Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
2билет 1. Строение бактериальной клетки. Жгутики,строение, химический состав значение, расположение. Методы выявления подвижности у микроорганизмов. Строение бактериальной клетки: Бактериальная клетка состоит из следующих частей: трехслойной оболочки, цитоплазмы с различными включениями и ядерного вещества (нуклеоида). Дополнительными структурными образованиями являются капсулы, споры, жгутики, пили. Оболочка-3-х слойная: 1) наружная (внешний, капсульный, слизистый)- полисахаридной природы состоит из гомо- и гетерополисахаридов у некоторого капсульного вещества может быть представлено полипептидом. Различают микро- и макрокапсулы. Микрокапсула обнаруживается только при электронной микроскопии состоящая из мукополисахаридов которая тесно приклепляется КС. Макрокапсула выраженный слизистый слой покрывающий КС образуется при попадании клетки в неблагоприятные условия. У некоторых микроорганизмов с капсулой связаны патогенетические свойства и АГ-структура. КС- поддерживает форм у клетки, отделяет от окружающей среды, сохраняет постоянное осмотическое давление. Участвует в регуляции роста и деления, обеспечивает коммуникацию с внешней средой через поры и каналы. Цитоплазма-плотно прилегает к КС с внутренней стороны. Она очень тонкая и сост. Из белков и фосфолипидов. Это полупрозрачный пограничный слой, через который осуществляется питание клетки. В цитоплазме находятся ядерное вещество, рибосомы и включения. Нуклиоид, ядерное вещество –у прокариотов в отл. от эукариотов ядро есть, но не оформленное. Рибосомы- находятся в цитоплазме кл. и выполняют функцию синтеза белка. В состав рибосом входит 60% РНК и 40% белка. Включения- гранулы, содержащие различные запасные питательные вещества: крахмал, гликоген, жир. Они расположены в цитоплазме. Жгутики-органы движения, характерны для палочковидных бактерий. Это тонкие нитевидные фибриллы, сост. Из белка -флагелина. Длина их превышает размеры бактериальной клетки. По расположению жгутиков бактерии делят на группы: монотрихи- с одним жгутиком (возбудитель холеры), амфитрихи – с пучками или единичными жгутиками на обоих концах клетки (спириллы), лофотрихи- с пучком жгутиков на одном конце клетки , перетрихи-жгутики расположены по всей поверхности клетки (кишечные бактерии). Скорость движения бактерий зависит от количества и расположения жгутиков. Химический состав: Важнейшими элеменатми являются органеллы ( углерод, водород, кислород, азот), которые используются для построения сложных органических веществ: белков углеводов и липидов. Микроорганизмы содержат также зольные и минеральные элементы. Вода. Все вещества поступают в клетку с водой, с ней же удаляются продукты обмена. Вода в микробной клетке находится в свободном состоянии как самостоятельное соединение, но большая ее часть связана с различными химическими компонентами и входит в состав клеточных структур. Свободная мвода принимает участие в химических реакциях, протекающих в организме, является растворителем различных химических соединений, а также служит дисперсной средой для коллоидов. Белки- определяют важнейшие биологические свойства микроорганизмов. Это простые белки- протеины и сложные- протеиды.Большое значение в жизнедеятельности клетки имеют нуклеопротеиды- соединение белка с нуклеиновыми кислотами. Белки распределены в цитоплазме , нуклеоиде, они входят в состав структуры клеточной стенки. К белкам принадлежат ферменты, многие токсины. Нуклеиновые кислоты- ДНК содержится в ядреи обуславливает генетические свойства мо. РНК принимает участие в биосинтезе клеточных белков, содержится в ядре и цитоплазме. Углеводы- 12-18% сухого вещества, используются микробной клеткой в качестве источника энергии и углерода. Из них состоят многие структурные компоненты клетки, Углеводы входят в состав тейхоевой кислоты, характерной для грамположительных бактерий. Клетки мо содержат простые ( моно- и дисахариды) и высокомолекулярные ( полисахариды) углеводы . Липиды 0,2-40% сухого вещества. Учавствуют в энергетическом обмене. Выполняют роль запаснных веществ. Состоят в основном из нейтральных жиров, жирных кислот, фосфолипидов. Минеральные вещества- фосфор, натрий. Калий, магний, сера. Железо, хлор и другие в среднем составляют 2-14% сухого вещества. Фосфор входит в состав нуклеиновых кислот,фосфолипидов, многих ферментов, а также атф. Натрий учавствует в поддержании осмотического давления в клетке. Железо содержится в дыхательных ферментах. Магний входитв состав рибонуклеата магния, который локолизован на поверхности грамполположительных бактерий. Для развития мо необходимы микроэлементв, содержащиеся в клетке в очень малых количествах. К ним относят кобальт, марганец, медь, хром, цинк, молибден. Метод обнаружения с помощью раздавленной и висячей капли. Раздавленная: на предметное стекло наносят пипеткой каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. Что бы не образовалось пузырьков воздуха, стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его. Микроскопируют при увеличении объектива 40 в темном поле. Висячая: для приготовления препарата необходимо стекло с лункой, покровное стекло, вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина. На покровное стекло наносят каплю культуры, затем осторожно накрывают покровное стекло стеклом с лункой, та чтобы капля оказалась в центре. Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Микроскопируют при малом увелич. 8, находят край капли, а затем при большом. 2. Патогенные кокки.Гонококки. Характеристика биологических свойств. Патогенные свойства,заболевания.Методы микробиологической диагностики гонококковых инфекций. Нейсcерии – грамотрицательные аэробные кокки, относящиеся к роду Neisseria, включающему 8 видов: Neisseria meningitides, Niesseria gonorrhoeae, N. flava, N. subflava, N. perflava, N. sicca. Морфология: неподвижные неспорогенные грамотрицательные диплококки, образующие капсулу, полиморфны – встречаются в виде мелких или крупных форм а так же в виде полочек, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, бриллиантовым зелёным и т. д.), под действием пенициллина образуют L-формы, могут менять свойства и превратиться в грамположительную форму. Культуральные свойства: аэробы, хемоорганотрофы; для роста требуют свежеприготовленные влажные среды с добавлением нативных белков крови, сыворотки или асцитической жидкости . Не вызывают гемолиза на средах, содержащих кровь; на средах с добавлением молока, желатина и картофеля не растут. На плотных питательных средах через 24ч, при содержании протеина II образуют слегка мутные бесцветные колонии, не содержащие его образуют круглые прозрачные колонии в виде капель росы, на жидких питательных средах растут диффузно и образуют плёнку, через несколько часов оседающую на дно. Биохимическая активность: крайне низкая – разлагают только глюкозу, продуцируют каталазу и цитохромоксидазу, протеолитическая активность отсутствует, H2S, аммиака, индола не образует. Антигенная структура: Содержит А и К антигены, ЛПС обладают сильной иммуногенностью, основную антигенную нагрузку несут пили и белки мембраны. Наружная мембрана содержит протеины I, II, III классов, проявляющих сильные иммуногеннные свойства Факторы патогенности: капсула, пили, эндотоксин, белки мембраны Капсула обладает антифагоцитарным действием. Пили обеспечивают адгезию к эпителию. Клеточная стенка содержит эндотоксин. Поверхностный белок I класса – обеспечивает устойчивость к бактерицидным факторам слизистых оболочек. Класса II – (протеины мутности, ОРА-протеины) обуславливают прикрепление к эпителию, препятствуют фагоцитозу. N. синтезируют IgA протеазу, расщепляющую Ig. Микробиологическая диагностика: Бактериоскопическое исследование: Материалом для исследования служит гнойное отделяемое из уретры, влагалища, примой кишки, глотки, сыворотки крови. Готовят мазки, окраска по Граму, При «+» результате – обнаруживают гонококки – грам+ диплококки бобовидной формы., находятся внутри лейкоцитов. Положительный диагноз ставится при острой форме гонореи до применения антибиотиков. Бактериологическое исследование. Материал засевают на чашки Петри со специальными питательными средами — КДС, сывороточным агаром. Среда КДС содержит питательный агар с добавлением в определенной концентрации казеина, дрож жевого экстракта и сыворотки крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24—72 ч. Гонококки образуют круглые прозрач ные колонии, напоминающие капли росы, в отличие от более мутных колоний стрептококков или пигментированных колоний стафилококков, которые также могут расти на этих средах. Подо зрительные колонии пересевают в пробирки на соответствующие среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по сахаролитическим свойствам на средах «пестрого» ряда (по лужидкий агар с сывороткой и углеводом). Гонококк ферментирует только глюкозу с образованием ки слоты.. Серодиагностика. В некоторых случаях ставят РСК Борде — Жангу. В качестве антигена используют взвесь убитых гонокок ков. Реакция Борде—Жангу имеет вспомогательное значение при диагностике гонореи. Она положительна при хронической и осложненной гонорееподросткам и взрослым — в область дельтовидной мышцы плеча. 3. У больного, госпитализированного в хирургическое отделение по поводу холецистита, врач заподозрил брюшной тиф на основании клинических результатов исследования. ОТВЕТ: 1)Кровь – на гемокультуру, моча, кал. 2)Микробиологическим, серологическим, бактериологическим. 3)Сальмонеллы – мелкие палочки с закругленными концами, Гр-, подвижны – перитрихи, спор и капсул не обр-ют. Факульт анаэробы. Расщип-ют глюкозу, манит, мальтозу с обр-ем к-ты и газа , исключение s.tuphi- он расщип эти сахара только до к-ты. Большенство расщипляет белковые среды с обр-ем сероводороды. Индол не обр-ют, желатин не разщищают 3 билет 1. Рост и размножение микроорганизмов. Стадии размножения на жидких питательных средах (охарактеризовать). Под размножением понимаю способность м.о к самовоспроизведению, в результате чего увеличивается число особей в популяции. Размножение бактерий протекает путем поперечного деления. Перед делением бактериальной кл. происходит удвоение молекулы ДНК. Каждая дочерняя кл. получает копию материнской ДНК. Процесс деления считается законченным, когда цитоплазма дочерних кл. разделена перегородкой. Деление может быть 2-х видов: 1. Изоморфное-перегородка формируется в середине делящейся кл.,при этом образуются кл. одинаковой величины. 2.Гетероморфное-перегородка образуется ближе к одному из концов, кл. не одинаковых размеров. Деление кокков может происходить в различных плоскостях с образованием многообразных сочетаний клеток: цепочки, парные соединения(диплококки), тетрады кокков, тюки(сарцины), гроздья. Палочковидные и извитые формы делятся поперечно и только в одной плоскости. Размножение бактерий можно рассмотреть на жидких пит.ср. В результате роста и размножения можно выделить 4 фазы: 1.Стационарная-адаптацияой фигуры к питательной среде, подготовка к делению, начало деления. 2. Активный логарифмический рост кл. активно делятся, количество увелич. В геометрической прогрессии в конце фазы в результате накопления продуктов метаболизма протекает процесс отмирания клеток. 3.Стационрная, которая характеризуется тем, сто количество делящихся клеток становится равно количеству отмирающих (кратковременная ) (накопление продуктов метаболизма и заканчиваются питательные вещества). 4. Отмирание-количество делящихся резко сокращается, количество отмирающих постоянно нарастает. 2. Патогенные кокки.Пневмококки. Характеристика биологических свойств. Патогенные свойства,заболевания.Методы микробиологической диагностики пневмококковых инфекций. Пневмококки впервые были описаны Пастером, Шамберланом и Ру в 1871 г. Морфология и биологические свойства. Пневмококки представляют собой парно расположенные кокки овальной, слегка вытянутой ланцетовидной формы, напоминающие пламя свечи. Они могут располагаться также короткими цепочками, напоминая стрептококки. В организме человека и животных образуют капсулу; при выращивании на искусственных средах она отсутствует. Неподвижны, спор не образуют, грамположительны. По типу дыхания — факультативные аэробы. На простых питательных средах не растут или дают скудный рост. Выращивают их на средах с добавлением белка: кровяных, сывороточных, с асцитической жидкостью. На кровяном агаре колонии пневмококков мелкие, напоминающие росинки, прозрачные в проходящем свете, с вдавленным центром, окружены зоной неполного гемолиза, зеленоватого оттенка, сходные с колониями зеленящего стрептококка. На жидких средах дают нежное помутнение, иногда образуя осадок. Биохимически довольно активны: разлагают глюкозу, лактозу, мальтозу, инулин и другие углеводы с образованием кислоты, не разжижают желатина, не образуют индола. Расщепление инулина является дифференциально-диагностическим признаком, помогающим отличить пневмококки от стрептококков, которые инулин не разлагают. Важным отличительным признаком служит способность пневмококков растворяться в желчи, в то время как стрептококки хорошо в ней сохраняются. Токсинобразование. Пневмококки содержат эндотоксин, а также гемотоксин, фибринолизин, лейкоцидин, гиалуронидазу. Вирулентность пневмококка связана с веществом капсулы. В ней находится антифагин, препятствующий фагоцитированию лейкоцитами пневмококков. Антигенная структура. У всех пневмококков имеется один общий видовой протеиновый антиген, находящийся в цитоплазме. В капсуле пневмококков имеются различные полисахариды, специфичные для каждого типа. В настоящее время пневмококки делят по капсульному антигену на 80 типов. Считают, что наибольшее значение в патологии человека имеют I, II и III типы, но с каждым годом выявляется патогенность новых типов. Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования являются мокрота, кровь, мазок из зева, спинномозговая жидкость. Ввиду того что пневмококк быстро погибает, патологический материал необходимо как можно скорее доставить в лабораторию для исследования. Из этого материала готовят мазки, окрашивают их по Граму и по методу Гинса, а затем микроскопируют. Обнаружение ланцетовидных диплококков, окруженных бесцветной капсулой, дает основание предположить наличие пневмококков. Затем производят микробиологическое исследование патологического материала. С этой целью делают посев на кровяной агар и сывороточный бульон. Одновременно используют биологический метод, вводя внутрибрюшинно исследуемый материал двум белым мышам. Уже через 4-6 часов у них появляются первые признаки заболевания. Мышей под наркозом вскрывают или отсасывают пунктат из брюшной полости. Кусочки внутренних органов, кровь или пунктат засевают в сывороточный бульон и на кровяной агар. На следующий день просматривают посевы, отмечают характер роста, микроскопируют, выделяют чистую культуру. Для дифференциации от стрептококка делают посев исследуемой культуры в пробирку с 10% желчным бульоном и в среду с инулином. Если через 24 ч инкубации в термостате в пробирке с желчным бульоном произошло полное просветление среды (вследствие лизиса микробов), а в пробирке инулином— покраснение ее, указывающее на разложение инулина, выделенную культуру относят к пневмококкам. Для определения типа пневмококка ставят реакцию агглютинации с противопневмококковыми сыворотками 3. У больного П., 32 года, на 8 день болезни участковый врач диагностировал брюшной тиф под вопросом. Диагноз поставлен по типичной клинической картине 1) Произвести посев на: Эндо, Плоскирева. 2) Брюшной тиф. 3) Используется серологическая диагностика. Однако ее методы, могут показать заболевания только, начиная с 5-го – 8 –го дня с начала заболевания. Максимум возможностей достигает на 2 –ой и 3- ей неделях болезни. Так же применяется реакция Видаля, а также РПГА – они используются для диф диагностики, сцелью отличия от болезней схожими симптомами ( паратиф, сальмонеллез). 4) Соблюдение личной гигиены, проведение санитарно – гигиенических мероприятий 4билет 1. Ферменты микроорганизмов. Классификация: эндо- и экзоферменты, адаптивные и конститутивные. Значение ферментативной активности для идентификации микроорганизмов. Ферменты-это вещества белковой природы, вырабатываемые живой клеткой Они являются катализаторами и играют важную роль в обмене веществ микроорганизмов. Микроорганизмы могут синтезировать самые разнообразные ферменты, относящиеся к 6 известным классам; оксиредуктазы, трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы, лигазы. Активность ферментов зависит от температуры среды,Ph и других факторов. Для многих патогенных микроорганизмов оптимальное значение ph-7.2-7.4 и оптимальная температура 37-50. Ферменты микроорганизмов классифицируются на: -Экзоферменты: выделяются во внешнюю среду, расщипляют макромолекулы питательных веществ до более простых соединений, которые могут быть усвоены питательной клеткой. К экзоферментам относят гидролазы, вызывающие гидролиз БЖУ. Белки расщипляютсяна аминокислоты и пептоны. Жиры-на жирные кислоты и глицерин. Углеводы на дисахариды и моносахариды. Распад белков вызывают ферменты протеазы, жиров- липазы, углеводов- карбогидразы. -Эндоферменты; учавствуют в реакциях обмена вещества, происходящих внутри клетки. Конститутивные ферменты постоянно находятся в микробной клетке независимо от условий существования. Это в основном ферменты клеточного обмена: протеазы, липазы, карбогидразы и тд. Индуктивные (адаптивные) ферменты синтезируются в клетке только под влиянием соответствующего субстрата, находящегося в питательной среде и когда микрооганизм вынужден его усваивать. Индуктивные ферменты позволяют микробной клетке приспособиться к изменившимся условиям существованиям. Наряду с ферментами обмена многие патогенные бактерии выработыват также ферменты агрессии, которые служат для преодаленияестественных защитных барьеров микроорганизма и являются факторами патогенности (гиалуронидаза, дезоксирибонуклеаза (днк), лецитовителаза). |