Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
2. Вирусы – общая характеристика биологических свойств, классификация, особенности репликации. Методы вирусологической диагностики (охарактеризовать). Вирусы - неклеточный форма существования живой материи, мельчайшие организмы, которые по своей морфологии и биологическим свойствам отличаются от других организмов. Классификация В вирусологии используют таксономические категории: ЦАРСТВОVira делится на два подцарства: дезоксивирусы (ДНК – вирусы) и рибовирусы (РНК-вирусы); ПОДЦАРСТВА подразделяются на семейства (–viridae); СЕМЕЙСТВА подразделяются на роды(-virus); ВИД вируса не получил биноминального названия, как у бактерий. В основу классификации вирусов положены категории: тип НК; размер и морфология вирионов, количество капсомеров; тип симметрии; наличие суперкапсида; антигенные свойства. Репликация вирусов АДСОРБЦИЯ - пусковой механизм, связанный со взаимодействием специфических рецепторов вируса и хозяина. ПРОНИКНОВЕНИЕ - путем слияния суперкапсида с мембраной клетки или путем эндоцитоза (пиноцитоза). ОСВОБОЖДЕНИЕ нуклеиновых кислот - “раздевание” нуклеокапсида и активация нуклеиновой кислоты. СИНТЕЗ нуклеиновых кислот и вирусных белков, т.е. подчинение систем клетки хозяина и их работа на воспроизводство вируса. СБОРКА ВИРИОНОВ - ассоциация реплицированных копий вирусной нуклеиновой кислоты с капсидным белком. ВЫХОД вирусных частиц из клетки, приобретения суперкапсида оболочечными вирусами. Типы взаимодействия: Продуктивный тип – завершается образованием нового поколения вирионов и гибелью заражённых клеток. Некоторые вирусы выходят из клеток, не разрушая их. Интегративный тип (вирогения) – характеризуется встраиванием вирусной ДНК в виде провируса в хромосому клетки и их совместным сосуществованием. Культивирование и индикация Вирусы культивируют путем заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов и культур клеток. Присутствие вируса в исследуемом материале определяют с помощью методов индикации и идентификации. ИНДИКАЦИЯ ВИРУСОВ, т.е. неспецифическое обнаружение факта инфицирования, основана на выявлении биологических свойств вирусов и особенностей их взаимодействия с чувствительными клетками. ИДЕНТИФИКАЦИЯ означает установление вида или типа вируса. Осуществляется с помощью реакций иммунитета или молекулярно – генетических методов. Морфология: Все вирусы имеют общие черты строения – зрелые частицы вирусов называются вирионами. Он состоит из геномной нуклеиновой кислоты, окруженный одной или двумя оболочками – капсид. По своему строению вирусы можно разделить на 4 типа, которые различают по характеру упаковки морфологических субъединиц.Со спиральной симметрии нельзя нарушать оболочку без нарушения нуклеиновые кислоты 2. Вирусы с кубической симметрии, изомерические 3. С бинарной симметрией (фаги) 4. Более сложно организованные вирусы имеющие вторичную оболочку. Наиболее просто организованные вирусы представляют собой нуклеокапсид, состоящее из нуклеиновые кислоты и белковые оболочки, построенной из идентичных субъединиц капсомер. Более сложно устроенные вирусы, имеющие вторичную оболочку, которая получила название пеплос, или суперкапсид которая представляет собой биологическую мембрану состоящую из двух слоев липидов, имеющие клеточного происхождения и заключающие в них гликозилированныйсуперкапсидных вирусных белков которые выступают над поверхностью мембраны виде различных шипов. Они обладают следующими функциями: – распознают клеточные рецепторы и связывается с ними, образуют слияние вирусной мембраны с мембраны клетки хозяина; – способствуют распознав распрост ранению вируса за счёт слияния клеток; – большинство обладают свойствами протективных Антигенов. Классификация вирусов: 1. НК ( РНК, ДНК): число нитей, молекулярная масса. Методы вирусологической диагностики: 1. Вирусологический метод – обнаружение вирусов с помощью электронных микроскопов, или световых при специальном методе окраски. 2. Серологический – обнаружение АГ в сыворотке больного при помощи реакций: нейтрализации, РСК, РТГА, преципитации в геле, реакции иммунофлюоресценции, все эти же реакции могут быть использованы для обнаружения вирусных антигенов в исследуемом материале с использованием специфических иммунных сывороток. 3. Биологический метод. Заражение экспериментальных животных, куриные эмбрионы метод культуры тканей. 3.От ребёнка 7 лет, страдающего хроническим отитом, из гноя выделен пневмококк третьего сероварианта. 1.Форма клеток напоминает пламя свечи, располагаются попарно, уплощены сторонами друг к другу, каждая пара окружена капсулой – обнаружение которые имеют дифференциальное значения. Под капсулой располагаются белок – М, аналогичный по своим белкам других стрептококков, но имеющие свою Антигенную специфичность. Гр +, спор не образуют, неподвижны. 2. (реакция микроагглютинации). 4 капли экссудата из брюшной полости зараженной мыши наносят на предметное стекло. К первой капле прибавляют агглютинирующую сыворотку I типа, ко второй - сыворотку II типа, к третьей - III типа, к четвертой - изотонический раствор натрия хлорида (контроль). Сыворотки I и II типа предварительно разводят в соотношении 1:10, а сыворотку III типа - 1:5. Все капли размешивают, высушивают, фиксируют и окрашивают разведенным фуксином. При положительном результате в одной из капель отмечается скучивание микробов (агглютинация). 3.провести посев на чувствительность к антибиотикам 21 билет. Вакцины (определение), назначение. Виды вакцин и их получение. Методы введения. Вакцины - иммунобиологические препараты для создания искусственного активного специфического иммунитета с целью профилактики инфекционных заболеваний (реже - отравлений ядами, опухолей, неко-торых неинфекционных заболеваний). Виды: живые, но ослабленные штаммы микробов или вирусов (от ветряной оспы, гриппа, жёлтой лихорадки, кори, краснухи, полиомиелита, ротавирусной инфекции, эпидемического паротита); * убитые (инактивированные) микробы или вирусы (от бешенства, брюшного тифа, гепатита А, гриппа, клещевого энцефалита, коклюша, полиомиелита); * анатоксины (ослабленные или изменённые токсины) микроорганизмов (от дифтерии, столбняка); * субъединичные, в том числе синтетические вакцины, генно-инженерные и молекулярные (от гемофильной инфекции, гриппа, вируса папилломы человека, гепатита B, коклюша, пневмококковой и менингококковой инфекции Разработка и изготовление вакцин Разработка любой вакцины включает четыре этапа: * идентификация протективного антигена в экспериментах на животных Иммуногенность и безопасность новой вакцины сначала оценивают на животных; * поиск формы введения антигена, которая наилучшим образом обеспечивает иммунный ответ. Каждый испытуемый должен дать письменное согласие на участие в эксперименте. Небольшому числу испытуемых вводят возрастающие дозы вакцины, чтобы определить оптимальную дозу и оценить иммуногенность и безопасность; * клинические испытания безопасности и иммуногенности вакцины на людях разного возраста. Проводят клинические испытания на большой группе добровольцев, которых подвергают воздействию патогенного микроорганизма; * оценка безопасности и эффективности применения вакцины в восприимчивой популяции. Проводят широкомасштабные испытания вакцины на людях (1000-10000 человек). Только после этого вакцина может претендовать на лицензию. СПОСОБЫ ВВЕДЕНИЯ ВАКЦИН Вакцинацию можно проводить следующими способами: - орально - дозу вакцины закапывают в рот. После прививки в течение часа не разрешается прием пищи и жидкости.; - интраназально - препараты впрыскивают в носовые ходы, что способствует выработке не только общего, но и местного иммунитета.; - накожно (скарификационная вакцинация) оптимальна при иммунизации живыми вакцинами против особо опасных инфекций (чумы, туляремии и др.). Вакцины наносят на наружную поверхность плеча, а затем сухим оспопрививочным пером делают насечки через каплю.; - внутрикожно - введение вакцины осуществляется в области наружной поверхности плеча (живая вакцина против туберкулеза (БЦЖ)).; - подкожно - вакцинация используется для введения некоторых живых вакцин (коревой, паротитной и др.). Инъекцию делают в подлопаточную область или область наружной поверхности плеча.; - внутримышечно - вакцинация в основном используется для введения инактивированных вакцин, так как местная реакция при данном способе иммунизации менее выражена. Детям в возрасте до 3 лет вакцины рекомендуется вводить в переднебоковую часть бедра, детям старше 3 лет, Возбудители воздушно-капельных бактериальных инфекций. Коринобактерии. Дифтерия – характеристика биологических свойств возбудителя дифтерии, токсинообразование, идентификация биоваров. Методы микробиологической диагностики дифтерии. Возбудитель дифтерии относится к семействуCorynebacterium. Морфология. Возбудители дифтерии слегка изогнутые, тонкие палочки, размером 3--6×0,3-0,5 мкм, на концах которых имеются утолщения. В этих утолщениях имеются зерна волютина (зерна Бабеша- Эрнста). Бактерии дифтерии неподвижны, не имеют спор и капсул. Грамположительны. Они хорошо окрашиваются ос-новными анилиновыми красителями, при этом волютино-вые зерна окрашиваются интенсивнее. Для окраски обычно применяют щелочной метиленовый синий или кристал-лический фиолетовый. Особенностью коринебактерийдифтерии является их полиморфность; в одной кула-туре встречаются различные по форме и размерам палоч-ки: изогнутые, прямые, длинные, короткие, толстые, иногда коккобактерии. Характерно расположение бактерий в мазках - они обычно располагаются попарно под острым или тупым углом, в виде растопыренных пальцев и т. д. Расположение в мазках и наличие зерен волютина является дифференциально-диагностическим признаком при микроскопическом исследовании. Непатогенные представители рода коринебактерий - ложнодифтерийные палочки и дифтериоды чаще располагаются в виде частоко-ла, зерна волютина у них могут отсутствовать либо быть на одном конце. Культивирование. Коринебактерии дифтерии- факультативные анаэробы. Растут при температуре 35-37 °C, рН среды 7,4-7,8. Они не размножаются на обычных питательных средах. Культивируют их на сре-дах, содержащих кровь или сыворотку. В настоящее время основными средами для выращива-ния являются среда Клауберга (содержащая сыворотку крови и теллурит калия), хинозольная среда Бучина, среда Тинсдаля и др. На основании культуральных и фермента-тивных свойств коринебактерии дифтерии делят на три биовара: гравис (gravis), митис (mitis), интермедиус (intermedius). Биовар гравис обычно находится в R-форме. На среде Клауберга бактерии этого биовара растут в виде крупных колоний 2-3 мм, серовато-черного цвета (так как восстанавливают теллурит в теллур), имеют изрезан- ные края, что придает им вид розетки. При прикосновении к колонии петлей она как бы рассыпается. На бульоне бактерии этого биовара образуют крошащуюся пленку и зернистый осадок. Коринебактериибиоварамитис (mitis) на среде Кла-уберга растут в виде небольших, гладких колоний (S-форма) черного цвета. На бульоне они дают равномерное помутнение. Коринебактериибиовараинтермедиус (intermedius) являются промежуточными. На среде Клауберга бактерии этого биовара чаще растут в виде блестящих, мелких, черных колоний (этот биовар встречается редко). Ферментативные свойства. Все три биоварадифтерий-ных бактерий обладают ферментом цистиназой, расщепля-ющимцистин с образованием сероводорода. Эти свойства используются для дифференциации возбудителей дифтерии от непатогенных представителей этого рода Возбудители всех трех биоваров расщепляют глюкозу и мальтозу до образования кислоты. C.gravis расщепляют крахмал. Это свойство отличает его от двух других биоваров. Коринебактерии дифтерии восстанавливают нитраты в нитриты, не образуют индол, не разлагают мочевину. Коринебактерии дифтерии образуют нейраминидазу, гиалуронидазу и другие ферменты патогенности. Токсинообразование. Вирулентные штаммы возбудителей дифтерии продуцируют экзотоксин. Химически он представляет собой термолабильный белок, состоящий из двух фракций. Фракция В фиксирует токсин на чувствительных к нему тканях организма. Фракция А ответственна за токсическое действие. Силу токсина дифтерийных культур можно устанавливать «invivo» на чувствительных к этому токсину морских свинках. DIm дифтерийного экзотоксина-минимальная смертельная это минимальное количество доза, яда, убивающее морскую свинку массой 250 г на 4-й день. Наличие экзотоксина можно обнаружить также «invitro» - на плотной питательной среде. Этот метод широко используется в практической работе. Дифтерийный экзотоксин малоустойчив. Он быстро разрушается под влияни-ем температуры, света и кислорода воздуха. После добавления к токсину формалина (0,3-0,4%) и выдерживания его при температуре 37-38°С в течение нескольких недель он переходит в анатоксин, который теряет ядовитость, но сохраняет антигенные свойства токсина. Токсины, образуемые различными штаммами, не различаются между собой и могут быть нейтрализованы дифтерийным антитоксином Антигенная структура. У бактерий дифтерии имеется поверхностный термолабильный белковый антиген и ти-поспецифический полисахаридный О-антиген. Кроме это-го, среди коринебактерий различают 19 фаговаров, которые учитываются при идентификации культур. С помощью фаговаров выявляют источник заболевания. Методы микробиологической диагностики Материал: Слизь из носа, зева, глаза, гной из уха, отделяемое слизистой оболочки влага-лища, раны (из зева)1. Материал собирают натощак либо не раньше чем через 2 ч после еды и не ранее чем через 4 дня после лечения антибиотиками или другими антибактериальными средствами. 2. Если материал берут из зева и носа, то пробирки с обоими тампонами надписывают и связывают вместе. Посевы делают раздельно и исследование материала из каждого тампона ведут как самостоятельную работу. 3. Материал, собранный сухим тампоном, должен быть посеян не позднее чем через 2-3 ч после забора. При необходимости транспортировки собранного материала тампон предварительно смачивают 5% раствором глицерина в изотоническом растворе натрия хлорида. Ход исследования Первый день исследования 1.Изучение морф и тинктсвойств.При наличии в мазке палочек с характерной для возбудителей дифтерии морфологией можно дать предварительный ответ. 2.Посев производят на средуКлауберга или другие специальные среды для выращивания возбудителя дифтерии, разлитые в чашки Петри. Тампоном втирают исследуемый материал в среду, поворачивая его сначала на ограниченном участке, затем штрихами по всей поверхности отведенного для посева участка. При посевах материала, собранного для постановки диагноза, засевают всю чашку или ½2 часть ее, при посевах, проводимых с профилактиче-ской целью, засевают или ¼ чашки. Посевы ставят в термостат. Второй день исследования 1.Изучение культуральных свойствРост бактерий на среде Клауберга может быть замедлен из-за наличия ингибиторов в среде. В этом случае чашки ставят в термостат еще на 24 ч. Третий день исследования 1.Изучение культуральных свойствЧашки вынимают из термостата, просматривают их с помощью лупы или стереоскопического микроскопа. При наличии подозрительных колоний часть их под контролем стереоскопического микроскопа выделяют на агар с 25% сывороткой и на столбик со средой Пизу для определения фермента цистиназы. Из другой части колоний ставят пробу на токсигенн ость. 2.Изучение морф св колоний, снятых со среды Клауберга, коринебактерии дифтерии теряют свою специфичность: отсутствует зернистость, изменяется величина, расположение сохраняется. При посеве их на среды с сывороткой морфологическая специфичность возбудителей дифтерии восстанавливается. 3.Проба на наличие фермента цистиназы и определение токсигенностиявляются обязательными при идентификации возбудителей дифтерии. Если результат этих опытов, проведенных с частью колоний со среды Клауберга, недостаточно четкий или отрицательный, то опыт повторяют, используя выделенную чистую куль-туру. Проба на цистиназу. Проводят посев исследуемой культуры уколом в центр столбика среды Пизу. При положительной реакции через 18-24 ч по ходу укола наблюдается почернение, а вокруг черного стержня образуется темное облачко; почернение происходит в результате того, что фермент цистиназа расщепляет цистин, входящий в состав среды Пизу, и освободившаяся сера вступает в реакцию с ацетатом свинца- образуется сульфит свинца черного цвета. Дифтероиды и ложнодифтерий-ные палочки не содержат фермент цистиназу, поэтому при росте их на среде Пизу цвет среды не изменяется. Определение экзотоксина. Проводят методом диффуз-ной преципитации в геле. Метод основан на взаимодействии токсина с антитоксином. В тех участках агара, где эти компоненты взаимодействуют, образуется преципитат в виде закругленных линий. Методика определения: в чашки Петри разливают растопленный и охлажденный до 50 °С агар Мартена рН 7,8 (на агаре Мартена лучше продуцируется экзоток-син). Количество агара в чашке должно быть не 12-15 мл, чтобы сохранить прозрачность, В Толстом слое линии преципитации плохо видны. После застывания агара накладывают полоску стерильной фильтровальной бумаги, смоченной противодифтерийной антитоксической сывороткой. Испытуемую культуру засевают «бляшками». Посев производят петлей. Диаметр бляшек 0,8--1,0 см. Рассто-яние бляшек от края полосок бумаги 0,5--0,7 см, между двумя бляшками испытуемой культуры засевают бляшки заведомо токсигенного штамма. Испытуемую культуру считают токсигенной, если линии преципитации четки и сливаются с линиями преципитации контрольного (токси-генного) штамма. Если линии преципитации перекрещива-тся с линиями контрольного штамма или отсутствуют, выделеннуюкульгуру считают нетоксигенной. Приготовление полосок бумаги. Из фильтро-вальной бумаги нарезают полоски размером 1,5×8 см, заворачивают по несколько штук в бумагу и стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С в течение 30 мин. Перед постановкой опыта стерильным пинцетом вынимают одну полоску, укладывают ее в стерильную чашку Петри и смачивают противодифтерийной антитоксической сывороткой. Предварительно сыворотку разводят так, Чтобы в 1 мл содержалось 500 АЕ (антитоксических еди-ниц). Бумажку смачивают 0,25 мл сыворотки (125 AE) и помещают на поверхность среды. Затем делают посевы указанным выше способом. Все посевы ставят в термо-стат. Учет результатов производят через 18-24 и 48 ч. |