Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
Возбудитель ботулизма образует экзотоксины, которые отличаются по антигенным свойствам. По АГ-структуре продуцируемого экзотоксина клостридии ботулизма подразделяются на 7 серотипов: Cl. botulinum A; Cl. botulinum B; Cl. botulinum C; Cl. botulinum D; Cl. botulinum E; Cl. botulinum F; Cl. botulinum G. В патологии человека основную роль играют серотипы А, В, Е и редко - F. Токсинообразование Основным фактором патогенности возбудителя ботулизма является ботулинический экзотоксин – белок, обладающий нейротоксическим действием. Ботулотоксин является самым сильным ядом: 1 г кристаллического токсина содержит 10^12 смертельных для человека доз. Очень чувствительны мыши. К факторам патогенности возбудителей ботулизма относятся также ферменты агрессии: протеиназы, лецитиназа, декарбоксилазы. Методы микробиологической диагностики Материалом для исследования являются испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, остатки пищевых продуктов – возможные факторы передачи инфекции. 1этап Производится посев материала на дифференциально-диагностические среды (Эндо, Плоскирева, Левина, висмут-сульфит агар) для выделения чистой культуры сальмонелл или эшерихий, а также в конденсационную воду в пробирке со скошенным агаром. 2 этап. После инкубации посевов при температуре 37°С в течение 20 – 24 ч. отмечают цвет колоний на чашках с дифференциальной средой и наличие «ползучего» роста, характерного для протея, в пробирке со скошенным агаром. Подозрительные колонии пересевают на трехсахарный агар для получения чистой культуры и одновременно ставят с ними реакцию агглютинации на стекле, используя смесь диагностических сывороток к разным сероварам сальмонелл. 3 этап. С выросшей культуры на трехсахарном агаре делают мазок и определяют чистоту выделенной культуры, ставят реакции агглютинации с групповыми О сыворотками и монорецепторными Н- сыворотками и делают посев на среды «пестрого» ряда. При выделении одного и того же серовара сальмонелл из организма больного и пищевого продукта делают окончательное заключение об этиологии пищевой токсикоинфекции- факторе передачи инфекции. 3. . К врачу травматического пункта пришел на прием мужчина 37 лет. Минимальный – 15-45 дней, средний до 3-6 месяцев, максимальный – до года. 1.Длительность инкубационного периода зависит от близости поражения к голове и характера повреждения ткани. 2. В чем состоит сущность первой медицинской помощи, оказанной пострадавшему? Сущность первой медицинской помощи, оказанной пострадавшему состоит в том, чтобы как можно быстрее обработать рану и ввести вакцину Флори. 3. Какими препаратами и как прививают против бешенства? Специфическая профилактика.Введение антирабической вакцины, предложенной Пастером – взвесь мозговой ткани животного (кролика, мыши и др.), зараженного фиксированным вирусом бешенства. Имеются 2 типа вакцин: вакцина Ферми (содержит 1% фенол), Филлипса – (лицерин). Пользуются вакциной Флори – живая антирабическая вакцина, приготовленная из вирусов, культивированных в эмбрионах птиц. Принцип действия – интерференция вирусов. При укусах опасной локализации и для повышения эффективности вакцин применяют еще антирабический иммуноглобулин из сыворотки гипериммунизированных фиксированным вирусом лошадей. Имиммуноглобулин нейтрализует действие вируса и предупреждает поствакцинальные осложнения. Вакцинации подлежат все укушенные или обслюненные больными или подозрительными в отношении бешенства животными Неспецифическая – отлов и сокращение бешеных животных. 18 билет 1.Иммунитет (определение). Виды иммунитета (охарактеризовать). ИММУНИТЕТ – невосприимчивость организма ко всяким генетически чужеродным агентам, в том числе и болезнетворным микроорганизмам и их ядам. Он обеспечивается комплексом клеточных и гуморальных, специфических и неспецифических защитных реакций макроорганизма, благодаря которым поддерживается постоянство внутренней среды макроорганизма В зависимости от типа чужеродных агентов, обуславливающих развитие невосприимчивости различают: антибактериальный, антитоксический, противоопухолевый, трансплантационный и др. Различают 2 основных иммунитета: ВРОЖДЁННЫЙ (естественный) – естественная неспецифическая резистентность, обусловлена анатомо-физиологическими особенностями организма, закреплёнными на генетическом уровне; ПРИОБРЕТЕННЫЙ (искусственный) – формируется в течение всей жизни, носит индивидуальный характер и делится по механизму получения на 2 формы: Естественный иммунитет. Активный иммунитет формируется после перенесенного заболевания (его называют постинфекционным). Он длительно сохраняется: после кори, ветряной оспы, чумы и др. Но после некоторых заболеваний длительность иммунитета невелика и не превышает одного года (грипп, дизентерия и др.). Иногда естественный активный иммунитет развивается без видимого заболевания. Он формируется в результате скрытой (латентной) инфекции или многократного инфицирования небольшими дозами возбудителя, не вызывающими явно выраженного заболевания (дроб-ная, бытовая иммунизация). Пассивный иммунитет-это иммунитет новорож-денных (плацентарный), приобретенный ими через плаценту в период внутриутробного развития. Новорожденные могут также получить иммунитет с молоком матери. Этот вид иммунитета непродолжителен и к 6-8 мес, как правило, исчезает. Однако значение естественного пассив-ного иммунитета велико - он обеспечивает невосприимчи-вость грудных детей к инфекционным заболеваниям. Искусственный иммунитет.Активный иммунитет человек приобретает в результате иммунизации (приви-вок). Этот вид иммунитета развивается после введения в организм бактерий, их ядов, вирусов, ослабленных или убитых разными способами (прививки против коклюша, дифтерии, оспы). При этом в организме происходит активная перестрой-ка, направленная на образование веществ, губительно действующих на возбудителя и его токсины (антитела). Происходит также изменение свойств клеток, уничтожа-щих микроорганизмы и продукты их жизнедеятельно-сти. Развитие активного иммунитета происходит постепенно в течение 3-4 нед и сохраняется он сравнительнодлительное время--от 1 года до 3-5 лет. Пассивный иммунитет создают введением в организм готовых антител. Этот вид иммунитета возникает сразу после внесения антител 2.Пищевые токсикоинфекции, интоксикации. Ботулизм. Характеристика биологических свойств возбудителя ботулизма, токсикообразование. Методы микробиологической диагностики ботулизма. 1.Морфология Clostridiumbotulinum: *полиморфные палочки с закругленными концами, размером 4-9 × 0,6-1 мкм; *грамположительные; *образуют споры, которые располагаются субтерминально, величина споры превышает поперечник палочки, что придает вид теннисной ракетки; *капсул не образует; *подвижны (перитрихии). 2.Культуральные свойства Возбудитель ботулизма является: *строгим анаэробом; *опт t роста 28-35 C; *рН - 7,3-7,6; *требовательны к питательным средам. Для выращивания применяют: -среду Китта-Тароцци; -плотные питательные среды: печеночный агар, железосульфитный агар, глюкозно-кровяной агарЦейсслера. -В среде Китта-Тароцци и МПБ в анаэробных условиях рост клостридий ботулизма сопровождается равномерным помутнением и небольшим газообразованием, при этом отмечается запах прогорклого масла. На плотных питательных средах в анаэробных условиях: -печеночном или сахарном агареклостридии ботулизма формируют шероховатые колонии (R-форма); -кровяном агаре - колонии с ровными или изрезанными краями, блестящей поверхностью, окруженные зоной гемолиза; -железо-сульфитномагаре (среде Вильсона-Блера) - колонии черного цвета за счет образования сульфида железа под влиянием продуцируемого бактериями сероводорода; -желатиновой среде - сероватые колонии, окруженные зоной разжиженного желатина. Биохимическиеи свойства Сахаролитические свойства: ферментирует с образованием газа и кислоты: глюкозу, левулезу, мальтозу, глицерин, декстрин, салицин, адонит, инозит; не ферментирует галактозу, сахарозу, дульцит, маннит, арабинозу и рамнозу. Протеолитические свойства - гидролизуют желатин и эскулин; отдельные представители могут проявляют липазную активность. По биохимическим свойствам выделяют 4 группы Cl. botulinum: I группа обладают выраженными протеолитическими свойствами, ферментируют глюкозу и мальтозу, проявляют липазную активность (включает штаммы типа А, B и F); II группа не обладают сахаро- и протеолитической активностью; III группа обладают липазной активностью и слабыми протеолитическими свойствами (включает штаммы, продуцирующие токсины типов С и D); IV группа обладают протеолитической активностью, сахароитическую и липазную активность не проявляют (включает штаммы, продуцирующие токсины типа G). Антигенная структура В вегетативных клетках возбудителя ботулизма выявляют соматический О-антиген (групповой) и жгутиковый Н-антиген (типоспецифический). Эти антигены идентифицируются в реакции агглютинации. Возбудитель ботулизма образует экзотоксины, которые отличаются по антигенным свойствам. По АГ-структуре продуцируемого экзотоксина клостридии ботулизма подразделяются на 7 серотипов: Cl. botulinum A; Cl. botulinum B; Cl. botulinum C; Cl. botulinum D; Cl. botulinum E; Cl. botulinum F; Cl. botulinum G. В патологии человека основную роль играют серотипы А, В, Е и редко - F. Токсинообразование Основным фактором патогенности возбудителя ботулизма является ботулинический экзотоксин – белок, обладающий нейротоксическим действием. Ботулотоксин является самым сильным ядом: 1 г кристаллического токсина содержит 10^12 смертельных для человека доз. Очень чувствительны мыши. К факторам патогенности возбудителей ботулизма относятся также ферменты агрессии: протеиназы, лецитиназа, декарбоксилазы. Материал для исследования Рвотные массыБерут стеклянным шпателем 50-60 г в стерильные стеклянные банки Промывные воды желудка Берут 50- 100 мл в стерильные стеклянные банки Кал Берут 25-30 г. в стерильные стеклянные банки КровьБерут 6-8 мл из локтевой вены в стерильную пробирку до введения больному лечебной сыворотки Остатки пищевых продуктов Берут 100 г в стерильную посуду (из разных мест). Банки, пробирки с собранным материалом закрывают резиновыми или корковыми пробками. Bce собранные пробы этикетируют. Методы микробиологической диагностики. 1 день исследования 1. Подготовка материала к исследованию 1)рвотные массы.Помещают в стерильную ступку и тщательно растирают с равным или двойным объемом изотонического раствора натрия хлорида (в зависимости от плотности материала) 2)промывные воды желудка. При наличии комков растирают в стерильной ступ-ке с изотоническим раствором натрия хлорида 3)кал. То же 4)кровь. Смешивают с 4% раствором цитрата натрия в соотношении 3:1 (цитратная кровь) или отделяют сыворотку 5)пищевые продукты. Растирают в ступке с равным или двойным объемом изотонического раствора натрия хлорида (в зависимости от плотности материала). Материал делят на две части. 2.Посев одной части на питательные среды: бульон Хоттингера с 0,5% глюкозы, казеиново-грибную среду и др. Посевы инкубируют в анаэробных условиях (высокий столбик жидкой среды под вазелиновым маслом). 3. Биологическая проба. Вторую часть пробы выдерживают 30-40 мин для экстрагирования токсина. Затем экстракт фильтруют через ватно-марлевый фильтр либо центрифугируют. Полученный фильтрат или центрифугат разливают в 2 пробирки. К одной из них добавляют поливалентную антиботулиническую сыворотку и оставляют смесь на 30-40 мин для нейтрализации токсина. В опыт берут две пары мышей. Одной паре вводят внутримышечно или внутривенно по 0,5 мл фильтрата (или центрифугата). Другой паре мышей вводят такое же количество смеси филь-трата с 0,2 мл поливалентной противоботулинической сыворотки . За животными ведут наблюде-ние. Второй - четвертый дни исследования 1. Осматривают животных. Заболевание и гибель животных могут наступить в течение 1 -4 дней. Заболевание характеризуется появлением учащенного дыхания, расслаблением и западением мышц брюшной стенки (осиная талия), судорогами, параличом, после чего наступает гибель животного. Мыши, которым был введен центрифугат с противоботулинической сывороткой, остаются Живыми. В случае обнаружения в пробе ботулинического токсина ставят реакцию нейтрализации с типоспецифическими диагностическими сыворотками А, B, C. E, F, G (сыворотку D в СССР не выпускают). Для каждой сыворотки берут отдельный шприц. Мышии, получившие сыворотку, гомологичную токсину (типу), остаются Живыми. 2. Изучение культуральных свойств. Вынимают посевы из термостата. При наличии подозрительных колоний их выделяют на среду Китта-Тароцци для получения чистой культуры возбудителя и снова ставят реакцию нейтрализации, как указано выше. Пятый - шестой дни исследования 1.Изучают биологические свойства выделенной культуры: морфологию, подвижность, ферментативные свойства. При отрицательном результате биологической пробы с нативным материалом ее ставят повторно с выделенной культурой по той же схеме - для определения наличия и типа ботулинического токсина. Реакция нейтрализации: Биологическая проба с мышами (выше) 3.При исследовании шовного материала - шелка, взятого из бикса после стерилизации, определили, что он не стерилен! 1. Как правильно следует взять шелк из бикса для бактериологического исследования? Шелк сохраняют в спирте, а перед посевом моток шелка выдерживают 24 ч в стерильной дист воде. 2. Как подготовить шелк к проведению бактериологического исследования? Подготовленный шовный материал стерильным пинцетом извлекают из дист воды над пламенем горелки , кладут в чашку Петри, стерильными ножницами разрезают на куски 2-5 см. 3. Расскажите методику бактериологического исследования шелка на стерильность. Отдельные кусочки засевают на 2 пробирки сахарного бульона хоттингера и сабуро. Инкубируют 37 °C, 12-14 дней, просматривая их каждый день (посевы на среде Сабуро инкубируют при 20-22 °С). При наличии роста в пробирках материал- нестерильный. 4. Каким методом, при каком режиме необходимо производить стерилизацию шовного материала - шелка? В автоклаве 15-20мин при 2атм 19 билет. 1. Реакции иммунной сыворотки (перечислить). Механизм, значение, применение. РСК - принцип, ингредиенты, особенности подготовки, техника постановки основного опыта и контролей. Иммунные реакции – это реакции между антигеном и антителом или между антигеном и сенсибилизированными лимфоцитами, которые происходят в живом организме и могут быть воспроизведены в лабораторных условиях. Реакции антигена с антителом называются серологическими или гуморальными, потому что участвующие в них антитела (иммуноглобулины) всегда находятся в сыворотке крови. Реакция агглютинация (РА) - это реакция основанная на способности АГ бактерий специфически соединяться с АТ иммунной сыворотки в изотоническом растворе с образованием зерен, комочков, хлопьев. (осадок зависит от АТ, см. стр.190). Результат: ++++ все клетки осели, жидкость в пробирке совершенно прозрачна. Результат реакции резко положительный. +++ осадок меньше, нет полного просветления жидкости. Результат реакции положительный. ++ осадок еще меньше, жидкость мутная. Результат реакции слабо положительный. + незначительный осадок, жидкость мутная. Сомнительный результат реакции. - осадка нет, жидкость равномерно мутная, как в контроле антигена. Отрицательный результат реакции.Техника постановки РА:1.Ориентировочная реакция-реакция агглютинации на стекле, 2.Развёрнутая реакция РГА-реакция гемагглютинации В лабораторной практике пользуются двумя различными по механизму действия реакциями гемагглютинации (РГА). Первая РГА относится к серологическим. В этойреакции эритроциты агглютинируются при взаимодействии с соответствующими антителами (гемагглютининами). Реакцию широко используют для определения групп крови. Вторая РГА не является серологической. В ней склеивание эритроцитов вызывают не антитела, а особые вещества, образуемые вирусами. Эта реакция позволяет судить о наличии того или иного вируса в исследуемомматериале. Учет результатов. При положительном результате реакции на дне пробирки или лунки выпадает осадок эритроцитов с фестончатыми краями («зонтик»), покрывающий все дно лунки. При отрицательном результате эритроциты образуют плотный осадок с ровными краями («пуговку»). Такой же осадок должен быть в контроле. Интенсивностьреакции выражают знаками «плюс». |