Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
2.Семейство Энтеробактериациа. Род Сальмонелла. Характеристика биологических свойств. Классификация сальмонелл по Кауфману и Уайту. Заболевания. Методы микробиологической диагностики тифо-паратифозных заболеваний. Бактерии этого семейства являются наиболее частыми возбудителями кишечных инфекций. Это короткие, не образующие спор, палочки с закругленными концами, подвижные (перитрихи) или неподвижные, некоторые имеют капсулы. Аэробы или факультативные анаэробы. Характерна отрицательная окраска по Граму. Хорошо растут на обычных питательных средах с мясном экстрактом. На большинстве плотных сред энтеробактерии образуют круглые выпуклые блестящие S- (гладкие) колонии, а также часто обусловленные потерей капсулы плоские, неровные и зернистые R- (шероховатые) формы. Для них характерна ферментация глюкозы (и других углеводов) с образованием кислоты и газа. По отношению к лактозе их делят на лактоза- ферментирующие и лактоза - неферментирующие. Каталаза - положительны, восстанавливают нитраты в нитриты. Наибольшее значение для человека имеют рода Escherichia, Salmonella, Shigella, Yersinia, Proteus, Klebsiella и др. Род Сальмонелла. Сальмонеллы делят на монопатогенные и полипатогенные. К первым относятся возбудители брюшного тифа,паратифа А и паратифа В. Этими заболеваниями болеет только человек. Ко второй группе относятся возбудители заболеваний, поражающие человека и животных. S. typhi впервые были обнаружены Эбертом (1880) в органах человека, погибшего от брюшного тифа. Ашар и Бансод (1886) при заболеваниях, сходных с брюшным тифом, выделили из гноя и мочи больных бактерии, отличающиеся по биохимическим и серологическим свойствам от возбудителей брюшного тифа. Их назвали S. paratyphi А и S. paratyphi B. Почти одновременно американский ученый Д. Сальмон (1885) впервые описал возбудителей холеры свиней (S.choleraesuis). В дальнейшем было описано множество сходных бактерий, объединенных в род Сальмонелла, названного по имени ученого, их описавшего. Морфология. Все сальмонеллы мелкие, 1,0-3,0×0,6-0,8 мкм палочки с закругленными концами. Грамотрицательны. Подвижны, перитрихи. Спор и капсул не образуют. Культивирование. Сальмонеллы – факультативные анаэробы. Они не требовательны к питательным средам. Хорошо растут на МПА и МПБ при 37 °С (от 20 до 40°C) и рН среды 7,2-7,4 (от 5,0 до 8,0). На МПА образуют нежные, полупрозрачные, слегка выпуклые, блестящие колонии, в МПБ-равномерное помутнение. При первичном посеве материала от больных (кал, моча, рвотные массы, кровь, желчь) часто отмечают медленный рост сальмонелл. Для их накопления производят посев на среды обогащения: селенитовый бульон,среду Мюллера, среду Кауфмана. Используют также элективные (избирательные) среды: желчь (10-20%) и среду Раппопорт. На дифференциально-диагностических средах Эндо,ЭМС, Плоскирева сальмонеллы растут в виде бесцветных колоний, так как не расщепляют лактозу, входящую в состав среды. На висмут-сульфитном агаре через 48 ч они образуют колонии черного цвета, оставляющие след после того, как их снимают петлей (кроме сальмонелл паратифа А). У свежевыделенных культур S.paratyphi В после инкубации в термостате в течение 18-20 ч и выдерживания при комнатной температуре в течение 1 -2 сут на периферии колонии образуется слизистый вал. Ферментативные свойства. Сальмонеллы расщепляют глюкозу, маннит, мальтозу с образованием кислоты и газа. Исключением являются возбудители брюшного тифа (S.typhi), которые расщепляют эти сахара только до кислоты. Сальмонеллы не ферментируют лактозу и сахарозу. Протеолитические свойства: большинство сальмонелл расщепляет белковые среды с образованием сероводорода (возбудители паратифа А отличаются отсутствием этого свойства). Индол не образуют. Желатин не разжижают. Токсигенность. Сальмонеллы содержат эндотоксин-липополисахариднопротеиновый комплекс. Антигенная структура и классификация. Сальмонеллы содержат два антигенных комплекса: О и Н,О-антиген - липополисахариднопротеиновый комплекс;он термостабилен, инактивируется под действием формалина. Н-антиген связан со жгутиками, имеет белковую природу; он термолабилен, инактивируется под действием спирта и фенола, но устойчив к воздействию формалина.Все сальмонеллы разделены на О-группы, каждая из которых характеризуется наличием определенных О-антигенов: основного, обозначенного арабской цифрой (2, 4, 7, 8, 9 и т. д.), и дополнительных, общих для нескольких О-групп (1, 12). В настоящее время известно более 60 О-групп, обозначаемых прописными буквами латинского алфавита (А, В, С, D, Е и т. д.). S.typhi содержит, кроме того, Vi-антиген, который расположен в микробной клетке более поверхностно, чем О-антиген, и препятствует агглютинации культуры с О-сывороткой. Этот антиген термолабилен. Его присутствие связывали с вирулентностью возбудителя. Vi-антиген содержится также в клетках S. paratyphi C.Н-антигены сальмонелл имеют две фазы. Сальмонеллы различных серовариантов одной О-группы имеют различную первую фазу Н-антигена, которую обозначают строчными буквами латинского алфавита: а, b, с, d, eh… u, z и т. д. Вторую фазу Н-антигена обычно обозначают араб- скими цифрами: 1, 2, 5, 6, 7 и строчными латинскими буквами. Сочетание различных О- и Н-антигенов определяет антигенную структуру культур и их название. При употреблении продуктов, зараженных сальмонеллами различных сероваров кроме(S.typhi, S.paratyphiA и B), возникают пищевые токсикоинфекции. Брюшной тиф, паратифы А и В Источник инфекции. Больной человек и бактерионоситель. Пути передачи. Возбудители инфекции передаются через предметы, загрязненные выделениями человека,через руки, воду, пищу. Часто возбудителей переносят мухи. В зависимости от путей передачи различают бытовые, водные, пищевые вспышки брюшного тифа и парати- фов. Заражение происходит через рот. Из ротовой полости микроорганизмы попадают в желудок, где частично разрушаются под воздействием желудочного сока и ферментов. Оставшиеся сальмонеллы поступают в тонкий кишечник, проникают в лимфоидную ткань тонкого кишечника (групповые лимфатические и солитарные фолликулы), в которой размножаются в течение инкубационного периода (10-14 дней). К концу этого срока возбудители поступают в лимфу и кровь (бактериемия) и разносятся по всему организму. В этот период они локализуются в лимфоидной ткани внутренних органов, системе макрофагов, печени, селезенке, костном мозге. Сальмонеллы накапливаются в желчном пузыре, где находят благоприятные условия для размножения, так как желчь- хорошая питательная среда для этих бактерий. При этом они вторично попадают в тонкий кишечник и, поражая уже сенсибилизированную лимфоидную ткань (групповые лимфатические и солитарные фолликулы), вызывают образование специфических брюшнотифозных язв (рис. 42). В период бактериемии часть микроорганизмов разрушается, при этом освобождается эндотоксин и возникают явления интоксикации: повышается температура, появляется общее недомогание, слабость, головная боль и т. д. С конца 2-й и начала 3-й недели сальмонеллы начинают выделяться из организма с калом, мочой,слюной и т. п. Период реконвалесценции (выздоровления) характеризуется очищением организма от возбудителя, уси- лением фагоцитарной активности клеток, накоплением антител в крови. Однако при брюшном тифе и паратифах бактериовыделение часто не заканчивается с выздоровлением больного- формируется бактерионосительство. Хронические воспалительные явления в желчном пузыре способствуют переживанию сальмонелл в желчи и их длительному выделению из организма (иногда до нескольких лет). Материал для исследования 1. Кровь. 2. Испражнения. 3. Моча. 4. Дуоденальное содержимое. В зависимости от стадии болезни исследуют разный материал. Исследованию могут быть также подвергнуты содержимое розеол, костный мозг, мокрота и материал, получерный на вскрытии - кусочки органов. При токсикоинфекциях материалом для исследования могут служить промывные воды желудка, рвотные массы,остатки пищевых продуктов. Основные методы исследования : бактериологичсекий и серологический. Первый день исследования Посев материала на дифференциальные среды и среды обогащения (селенитовую и др.). На среду Плоскирева и среду висмут-сульфит агар засевают в 2 раза больше материала, чем на среду Эндо, так как в первой имеются факторы, задерживающие рост; на селенитовую среду посев производят в соотношении 1:5. Второй день исследования Вынимают чашки из термостата (инкубация 18-24 ч) и просматривают выросшие колонии невооруженным глазом и при помощи лупы. Несколько (5-6) подозрительных колоний выделяют на среду Олькеницкого или Рассела. Посев производят следующим образом: снятую колонию осторожно, не задевая края пробирки, вносят в конденсационную жидкость, затем штрихами засевают всю скошенную поверхность среды и делают укол в глубину столбика для выявления газообразования. Укол следует производить в центр агарового столбика. Пробирки с посевами ставят в термостат Третий день исследования Вынимают пробирки с посевами из термостата и просматривают характер роста.. Расщепление глюкозы происходит только в условиях анаэробиоза. Поэтому скошенная поверхность среды при расщеплении глюкозы не изменяется, а столбик окрашивается в цвет, соответствующий индикатору. Бактерии, расщепляющие лактозу и мочевину, изменяют цвет всей среды.Если выделенные культуры сбраживают лактозу или расщепляют мочевину, меняя цвет всей среды, то они не являются сальмонеллами и можно дать отрицательный ответ.Культуру, расщепляющую только глюкозу, подвергают дальнейшему изучению: делают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. При наличии в мазках грамотрицательных палочек изучают их подвижность и ферментативные свойства. Подвижность можно определить в висячей капле или в раздавленной капле, а также по характеру роста в полужидкой среде Гисса или в 0,2% агаре. При наличии подвижности при посеве уколом рост на среде диффузный, среда мутнеет. Для выявления ферментативной активности производят посев на среды Гисса, МПБ, пептонную воду. В пробирки с последними средами опускают (под пробку) индикаторные бумажки для определения индола и сероводорода. Делают также посев на лакмусовое молоко. Четвертый день исследования Учитывают биохимическую активность по результату ферментации углеводных и других сред . Определив морфологические, культуральные и ферментативные свойства выделенной культуры, необходимо провести анализ антигенной структуры . Серологическую идентификацию сальмонелл начинают с реакции агглютинации на стекле с поливалентной О-сывороткой А, В, С, D, Е. При отсутствии агглютинации выделенную культуру испытывают с поливалентной О-сывороткой к редким группам сальмонелл. При положительной реакции с одной из сывороток культуру испытывают с каждой О-сывороткой, входящей в состав поливалентной, для определения О-серогруппы. Установив принадлежность культуры к О-группе, определяют ее Н-антигенны с сыворотками первой, а затем второй фазы .Культуру сальмонелл тифа испытывают также с Vi-сывороткой. Возбудители брюшного тифа, содержащие Vi-антиген, испытывают Vi-фагами. Методика фаготипирования. 1-й метод. В чашки Петри наливают 20- 25 мл агара и подсушивают с открытыми крышками в термостате. Дно чашки делят на секторы. На каждом секторе пишут название фага. Изучают 4-6- часовую бульонную культуру, так как она содержит больше Vi-антигена. На поверхность агара наносят 8-10 капель бульонной культуры и стеклянным шпателем растирают ее по поверхности агара. Чашки с посевами подсушивают с открытыми крышками в термостате. На каждый сектор наносят каплю соответствующего типового фага. После подсыхания капель чашки ставят в термостат на 18-24 ч. Результат учитывают невооружен- ным глазом или с помощью лупы через дно чашки. Наличие лизиса культуры одним или несколькими типовыми фагами позволяет определить принадлежность выделенного штамма к определенному фаготипу. 2-й метод. На питательную среду культуру наносят каплями. На каждую каплю после высыхания культуры в термостате наносят каплю типового фага. Ставят в термостат.Степень лизиса выражают по четырехкрестной системе. Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифа. Реакция Видаля. Для постановки реакции Видаля используют сыворотку больного, набор диагностикумов, изотонический раствор натрия хлорида. Реакцию ставят раздельно с О- и Н-антигенами (диагностикумы). Так как клинически брюшной тиф и паратифы А и В сходны, то для выявления природы заболевания сыворотку больного испытывают одновременно с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифа А и В. Поставить реакцию можно двумя способами: капельным и объемным. В практике чаще используют объемный метод. При постановке линейной реакции агглютинации количество рядов должно соответствовать количеству антигенов (диагностикумы). Возбудителем заболевания считают микроорганизм, диагностикум из которого агглютинировался сывороткой больного. Иногда отмечают групповую агглютинацию, так как возбудители тифа и паратифов обладают общими групповыми антигенами. В этом случае положительным считают результат реакции в ряду, в котором агглютинацию отмечают в большем разведении сыворотки.Если агглютинация возникает только в небольших разведениях сыворотки - 1:100, 1:200, то для отличия реакции при заболевании от прививочной или анамнестической прибегают к повторной постановке реакции агглютинации через 5-7 дней. У больного титр антител повышается, а у привитого или переболевшего не изменяется. В ответ на внедрение в организм возбудителей брюшного тифа, обладающих Vi-антигеном, в крови больного появляются Vi-агглютинины. Их определяют со 2-й недели болезни, но титр их обычно не превышает 1:10. Обнаружение Vi-антител связывают с наличием в организме возбудителей брюшного тифа, поэтому определение этих антител имеет большое эпидемиологическое значение, так как позволяет выявить бактерионосителей. Реакция Vi-гемагглютинации. Принцип реакции заключается в том, что эритроциты человека (I группы) или барана после специальной обработки могут адсорбировать на своей поверхности Vi- антиген и приобретают при этом способность агглютини- роваться соответствующими Vi-антителами. Эритроциты с адсорбированными на поверхности антигенами называют эритроцитарными диагностикумами. Для постановки реакции Vi-гемагглютинации берут: 1) сыворотку крови больного (1-2 мл); 2) эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум; 3)Vi-сыворотку; 4) О-сыворотку; 5) изотонический раствор натрия хлорида. Учет начинают с контроля. Реакцию оценивают в зависимости от степени агглютинации диагностикума. Результаты учитывают по четырехкрестной системе: ++++ эритроциты полностью агглютинированы осадок на дне лунки в виде «зонтика»; +++ «зонтик» меньше, не все эритроциты агглютинировались; ++ «зонтик» маленький, на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов; - реакция отрицательная; эритроциты не агглютинировались и осели на дно лунки в виде пуговки. 3. Юноша П., 17 лет, заявил врачу, что он заразился гонореей от женщины, больной гонореей и состоящей на учете в диспансере. Последний факт при проверке подтвердился. 1. Сообщить родителям. 2. Вакцины, АБ, презервативы. 3. Микроскопический, серологический, микробиологический. 4. Гонококки – это диплококки, состоящие из 2-х бобовидных кокков, лежащих вогнутыми сторонами друг к другу формы, Гр-, неподвидны 5 билет 1. Питание, типы питания микробной клетки. Механизм поступления питате Питание- в качестве питательных веществ и источников энергии микроорганизмы используют различные органические и неорганические соединения, для нормальной жизнедеятельности им требуется также микроэлементы и факторы роста. Типы питания определяются по характеру усвоения углерода и азота. По усвоению углерода микроорганизмы делят на 2 типа: Автотрофы- способны синтезировать сложные органические вещества из простых неорганических соединений. Автотрофами являются многие почвенные бактерии. Гетеротрофы- для своего роста и развития нуждаются в готовых органических соединениях. Они могут усваивать углерод из углеводов, многоатомных спиртов, органических кислот, аминокислот. Гетеротрофы представляют обширную группу микроорганизмов, среди которых различают: Сапрофиты- получают готовые органические соединения от отмерших организмов. (бактерии гниения) Паразиты- живут и размножаются за счет органических веществ живой клетки растений, животных или человека. (вирусы, некоторые простейшие) По способу усвоения азота: Аминоавтотрофы- для синтеза белка клетки используют молекулярный азот воздуха или усваивают его из аммонийных солей. Аминогетеротрофы- получают азот из органических соединений- аминокислот, сложных белков. (все патогенные микроорганизмы) По источникам энергии среди микроорганизмов различают: Фототрофы- используют для биосинтетических реакций энергию солнечного света. Хемотрофы- которые получают энергию за счет окисления неорганических веществ и органических соединений. Транспорт питательных веществ Транспорт питательных веществ в клетку и выход из нее продуктов метаболизма осуществляется через цитоплазматическую мембрану. Питательные вещества проникают в клетку несколькими способами: 1.Пассивная диффузия- перемещение веществ через толщу мембраны, в результате чего выравниваются концентрация веществ и осматическое давление по обе стороны оболочки. Таким путем могут проникать питательные вещества, когда концентрация в среде значительно превышает концентрацию веществ в клетке. 2.Облегченная диффузия: проникновение питательных веществ в клетку с помощью активного переноса их особыми молекулами-переносчиками- пермиазами. Без затраты энергии. 3.Активный транспорт: осуществляется также с помощью пермиаз, но этот процесс требует затрату энергии. В этом случае питательное вещество может проникнуть в клетку, если концентрация его в клетке значительно выше концентрации в среде. 4. В ряде случаев транспортируемое вещество может подвергаться химической модификации и такой способ переноса веществ получил название переноса радикалов или транслокации химических групп. По механизму передачи этот процесс сходен с активным транспортом. Выход веществ из микробной клетки осуществляется или в виде пассивной диффузии, или в процессе облегченной диффузии с участием пермиаз.льных веществ в клетку. 2. Семейство Энтеробактериациа. Род Эшерихия. Характеристика биологических свойств. Классификация диареегенных кишечных палочек. Заболевания. Методы микробиологической диагностики эшерихиозов. (Продолжить) Бактерии этого семейства являются наиболее частыми возбудителями кишечных инфекций.. Это короткие, не образующие спор, палочки с закругленными концами, подвижные (перитрихи) или неподвижные, некоторые имеют капсулы. Аэробы или факультативные анаэробы. Характерна отрицательная окраска по Граму. Хорошо растут на обычных питательных средах с мясном экстрактом. На большинстве плотных сред энтеробактерии образуют круглые выпуклые блестящие S- (гладкие) колонии, а также часто обусловленные потерей капсулы плоские, неровные и зернистые R- (шероховатые) формы. Для них характерна ферментация глюкозы (и других углеводов) с образованием кислоты и газа. По отношению к лактозе их делят на лактоза- ферментирующие и лактоза - неферментирующие. Каталаза - положительны, восстанавливают нитраты в нитриты.Наибольшее значение для человека имеют рода Escherichia, Salmonella, Shigella, Yersinia, Proteus, Klebsiella и др. Род Escherichia. Эшерихии - наиболее распространенные аэробные бактерии кишечника, способные при определенным условиях вызывать обширную группу заболеваний человека, как кишечной (диарея), так и внекишечной (бактеремия, инфекции мочевыводящих путей и др.) локализации. Основной вид - E.coli (кишечная палочка) - самый распространенный возбудитель инфекционных заболеваний, вызываемых энтеробактериями. Этот возбудитель является показателем фекального загрязнения, особенно воды. Коли - титр и коли - индекс часто использовали как санитарные показатели. Эшерихии входят в состав микрофлоры толстого кишечника млекопитающих, птиц, пресмыкающихся и рыб. Культуральные свойства. На жидких средах E.coli дает диффузное помутнение, на плотных средах образует S- и R- формы колоний. На основной для эшерихий среде Эндо лактозоферментирующие кишечные палочки образуют интенсивно красные колонии с металлическим блеском, не ферментирующие - бледно- розовые или бесцветные колонии с более темным центром, на среде Плоскирева - красные с желтоватым оттенком, на среде Левина - темно- синие с металлическим блеском. Биохимические свойства. Кишечная палочка в большинстве случаев ферментирует углеводы (глюкозу, лактозу, маннит, арабинозу, галактозу и др.) с образованием кислоты и газа, образует индол, но не образует сероводород, не разжижает желатин. Антигенная структура. Какие - либо существенные морфологические различия между патогенными и непатогенными кишечными палочками не обнаружены. Их дифференциация основана на изучении антигенных свойств. Среди поверхностных антигенов выделяют полисахаридные О- антигены, жгутиковые Н- антигены и капсульные полисахаридные К- антигены. Известно более 170 вариантов О- антигенов (это соответствует принадлежности возбудителя к определенной серогруппе) и 57 - Н- антигенов (принадлежность к серовару). В состав диареегенных (вызывающих диарею) кишечных палочек входят 43 О- группы и 57 ОН- вариантов. Основные факторы патогенности диареегенных E.coli. 1. Факторы адгезии, колонизации и инвазии, связанные с пилями, фимбриальными структурами, белками наружной мембраны. Они кодируются плазмидными генами и способствуют колонизации нижних отделов тонкой кишки. 2. Экзотоксины: цитотонины (стимулируют гиперсекрецию клетками кишечника жидкости, нарушают водно - солевой обмен и способствуют развитию диареи) и энтероцитотоксины (действуют на клетки стенки кишечника и эндотелия капилляров). 3. Эндотоксин (липополисахарид). В зависимости от наличия различных факторов патогенности диареегенные кишечные палочки разделены на пять основных типов: энтеротоксигенные, энтероинвазивные, энтеропатогенные, энтерогеморрагические, энтероадгезивные. 4. Для патогенных кишечных палочек характерна выработка бактериоцинов (колицинов). Энтеротоксигенные E.coli имеют высокомолекулярный термолабильный токсин, схожий по действию с холерным, вызывают холероподобную диарею (гастроэнтериты у детей младшего возраста, диарею путешественников и др.). Энтероинвазивные кишечные палочки способны проникать и размножаться в клетках эпителия кишечника. Вызывают профузную диарею с примесью крови и большим количеством лейкоцитов (показатель инвазивного процесса) в испражнениях. Клинически напоминает дизентерию. Штаммы имеют некоторое сходство с шигеллами (неподвижные, не ферментируют лактозу, обладают высокими энтероинвазивными свойствами). Энтеропатогенные E.coli - основные возбудители диареи у детей. В основе поражений - адгезия бактерий к эпителию кишечника с повреждением микроворсинок. Характерна водянистая диарея и выраженное обезвоживание. Энтерогеморрагические кишечные палочки вызывают диарею с примесью крови (геморрагический колит), гемолитико - уремический синдром (гемолитическая анемия в сочетании с почечной недостаточностью). Наиболее частый серотип энтерогеморрагических кишечных палочек - О157: Н7. Энтероадгезивные E.coli не образуют цитотоксины, слабо изучены. Лабораторная диагностика. Материал для исследования 1. Испражнения. 2. Рвотные массы. При необходимости исследуют отделяемое из носа и зева, гной из уха, кровь, мочу, кусочки органов трупа. При возникновении очага заболеваний коли-энтеритом исследуют (по эпидемиологическим показаниям) пищевые продукты, смывы с рук обслуживающего персонала, игрушек и других предметов. Первый день исследования Испражнения,рвотные массы-Собранный материал засевают на среду Эндо илиЭМС. Посев следует производить на 2-3 чашки,набирая для каждой чашки материал заново. Чашкис посевом ставят в термостат Второй день исследования Вынимают из термостата засеянные накануне чашки ипросматривают их в падающем или проходящем свете.При наличии малиново-красных колоний на среде Эндо (сметаллическим блеском или без него) или фиолетовых насреде ЭМС ставят пробную реакцию агглютинации настекле для дифференциации ЭПКП от других разновидностей эшерихий.Постановка пробной реакции агглютинации. На одно или два предметных стекла наносят 10 капель поливалентной сыворотки (или иммуноглобулина). В каждую каплю вносят часть намеченной колонии и растирают ее. Колонии, давшие реакцию агглютинации,отсевают в пробирки со скошенным агаром и ставят втермостат на 18-20 ч. Если ни одна из 10 колоний не дала реакции агглютинации, дают отрицательный ответ. Третий день исследования Вынимают из термостата посевы и просматривают их.На МПА энтеропатогенные кишечные палочки образуют влажный, блестящий, сероватый налет, реже он бывает мутным. Выросшую на скошенном агаре культурупроверяют повторно в реакции агглютинации на стекле споливалентными эшерихиозными сыворотками (или иммуноглобулинами). Если выделенная культура дает реакциюагглютинации с поливалентной сывороткой (иммуноглобулином), то ее агглютинируют с каждой типовой сывороткой (иммуноглобулином) раздельно в разведении 1:5-1:10. Агглютинация с живой культурой имеет ориентировочное значение. Далее производят посев культуры на полужидкиесреды Гисса с лактозой, глюкозой, маннитом, сахарозой,мальтозой и другими сахарами, а также на бульон илипептонную воду для определения образования индола исероводорода. Одновременно определяют подвижность бактерий: делаютпосев в полужидкий (0,2%) агар уколом. Подвижные бактерии дают помутнение всей среды, неподвижныерастут только по уколу. Для окончательной идентификации выделенной культуры ставят развернутую реакцию агглютинации с живой игретой культурами: с живой - для определения К-антиге- на, с гретой - для определения О-антигена. Пробирки встряхивают и помещают в термостат на18-24 ч. Четвертый день исследования Производят учет изменений сред Гисса, регистрируютобразование индола и сероводорода.Большинство представителей эшерихий ферментируетуглеводы с образованием кислоты и газа, расщепляетбелковый питательный субстрат до образования индола. Учет пробирочной реакции агглютинации проводят припомощи лупы или агглютиноскопа. Агглютинация с живойкультурой крупнохлопчатая, с убитой - мелкозернистая.Реакцию считают положительной, если агглютинация сгретой культурой отмечается в разведении сыворотки нениже половины титра сыворотки, а живая культура агглютинируется сывороткой, разведенной не менее чем1:200. Играет роль и соотношение антител к гретой и живой культуре. Разведение сыворотки, в котором отмечается с гретой культурой , должно превышать разведение сыворотки, в котором агглютинируется живая культура, не менее чем в 2 раза. |