Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
Входные ворота - это те органы и ткани организма хозяина, через которые проникают патогенные микроорганизмы. Роль микроорганизмов в развитии инфекционного процесса. Способность микроорганизмов вызывать патологические процессы в макроорганизме, т. е. заболевания, называется патогенностью (от лат. pathos--страдание. genos - рождение). Микроорганизмы, обладающие этой способностью, называются патогенными. Патогенность это генетически обусловленный видовой признак. Для большинства патогенных микроорганизмов характерна специфичность-способность данного вида микробов вызывать определенное заболевание. Например, холеру вызывает холерный вибрион, гонорею-гонококк и Т. д. Разные штаммы одного и того же вида могут обладать различным по патогенности действием. Степень или мера патогенности называется вирулентностью. Вирулентность, как и всякое свойство микроорганизма, может изменяться. Эти изменения носят либо фенотипический характер, либо являются результатом нарушений в геноме клетки клетки - тогда они передаются по наследству. Вирулентность микроорганизмов обусловлена их способностью к адгезии (прилипанию), колонизации (размножению), инвазии (проникновению в ткани, клетки макроорганизма) и подавлению фагоцитоза. Адгезия - способность адсорбироваться на определенных, чувствительных к данному микробу клетках организма хозяина Она обусловлена, с одной стороны, поверхностными структурами микробной клетки (пили и пр.), с другой - наличием рецепторов клетки макроорганизма, способных вступать в соединение с микробной клеткой. Колонизация может быть на поверхности клеток, к которым прилипли микробы (например, холерные вибрионы размножаются на энтероцитах), или внутри клеток, в которые проникают прилипшие микробы (например, дизентерийные палочки размножаются в клетках толстого отдела кишки). Инвазивность связана со способностью микробов продуцировать ферменты, нарушающие (повышающие) проницаемость соединительной и других тканей. К таким ферментам относятся: а) гиалуронидаза (фактор распространения), которая разрушает гиалуроновую кислоту соединительной ткани и тем самым способствует проникновению микробов в ткани; б) нейраминидаза, отщеляющая нейраминовую кислоту от гликопротеидов, глико-липидов, полисахаридов, входящих в состав разных тканей, и таким образом повышающая их проницаемость. Подавление фагоцитоза осуществляют капсулы бактерий. вещества, входящие в состав капсул различных микроорганизмов, неодинаковы и их функции тоже раз личны. Кроме перечисленных факторов, микробы защищаются от фагоцитоза некоторыми ферментами. Особое значение в вирулентности имеет способность микроорганизмов синтезировать токсины (яды). Токсины, образуемые микроорганизмами, делят на две группы-экзотоксины и эндотоксины. Свойства экзо- и эндотоксинов Экзотоксины 1.Белковой природыДиффундируют из клетки в окружающую среду 2.Высокотоксичны 3.Избирательно действуют на органы и ткани (специфичны) 4.Термолабильны 5.Под действием формалина переходят в анатоксин 6.Образуются в основном грамположительными бактериями Эндотоксины 1.Липополисахаридопротеиновый комплекс 2.Связаны с телом микробной клетки 3.Малотоксичны 4.Вызывают общие явления интоксикации 5.Термостабильны 6.Под действием формалина частично обезвреживаются 7.Образуются в основном грамотрицательными бактериями. 2.Возбудители бактериальных зооантропонозных инфекций. Бруцеллез.Характеристика биологических свойств возбудителей бруцеллеза. Методы микробиологической диагностики бруцеллеза. Бруцеллез – антропозоонозная инфекция, вызванная бактериями семейства Brucellaceae, рода Brucella. Типы бруцелл Бруцеллы относятся к роду Brucella, основные представители: B. melitensis– возб. бруцеллеза мелкого рогатого скота (овец, коз), патогенен для человека, имеет 3 биовара; B. abortus– возб. бруцеллеза крупного рогатого скота (болезни Банга), патогенен для человека, включает 7 биоваров; B. suis– возб. бруцеллеза свиней, патогенен для человека, имеет 5 биоваров; B. ovis– возб. инфекционного эпидидимита баранов и аборта овец, и др. Морфология Brucella: *коккобактерии, полиморфны;размер 0,6-0,8 × 0,3-0,5 мкм;неподвижны;спор не имеют;образуют нежную капсулу;грамотрицательные бактерии. Культуральные свойства Бруцеллы: -хемоорганотрофы -облигатные аэробы;требовательны к питательным средам;опт t 37°С и рН 6,8-7,2; на плотных питательных средах – нежные, мелкие, бесцветные, выпуклые с перламутровым блеском колонии в S-форме; в жидких – дают равномерную муть; Специальные питательные среды: *сывороточно-декстрозныйагар; агар из картофельного настоя с сывороткой и кровью (5% овечьей крови);среда «Д»;печеночный МПА и МПБ. Биохимические свойства Сахаролитические свойства выражены слабо, ферментируют глюкозу и арабинозу с образованием кислоты, некоторые штаммы бруцелл ферментируют декстрозу, галактозу, ксилозу, левулезу. Протеолитические свойства: не образуют индол, не разжижают желатин, не свертывают молоко, отличаются по способности образовывать сероводород: B. abortus и B. suis выделяют сероводород; B. melitensis образует его в незначительном количестве; Переводят нитраты в нитриты; Не обладают гемолитической активностью. Бруцеллы синтезируют каталазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу. Материал для исследования. Кровь(для гемокультуры). Берут из локтевой вены 5-10 мл стерильно Кровь. Берут из пальца 1-2 мл Моча. Берут стерильным катетером в стерильную посуду Грудное молоко. Собирают в стерильную посуду СМЖ. Берут специальной иглой в стерильную посуду Костный мозг. Берут стерильным шприцем в стерильную посуду Методы микробиологической диагностики (перечислить охарактеризовать). Бактериологический метод Кровь (в начале заболевания). 10-15 мл берут стерильным шприцем, лучше во время лихорадочного периода - это дает наибольший процент высеваемости. Кровь берут до лечения антибиотиками. Посев крови производят во флаконы (лучше прямоугольные, вместимостью 100-200 мл), в которые наливают по 30-50 мл агара. После стерилизации их укладывают так, чтобы агар застыл на одной стороне флакона. В каждый флакон заливают по 25-30 мл простерилизованного бульона. Эту среду выдерживают в термостате 2-3 дня, после чего добавляют взятую кровь по 5 мл в каждый флакон. Один флакон инкубируют при повышенном содержании СО2, а другой-в обычных условиях. Начиная с 4-го дня после посева флаконы просматривают, при отсутствии роста поверхность агара вновь орошают бульоном. При положительном результате на поверхности агара появляются колонии - мелкие, бесцветные, выпуклые с зернистостью. Так как колонии бруцелл мелкие, то целесообразно их изучать при помощи стереоскопического микроскопа или обычного микроскопа с объективом наименышего увеличения. Если в течение месяца колоний не обнаруживаются, делают контрольный высев на плотную питательную среду Костный мозг. Посевы производят так же как и кровь СМЖ. Идентификацию выросшей культуры проводят по культуральным свойствам, микроскопии окрашенных препаратов и по реакции агглютинации со специфической сывороткой (предварительно ставят реакцию микроагглютинации на стекле). У больных, страдающих хронической формой бруцеллеза в период обострения, перед началом лечения делают посевы пунктатов костного мозга и лимфа-тических узлов на специальную среду для выделения L-культур бруцелл. Идентификацию выросших L-форм колоний проводят по таким же показателям, как и у других бактерий. Серологическая диагностика -РПГА; РИФ;ИФА;реакция Кумбса, определения неполных антител; опсонофагоцитарная реакция, РА, РНГА, РСК – в поздние сроки .В ранние сроки заболевания определяют наличие IgM, в более поздние – IgG. При массовых обследованиях реакцию Хеддельсона проводят в сочетании с кожно-аллергической пробой Бюрне(её ставят с 15-20 дня). На ладонную поверхность предплечия в/к вводят 0,1 мл бруцеллина. При ГЗТ через 6-8 час появляется гиперемия кожи и болезненная отёчность. Учёт реакции через 24 час. ( недостаток – положительная реакция наблюдается у больных, переболевших и у вакцинированных). Реакция Хеддельсона не заменяет пробу Бюрне. Экспресс-методы: ПЦР Биологическая проба Стерильно взятые кровь, мочу, СМЖ, молоко, мокроту. Пробу ставят на белых мышах или морских свинках. Заражение исследуемым материалом можно проводить разными методами, однако лучшим является введение материала подкожно в паховую область. Этот способ дает возможность проследить развитие инфекционного процесса в лимфатических узлах. 15 билет 1.Генетика микроорганизмов. Понятие генотип, фенотип. Формы изменчивости (фено- и генотипическая). Мутации. Значение изменчивости в диагностике, профилактике и терапии инфекционных заболеваний. Способность живых организмов сохранять определенные признаки на протяжении многих поколений называется наследственностью. В процессе изучения наследственности оказалось, что каждое последующее поколение под влиянием различных факторов может приобретать признаки, отличающие их от предыдущих поколений. Это свойство называется изменчивостью. Полный набор генов, которым обладает клетка, называется генотипом. Гены подразделяются на структурные, несущие информацию о конкретных белках, вырабатываемых клеткой, и гены-регуляторы, регулирующие работу структурных генов. Мутации – это передаваемые по наследству структурные изменения генов. Крупные мутации (геномные перестройки) сопровождаются выпадением или изменением относительно крупных участков генома- такие мутации, как правило, необратимы. Мелкие (точечные) мутации связаны с выпадением или добавлением отдельных оснований ДНК. При этом изменяется лишь небольшое число признаков. Такие изменение бактерии могут полностью возвращаться в исходное состояние (ревертировать). Бактерии с изменёнными признаками называются мутантами. Факторы, вызывающие изменения – мутагены. Бактериальные мутации делятся на: 1. Спонтанные (самопроизвольные) мутации возникают под влиянием неконтролируемых факторов, т.е. без вмешательства экспериментатора. 2. Индуцированные (направленные) мутации появляются в результате обработки м.о спец. мутагенами (хим. в-ва, излучения и тд.). В результате мутаций также могут изменяться различные виды модификации. Значение изменчивости: Метода генной инженерии позволяют изменять структуру генов и включать в хромосому бактерий гены других организмов, ответственных за синтез важных и нужных веществ. Таким путём получают медицинские препараты, как инсулин, интерферон. При использовании мутагенных факторов факторов и селекции были получены мутанты-продуценты антибиотиков, которые в 100-1000 раз активнее исходных. 2.Возбудители бактериальных зооантропонозных инфекций. Сибирская язва Характеристика биологических свойств возбудителя сибирской язвы. Методымикробиологической диагностики. Возбудитель сибирской язвы относится к семействуBacillaceae , роду Bacillus, виду Вacillusanthracis. Морфология Bacillusanthracis: *крупные палочки 6-8 × 1-1,5 мкм с обрубленными или несколько *вогнутыми концами; грамположительные; в мазках располагаются попарно или в виде коротких цепочек; неподвижны; образуют: -капсулу, которая окружает всю цепочку; спору овальной формы, которая располагается в центре, не превышает поперечник микробной клетки. Культуральные свойства Bacillusanthracis: *факультативные анаэробы; не требовательны к питательным средам; опт t 35-38° С; опт рН среды 7,2-7,6. На МПА образуют крупные колонии с неровными бахромчатыми краями (R-форма). От края колонии отходят пучки нитей. В МПБ - характеризуется придонным ростом, на дне пробирки образуется осадок в виде комка ваты, при этом среда остается прозрачной. При посеве на 10-12% желатин после 2-3-дневной инкубации появляется рост по ходу укола в виде белых тяжей, уменьшающихся книзу - вид опрокинутой елочки. При посеве на МПА с пенициллином (на пластинчатом агаре) наблюдается распад бацилл на шары, цепь из которых напоминает жемчужное ожерелье. Биохимические свойства Сахаролитические свойства: расщепляют глюкозу, лактозу, мальтозу, левулезу и другие сахара до образования кислоты. Протеолитические свойства вызываютпептонизацию молока, свертывание молока (медленно), разжижение желатина, образуют сероводород и аммиак; Переводят нитраты в нитриты. Обладают диастатическими свойствами - гидролизируют крахмал, а так жеобразуют ферменты: диастазу, пероксидазу, липазу. Материал Содержимое везикул, карбункула, отторгнутый струп. Перед взятием материала кожу вокруг поврежденного участка осторожно очищают ваткой или кусочком марли, смоченными спиртом, материал берут стерильным шприцем или тампоном. Если материал необходимо переслать в лабораторию, содержимое карбункула набирают пастеровской пипет-кой, тонкий конец которой запаивают. При отсутствии пипетки можно взять нитку, прокипятить ее и опустить в открытый карбункул. После того как нитка пропитается гноем, ее подсушивают и помещают в стерильную пробирку. Гной из карбункула можно собрать адсорбентом (сахар, мел), погрузив его в гной с помощью пинцета, а затем перенести в стерильную пробирку. Мокрота. Собирают в стерильные широкогорлые банки Кал. То же Кровь(при генерализованной форме).Берут 3-5 мл стерильным шприцем из локтевой вены и засевают у постели больного в 50 мл бульона Хоттингера. Параллельно делают 2-3 тонких мазка на предметное стекло. Методы микробиологической диагностики 1 день 1.Микроскопический метод. 1)Приготовить мазки, фиксируют их в смеси Никифорова в течение 20 мин. Мазки окрашивают по Граму и микроскопируют. Для выявления капсул мазки окрашивают по Бурри-Гинсу. Наличие крупных грамположительных палочек, располагающихся единично, попарно или в виде коротких цепочек, заключенных в капсулу, дает право дать предварительный ответ. 2)Посев. Исследуемый материал засевают на МПА и МПБ. Посевы инкубируют в термостате при температуре 36-37 °C. Биологическая проба. Заражают лабораторных животных -белых мышей, морских свинок, кроликов. Исследуемый материал эмульгируют в изотониче-ском растворе натрия хлорида. Мышам вводят 0,1-0,2 мл исследуемого материала под кожу спины, морским свинкам- 0,2-0,5 мл под кожу живота. Мыши погибают от сибирской язвы через 1-2 дня, кролики и морские свинки - через 2-4 сут. Ускоренный биологический метод. Двум-трем белым мышам внутрибрюшинно вводят исследуемый материал. Через несколько часов из перитонеального содержимого делают мазки, окрашивают их и микроскопируют. Наличие в мазках типичных бацилл с капсулой дает право дать ответ. Второй день исследования 1. Изучение культуральныхсвойств колоний, выросших на плотной и жидкой питательной среде. Колонии на плотной питательной среде изучают под микроскопом при малом увеличении. 2.Выделение чистой культуры. При наличии подозрительных колоний выделяют чистую культуру на скошенный МПА. Посевы инкубируют в термостате. 3. Определение подвижности. Из бульонной культуры (рост в виде комка ваты на дне, бульон прозрачный) делают висячую каплю (для установления неподвижности - дифференциации от антра-койда). 4. Ставят тест «жемчужного ожерелья» (ускоренный метод исследования). С этой целью к бульону Хоттингера добавляют 30% инактивированной лошадиной сыворотки и пенициллин из расчета 0,5 ЕД на 1 мл бульона. Приготовленную среду разливают в пробирки п 2-3 мл и в каждую вносят 2 капли исследуемой бульонной культуры. Посевы инкубируют в термостате 3 ч при температуре 37 °С. Затем вынимают их из термостата. 5. Изучение морфологических свойств. Из каждой пробирки делают 2-3 мазка, высушивают на воздухе и фиксируют в жидкости Карнуа (6 частей этилового спирта + 3 части хлороформа + 1 часть ледяной уксусной кислоты). Фиксацию проводят до полного испарения жидкости. Полученные мазки окрашивают метиленовым синим и микроскопируют. В мазках сибиреязвенные бациллы обнаруживаются в виде цепи шаров, напоминающих жемчужное ожерелье-результат действия пенициллина. 6. Осматривают зараженных животных. Павших животных вскрывают, делают мазки и мазки-отпечатки, которые фиксируют, окрашивают и изучают под микроскопом. При наличии подозрительных палочек производят посевы на МПА и МПБ. Третий день исследования 1)Изучение морфологических свойств. На МПА и МПБ бациллы сибирской язвы растут в виде бескапсульных особей. 2)Определение ферментативной активности. Производят посев на сахара, лакмусовое молоко, желатин, на чашки с 2% кровью и ставят пробу с сибиреязвенным бактериофагом. Посевы инкубируют в термостате. Четвертый день исследования Вынимают посевы из термостата и учитывают полученные результаты Исследование мокроты, испражнений и крови после специальной обработки ведут так же. Аллергическая проба Для диагностики сибирской язвы используют аллергическую пробу с сибиреязвенным антигеном (антраксин). Для этого внутрикожно на внутренней поверхности предплечья вводят антраксин. Реакцию учитывают через 24-48 ч. Положительная реакция проявляется с первых дней заболевания. Реакция Асколи Реакцию ставят для обнаружения специфического антигена бацилл сибирской язвы в шерсти животных, коже, трупах, почве и т. д. Приготовление антигена: исследуемый материал измельчают в ступке, заливают 25-50-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида и кипятят (анти-ген термоустойчив). Полученный экстракт фильтруют через смоченную тем же раствором фильтровальную бумагу. Фильтрат-термоэкстракт- прозрачная жидкость. Для реакции используют преципитирующую сибиреязвенную сыворотку и для контроля сибиреязвенный антиген . Постановка реакции: 1-я пробирка - преципитирующая сыворотка+ исследуемый термоэкстракт; 2-я пробирка - преципитирующая сыворотка + стандартный сибиреязвенный антиген (контроль). 3-я пробирка – преципитирующая сыворотка + термоэкстракт из шерсти здорового животного (контроль). При положительной реакции в первых двух пробирках образуется преципитационное кольцо, в третьей - кольцо отсутствует. |