Главная страница
Навигация по странице:

  • РНГА- реакция непрямой гемагглютинации

  • Учёт по 4-крестной системе

  • Реакция преципитации

  • Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

  • РЕАКЦИЯ ЛИЗИСА (ИММУННЫЙ ЦИТОЛИЗ) Механизм;

  • Реакция иммунофлюоресценции.

  • Реакция связывания комплемента (РСК)

  • 2. Возбудители вирусных инфекций. Вирусы – возбудители ОРВИ. Вирус гриппа – характеристика биологических свойств. Методы вирусологической диагностики гриппа.

  • Устойчивость к факторам окружающей среды

  • Источники инфекции

  • ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКАВирусологический метод

  • Риноцитоскопический метод.

  • Серологическая диагностика

  • 3. Из гноя фурункула выделена культура микроорганизмов, которая является факультативным анаэробом, хорошо растёт на

  • 20 билет. 1.Методы микробиологической диагностики (перечислить, охарактеризовать).

  • 1. Микроскопические методы

  • Микробиологические методы

  • Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры


    Скачать 382.85 Kb.
    НазваниеСтроение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
    АнкорМикробиология
    Дата23.03.2023
    Размер382.85 Kb.
    Формат файлаdocx
    Имя файлабилеты все (копия).docx
    ТипДокументы
    #1010025
    страница26 из 27
    1   ...   19   20   21   22   23   24   25   26   27

    РТГА-Реакция торможения гемагглютинации
    Это серологическая реакция, в которой специфические противовирусные антитела, взаимодействуя с вирусом (антигеном), нейтрализуют его и лишают способности агглютинировать эритроциты, т. е. тормозят реакцию гемагглютинации. Высокая специфичность реакции торможения гемагглютинации (РТГА) позволяет с ее помощью определить вид и даже тип вирусов, обнаруженных при постановке РГА.
    Учет результатов производят после повторной инкубации в термостате в течение 30 или 45 мин при комнатной температуре. При правильной постановке опыта в контроле сыворотки и эритроцитов должна образоваться «пуговка» - нет агглютинирующего эритроциты фактора; в контроле антигена образуется «зонтик»-внрус вызвал агглютинацию эритроцитов.
    В опыте, если сыворотка гомологична изучаемому вирусу, образуется «пуговка» - сыворотка нейтрализовала вирус. Титр сыворотки – это ее максимальное разведение, в котором происходит задержка гемагглютинации.
    РНГА- реакция непрямой гемагглютинации

    Принцип

    Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) основана на том, что эритроциты, если на их поверхности адсорбировать растворимый антиген, приобретают способность агглютинироваться при взаимодействии с антителами к адсорбированному антигену.

    Учёт по 4-крестной системе

    Контроли: взвесь эритроцитарного диагностикума с заведомо иммунной сывороткой, взвесь диагностикума с нормальной сывороткой; взвесь нормальных эритроцитов с испытуемой сывороткой. В первом контроле должна произойти агглютинация, во втором и третьем ее не должно быть.

    ++++ полная геагглютинация, эритроциты равномерно устилают днот лунки (зонтик)

    +++ почти все эритроциты агглютинировались, равномерно покрывают дно лунки.

    ++ половина агглютинированы , на дне осадок в виде колечка из неагглютинированных эритроцитов.

    + большинство эритроцитов осело на дно лунки в виде пуговки.

    Титр реакции - последнее разведение, которое даёт положительную реакцию АГ эритроцитов не менее чем на +++.
    Реакция преципитации – это реакция, основанная на взаимном соосаждении коллоидных растворов АГ и АТ иммунной сыворотки при их применении.
    Результат:
    + наличие "кольца";
    - отсутствие "кольца

    Основные методы проведения реакции преципитации: реакция кольцепреципитации и реакция преципитации в агаре (геле).

    Реакцию преципитации обычно применяют для определения антигена при диагностике ряда инфекций (сибирская язва, менингит и др.).

    Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – это реакция, основанная на способности специфически адсорбировать на своей поверхности специфические микробные АГ. Сенсибилизированные таким образом эритроциты агглютинируются в присутствии гомологичной для АГ сыворотки, образуя на дне гемагглютинат. Эритроциты адсорбировавшие на своей поверхности АГ, становятся «чувствительными» (сенсибилизированными) к соответствующей иммунной сыворотке.
    Результат:
    ++++ полная гемагглютинация, эритроциты равномерно устилают дно лунки (напоминая зонтик)
    +++ почти все эритроциты агглютинированы и равномерно покрывают дно лунки
    ++ наряду с равномерным агглютинатом на дне лунки имеется осадок в виде колечка или пуговки из неагглютинированных эритроцитов
    + большинство эритроцитов осело в центре дна лунки в виде компактного колечка или «пуговки» и лишь незначительная часть агглютинированные эритроциты.
    РЕАКЦИЯ ЛИЗИСА (ИММУННЫЙ ЦИТОЛИЗ)
    Механизм;Иммунный лизис - это растворение клеток под воздействием антител при обязательном участии комплемента.

    Учет результатов. При правильно поставленной реакции в 1-й пробирке произойдет гемолиз — содержимое ее станет прозрачным. В контролях жидкость остается мутной: во 2-й пробирке для наступления гемолиза не достанет комплемента, в 3-й - нет гемолизина, в 4-й - нет ни гемолизина, ни комплемента, в 5-й -антиген не соответствует антителу

    Реакция иммунофлюоресценции.
    В реакции иммунофлюоресценции (РИФ) используют люминесцентную микроскопию для серологических исследований. Реакция основана на том, что иммунные сыворотки, к которым химическим путем присоединены флюорохромы, при взаимодействии с соответствующими антигенами образуют специфический светящийся комплекс, видимый в люминесцентном микроскопе.РИФ широко применяют при экспресс (ускоренной)-диагностике ряда инфекций.
    Реакция связывания комплемента (РСК) – это реакция основана на том, что при взаимодействии опытной системы АГ и АТ образуется специфический комплекс, который связывает комплемент. Процесс взаимодействия АТ и АГ является невидимым поэтому на 2 этапе в реакцию вводят вторую заведомо специфическую индикаторную систему (гемолитическую), которая свидетельствует о результате РСК.
    Результат:
    ++++ полная задержка гемолиза. Эритроциты образуют равномерную муть или оседают на дно. В этом случае жидкость в пробирке становится бесцветной;
    +++ лизировано примерно 25% эритроцитов. Осадок меньше, жидкость над ним слегка розовая. Результат РСК также оценивают как резко положительный;
    ++ лизировано примерно 50% эритроцитов. Осадок небольшой, жидкость розовая. Положительный результат РСК;
    + лизировано примерно 75% эритроцитов. Незначительный осадок, над ним интенсивно окрашенная жидкость. Сомнительный результат РСК;
    - лизированы все эритроциты. Жидкость интенсивно окрашена и совершенно прозрачна. Отрицательный результат РСК.

    РСК

    Принцип- основан на том, что при взаимодействии в опытной системе АГ и АТ образуется специфический комплекс АГ+АТ, который связывает комплемент.

    Ингредиенты:

    Сыворотка- полученная на кануне постановки р-ии подогревается на водяной бане при t-56° в течении 30 мин для инактивации ее собственного комплекса.

    Эритроциты барана- готовят 3% взвесь отмытых эритроцитов. Для приготовления гемолитической системы за 30 мин до внесения ее в опыт смешивают равные количества разведенной сыворотки и взвеси эр, перемешивают и инкубируют 30 мин при t-37°

    Комплемент-смесь сывороток, полученных от 3-5 морских свинок, перед употреблением сыворотку разводят изотоническим раствором NаCl в соотношении 1:10 получая основной раствор.

    АГ- обычно получают готовым с указанием его титра, т.е. того количества, которое после разведения АГ должно содержаться в 1мл.

    АТ-сыворотка больного. Перед опытом сыворотку инактивируют чтобы разрушить имеющийся в ней комплемент. Для этого ее прогревают 30мин при 56°С на водяной бане.

    Техника постановки:

    1 фаза: в пробирки разливают изотонический р-р NaCl и сыворотку, и рабочие дозы АГ и комплемента. Пробирки встряхивают и инкубируют при 37°С 45 мин, за это время при наличии специфического комплекса происходит склеивание комплемента.

    2фаза: по окончанию инкубации во все пробирки (7) добавляют по 1мл гемолитической системы, которую предварительно выдерживают в термостате 30 мин. Пробирки встряхивают и ставят в термостат.

    Проводят учет:

    ++++ полная задержка гемолиза. Эр образуют равномерную муть или оседают на дно.

    +++ лизировано 25% эр. Осадок меньше, жидкость над ним слегка розовая. Резко положительная реакция РСК

    ++ лизировано 56% эр. Осадок небольшой, жидкость розовая. Положительная реакция РСК.

    + лизировано 75% эр. Незначительный осадок, над ним интенсивно окрашенная жидкость. Сомнительный результат РСК.

    -лизированы все эр. Жидкость интенсивно окрашена и прозрачна. Отрицательный результат РСК.
    2. Возбудители вирусных инфекций. Вирусы – возбудители ОРВИ. Вирус гриппа – характеристика биологических свойств. Методы вирусологической диагностики гриппа.

    Острые респираторные вирусные инфекции являются большой и разнообразной группой заболеваний, с общим механизмом передачи, которые проявляются катаральным воспалением верхних дыхательных путей и протекают с лихорадкой, ринитом, чиханием, кашлем, болью в горле, нарушением общего состояния разной выраженности.
    Наиболее часто возбудителями ОРВИ являются РНК-содержащие вирусы, представители семейств:
    – Orthomyxoviridae
    – Coronaviridae – респираторные коронавирусы;
    – Paramyxoviridae
    – Picornaviridae – пикорнавирусы
    – Reoviridae – респираторные реовирусы.
    Из ДНК-содержащих вирусов наибольшее значение имеют представители семейств Parvoviridae и Adenoviridae.
    Грипп - распространенное острое инфекционное заболевание дыхательных путей, имеющее эпидемический характер и поражающее большие массы людей.
    Возбудители гриппа относятся к семейству Orthomyxoviridae (от лат. myxomatosis - слизистый). Они обладают выраженным тропизмом к слизистым оболочкам верхних дыхательных путей.
    Это семейство включает вирусы, вызывающие заболевания у человека, животных и птиц.
    Морфологическая структура. Структура вирионов гриппа сложна. В ее составе имеются однонитчатая РНК, нуклеокапсид спиральной формы и защитная липидоуглеводопротеиновая оболочка. Количество капсомеров точно не установлено. Вирионы имеют в основном сферическую форму, но встречаются и вирионы нитевидной формы. Оболочка имеет выступы (шипы) - пепломеры. РНК синтезируется в ядре клетки хозяина. Вирусные белки синтезируются в цитоплазме. Формирование вирионов происходит вблизи оболочки клетки.
    Культивирование. Вирус гриппа хорошо размножается в курином эмбрионе (в клетках амниотической или аллантоисной полостей). Культивировать его можно также в культуре клеток почек обезьян, эмбриона человека и др.
    Антигенная структура. Вирусы гриппа имеют S-антиген, по которому в реакции связывания комплемента они подразделяются на типы А, В, С.
    У вируса А обнаружены еще два антигена: гемагглютинин и нейраминидаза. Гемагглютинин имеет четыре подтипа (Н0, Н1, Н2, Н3), а нейраминидаза - два (N1 и N2). По сочетанию этих антигенов определяют подтип вируса, который меняется при разных эпидемиях. Вариабельность сочетания этих антигенов определяет изменчивость вируса А. Вирус типа В более устойчив. Самый устойчивый тип С. Типы и подтипы вирусов не дают перекрестного иммунитета.
    Вирусы гриппа обладают общим антигеном с изоантигенами эритроцитов человека.
    Устойчивость к факторам окружающей среды. Температура 65° С губит вирусы гриппа через 5-10 мин. При 50°С он утрачивает свои инфекционные свойства через несколько минут. При комнатной температуре вирус инактивируется через несколько часов. В кислой, щелочной среде, под влиянием эфира и дезинфицирующих растворов он погибает очень быстро. Вирус очень чувствителен к действию УФ-лучей и ультразвуку. Он устойчив к действию глицерина, в котором может сохраняться несколько месяцев.
    Источники инфекции. Больной человек. Пути передачи. Воздушно-капельный (при разговоре, кашле, чиханье).
    Патогенез. Вирус попадает на слизистую оболочку верхних дыхательных путей. Проникнув в организм человека, он внедряется в эпителиальные клетки верхних дыхательных путей, откуда проходит в кровь и вызывает явления интоксикации. В слизистой оболочке вирус вызывает гибель клеток. Это создает условия для проникновения других микроорганизмов, вызывающих вторичную инфекцию - пневмонию, бронхит и др. Активируются бактерии, локализующиеся в верхних дыхательных путях, - возникает аутоинфекция. Кроме того, вирус гриппа активирует хронические заболевания, такие как туберкулез и др.
    Иммунитет. Формируется главным образом за счет антигемагглютининов, которые обладают вируснейтрализующими свойствами - препятствуют адсорбции вирусов на чувствительной клетке. Большую роль играют антинейраминидазные антитела. Защита организма обусловливается также интерфероном и другими ингибиторами, находящимися в сыворотке крови человека.

    Обычно иммунитет носит типо- и штаммоспецифический характер. Смена подтипов вируса А исключает надежную защиту организма от этой инфекции, так как перекрестного иммунитета нет, а прогнозировать направление изменчивости пока не удается.
    Профилактика. Изоляция больного, проветривание помещения, влажная уборка и т. д. Важно также предупреждение охлаждения, которое снижает выработку такого защитного фактора как интерферон. Специфическая – вакцинация.

    ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА
    Вирусологический метод
    – выделение и ориентировочная идентификация вируса на куриных эмбрионах, в культурах клеток, в организме чувствительных животных. После специальной обработки собранных смывов и прибавления к ним по 500 МЕ пенициллина и 250 ЕД стрептомицина их используют для заражения 9-11дневных куриных эмбрионов.
    Размножение вирусов обнаруживают через 3 дня при помощи реакции гемагглютинации. Антигеном служит аллантоисная жидкость куриных эмбрионов, в которых размножился вирус. Штаммовую принадлежность определяют по РТГА с соответствующими иммунными сыворотками (сыворотки получают от животных, иммунизированных соответствующими типами вирусов).
    Риноцитоскопический метод. Это исследование является ориентировочным. Отпечатки, взятые с поверхности нижней носовой раковины, окрашивают по Романовскому и микроскопируют. При гриппе в препаратах обнаруживают измененный цилиндрический эпителий, клетки которого лишены ресничек. Кроме того, в цилиндрических клетках находят включения, окрашивающиеся по Романовскому в фиолетовый цвет. Изменения цилиндрического эпителия и выявление включений обнаруживают обычно в первый период заболевания.
    К ускоренным методам относится также метод иммунофлюоресценции. Мазки-отпечатки обрабатывают иммунофлюоресцентными типоспецифическими антисыворотками. Наличие вируса гриппа в эпителиальных клетках вызывает желтовато-зеленое свечение.
    Серологическая диагностика
    Для ретроспективной диагностики используют метод парных сывороток. У больного берут кровь в начале заболевания и в период выздоровления. С полученными сыворотками ставят РСК и РТГА. Антигеном служат диагностические гриппозные антигены.
    Положительный сероднагноз гриппа учитывается по четырехкратному и более нарастанию титра антител во-вторых порциях сывороток (реакция парных сывороток).
    3. Из гноя фурункула выделена культура микроорганизмов, которая является факультативным анаэробом, хорошо растёт на

    1) S. aureus

    2) Р-ию плазмакоагуляцию, расщип маннита в анаэроб условиях, лецитовитилазнаяактивность, ДНК-за, чувть к новобиозу, гемолиз эртьроцитов.

    3)Фурункулы, карбункулы, понариции, цисты, ангины, маститы. От поражения кожи до сепсиса.

    20 билет.

    1.Методы микробиологической диагностики (перечислить, охарактеризовать).

    Для обнаружения возбудителя в материале от больного с диагностической целью применяют:

    1) микроскопические (бактериоскопические, микоскопичес-кие, вирусоскопические) методы;

    2) микробиологические (бактериологические, микологичес кие, вирусологические) методы;

    3) биологические методы, или биопробы.

    1. Микроскопические методы.Микроскопические методы применяют для обнаружения возбудителей (бактерий, грибов, простейших, вирусов) непосредственно в исследуемом мате риале.

    Для выявления бактерий (бактериоскопические ис следования), а также грибов и простейших применяют све товые методы микроскопии окрашенных или нативных пре паратов, приготовленных из материала, полученного от боль ного (см. тему 1.1 иглаву 2).

    Преимущество микроскопическихисследований состоит в быстроте (осуществление требует не более 30—60 мин), про стоте и дешевизне. Основным недостатком метода является низкая специфичность — невозможность видовой идентифика ции обнаруженных микроорганизмов, а в ряде случаев — их дифференциации между собой (например, эшерихий, сальмо нелл и шигелл). Чувствительность также невысока: микроско пический метод позволяет обнаружить возбудителя при его концентрации не менее 10б микробных клеток в 1 мл или 1 г исследуемого материала.

    В большинстве случаев микроскопический метод имеет ори ентировочное значение и позволяет получить предварительные данные о микробах, присутствующих в материале, и наметить пути дальнейших исследований. Вместе с тем при некоторых бактериальных инфекциях, а также при микозах и протозой-

    Микробиологические методы.Основаны на выделении чистой культуры возбудителя из материала, полученного от больного, и ее последующей идентификации (см. главу 3). Микробиологические методы отличаются высокой чувстви тельностью и специфичностью. Располагая чистой культурой возбудителя, можно определить его родовую ивидовую при надлежность иосуществить внутривидовое типирование, обна ружить факторы вирулентности, а также определить чувстви тельность к антибиотикам, что необходимо для рационального выбора этиотропной терапии.

    Для эпидемиологического анализа вспышек инфекционных заболеваний проводят типирование культур возбудителей, вы деленных от разных больных и из внешних объектов — веро ятных источников заражения (вода, пищевые продукты ит.д.), т.е. определение их биовара: серовара (серотипирование, см. тему 10.1), фаговара (фаготипирование, см. тему 5.3) ит.д. Кроме того, микробиологические исследования проводят для выявления носительства патогенных микробов среди детей и взрослых, а также среди

    работников медицинских учреждений, предприятий пищевой промышленности и общественного пи тания.

    Бактериологическое исследование является ведущим в диагностике большинства бактериальных инфекций. Труд ности метода могут быть связаны с низкой скоростью размно жения бактерий-возбудителей, сложными ростовыми потреб-

    3. Биологические методы (биопробы).Биопробу осуществля ют путем заражения лабораторных животных материалом, по лученным от больного. Этот метод применяют для выделения чистой культуры возбудителя в тех случаях, когда микроорга низмы не растут или плохо культивируются, когда микробио логические методы не дают однозначно положительного ре зультата, а также для дифференциации патогенных микроор ганизмов и определения их вирулентности. Дифференциация возбудителей основана на неодинаковой чувствительности раз ных лабораторных животных к определенным микроорганиз мам. В настоящее время биопробы применяют только в случае крайней необходимости, что определяется в первую очередь гуманным отношением к животным, а также связано с повы шенным риском заражения персонала диагностической лабо ратории.
    1   ...   19   20   21   22   23   24   25   26   27


    написать администратору сайта