Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
1 билет 1. Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы – структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры. Строение бактериальной клетки: Бактериальная клетка состоит из следующих частей: трехслойной оболочки, цитоплазмы с различными включениями и ядерного вещества (нуклеоида). Дополнительными структурными образованиями являются капсулы, споры, жгутики, пили. Оболочка-3-х слойная: 1) наружная (внешний, капсульный, слизистый)- полисахаридной природы состоит из гомо- и гетерополисахаридов у некоторого капсульного вещества может быть представлено полипептидом. Различают микро- и макрокапсулы. Микрокапсула обнаруживается только при электронной микроскопии состоящая из мукополисахаридов которая тесно приклепляется КС. Макрокапсула выраженный слизистый слой покрывающий КС образуется при попадании клетки в неблагоприятные условия. У некоторых микроорганизмов с капсулой связаны патогенетические свойства и АГ-структура. КС- поддерживает форм у клетки, отделяет от окружающей среды, сохраняет постоянное осмотическое давление. Участвует в регуляции роста и деления, обеспечивает коммуникацию с внешней средой через поры и каналы. Цитоплазма-плотно прилегает к КС с внутренней стороны. Она очень тонкая и сост. Из белков и фосфолипидов. Это полупрозрачный пограничный слой, через который осуществляется питание клетки. В цитоплазме находятся ядерное вещество, рибосомы и включения. Нуклиоид, ядерное вещество –у прокариотов в отл. от эукариотов ядро есть, но не оформленное. Рибосомы- находятся в цитоплазме кл. и выполняют функцию синтеза белка. В состав рибосом входит 60% РНК и 40% белка. Включения- гранулы, содержащие различные запасные питательные вещества: крахмал, гликоген, жир. Они расположены в цитоплазме. Споры-встречаются только у палочковидных бактерий. Образуются при попадании м.о. в неблагоприятные условия внешней среды. Они находятся внутри бактериальной клетки. Споры отл. по форме, размерам и расположению в клетке. Могут располагаться центрально, субтерминально и терминально. Жгутики-органы движения, характерны для палочковидных бактерий. Это тонкие нитевидные фибриллы. Длина их превышает размеры бактериальной клетки. По расположению жгутиков бактерии делят на группы: монотрихи- с одним жгутиком (возбудитель холеры), амфитрихи – с пучками или единичными жгутиками на обоих концах клетки (спириллы), лофотрихи- с пучком жгутиков на одном конце клетки , перетрихи-жгутики расположены по всей поверхности клетки (кишечные бактерии). Пили-ворсинки, расположены на поверхности бактериальной клетке. Они короче и тоньше жгутиков. Состоят из белка –пилина. Одни пили служат для прикрепления бактерий к клеткам животных и человека, с другими связана передача генетического материала из клетки в клетку. Капсула-внешний уплотненный слизистый слой, примыкающий к клеточной стенке. Это защитный орган, предохраняющий м.о. от защитных факторов организма, появляется при попадании в организм человека и животных. Капсулы обнаруживаются по методу окраски Ожешко(туш) Споры- встречаются только у палочковидных бактерий. Образуются при попадании м.о. в неблагоприятные условия внешней среды. Они находятся внутри бактериальной клетки. Споры отл. по форме, размерам и расположению в клетке. Могут располагаться центрально, субтерминально и терминально. По хим. Составу отл. от вегетативных кл. малым количеством воды, увеличенным содержанием липидов и солей кальция, что способствует высокой устойчивости спор. В бактериальной кл. образуется только одна спора, следовательно, споры не явл. Органом размножения, а служат для переживания неблагоприятных условий. Споры обнаруживаются при окраске по Граму. Стерилизацию проводят различными способами: паром, сухим горячим воздухом, кипячением. Окраска по Ожешко (выявление спор). 1. На высушен-ный на воздухе мазок наливают несколько капель 0,5% раствора хлороводородной кислоты и подогревают дообразования паров. Препарат высушивают и фиксируют над пламенем.2. Окрашивают по способу Циля- Нильсена. Кисло- тоустойчивые споры окрашиваются в розово-красный, а бактериальная клетка -в голубой цвет Окраска по Бурри- Гинсу (выявление капсулы). Этот метод назван негативным, так как окрашивается фон препарата и бактериальная клетка, а капсула остается неокрашенной.1. На предметное стекло наносят каплю черной туши,разведенной в 10 раз. в нее вносят каплю культуры.Ребром шлифовального стекла делают мазок, так же как мазок крови, и высушивают.2. Фиксируют химическим способом спиртом или суле- мой. Осторожно промывают водой.3. Окрашивают фуксином Пфейффера 3-5 мин. Осто- рожно промывают и высушивают на воздухе. Внимание! Фильтровальной бумагой не пользоваться, чтобы не повредить препарат.Микроскопируют с помощью иммерсионной системы. Фон препарата чёрный , клетки -красные, капсулы неокрашенные 2.Патогенные спирохеты. Род Трепонема. Характеристика биологических свойств. Заболевания. Методы микробиологической диагностики сифилиса. Спирохеты относятся к семейству Spirochaetaceae. Представляют собой тонкие, извитые микроорганизмы, тело которых состоит из осевой нити и окружающей ее спиралевидной цитоплазмы, что придает им штопора- образную форму. B ультрасрезах обнаружена трехслойная наружная мембрана. У некоторых спирохет в электронном микроскопе видны на концах нитевидные образования. Жгутиков, капсул, спор они не образуют. Очень подвижны. Обладают четырьмя видами движения: поступательным, сгибательным, волнообразным и вращательным. Размеры спирохет колеблются от 5 до 500 мкм в длину и 0,3-0,75 мкм в ширину. К патогенным для человека спирохетам относятся представители следующих родов: 1. Treponema - возбудители сифилиса и фрамбезии 2. Borrelia - возбудители возвратного тифа эпидемиче- ского, эндемического и ангины Венсана 3. Leptospira - возбудители лептоспирозов Морфологически спирохеты отличаются друг от друга количеством и глубиной завитков спирали и отношением к окраске. Основной метод окраски по Романовскому-Гимзе. Этим способом лучше всех окрашиваются боррелии- в сине-фиолетовый цвет, хуже - трепонемы – в бледно-розовый цвет. Спирохеты изучают в живом состоянии. Заболевания, вызываемые спирохетами, называются спирохетозами. Treponema pallidum - возбудитель сифилиса, включен в род Treponema. Морфология. Т. pallidum - спиралевидная нить размером 8-18 × 0,08-0,2 мкм с мелкими, равномерными завитками. Число завитков 12-14. Концы трепонемы заострены или закруглены. Подвижны. Обладают четырьмя видами движения. По Р-Г окрашиваются в бледно-розовый цвет. Плохое окрашивание объясняется малым содержанием нуклеопротеидов. Спирохеты можно выявлять в препаратах, окрашенных по Бурри, серебрением. Кроме того, их изучают в живом состоянии - в темном поле. Спор и капсул не имеют. Культивирование. Очень требовательны к питательным средам. На искусственных пит. средах они растут только в присутствии кусочков мозга или почек кролика и асцитической жидкости. Растут медленно, 5-12 дней при температуре 35-36° С в анаэробных условиях. Бледные трепонемы хорошо размножаются в курином эмбрионе (поперечным делением). При выращивании на искусственных питательных средах трепонемы теряют вирулентность. Такие культуры называются культуральными. Культуры, выращенные в курином эмбрионе, называют тканевыми. Они обычно сохраняют вирулентность. Ферментативные свойства. Не обладают. Однако культуральные штаммы различаются между собой по способности образовывать индол и сероводород. Токсинообразование. Не установлено. Антигенная структура. Бледная трепонема содержит несколько антигенных комплексов: полисахаридный, липидный и протеиновый. Серогруппы и серовары не установлены.Микробиологическая диагностика. Микробиологическая диагностика. Материал: содержимое твердого шанкра (первичный период),содержимое розеол, папул, везикул (вторичный период), кровь (вторичный, третий и четвертый периоды). Основные методы исследования: 1. Микроскопический. 2. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). 3. Серологический: а) реакция Вассермана (РСК); б) осадочные реакции. 4. Реакция иммобилизации трепонем (РИТ). Микроскопический метод Способ 1-микроскопия в темном поле, 2-3 капли жидкости из язвы наносят на предметное стекло, которое накрывают покровным. Микроскопируют в темном поле зрения (объектив 40×, окуляр 10×). Возбудитель сифилиса имеет вид двигающейся тонкой светлой спирали на темном фоне. Способ 2- мазок из полученной жидкости окрашивают по методу Романовского- Гимзы и микроскопируют. В препарате видна бледно-розовая спирохета. Способ 3- метод Левадити. Собранную жидкость импрегнируют серебром и микроскопируют. В препарате трепонема имеет вид черной спирали на светлом фоне. Иммунофлюоресценция (реакция строго специфична) Реакция Вассермана. Реакцию ставят по принципу реакции связывания комплемента. Отличается она тем, что при реакции Вассермана может быть использован неспецифический антиген. Например, липоидный экстракт из бычьего сердца- кардиоантиген. Ввиду не специфичности антител, реагирующих с этим антигеном, их называют реагинами. Реакция с неспецифическим антигеном объясняется тем, что в сыворотке крови больного повышается содержание глобулинов и изменяется степень их дисперсности. Глобулины, вступая в соединение с липидными экстрактами, образуют комплекс, который связывает комплемент, и поэтому гемолиз не происходит (в гемолитической системе). Отсутствие гемолиза-положительная реакция - серологически подтверждает диагноз «сифилис». При постановке серологических реакций нужно использовать также специфические антигены из тканевых трепонем и культуральные. 1) ++++ полная задержка гемолиза; - гемолиз; 2) антиген № 1 неспецифический (липоидная фракция бычьего сердца); 3) антигены № 2 и 3 специфические, приготовленные из культур трепо- нем. Осадочные реакции. 1. Реакция Кана. Сыворотку больного инактивируют при 56 °C 30 мин. К антигену (экстракт липидов бычьего сердца) прибавляют 0,6% холестерина для повышения чувствительности реакции. Учет результата: появление преципитации отмечается как положительная реакция. 2. Реакция Закса-Витебского (цитохолеваяосадочная реакция) является модификацией реакции Кана.Авторы применили более концентрированный антиген, ккоторому прибавлен холестерин, что способствует болеебыстрому образованию преципитата. Реакция иммобилизации трепонем (РИТ). Это ниболееспецифичная реакция в диагностике сифилиса.В настоящее время разработана методика этой реакции: взвесь трепонем получают из измельченного яичкакролика, зараженного T.pallidum, и сохраняют в специальной среде, не угнетающей подвижность трепонем. Впробирку вносят 1,7 мл взвеси тканевых трепонем, добав- ляют 0,2 мл испытуемой сыворотки, 0,1 мл свежего комплемента.Контроли: в 1-ю пробирку вместо испытуемой сыворотки вносят сыворотку здорового лица; во 2-юналивают инактивированную сыворотку морской свинки.Все пробирки помещают в эксикатор или анаэростат,заполняют их смесью газов (1 объем углекислоты и 19объемов азота) и ставят в термостат при 35°C. Затемисследуемый материал наносят на стекло и изучаютподвижность трепонем в темном поле. Принцип реакции заключается в том, что сыворотка больного сифили- сом в присутствии комплемента угнетает движение бледной трепонемы. Определяют процент иммобилизованныхтрепонем.Результат считают положительным, если иммобилизованных трепонем выше 50%; слабоположительным-от 30- 50%; отрицательным- ниже 20%. 3. Во время поликлинического приема к вам обратился больной К., 42 года, с жалобами на боли в животе, частый стул со слизью, температурой 38.20С. 1) Дизентерия, паратифы А и В, брюшной тиф (сальмонеллез). 2) Испражнения, моча ( Эндо, Плоскирева, В-С агар, в среду обогащения: Мюллера или Кауфмана), кровь (Эндо, Плоскирева), промывные воды желудка, рвота, пищевые продукты. 3) 1д-Эндо, ЭМС, Плоскирева, ВС, на селенит бульон -термостат. 2д- подозрит колонии(бесцвет) пересев на ср Олькеницкого или Расселя уколом в агар-й столбик. 3д-лак (- )культ исследуют дальше: мазок, окрашивают по Г, микроскопируют, при наличии Гр- пал -посев на ср Гисса, бульон с индик-ми бум-ми(для выяв индола и серовод-да) и на лакмусовое молоко, термостат на сут. 4д -учет рез-в. подозрит кол в отношении шигелл подверг серолог идентиф. 2билет 1. Строение бактериальной клетки. Жгутики,строение, химический состав значение, расположение. Методы выявления подвижности у микроорганизмов. Строение бактериальной клетки: Бактериальная клетка состоит из следующих частей: трехслойной оболочки, цитоплазмы с различными включениями и ядерного вещества (нуклеоида). Дополнительными структурными образованиями являются капсулы, споры, жгутики, пили. Оболочка-3-х слойная: 1) наружная (внешний, капсульный, слизистый)- полисахаридной природы состоит из гомо- и гетерополисахаридов у некоторого капсульного вещества может быть представлено полипептидом. Различают микро- и макрокапсулы. Микрокапсула обнаруживается только при электронной микроскопии состоящая из мукополисахаридов которая тесно приклепляется КС. Макрокапсула выраженный слизистый слой покрывающий КС образуется при попадании клетки в неблагоприятные условия. У некоторых микроорганизмов с капсулой связаны патогенетические свойства и АГ-структура. КС- поддерживает форм у клетки, отделяет от окружающей среды, сохраняет постоянное осмотическое давление. Участвует в регуляции роста и деления, обеспечивает коммуникацию с внешней средой через поры и каналы. Цитоплазма-плотно прилегает к КС с внутренней стороны. Она очень тонкая и сост. Из белков и фосфолипидов. Это полупрозрачный пограничный слой, через который осуществляется питание клетки. В цитоплазме находятся ядерное вещество, рибосомы и включения. Нуклиоид, ядерное вещество –у прокариотов в отл. от эукариотов ядро есть, но не оформленное. Рибосомы- находятся в цитоплазме кл. и выполняют функцию синтеза белка. В состав рибосом входит 60% РНК и 40% белка. Включения- гранулы, содержащие различные запасные питательные вещества: крахмал, гликоген, жир. Они расположены в цитоплазме. Жгутики-органы движения, характерны для палочковидных бактерий. Это тонкие нитевидные фибриллы, сост. Из белка -флагелина. Длина их превышает размеры бактериальной клетки. По расположению жгутиков бактерии делят на группы: монотрихи- с одним жгутиком (возбудитель холеры), амфитрихи – с пучками или единичными жгутиками на обоих концах клетки (спириллы), лофотрихи- с пучком жгутиков на одном конце клетки , перетрихи-жгутики расположены по всей поверхности клетки (кишечные бактерии). Скорость движения бактерий зависит от количества и расположения жгутиков. Химический состав: Важнейшими элеменатми являются органеллы ( углерод, водород, кислород, азот), которые используются для построения сложных органических веществ: белков углеводов и липидов. Микроорганизмы содержат также зольные и минеральные элементы. Вода. Все вещества поступают в клетку с водой, с ней же удаляются продукты обмена. Вода в микробной клетке находится в свободном состоянии как самостоятельное соединение, но большая ее часть связана с различными химическими компонентами и входит в состав клеточных структур. Свободная мвода принимает участие в химических реакциях, протекающих в организме, является растворителем различных химических соединений, а также служит дисперсной средой для коллоидов. Белки- определяют важнейшие биологические свойства микроорганизмов. Это простые белки- протеины и сложные- протеиды.Большое значение в жизнедеятельности клетки имеют нуклеопротеиды- соединение белка с нуклеиновыми кислотами. Белки распределены в цитоплазме , нуклеоиде, они входят в состав структуры клеточной стенки. К белкам принадлежат ферменты, многие токсины. Нуклеиновые кислоты- ДНК содержится в ядреи обуславливает генетические свойства мо. РНК принимает участие в биосинтезе клеточных белков, содержится в ядре и цитоплазме. Углеводы- 12-18% сухого вещества, используются микробной клеткой в качестве источника энергии и углерода. Из них состоят многие структурные компоненты клетки, Углеводы входят в состав тейхоевой кислоты, характерной для грамположительных бактерий. Клетки мо содержат простые ( моно- и дисахариды) и высокомолекулярные ( полисахариды) углеводы . Липиды 0,2-40% сухого вещества. Учавствуют в энергетическом обмене. Выполняют роль запаснных веществ. Состоят в основном из нейтральных жиров, жирных кислот, фосфолипидов. Минеральные вещества- фосфор, натрий. Калий, магний, сера. Железо, хлор и другие в среднем составляют 2-14% сухого вещества. Фосфор входит в состав нуклеиновых кислот,фосфолипидов, многих ферментов, а также атф. Натрий учавствует в поддержании осмотического давления в клетке. Железо содержится в дыхательных ферментах. Магний входитв состав рибонуклеата магния, который локолизован на поверхности грамполположительных бактерий. Для развития мо необходимы микроэлементв, содержащиеся в клетке в очень малых количествах. К ним относят кобальт, марганец, медь, хром, цинк, молибден. Метод обнаружения с помощью раздавленной и висячей капли. Раздавленная: на предметное стекло наносят пипеткой каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. Что бы не образовалось пузырьков воздуха, стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его. Микроскопируют при увеличении объектива 40 в темном поле. Висячая: для приготовления препарата необходимо стекло с лункой, покровное стекло, вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина. На покровное стекло наносят каплю культуры, затем осторожно накрывают покровное стекло стеклом с лункой, та чтобы капля оказалась в центре. Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Микроскопируют при малом увелич. 8, находят край капли, а затем при большом. |