Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
Аллергическая проба Применяется для выявления инфицированности организма. В настоящее время пользуются внутрикожной пробой Манту. Вводят очищенный туберкулин в стандартном разведении в количестве 0,1 мл. У инфицированных микобактериями людей на месте введения образуется покраснение и припухлость. Положительной считается реакция при диаметре инфильтрата не менее 5 мм. Учитывают ее через 48 ч. 3. В лабораторию особо опасных инфекций доставлен контейнер с исследуемым материалом (испражнения, 1. При дизентерии - люминесцентная микроскопия ибиологическая проба на морских свинках. При введениивирулентных штаммов шигелл в конъюнктивальный мешок к концу 1-х суток у животных развивается конъюнктивит.При холере - реакция иммобилизации и люминесцентно-серологический метод. Реакция иммобилизации. На предметное стеклонаносят 2 капли испражнений или материала с поверхностипептонной воды. К 1-й капле добавляют одну каплю О-сыворотки (1:100), ко 2-й - каплю изотонического растворанатрия хлорида. Каждую каплю эмульгируют пастеровскойпипеткой или петлей, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом. При положительномрезультате в первой капле прекращается движениевибрионов (действие специфической сыворотки), во второй наблюдается движение. 2.Необходимо взять испражнения и посеять их на средыЭндо, Плоскирева, щелочной агар, щелочная пептоннаявода. При дизентерии появятся бесцветные, прозрачные колонии на средах Эндо и Плоскирева, а на остальных средахроста не будет (из-за щелочной среды). При холере нащелочном агаре образуются колонии желтого цвета на фонеголубоватой среды, а на поверхности пептонной воды появится пленка. 3. Кровь, моча, слизь из носоглотки и желчь, т.к. при холереи дизентерии нет генерализации инфекционного процесса. 4. Предварительный - 3 день, окончательный - 4 день. 23 билет. Аллергия, определение понятия. Виды аллергических реакций. Гиперчувствительность немедленного типа, механизм развития (привести пример). Аллергия (от лат. allos-иной, ergon--действие)-это состояние измененной, повышенной чувствительности организма к различным чужеродным веществам (антигенам). Вещества, вызывающие состояние повышенной чувствительности (гиперчувствительности) организма, называют аллергенами. Аллергенами могут быть: микроорганизмы (бактерии, вирусы, грибы), продукты распада микробных клеток; белки животного происхождения (яйца, молоко и др.); белки растительного происхождения (земляника, грибы и пр.); лечебные гетерологичные сыворотки и пр. Все эти вещества являются полноценными антигенами. Кроме того, аллергию могут вызвать гаптены-- вещества, которые становятся аллергенами после соединения с белками организма: производственные аллергены (красители, лаки, мыла и пр.); бытовые аллергены (пыль, шерсть собак и кошек, пух подушек и пр.); растительные аллергены (пыльца растений во время цветения и пр.); лекарственные вещества (антибиотики, аспирин и пр.). Аллергия-специфическая гиперчувствительность организма к различным агентам. B ее основе лежит реакция антиген - антитело. Впервые попадая в организм, одни аллергены образуют антитела, другие аллергены сенсибилизируют Т-лимфоциты. В том и другом случае организм приобретает повышенную чувствительность к повторной встрече с антигеном, который вызвал эти изменения. Эта повторная встреча может проявиться по-разному в зависимости от аллергена, характера иммунной перестройки организма. Все аллергические реакции делятся на две группы: реакции гиперчувствительности немедленного типа (ГНТ) и реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). В зависимости от формы аллергии проявляется реакция гиперчувствительности того или иного типа. Реакции гиперчувствительности: Немедленного типа (ГНТ): 1.Анафилаксия 2.Феномен Артюса - Сахарова 3.Сывороточная болезнь 4.Атопии (поллиноз, бронхиаль-ная астма, крапивница) Замедленного типа (ГЗТ): 1.Инфекционная аллергия 2.Контактные дерматиты 3.Лекарственная аллергия Анафилаксия (от лат. ana - против, phylaxis - защита) - это гиперчувствительность, проявляющаяся немедленно после повторного введения чужеродного антигена в виде шока или близких к нему состояний. Вещества, вызывающие анафилаксию, называют анафилактогенами. К ним относят чужеродные белки, бактериальные токсины, полисахариды микробной клетки, различные лекарственные вещества, т. е. и полноценные антигены и гаптены. Механизм анафилаксии. Первое введение анафилактогена (например, сыворотки лошади в организм морской свинки) вызывает специфическую сенсибилизацию. Возникают антитела (IgE), которые накапливаются в максимальном титре через 10-12 дней. Циркулируя в крови, эти антитела частично адсорбируются на клетках тела. Первая доза чужеродного белка, вызывающая сенсибилизацию, называется сенсибилизирующей. Обычно это очень небольшая доза (0,01-0,0001 мл лошадиной сыворотки для морской свинки). Сенсибилизация происходит при парентеральном введении антигена. Однако она может наступить и при прохождении антигенов через слизистую оболочку кишечника или легких. Развившееся состояние аллергии может сохраняться долго - несколько месяцев и даже лет. Повторное введение того же анафилактогена вызывает реакцию немедленного типа - анафилактический шок, от которого животное погибает. Условиями развития анафилактического шока являются: 1) повторная доза (разрешающая) должна превышать сенсибилизирующую в 10-100 раз; 2) разрешающая доза должна быть введена непосредственно в кровь. Семейство Энтеробактериациа. Род Шигеллы. Характеристика биологических свойств. Заболевания. Методы микробиологической диагностики дизентерии. Это короткие, не образующие спор, палочки с закругленными концами, подвижные (перитрихи) или неподвижные, некоторые имеют капсулы. Аэробы или факультативные анаэробы. Характерна отрицательная окраска по Граму. Хорошо растут на обычных питательных средах с мясном экстрактом. На большинстве плотных сред энтеробактерии образуют круглые выпуклые блестящие S- (гладкие) колонии, а также часто обусловленные потерей капсулы плоские, неровные и зернистые R- (шероховатые) формы. Для них характерна ферментация глюкозы (и других углеводов) с образованием кислоты и газа. По отношению к лактозе их делят на лактоза- ферментирующие и лактоза - неферментирующие. Каталаза - положительны, восстанавливают нитраты в нитриты.Наибольшее значение для человека имеют рода Escherichia, Salmonella, Shigella, Yersinia, Proteus, Klebsiella и др. Первый возбудитель дизентерии был открыт А. В. Григорьевым (1891), а в 1898 г. японский ученый Шига изучил и описал его. В последующие годы были выделены и описаны другие представители этого рода: Флекснер (1900), Зонне (1915), Штутцер-Шмитц (1917),Лардж-Сакс (1934). Согласно Международной классификации все бактерий, вызывающие дизентерию, в честь Шига объединены в один род-шигеллы. Морфология: это небольшие палочки с закругленными концами;размер 2-3 × 0,4-0,6 мкм;неподвижны;не имеют спор и капсул;грамотрицательны. Культуральные свойства :Факультативные анаэробы, Неприхотливы к питательным средам. Размножаются на МПА и МПБ при температуре 37° С и рН 7,2-7,4. Элективными и дифференциально-диагностическими средами для них являются среды Плоскирева, Эндо, ЭМС. Растут в виде небольших, полупрозрачных, сероватых, круглых колоний, размером 15-2 мм в S-форме. Исключением являются шигеллы Зонне, которые часто диссоциируют, образуя крупные, плоские, мутные, с изрезанными краями колонии R-формы. В жидких питательных средах шигеллы дают равномерную муть, R-формы образуют осадок. Биохимические свойства Сахаролитические свойства: они расщепляют углеводы без газообразования, не расщепляют лактозу и сахарозу. Исключением являются шигеллы Зонне, которые на 2-3-й сутки расщепляют эти углеводы. Протеолитические свойства: мало выражены - образование индола и сероводорода непостоянно, молоко они свертывают, желатин не разжижают. Антигенное строение Шигеллы содержат соматические антигены, к которым относятся групповые и типовые антигены. По Международной классификации шигеллы подразделяют на четыре группы, обозначаемые латинскими большими буквами А, В, С, D. Группа A– S. dysenteriae: 1 - Григорьева - Шиги; 2 - Штутцера - Шмитца; 3-7 - Лардж - Сакса и 8-10 - провизорные. Представители этой группы имеют только типовые антигены, обозначаемые арабскими цифрами. Группа В – S. flexneri. содержат типовые антигены, обозначаемые римскими цифрами, и групповые антигены, обозначаемые арабскими цифрами. Шигеллы Флекснера имеют 6 серовариантов Группа С – S. boydii. Имеет только типовые антигены. В этой группе 15 серологических типов. Группа D – S. sonnei имеет свой видовой антиген. Классификация - по ферментативным свойствам( расщеплению маннита): 1)Расщепляющие: Флекснера, Бойда, Зонне до кислоты; 2)Нерасщепляющие: Григорьева-Шиги, Штутцера-Шмитца, Лардж-Сакса. - по антигенной структуре(выше) Материал для исследования, правила взятия. Кал. Брать следует первые порции кала, так как шигеллы локализуются в слизистой оболочке толстого кишечника. 3-5 г испражнений, взятых из подкладного судна или горшка, предварительно продезинфицированных и хорошо промытых, помещают в глицериновую смесь. Сбор материала производят двойной алюминиевой петлей, вмонтированной в пробку пробирки. Петлю вводят в прямую кишку. Материалом для исследования могут также служить промывные воды кишечника, которые получают при помощи клизм. Секционный материал. 2-3 отрезка толстой кишки растирают в ступке, прибавляют изотонический раствор натрия хлорида в соотношении 1:5, 1:10. Полученную суспензию засевают для лучшего измельчения растирают со стерильным песком). Пищевые продукты. Материал собирают так же как при токсикоинфекциях. Микробиологическая диагностика дизентерии. 1 день 1)Взятие материала; 2) Посев материала. (Испражнения)При наличии в испражнениях гноя, слизи, крови эти примеси захватывают петлей, промывают изотоническим раствором натрия хлорида и наносят на чашку Петри с дифференциальной средой. Испражнения в глицериновой смеси эмульгируют (размешивают), каплю эмульсии наносят на среду и шпателем втирают ее. Дифференциальными средами для шигелл являются среды Плоскирева, Эндо и ЭМС. Среда Плоскирева - элективная среда, так как подавляет рост кишечной палочки и препятствует размножению бактериофага, который нередко находится в выделяемой культуре. Для получения изолированных колоний чашки Петри со средой перед посевом подсушивают в термостате. Затем на среду наносят каплю исследуемого материала, растирают его шпателем по поверхности на ограниченном участке, после чего втирают по всей поверхности среды. При посевах на две или три чашки каждый раз берут новую порцию материала, что увеличивает возможность выделения шигелл. С тех пор как для лечения дизентерии стали широко применять антибиотики (левомицетин, синтомицин) появились штаммы шигелл не только устойчивые к этим антибиотикам, но и зависимые от них, поэтому предложено добавлять к средам растворы часто употребляемых антибиотиков. Параллельно с прямым посевом собранный материал засевают на среду обогашения-селенитовый бульон. Посев производят в соотношении 1:4, 1:5. Все посевы ставят в термостат. Второй день исследования 1)Изучение культуральных свойств. Подозрительные колонии (бесцветные) в количестве 4-6 отсевают на среду Рассела и маннит. Посев производят штрихами по скошенной поверхности и уколом в агаровый столбик. Засеянную среду Рассела помещают в термостат на 18-24 ч (параллельно делают пересев из селенитовой среды на дифференциальные среды). Третий день исследования 1)Учёт результатов посева. Вынимают посевы, сделанные на среду Рассела, из термостата. Культуры, не расщепившие лактозу, подвергают дальнейшему изучению. 2) Изучение морфологических свойств.Делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии грамотрицательных палочек производят посев на среды Гисса, бульон с индикаторными бумажками (для выявления индола и сероводорода) и на лакмусовое молоко. Засеянные среды ставят в термостат на 18-24 ч. Четвертый день исследования 1)Вынимают посевы из термостата и учитывают результат. Культуры, подозрительные по своим ферментативным и культуральным свойствам в отношении шигелл, подвергают серологической идентификации. При отсутствий таких культур дают отрицательный ответ. Серологическая идентификация Вид, серовар, подсеровар выделенной культуры устанавливают при помощи адсорбированных сывороток. Анализ антигенной структуры начинают с реакции агглютинации на стекле со смесью № 1. В эту смесь входят сыворотки с антителами к шигеллам Зонне, Ньюкасл и поливалентная сыворотка к шигеллам Флекснера. При положительной реакции агглютинации со смесью выделенную культуру агглютинируют отдельно с каждой сывороткой, входящей в смесь. Положительная реакция агглютинации с адсорбированной сывороткой к шигеллам Зонне и Ньюкасл дает право дать ответ. Для установления серовара и подсеровара шигелл Флекснера необходимо дополнительно поставить реакции агглютинации с типовыми (I, II, III, IV, V) и групповыми (1-3, 4-6-7, 8) сыворотками. При отсутствии агглютинации со смесью № 1 ставят реакцию агглютинации с другими поливалентными сыворотками. При постановке реакции агглютинации следует учитывать отношение изучаемой культуры к манниту и в зависимости от этого использовать ту или иную сыворотку. Так, культуры, не расщепляющие маннит, испытывают с поливалентными сыворотками к шигеллам дизентерии Григорьева — Шиги и Штутцера — Шмитца (1, 2), Лардж -Сакса (3-7), провизорным типам (8-10). Культуры, расщепляющие маннит, испытывают со смесью № 1 и поливалентными сыворотками к шигеллам Бойда. При наличии агглютинации выделенной культуры одной из этих сывороток проводят испытание культуры с каждой из сывороток, входящих в поливалентную. Положительный результат с одной из сывороток определяет серовариант выделенной культуры. При использовании сыворотки к шигеллам Бойда агглютинацию начинают с сывороткой того серовара, который наиболее часто встречается в данной местности. В качестве ускоренных методов микробиологического исследования при дизентерии применяют люминесцентную микроскопию и биологическую пробу на морских свинках. При введении вирулентных штаммов шигелл в конъюнктивальный мешок (под нижнее веко) к концу 1-х суток у животных развивается коньюнктивит. 3. Для установления этиологии пневмонии и назначения рационального лечения больной Д. 27 лет, для исследования взяты - мокрота, 1.Микробиологическая диагностика пневмококковыхинфекций проводится в 3 этапа. I этап - взятие материала (если это мокрота, из нееготовят мазок, красят по Граму и микроскопируют) ипервичный посев на питательные среды - сывороточный или кровяной агар. II этап - выделение чистой культуры. Сначалапроводится изучение культуральных (сероватые колонии,круглые, выпуклые, с ровными краями) и биохимических (гемолитической активности) свойств; затем – приготовлениепрепарата-мазка, окраска его по Граму и изучениеморфологических и тинкториальных свойств (грам+ диплококки). Пересевают 2-3 подозрительные колонии наскошенный сывороточный агар. III этап. Проверяют чистоту выделенной культуры,проводят идентификацию. Для этого производят посев насреды Гисса, среду с оптохином, среду с инулином и лакмусовой настойкой, ставят пробу с желчью (1 млбульонной культуры + капля желчи). 2. a) S.aureus - лецитиназная, гемолитическая,плазмокоагулазная активность, ферментация маннита ванаэробных условиях, чувствительность к новобиацину. б) S.pneumonie - альфа-гемолитическая (зеленящая)активность, чувствительность к оптохину, лизис в желчномбульоне, расщепление инулина. b) S.piogenes - бета-гемолитическая активность, рост насреде с оптохином. 3. Предварительный - 2 день (после микроскопиикультуры), окончательный - 4 день. 4. Определитьчувствительностьвыделенногомикроорганизма к антибиотикам. 24 билет. Генетика микроорганизмов. Понятие генотип, фенотип. Формы изменчивости (фено- и генотипическая). Модификации. Диссоциация (S и R-формы колонии). Способность живых организмов сохранять определенные признаки на протяжении многих поколений называется наследственностью. В процессе изучения наследственности оказалось, что каждое последующее поколение под влиянием различных факторов может приобретать признаки, отличающие их от предыдущих поколений. Это свойство называется изменчивостью. Полный набор генов, которым обладает клетка, называется генотипом. Гены подразделяются на структурные, несущие информацию о конкретных белках, вырабатываемых клеткой, и гены-регуляторы, регулирующие работу структурных генов. Модификация(фенотипическая изменчивость) микроорганизмов возникает как ответ клетки на неблагоприятные условия ее существования. Это адаптивная реакция на внешние раздражители. Модификация не сопровождается изменением генотипа, в связи с чем возникшие в клетке изменения по наследству не передаются. При восстановлении оптимальных условий возникшие изменения утрачиваются. Модификация может касаться разных свойств микроорганизмов-морфологических, культуральных, биохимических и т.д. Морфологическая модификация выражается в изменениях формы и величины бактерий. Культуральная модификация состоит в изменении культуральных свойств бактерий при изменении состава питательной среды. Например, при недостатке кислорода у стафилококка утрачивается способность образовывать пигмент. Чудесная палочка при комнатной температуре образует ярко-красный пигмент, но при 37 °С способ-ность образовывать этот пигмент утрачивается и т. д. Биохимическая (ферментативная) модификация. Каждый вид бактерий имеет определенный набор ферментов, благодаря которым они усваивают питательные вещества. Значение изменчивости: Метода генной инженерии позволяют изменять структуру генов и включать в хромосому бактерий гены других организмов, ответственных за синтез важных и нужных веществ. Таким путём получают медицинские препараты, как инсулин, интерферон. При использовании мутагенных факторов факторов и селекции были получены мутанты-продуценты антибиотиков, которые в 100-1000 раз активнее исходных. Характеристика S- и R-форм колоний S-форма: Колонии гладкие, блестящие, правильной выпуклой формы, При ростевбульоне - равномерная муть, У подвижных бактерий имеются жгутики, У капсульных бактерий имеется капсула, Биохимически активны, Болезнетворны, Выделяются чаще в остром периоде заболевания R-форма:Колонии неправильной формы, мутные, шероховатые, Растут в бульоне в виде осадка У подвижных бактерий жгутики могут отсутствовать, Капсулы отсутствуют, Биохимические свойства выражены слабо, Большинство бактерий менее болезнетворны, Выделяются обычно при хронической форме заболевания. |