0,3-0,6 × 1-2 мкм; - полиморфны ; - спор не образуют ; - образуют нежную капсулу; - грамотрицательны ; - при окраске метиленовым синим наблюдается биполярность. Культуральные свойства - Хемоорганотрофы, факультативные анаэробы; - не прихотливы к питательным средам; - рн среды 7,0-7,2, температура 28-30°С; - элективными средами для выращивания возбудителей чумы являются казеиновые среды и гидролизаты кровяных сгустков. На МПБ рост в виде рыхлых хлопьев, взвешенных прозрачной жидкости. При более длительном росте с поверхности среды образуется плёнка, от которой спускаются рыхлые нити: "сталактитовый рост» ; На скошенном агарероств виде вязкого налета; На плотных питательных средах: -через 18-24 ч инкубации колонии имеют вид мелких глыбок с неровными краями; -через 48 ч – края колоний приобретают фестончатый вид и напоминают "кружевной платочек» . Бактерии чумы растут в R-форме, которая является вирулентной, легко диссоциируют под влиянием ряда факторов (бактериофаги) и через О-форму переходят в S-авирулентную форму. Биохимические свойства У чумных бактерий выражена сахаролитическая активность – они расщепляют сахарозу, мальтозу, арабинозу, рамнозу, глюкозу (не всегда) и маннит с образованием кислоты. Различают 2 варианта бактерий чумы -разлагающие и не разлагающие глицерин. Протеолитические свойства выражены слабо: они не разжижают желатин, не свертывают молоко, образуют сероводород. Патогенетические свойства 1.Токсинообразование. Токсин чумной палочки представляет собой особый белок, сочетающий свойства экзо- и эндотоксина, он состоит из двух белковых фракций (А и В), различающихся по аминокислотному составу и антигенным свойствам. 2.АГ структура Антигенная структура бактерий чумы сложна. Возбудитель чумы содержит около десяти различных антигенов: фракции F, V, W и др. Фракция F - основной компонент, связанный с капсулой; V и W компоненты препятствуют фагоцитированию клетки. У бактерий чумы имеются общие антигены с возбудителем псевдотуберкулеза, эшерихиями, шигеллами и эритроцитами человека АВ(О)-группы. Материал для исследования: отделяемое язвы или пунктата;содержимое бубона - бубонная форма;мокрота - легочная форма;испражнения - кишечная форма;кровь - при всех формах;секционный материал. Микробиологическая диагностика чумы. Первый день исследования 1) Из полученного материала готовят мазки, высушивают на воздухе, фиксируют в смеси Никифорова 15 - 20 мин. Мазок окрашивают по Граму и метиленовым синим для выявления биполярности. Наличие в мазках грамотрицательных палочек овоидной формы, а при окраске метиленовым синим-наличие биполярности дает право поставить предварительный диагноз. 2) Посев. Незагрязненный посторонней флорой материал засевают на плотные и жидкие питательные среды (МПА и МПБ) с прибавлением к ним стимуляторов: кровь, сульфит натрия и др. Стимуляция роста необходима, так как посевная доза может быть недостаточной. Материал, содержащий постороннюю флору (мокрота, содержимое открытых язв), засевают на среду Туманского или среду Коробковой. Эти среды содержат генциановый фиолетовый (1:50 000), подавляющий рост посторонней флоры. Посевы инкубируют в термостате при 28 °С. 3) Биологическая проба. Биопробу ставят на морскихссвинках и белых мышах. Метод введения исследуемого материала зависит от характера материала. Мокроту, гной из открытого абсцесса вводят путем втирания в кожу брюшной стенки (предварительно кожу эпилируют, обрабатывают стерильным изотоническим раствором натрия хлорида и скарифицируют). На скарифицированный участок наносят исследуемый материал, втирая его плоской частью скальпеля, под прикрытием специальной воронки или стеклянной крышки от чашки Петри. Незагрязненный материал (кровь, содержимое закрытого бубона) вводят животным подкожно или внутрибрюшинно. В зависимости от метода введения животное погибает на 3-9-й день. Второй день исследования 1)Изучение культуральных свойств колоний, выросших на плотной и жидкой питательной среде. 2)Из бульонной культуры при типичном росте делают мазки, окрашивают по Граму и метиленовым синим. Микроскопируют. Из плотной питательной среды при наличии типичных колоний выделяют чистую культуру и помещают в термостат. На 2-3 подозрительные в отношении возбудителя чумы колонии наносят чумный бактериофаг. Инкубируют в термостате. Через 10-12 ч колонии изменяются-лизируются. Лизис колоний под действием чумного бактериофага имеет диагностическое значение. Третий день исследования 1)Вынимают из термостата пробирки с культурой на скошенном агаре. На поверхности агара чумная палочка образует вязкий серовато-белый налет. 2)Выделенную культуру проверяют микроскопически. При наличии типичных палочек проверяют сахаролитические свойства посевом на сахара: глюкозу, мальтозу, сахарозу, рамнозу, маннит. Ставят пробу с бактериофагом. 3)Учёт результатов ферментативных свойств: Возбудитель чумы: глюкоза +-; сахароза -; манит к (до кислоты); мальтоза к ;рамноза -; арабиноза +. 3. 10. Из баночной упаковки (мясные консервы), со вздувшимся дном и крышкой, провели бактериологическое иссл 1.Банки освобождают от этикеток, регистрируют имеющиеся на них данные и моют горячей водой с мылом, ополаскивают и насухо вытирают. Поверхность банки обжигают ватой, смоченной спиртом. Под горящую вату подводят остриё профламбированного пробойника под углом 30-40*С. Пробивают отверстие и вводят в него стеклянную трубочку 8-9 мм в диаметре, закрытую с одной стороны ватой, и набирают в нее исследуемый материал. После взятия материала сделанное отверстие закрывается крышкой стерильной чашки Петри. 2.Для выявления мезофильныхаэробов проводят посев взятых проб в 2 пробирки с 5-6 мл бульона с 1% глюкозой.Для выявления мезофильныханаэробов исследуемый продукт засевают в 2 пробирки со средой Тароцци, предварительно прогретой на водяной бане в течение 20 мин, и быстро охлажденной до 40° С. 3.В расплавленный и охлажденный агар вносят культуру бактерий, содержимое пробирки выбивают в чашку Петри, на дне которой на двух палочках лежит стекло( среду заливают так, чтобы заполнилось пространство между стеклом и дном чашки). При появлении роста стекло поднимают и колонии пересевают на среду К-Т для выделения чистой культуры. 4.Можно сделать вывод, что это биологический бомбаж. Биологический(истинный) бомбаж — вздутие банок вследствие повышения давления внутри банок в результате выделения газообразных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов, например: ботулизм 11 билет 1. Механическая стерилизация. Механический – удаление микроорганизмов путем механического воздействия. Например, жидкости пропускают через специальные фильтры, которые задерживают частицы определенных размеров. С предметов или поверхностей механически можно удалять микроорганизмы путем чистки, протирания, выметания. Правила работы с бак. Свечами: 1. Бак.фильтры завернутые в бумагу стерилизуют в автоклаве; 2. Приемник присоединяют к вакуумному насосу; 3. Перед фильтрованием места соединения заливают парафином и фильтруют в асептических условия под УФ облучением; 5. Фильтрат выдерживают 3-4 дня в термостате при 25® для контроля на стерильность; 6. Свечу регенерируют для возвращения ей пористости. Правила работы с мембранными фильтрами: 1.перд употреблением фильтры кипятят 20 мин в дист. воде; 2. Фильтр монтируют простерилизованным держателеЗейтца следующим образом: на стенку стерильным пинцетом помещают кусок стерильной фильтровальной бумаги, на него накладывают мембранный фильтр гладкой поверхностью к верху. На мембранный фильтр кладут второй кружок фильтровальной бумаги.; 3. Места соединения с приемником парафинируют. Приемник присоединяют к вакуумному насосу.; 4. Монтирование и фильтрование производят в асептических условиях под УФ облучениям; е. фильтрат выдерживают в термостате доя контроля на стерильность.биотиков. 2.Возбудители воздушно-капельных бактериальных инфекций. Бордетеллы - возбудители коклюша Ипаракоклюша. Возбудители этих заболеваний относятся к роду Bordetella. 1. Bordetellapertussis – возбудителькоклюша, опИсан Борде и Жангу в 1906 г. 1. Bordetella parapertussis - возбудитель паракоклюша, описан Элдеринг и Кондрик в 1937г. 2. Bordetella bronchiseptica - вызывает заболевание у животных. Бактерии коклюша - мелкие палочки овоидной формы, 0,3-0,5×1— 1,5 мкм. Возбудитель паракоклюша большей величины. Оба микроба не имеют спор, неподвижны. При специальной окраске видна капсула. Грамотрицательны. Более интенсивно окрашиваются по полюсам. На ультрасрезах видны капсулоподобная оболочка, зерна валютина, в нуклеиде - вакуоли. Культивирование. Возбудители коклюша и паракоклюша -аэробы. Прихотливы к питательным средам. Для их выращивания применяют среду Борде - Жангу (глице-риново-картофельный агар с кровью). пользуются средой КУА (казеиново-угольный агар) - это полусинтетическая среда без крови. Источником аминокислот является гидролизат казеина. Для угнетения роста посторонней флоры к среде добавляют пенициллин по 0,25-0,5 МЕ на 1 мл среды или метициллин - 2,5-4 мкг на 1 мл. среды инкубируют в термостате при температуре 35-36 °С, рН среды 6,8- 7,4. Посевы необходимо предохранять от высыхания, для этого в термостат ставят сосуд с водой. Колонии B. pertussis появляются через 48--72 ч, а B. parapertussis - через 24__48 g На среде КУА колонии В. pertussis мелкие 1-2 мм в диаметре, B. parapertussis несколько крупнее. Колоний обоих микробов блестящие, серовато-кремового цвета (на казеиново-угольном агаре они напоминают капельки ртути). При снятии колоний остается вязкий, сметанообразный след. При изучении колоний в стереоскопическом микроскопе виден световой конус (коло-нии отбрасывают тень). Наличие светового конуса (хвостика) имеет диагностическое значение. B. parapertussis образует фермент тирозиназу, поэтому в средах, содержащих тирозин, происходит его расщепление и среда окрашивается в коричневый цвет. Изменение цвета среды является дифференциально-диагностическим признаком. В жидкой среде бактерии коклюша и паракоклюша образуют равномерную муть и придонный осадок. На агаре с кровью они дают зону гемолиза. Свежевыделенные культуры чаще всего имеют гладкую S-форму (I фаза). При культивировании в неблагопри-ятных условиях или в материале, взятом в поздние сроки заболевания, могут появиться диссоциированные формы II_IV фазы). ферментативные свойства. Возбудители коклюша не расщепляют углеводь и не ферментируют белки. Бактерии паракоклюша образуют ферменты уреазу и тирозиназу. Бактерии коклюша и паракоклюша продуцируют фермменты патогенности: гиалуронидазу, плазмокоаг ула-зу и лецитиназу. Токсинообразование. В опытах на животных у коклюшной палочки были выявлены четыре типа токсина белковой природы: 1) термолабильный дермонекротический токсин; 2) термостабильный эндотоксин; 3) лейкоцитовостимулирующий фактор (стимулирующий лейкоцитоз); парентеральное введение его вызывало гибель экспериментальных животных; 4) гистаминсенсибилизирующий фактор - при введении его мышам у них повышалась чувстви-тельность к гистамину. Первые два типа токсина свойственны и возбудителю паракоклюша. Антигенная структура. У бактерий рода Bordetella сложная антиренная структура. Наиболее важными антигенами для лабораторной диагностики являются агглютиногены. Родовым агглютиногеном является 7. Видоспецифическим агглютиногеном для бордетелл коклюша является 1, для бордетелл паракоклюша - 14, для бордетелл бронхосептика - 12. Микробиологическая диагностика . Материал для исследования Отделяемое слизистой оболочки носоглотки. 1день посев на питательные среды в чашках Петри: для получения изолированных колоний тампоном наносят несколько штрихов в центре среды (площадка сброса), после этого посев производят штрихами на несколько секторов. Посевы ставят в термостат на 5 дней с ежедневным просмотром, начиная со второго дня исследования. 2-3 дни Изучение культуральных свойствПри наличии подозрительных колоний их выделяют на КУА. Посевы ставят в термостат. Изучение морф и тинкт св. При наличии мелких грамотрицательных палочек ставят пробную реакцию агглютинации с моноспецифической родовой сыво-роткой 7. Положительная реакция агглютинации - принадлежность выделенной культуры к роду Bordetella. Для определения вида бордетелл ставят реакцию агглютинации с моноспецифическими видовыми сыворотками 1 и 14. Реакции ставят на предметном стекле. Положительный результат реакции агглютинации позволяет дать предварительный ответ 4 день- Изучение культур свойств: сначала невооруженным глазом, обращая внимание на цвет среды (нет ли коричневого окрашивания), затем изучают рост при помощи стереоскопического микроскопа При наличии подозрительных колоний из выделенной культуры делают мазки, окрашивают по Граму и изучают под микроскопом. Затем повторно (из чистой культуры) ставят реакцию агглютинации на стекле с моноспецифиче скими сыворотками 1,2,3 м 14. Результаты агглютинации дают возможность отдифференцировать B.pertussis от B.parapertussis, и если это - B.pertussis, то определить серовар: 1-й серовар - (1,2,3), 2-й серовар — (1,2,0), 3-й серовар- (1,0,3). Определение серовара имеет эпидеми-ологическое значение. Для окончательной идентификации выделенной культуры (при положительной агглютинации с моноспецифиче-скими сыворотками) ставят пробу на наличие уреазы и производят посев на скошенный агар, содержащий 0,1% тирозина (см. рис. 49). Проба на уреазу. В маленькую пробирку наливают 0,3-0,4 мл 2% раствора мочевины, вносят петлю культуры и добавляют 2- 3 капли фенолфталеина. Пробирку встряхивают и ставят в термостат. Учитывают реакцию через 2 и 24 ч. Бактерии коклюша не изменяют цвет среды. Бактерии паракоклюша обладают ферментом уреазой, который расщепляют мочевину с образованием аммиака. Аммиак изменяет индикатор и среда окрашивает-ся в красный цвет. Проба с тирозином. На скошенный МПА в пробирках с 0,1% тирозином засевают выделенную культуру и ставят в термостат. На следующий день вынимают пробирку из термостата и просматривают ее. Наличие роста в пробир-ке и окрашивание среды в коричневый цвет свидетельствуют о росте возбудителей паракоклюша. Возбудители коклюша на этой среде не растут. 5 день - При отсутствии подозрительных колоний дают отрицательный ответ. 12 билет 1.Антибиотики (определение). Антибиотики-продукты жизнедеятельности живых организмов, способны избирательно убивать м.о или подавлять их рост. |