Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
Возбудители бактериальных кишечных инфекций. Холерный вибрион. Характеристика биологических свойств, АГ-структура и патогенетические свойства. Биоварианты и сероварианты холерного вибриона. Микробиологическая диагностика холеры. Холера (cholera) — острая антропонозная инфекционная болезнь с фекально-оральным механизмом передачи возбудителя, для которой типична массивная диарея с быстрым развитием обезвоживания. Относится к карантинным, особо опасным для человека инфекциям. Возбудители холеры представлены двумя биоварами. Биовар V. cholerae выделен и изучен Р. Кохом (1883) и биоварeltorвыделен Ф. Готшлихтом (1906). В течение длительного времени биовар Эль-Тор не считали возбудителем холеры. В 1962 г. по решению ВОЗ он был признан биоваром холерного вибриона. Морфология Холерные вибрионы: -короткие изогнутые палочки 1,5-3*0,2-06 мкм; -грамотрицательные; -подвижные, за счет жгутика; -спор и капсул не образуют; -располагаются параллельно, в мазке напоминают стаю рыб; Культуральные свойства: Холерные вибрионы: -факультативные анаэробы; -не требовательны к питательным средам; -щелочелюбивы; Опт t 37-39° С и рН 8-9. Хорошо растут на МПА и МПБ. Элективной средой является щелочная 1% пептонная вода. На поверхности этой среды они образуют нежную голубоватую пленку. На плотной среде TBRS (тиосульфатцитратсахарозныйагар с добавлением солей желчи) образуются колонии желтого цвета на фоне голубоватой среды. Холерные вибрионы диссоциируют из колоний S- в R-форму. Ферментативные свойства Сахаролитические свойства выражены в расщеплении сахаров до образования кислоты. Ферментируют глюкозу, сахарозу, маннит, маннозу. Отсутствие ферментации арабинозы; ферментация лактозы в течение 48 ч является важным диагностическим признаком. Протеолитические свойства: разжижают желатин, разлагают триптофан до образования индола, продуцируют оксидазу, восстанавливают нитраты в нитриты, свертывают молоко. Сероводород не образуют. Диастатические свойства: выражаются в расщеплении растворимого крахмала. Антигенная структура.Холерные вибрионы имеют термостабильный соматический О-антиген и термолабильный Н-антиген. Н-антиген не специфический и является общим для всего рода Vibrio. О-антиген обладает видовой и типовой специфичностью. По О-антигену холерные вибрионы делят на 54 группы. Vibriocholerae и Vibrioeltor относятся к О1 группе. Внутри 01 группы различают три компонента- A, В, С, по сочетанию которых выделяют три серовара. Сочетание АВ - сероварОгава, сочетание АС - сероварИнаба, сочетание АВС – сероварГикокшима. Токсинообразование Холерные вибрионы продуцируют токсины трех типов: I типа - эндотоксин, выделяется при разрушении микробной клетки, термостабилен липополисахарид. II типа - экзотоксин (холероген) термолабилен, обладает энтеротоксическим действием и играет важную роль в патогенезе холеры- усиливает функцию секреторных клеток тонкого кишечника, что приводит к обезвоживанию организма. III тип - термостабилен, считают, что он подавляет активный транспорт натрия через эпителий кишечника. Материал Испражнения(последняя порция) 1. 10-20 мл собирают металлической, деревянной или картоннойложечкой и переносят в стеклянные баночки с плотно закрывающимися пробками (корковыми или стеклянными). Под пробки закладывают пергаментную бумагу. Сверху пробку обвязывают двойным слоем вощеной или пергаментной бумаги. Этикетируют баночки до внесения в них материала 2. Собирать материал можно резиновым катетером, один конец которого вводят в прямую кишку, а другой опускают в стерильную баночку. При легком нажатии на брюшную полость жидкие испражнения попадают в сосуд Собирать материал можно петлей, сделанной из алюминиевой проволоки диаметром 2-3 мм, длиной 45-50 см. Петлю складывают вдвое, смачивают стерильным изотоническим раствором натрия хлорида и вводят в прямую кишку. Собранный материал помещают в консервирующую жидкость. Рвотные массы. 10-15 г собирают стерильной металлической ложечкой и переносят в широкогорлую баночку Секционный материал. Берут отрезки верхней, средней и нижней части тонкой кишки. С этой целью пинцетом или лигатурой перехватывают несколько участков кишки и ножницами отрезают участки между двумя перехватами. Содержимое переносят в стерильную баночку. Микробиологическая диагностика 1 этап 1) Взятие материала(выше). 2)Исследуемый материал: Испражнения, рвотные массы, секционный материал Посев производят из расчета: 0,5-1 мл исследуемого материала на 50-100 мл 1% пептонной воды. На плотную питательную среду (щелочной агар) материал засевают петлей. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С. Если есть основание предполагать, что выделению холерного вибриона мешает имещийся в исследуемом материале холерный фаг, то засевают на среды с антифаговой сывороткой. 3) Изучение культуральных свойств Приготовить препарат-мазок, фиксируют их в смеси Никифорова 15-20 мин, окрашивают карболовым фуксином и по Граму. При наличии грамотрицательных, сходных с холерным вибрионом бактерий, проверяют подвижность в висячей или раздавленной капле. 2 Этап Через 6-8 ч посевы на 1% пептонной воде вынимают из термостата. Пленку или материал с поверхности среды засевают на вторую пептонную воду и делают мазок, фиксируют, окрашивают карболовым фуксином и по Граму. Микроскопируют. Если в мазках обнаруживают сходные с холерным вибрионом подвижные бактерии, то ставят ориентировочную реакцию агглютинации с сывороткой. Для этого на обезжиренное предметное стекло наносят одну каплю О-сыворотки, разведенной в 100 раз. Контролем - капля изотонического раствора натрия хлорида. В обе капли вносят материал из пленки и тщательно эмульгируют. При наличии в капле сыворотки агглютинации и отсутствии ее в контроле пленку засевают на щелочной агар и инкубируют в термостате. 3 этап Изучение культуральных свойств 12-14 ч вынимают посевы из термостата. Изучают рост посевов на плотной питательной среде. При наличии подозрительных колоний отбирают не менее пяти и ставят реакцию агглютинации с О-сывороткой, разведенной 1:100, при наличии положительной реакции агглютинации можно поставить ориентировочную реакцию агглютинации с типовыми сыворотками Огава и Инаба (в разведении 1:50). Наличие положительной агглютинации при типичной морфологии и культуральных свойствах дает право дать предварительный положительный ответ. Посев на среду Ресселя для определения ферментативной активности и выделения чистой культуры, а также в бульон. Бульон инкубируют 3-4 ч при 37°С. С молодой бульонной культурой ставят развернутую реакцию агглютинации. 4 Этап Через 12-14 ч вынимают посевы из термостата. На полиуглеводной среде(Ресселя) изменяется цвет столбика (расщепление сахарозы). Скошенная часть не изменяется. Полученную культуру идентифицируют. Идентификация культуры 1.Изучение морфологических свойств, подвижности (в висячей и раздавленной капле). 2.Изучение культуральных свойств 3.Изучение антигенных свойств (в реакции агглютинации) 4.Изучение сахаролитических свойств. 5.Определение протеолитических свойств. 6.Определение гемолитических свойств. 7.Определение уреазной активности. 8.Изучение восстановительных свойств (реакция холера-рот). 9.Изучение диастатической активности. 10.Постановка реакции Фогеса -Проскауэра. 11.Проба на оксидазу. 12.Определение чувствительности к фагам. 13.Определение чувствительности к полимиксину. Изучение морфологических Свойств, подвижности и культуральных свойств проводят с первых этапов исследования. Определение антигенных свойств. Ставят развернутую реакцию агглютинации с видоспецифической холерной О-сывороткой и типоспецифическими сыворотками Огава и Инаба. Реакцию ставят в объеме 1 мл. Сыворотки разводят начиная с 1:50 до титра. К каждому разведению добавляют по 2 капли выделенной культуры, реакцию сопровождают контролем сыворотки и контролем культуры. Учи-тывают реакцию через 18-20 ч. Положительная реакция должна быть не менее половины титра сыворотки. Ферментацию углеводов определяют на средах Гисса. Результаты учитывают через 6-14 ч. Расщепление глюкозы, сахарозы, маннита, мальтозы и манозы при отсутствии ферментации арабинозы является диагностиче-ским показателем. Протеолитические свойства определяют путем посева выделенной культуры в столбик желатина; инкубируют при 22 °С 2-3 дня. Положительная реакция выражается в воронкообразном разжижении желатина. Гемолитические свойства определяют путем добавления к 1 мл 24-часовой бульонной культуры 1 мл 1% взвеси эритроцитов барана. Контролем служит 1 мл бульона +1 мл 1% взвеси эритроцитов. Обе пробирки инкубируют 2 ч при 37 °С. Затем переносят на холод. Учет производят через 16 ч. При положительном результате в опытной пробирке (V. eltor) эритроциты гемолизируются (лаковая кровь), в контрольной - неизмененная взвесь эритроцитов. V. cholerae гемолиза не вызывает. Уреазную активность определяют посевом выделенной культуры на среду с мочевиной. Положительный результат характеризуется изменением желтого ивета среды в красный. Изучение восстановительных свойств (реакция холера-рот). Холерные вибрионы восстанавливают нитраты в нитриты. При добавлении к 24-часовой культуре концентрированной серной кислоты из расчета 2-3 капли на 1 мл культуры освобождается азотистая кислота, которая, связываясь к индолом, образует новое соединение (нитрозоиндол). Среда окрашивается в рубиново-красный цвет. Диастатическую активность определяют на среде Кодама, содержащей растворимый крахмал. Индикатором служит раствор Люголя. Холерные вибрионы расщепляют крахмал, поэтому цвет среды после прибавления раствора Люголя не изменяется. Реакция Фогеса - Проскауэра. Исследуемую культуру засевают в среду Кларка. Посев ставят в термостат. После 2--3 дней инкубации посевы вынимают из термостата и к 1 мл выросшей культуры добавляют 0,6 мл а-нафтола и 0,2 мл 40% раствора гидроксида натрия. Положительная реакция характеризуется появлением красного окрашивания (за счет ацетилметилкарбинола). Проба на оксидазу. На поверхность 18-часовой агаровой культуры наносят каплю 1% водного раствора параамино-диметиланилина (гидрохлорида или оксалата), добавляют каплю 1% спиртового раствора а-нафтола. При положи-тельной реакции на оксидазу через 2--3 мин культура окрашивается в ярко-синий цвет. Определение чувствительности к фагам. Исследуемую культуру засевают на щелочной агар и наносят бактериофаг С Мукерджи IV типа и бактериофаг Эль-Тор. Реакцию учитысают через 14 - 16 ч Чувствительность к холерным фагам Классический фаг (С Мукерджи IV) - V. Choleraeлизируется Фаг Эль-Тор II - V. Eltorлизируется Определение чувствительности к полимиксину. В расплавленный и остуженный агар добавляют полимиксин (И3 расчета 50 ед. в 1 мл среды). Среду размешивают и разливают в чашки Петри. На застывшую среду петлей засевают выделенную культуру и инкубируют в термостатe. Через 8-10 г вынимают посевы из термостата. Холерные вибрионы не растут в присутствии полимиксина. Вибрионы Эль-Гор вырастают. 3. Пирожное со сливочным кремом хранилось при температуре 22°С более трех суток в открытом месте. 1.О стафилококковой этиологии, т.к не соблюдался температурный режим. 2. Берут с различных мест-50гр, стерил ложкой в стерил контейнер. 3.Сол МПБ 6%, ЖСА, МЖСА 4.По каким признакам определяется патогенность выделенного микроорганизма (возбудителя данной интоксикации)? 5.Лецитовит ак-ть, гемолиз, ДНК-за, маннит, новобиоцин, плазмакоагуляции 27 билет. Клеточный механизм иммунного ответа. Механизм взаимодействия антигена и антитела. Лимфоциты организма выполняют основную функцию в развитии иммунитета - невосприимчивости, не только по отношению к микроорганизмам, но и ко всем генетически чужеродным клеткам, например при пересадке тканей. Лимфоидные клетки обладают способностью отличать «свое» от «чужого» и устранять «чужое» (элиминировать). Родоначальницей всех клеток иммунной системы является кроветворная стволовая клетка. В дальнейшем происходит развитие двух типов лимфоцитов: Т и В (тимусзависимых и бурсазависимых). Эти названия клетки получили в связи с их происхождением. Т-клетки развиваются в тимусе (зобной, или вилочковой железе) и под влиянием веществ, выделяемых тимусом, в периферической лимфоидной ткани. Название В-лимфоциты (бурсазависимые) произошло от слова «бурса» — сумка. В сумке Фабрициуса у птиц развиваются клетки, сходные с В лимфоцитами человека. При развитии В-лимфоцитов из стволовой клетки они проходят несколько стадий и преобразуются в лимфоциты, способные образовывать плазматические клетки. Плазматические клетки в свою очередь образуют антитела и на их поверхности имеются иммуноглобулины трех классов: IgG, IgM и IgA . Иммунный ответ в виде продукции специфических антител происходит следующим образом: чужеродный антиген, проникнув в организм, прежде всего фагоцитируется макрофагами. Макрофаги, перерабатывая и концентрируя антиген на своей поверхности, передают информацию о нем Т-клеткам, которые начинают делиться, «созревают» и выделяют гуморальный фактор, включающий в антителопродукцию В-лимфоциты. Последние также «созревают», развиваются в плазматические клетки, которые и синтезируют антитела заданной специфичности. Так, соединенными усилиями макрофаги, Т- и В-лимфоциты осуществляют иммунные функции организма- защиту от всего генетически чужеродного, в том числе и от возбудителей инфекционных болезней. Защита с помощью антител осуществляется таким образом, что синтезированные к данному антигену иммуноглобулины, соединясь с ним (антигеном), подготавливают его, делают чувствительным к разрушению, обезвреживанию различными естественными механизмами: фагоцитами, комплементом. Механизм взаимодействия антигена и антител имеет различные объяснения. Наиболее полно механизм соединения антигена и антитела объяснен гипотезой Маррека (теория «решетки») и Полинга (теория «фермы») (рис. 33). Маррек рассматривает соединение антигена и антител в виде решетки, в которой антиген чередуется с антителом, образуя решетчатые конгломераты. Согласно гипотизе Полинга антитела имеют две валентности (две специфические детерминанты), а антиген несколько валентностей - он поливалентен. При соединении антигена и антител образуются агломераты, напоминающие «фермы» построек. При оптимальном соотношении антигена и антител образуются большие прочные комплексы, видимые простым глазом. При избытке антигена каждый активный центр антител заполнен молекулой антигена, не хватает антител для соединения с другими молекулами антигена и образуются мелкие, невидимые глазом комплексы. При избытке антител, для образования решетки не хватает антигена, детерминанты антител отсутствуют и видимого проявления реакции нет. На основании изложенных теорий специфичность реакции антиген - антитело сегодня представляют как взаимодействие детерминантной группы антигена и активных центров антитела. Так как антитела формируются под воздействием антигена, их структура соответствует детерминантным группам антигена. Детерминантная группа антигена и фрагменты активных центров антитела имеют противоположные электрические заряды и, соединяясь, образуют комплекс, прочность которого зависит от соотношения компонентов и среды, в которой они взаимодействуют. Возбудители раневых анаэробных инфекций. Столбняк Характеристика биологических свойств возбудителя столбняка. Методы лабораторной диагностики столбняка. ВОЗБУДИТЕЛЬ СТОЛБНЯКА Возбудитель столбняка Clostridium tetani описал Николайер в 1884 г. В чистой культуре получил Китазато в 1889 г. Морфология. С. tetani - палочки размером 4-8×0,4-1 мкм с закругленными краями. Подвижны. Жгутики располагаются перитрихиально. Капсул не образуют. Образуют споры шаровидной формы, расположенные терминально, что придает бацилле вид барабанной палочки. Грамположительные. Старые культуры иногда теряют способность окрашиваться по Граму. Споры при окраске по Граму или метиленовым синим имеют вид колечек . Культивирование. Возбудитель столбняка – строгий анаэроб. Высокочувствителен к кислороду. Поэтому палочки хорошо размножаются в глубине высокого столбика агара. Специальными средами для их выращивания служат: среда Вейнберга в модификации ЦИЭМ, среда Виллиса и Хоббса, среда Китта- Тароцци и др. Жидкие среды заливают слоем вазелинового масла для создания анаэробных условий. Перед посевом из среды удаляют кислород путем кипячения в водяной бане и быстрого охлаждения до температуры 40-50 °С. Возбудители столбняка растут при температуре 35-37°С и рН среды 6,8-7,4. На плотных питательных средах рост появляется на 3-4-й день. Выросшие колонии сероватого цвета, иногда прозрачные с неровной зернистой поверхностью и вытянутыми краями - R-форма. В высоком столбике агара C. tetani образуют колонии в виде пушинок, иногда колонии бывают темные и напоминают чечевичные зерна. На кровяных средах вокруг колоний отмечается зона гемолиза. При посеве возбудителей столбняка на среду Китта - Тароцци среда мутнеет. Рост на среде Вильсона - Блера характеризуется почернением среды. Посевы на чашках ставят в анаэростат. |