Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
2. Патогенные кокки.Гонококки. Характеристика биологических свойств. Патогенные свойства,заболевания.Методы микробиологической диагностики гонококковых инфекций. Нейсcерии – грамотрицательные аэробные кокки, относящиеся к роду Neisseria, включающему 8 видов: Neisseria meningitides, Niesseria gonorrhoeae, N. flava, N. subflava, N. perflava, N. sicca. Морфология: неподвижные неспорогенные грамотрицательные диплококки, образующие капсулу, полиморфны – встречаются в виде мелких или крупных форм а так же в виде полочек, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, бриллиантовым зелёным и т. д.), под действием пенициллина образуют L-формы, могут менять свойства и превратиться в грамположительную форму. Культуральные свойства: аэробы, хемоорганотрофы; для роста требуют свежеприготовленные влажные среды с добавлением нативных белков крови, сыворотки или асцитической жидкости . Не вызывают гемолиза на средах, содержащих кровь; на средах с добавлением молока, желатина и картофеля не растут. На плотных питательных средах через 24ч, при содержании протеина II образуют слегка мутные бесцветные колонии, не содержащие его образуют круглые прозрачные колонии в виде капель росы, на жидких питательных средах растут диффузно и образуют плёнку, через несколько часов оседающую на дно. Биохимическая активность: крайне низкая – разлагают только глюкозу, продуцируют каталазу и цитохромоксидазу, протеолитическая активность отсутствует, H2S, аммиака, индола не образует. Антигенная структура: Содержит А и К антигены, ЛПС обладают сильной иммуногенностью, основную антигенную нагрузку несут пили и белки мембраны. Наружная мембрана содержит протеины I, II, III классов, проявляющих сильные иммуногеннные свойства Факторы патогенности: капсула, пили, эндотоксин, белки мембраны Капсула обладает антифагоцитарным действием. Пили обеспечивают адгезию к эпителию. Клеточная стенка содержит эндотоксин. Поверхностный белок I класса – обеспечивает устойчивость к бактерицидным факторам слизистых оболочек. Класса II – (протеины мутности, ОРА-протеины) обуславливают прикрепление к эпителию, препятствуют фагоцитозу. N. синтезируют IgA протеазу, расщепляющую Ig. Микробиологическая диагностика: Бактериоскопическое исследование: Материалом для исследования служит гнойное отделяемое из уретры, влагалища, примой кишки, глотки, сыворотки крови. Готовят мазки, окраска по Граму, При «+» результате – обнаруживают гонококки – грам+ диплококки бобовидной формы., находятся внутри лейкоцитов. Положительный диагноз ставится при острой форме гонореи до применения антибиотиков. Бактериологическое исследование. Материал засевают на чашки Петри со специальными питательными средами — КДС, сывороточным агаром. Среда КДС содержит питательный агар с добавлением в определенной концентрации казеина, дрож жевого экстракта и сыворотки крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24—72 ч. Гонококки образуют круглые прозрач ные колонии, напоминающие капли росы, в отличие от более мутных колоний стрептококков или пигментированных колоний стафилококков, которые также могут расти на этих средах. Подо зрительные колонии пересевают в пробирки на соответствующие среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по сахаролитическим свойствам на средах «пестрого» ряда (по лужидкий агар с сывороткой и углеводом). Гонококк ферментирует только глюкозу с образованием ки слоты.. Серодиагностика. В некоторых случаях ставят РСК Борде — Жангу. В качестве антигена используют взвесь убитых гонокок ков. Реакция Борде—Жангу имеет вспомогательное значение при диагностике гонореи. Она положительна при хронической и осложненной гонорееподросткам и взрослым — в область дельтовидной мышцы плеча. 3. У больного, госпитализированного в хирургическое отделение по поводу холецистита, врач заподозрил брюшной тиф на основании клинических результатов исследования. ОТВЕТ: 1)Кровь – на гемокультуру, моча, кал. 2)Микробиологическим, серологическим, бактериологическим. 3)Сальмонеллы – мелкие палочки с закругленными концами, Гр-, подвижны – перитрихи, спор и капсул не обр-ют. Факульт анаэробы. Расщип-ют глюкозу, манит, мальтозу с обр-ем к-ты и газа , исключение s.tuphi- он расщип эти сахара только до к-ты. Большенство расщипляет белковые среды с обр-ем сероводороды. Индол не обр-ют, желатин не разщищают 3 билет 1. Рост и размножение микроорганизмов. Стадии размножения на жидких питательных средах (охарактеризовать). Под размножением понимаю способность м.о к самовоспроизведению, в результате чего увеличивается число особей в популяции. Размножение бактерий протекает путем поперечного деления. Перед делением бактериальной кл. происходит удвоение молекулы ДНК. Каждая дочерняя кл. получает копию материнской ДНК. Процесс деления считается законченным, когда цитоплазма дочерних кл. разделена перегородкой. Деление может быть 2-х видов: 1. Изоморфное-перегородка формируется в середине делящейся кл.,при этом образуются кл. одинаковой величины. 2.Гетероморфное-перегородка образуется ближе к одному из концов, кл. не одинаковых размеров. Деление кокков может происходить в различных плоскостях с образованием многообразных сочетаний клеток: цепочки, парные соединения(диплококки), тетрады кокков, тюки(сарцины), гроздья. Палочковидные и извитые формы делятся поперечно и только в одной плоскости. Размножение бактерий можно рассмотреть на жидких пит.ср. В результате роста и размножения можно выделить 4 фазы: 1.Стационарная-адаптацияой фигуры к питательной среде, подготовка к делению, начало деления. 2. Активный логарифмический рост кл. активно делятся, количество увелич. В геометрической прогрессии в конце фазы в результате накопления продуктов метаболизма протекает процесс отмирания клеток. 3.Стационрная, которая характеризуется тем, сто количество делящихся клеток становится равно количеству отмирающих (кратковременная ) (накопление продуктов метаболизма и заканчиваются питательные вещества). 4. Отмирание-количество делящихся резко сокращается, количество отмирающих постоянно нарастает. 2. Патогенные кокки.Пневмококки. Характеристика биологических свойств. Патогенные свойства,заболевания.Методы микробиологической диагностики пневмококковых инфекций. Пневмококки впервые были описаны Пастером, Шамберланом и Ру в 1871 г. Морфология и биологические свойства. Пневмококки представляют собой парно расположенные кокки овальной, слегка вытянутой ланцетовидной формы, напоминающие пламя свечи. Они могут располагаться также короткими цепочками, напоминая стрептококки. В организме человека и животных образуют капсулу; при выращивании на искусственных средах она отсутствует. Неподвижны, спор не образуют, грамположительны. По типу дыхания — факультативные аэробы. На простых питательных средах не растут или дают скудный рост. Выращивают их на средах с добавлением белка: кровяных, сывороточных, с асцитической жидкостью. На кровяном агаре колонии пневмококков мелкие, напоминающие росинки, прозрачные в проходящем свете, с вдавленным центром, окружены зоной неполного гемолиза, зеленоватого оттенка, сходные с колониями зеленящего стрептококка. На жидких средах дают нежное помутнение, иногда образуя осадок. Биохимически довольно активны: разлагают глюкозу, лактозу, мальтозу, инулин и другие углеводы с образованием кислоты, не разжижают желатина, не образуют индола. Расщепление инулина является дифференциально-диагностическим признаком, помогающим отличить пневмококки от стрептококков, которые инулин не разлагают. Важным отличительным признаком служит способность пневмококков растворяться в желчи, в то время как стрептококки хорошо в ней сохраняются. Токсинобразование. Пневмококки содержат эндотоксин, а также гемотоксин, фибринолизин, лейкоцидин, гиалуронидазу. Вирулентность пневмококка связана с веществом капсулы. В ней находится антифагин, препятствующий фагоцитированию лейкоцитами пневмококков. Антигенная структура. У всех пневмококков имеется один общий видовой протеиновый антиген, находящийся в цитоплазме. В капсуле пневмококков имеются различные полисахариды, специфичные для каждого типа. В настоящее время пневмококки делят по капсульному антигену на 80 типов. Считают, что наибольшее значение в патологии человека имеют I, II и III типы, но с каждым годом выявляется патогенность новых типов. Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования являются мокрота, кровь, мазок из зева, спинномозговая жидкость. Ввиду того что пневмококк быстро погибает, патологический материал необходимо как можно скорее доставить в лабораторию для исследования. Из этого материала готовят мазки, окрашивают их по Граму и по методу Гинса, а затем микроскопируют. Обнаружение ланцетовидных диплококков, окруженных бесцветной капсулой, дает основание предположить наличие пневмококков. Затем производят микробиологическое исследование патологического материала. С этой целью делают посев на кровяной агар и сывороточный бульон. Одновременно используют биологический метод, вводя внутрибрюшинно исследуемый материал двум белым мышам. Уже через 4-6 часов у них появляются первые признаки заболевания. Мышей под наркозом вскрывают или отсасывают пунктат из брюшной полости. Кусочки внутренних органов, кровь или пунктат засевают в сывороточный бульон и на кровяной агар. На следующий день просматривают посевы, отмечают характер роста, микроскопируют, выделяют чистую культуру. Для дифференциации от стрептококка делают посев исследуемой культуры в пробирку с 10% желчным бульоном и в среду с инулином. Если через 24 ч инкубации в термостате в пробирке с желчным бульоном произошло полное просветление среды (вследствие лизиса микробов), а в пробирке инулином— покраснение ее, указывающее на разложение инулина, выделенную культуру относят к пневмококкам. Для определения типа пневмококка ставят реакцию агглютинации с противопневмококковыми сыворотками 3. У больного П., 32 года, на 8 день болезни участковый врач диагностировал брюшной тиф под вопросом. Диагноз поставлен по типичной клинической картине 1) Произвести посев на: Эндо, Плоскирева. 2) Брюшной тиф. 3) Используется серологическая диагностика. Однако ее методы, могут показать заболевания только, начиная с 5-го – 8 –го дня с начала заболевания. Максимум возможностей достигает на 2 –ой и 3- ей неделях болезни. Так же применяется реакция Видаля, а также РПГА – они используются для диф диагностики, сцелью отличия от болезней схожими симптомами ( паратиф, сальмонеллез). 4) Соблюдение личной гигиены, проведение санитарно – гигиенических мероприятий 4билет 1. Ферменты микроорганизмов. Классификация: эндо- и экзоферменты, адаптивные и конститутивные. Значение ферментативной активности для идентификации микроорганизмов. Ферменты-это вещества белковой природы, вырабатываемые живой клеткой Они являются катализаторами и играют важную роль в обмене веществ микроорганизмов. Микроорганизмы могут синтезировать самые разнообразные ферменты, относящиеся к 6 известным классам; оксиредуктазы, трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы, лигазы. Активность ферментов зависит от температуры среды,Ph и других факторов. Для многих патогенных микроорганизмов оптимальное значение ph-7.2-7.4 и оптимальная температура 37-50. Ферменты микроорганизмов классифицируются на: -Экзоферменты: выделяются во внешнюю среду, расщипляют макромолекулы питательных веществ до более простых соединений, которые могут быть усвоены питательной клеткой. К экзоферментам относят гидролазы, вызывающие гидролиз БЖУ. Белки расщипляютсяна аминокислоты и пептоны. Жиры-на жирные кислоты и глицерин. Углеводы на дисахариды и моносахариды. Распад белков вызывают ферменты протеазы, жиров- липазы, углеводов- карбогидразы. -Эндоферменты; учавствуют в реакциях обмена вещества, происходящих внутри клетки. Конститутивные ферменты постоянно находятся в микробной клетке независимо от условий существования. Это в основном ферменты клеточного обмена: протеазы, липазы, карбогидразы и тд. Индуктивные (адаптивные) ферменты синтезируются в клетке только под влиянием соответствующего субстрата, находящегося в питательной среде и когда микрооганизм вынужден его усваивать. Индуктивные ферменты позволяют микробной клетке приспособиться к изменившимся условиям существованиям. Наряду с ферментами обмена многие патогенные бактерии выработыват также ферменты агрессии, которые служат для преодаленияестественных защитных барьеров микроорганизма и являются факторами патогенности (гиалуронидаза, дезоксирибонуклеаза (днк), лецитовителаза). 2.Семейство Энтеробактериациа. Род Сальмонелла. Характеристика биологических свойств. Классификация сальмонелл по Кауфману и Уайту. Заболевания. Методы микробиологической диагностики тифо-паратифозных заболеваний. Бактерии этого семейства являются наиболее частыми возбудителями кишечных инфекций. Это короткие, не образующие спор, палочки с закругленными концами, подвижные (перитрихи) или неподвижные, некоторые имеют капсулы. Аэробы или факультативные анаэробы. Характерна отрицательная окраска по Граму. Хорошо растут на обычных питательных средах с мясном экстрактом. На большинстве плотных сред энтеробактерии образуют круглые выпуклые блестящие S- (гладкие) колонии, а также часто обусловленные потерей капсулы плоские, неровные и зернистые R- (шероховатые) формы. Для них характерна ферментация глюкозы (и других углеводов) с образованием кислоты и газа. По отношению к лактозе их делят на лактоза- ферментирующие и лактоза - неферментирующие. Каталаза - положительны, восстанавливают нитраты в нитриты. Наибольшее значение для человека имеют рода Escherichia, Salmonella, Shigella, Yersinia, Proteus, Klebsiella и др. Род Сальмонелла. Сальмонеллы делят на монопатогенные и полипатогенные. К первым относятся возбудители брюшного тифа,паратифа А и паратифа В. Этими заболеваниями болеет только человек. Ко второй группе относятся возбудители заболеваний, поражающие человека и животных. S. typhi впервые были обнаружены Эбертом (1880) в органах человека, погибшего от брюшного тифа. Ашар и Бансод (1886) при заболеваниях, сходных с брюшным тифом, выделили из гноя и мочи больных бактерии, отличающиеся по биохимическим и серологическим свойствам от возбудителей брюшного тифа. Их назвали S. paratyphi А и S. paratyphi B. Почти одновременно американский ученый Д. Сальмон (1885) впервые описал возбудителей холеры свиней (S.choleraesuis). В дальнейшем было описано множество сходных бактерий, объединенных в род Сальмонелла, названного по имени ученого, их описавшего. Морфология. Все сальмонеллы мелкие, 1,0-3,0×0,6-0,8 мкм палочки с закругленными концами. Грамотрицательны. Подвижны, перитрихи. Спор и капсул не образуют. Культивирование. Сальмонеллы – факультативные анаэробы. Они не требовательны к питательным средам. Хорошо растут на МПА и МПБ при 37 °С (от 20 до 40°C) и рН среды 7,2-7,4 (от 5,0 до 8,0). На МПА образуют нежные, полупрозрачные, слегка выпуклые, блестящие колонии, в МПБ-равномерное помутнение. При первичном посеве материала от больных (кал, моча, рвотные массы, кровь, желчь) часто отмечают медленный рост сальмонелл. Для их накопления производят посев на среды обогащения: селенитовый бульон,среду Мюллера, среду Кауфмана. Используют также элективные (избирательные) среды: желчь (10-20%) и среду Раппопорт. На дифференциально-диагностических средах Эндо,ЭМС, Плоскирева сальмонеллы растут в виде бесцветных колоний, так как не расщепляют лактозу, входящую в состав среды. На висмут-сульфитном агаре через 48 ч они образуют колонии черного цвета, оставляющие след после того, как их снимают петлей (кроме сальмонелл паратифа А). У свежевыделенных культур S.paratyphi В после инкубации в термостате в течение 18-20 ч и выдерживания при комнатной температуре в течение 1 -2 сут на периферии колонии образуется слизистый вал. Ферментативные свойства. Сальмонеллы расщепляют глюкозу, маннит, мальтозу с образованием кислоты и газа. Исключением являются возбудители брюшного тифа (S.typhi), которые расщепляют эти сахара только до кислоты. Сальмонеллы не ферментируют лактозу и сахарозу. Протеолитические свойства: большинство сальмонелл расщепляет белковые среды с образованием сероводорода (возбудители паратифа А отличаются отсутствием этого свойства). Индол не образуют. Желатин не разжижают. Токсигенность. Сальмонеллы содержат эндотоксин-липополисахариднопротеиновый комплекс. Антигенная структура и классификация. Сальмонеллы содержат два антигенных комплекса: О и Н,О-антиген - липополисахариднопротеиновый комплекс;он термостабилен, инактивируется под действием формалина. Н-антиген связан со жгутиками, имеет белковую природу; он термолабилен, инактивируется под действием спирта и фенола, но устойчив к воздействию формалина.Все сальмонеллы разделены на О-группы, каждая из которых характеризуется наличием определенных О-антигенов: основного, обозначенного арабской цифрой (2, 4, 7, 8, 9 и т. д.), и дополнительных, общих для нескольких О-групп (1, 12). В настоящее время известно более 60 О-групп, обозначаемых прописными буквами латинского алфавита (А, В, С, D, Е и т. д.). S.typhi содержит, кроме того, Vi-антиген, который расположен в микробной клетке более поверхностно, чем О-антиген, и препятствует агглютинации культуры с О-сывороткой. Этот антиген термолабилен. Его присутствие связывали с вирулентностью возбудителя. Vi-антиген содержится также в клетках S. paratyphi C.Н-антигены сальмонелл имеют две фазы. Сальмонеллы различных серовариантов одной О-группы имеют различную первую фазу Н-антигена, которую обозначают строчными буквами латинского алфавита: а, b, с, d, eh… u, z и т. д. Вторую фазу Н-антигена обычно обозначают араб- скими цифрами: 1, 2, 5, 6, 7 и строчными латинскими буквами. Сочетание различных О- и Н-антигенов определяет антигенную структуру культур и их название. При употреблении продуктов, зараженных сальмонеллами различных сероваров кроме(S.typhi, S.paratyphiA и B), возникают пищевые токсикоинфекции. Брюшной тиф, паратифы А и В Источник инфекции. Больной человек и бактерионоситель. Пути передачи. Возбудители инфекции передаются через предметы, загрязненные выделениями человека,через руки, воду, пищу. Часто возбудителей переносят мухи. В зависимости от путей передачи различают бытовые, водные, пищевые вспышки брюшного тифа и парати- фов. Заражение происходит через рот. Из ротовой полости микроорганизмы попадают в желудок, где частично разрушаются под воздействием желудочного сока и ферментов. Оставшиеся сальмонеллы поступают в тонкий кишечник, проникают в лимфоидную ткань тонкого кишечника (групповые лимфатические и солитарные фолликулы), в которой размножаются в течение инкубационного периода (10-14 дней). К концу этого срока возбудители поступают в лимфу и кровь (бактериемия) и разносятся по всему организму. В этот период они локализуются в лимфоидной ткани внутренних органов, системе макрофагов, печени, селезенке, костном мозге. Сальмонеллы накапливаются в желчном пузыре, где находят благоприятные условия для размножения, так как желчь- хорошая питательная среда для этих бактерий. При этом они вторично попадают в тонкий кишечник и, поражая уже сенсибилизированную лимфоидную ткань (групповые лимфатические и солитарные фолликулы), вызывают образование специфических брюшнотифозных язв (рис. 42). В период бактериемии часть микроорганизмов разрушается, при этом освобождается эндотоксин и возникают явления интоксикации: повышается температура, появляется общее недомогание, слабость, головная боль и т. д. С конца 2-й и начала 3-й недели сальмонеллы начинают выделяться из организма с калом, мочой,слюной и т. п. Период реконвалесценции (выздоровления) характеризуется очищением организма от возбудителя, уси- лением фагоцитарной активности клеток, накоплением антител в крови. Однако при брюшном тифе и паратифах бактериовыделение часто не заканчивается с выздоровлением больного- формируется бактерионосительство. Хронические воспалительные явления в желчном пузыре способствуют переживанию сальмонелл в желчи и их длительному выделению из организма (иногда до нескольких лет). Материал для исследования 1. Кровь. 2. Испражнения. 3. Моча. 4. Дуоденальное содержимое. В зависимости от стадии болезни исследуют разный материал. Исследованию могут быть также подвергнуты содержимое розеол, костный мозг, мокрота и материал, получерный на вскрытии - кусочки органов. При токсикоинфекциях материалом для исследования могут служить промывные воды желудка, рвотные массы,остатки пищевых продуктов. Основные методы исследования : бактериологичсекий и серологический. Первый день исследования Посев материала на дифференциальные среды и среды обогащения (селенитовую и др.). На среду Плоскирева и среду висмут-сульфит агар засевают в 2 раза больше материала, чем на среду Эндо, так как в первой имеются факторы, задерживающие рост; на селенитовую среду посев производят в соотношении 1:5. Второй день исследования Вынимают чашки из термостата (инкубация 18-24 ч) и просматривают выросшие колонии невооруженным глазом и при помощи лупы. Несколько (5-6) подозрительных колоний выделяют на среду Олькеницкого или Рассела. Посев производят следующим образом: снятую колонию осторожно, не задевая края пробирки, вносят в конденсационную жидкость, затем штрихами засевают всю скошенную поверхность среды и делают укол в глубину столбика для выявления газообразования. Укол следует производить в центр агарового столбика. Пробирки с посевами ставят в термостат Третий день исследования Вынимают пробирки с посевами из термостата и просматривают характер роста.. Расщепление глюкозы происходит только в условиях анаэробиоза. Поэтому скошенная поверхность среды при расщеплении глюкозы не изменяется, а столбик окрашивается в цвет, соответствующий индикатору. Бактерии, расщепляющие лактозу и мочевину, изменяют цвет всей среды.Если выделенные культуры сбраживают лактозу или расщепляют мочевину, меняя цвет всей среды, то они не являются сальмонеллами и можно дать отрицательный ответ.Культуру, расщепляющую только глюкозу, подвергают дальнейшему изучению: делают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. При наличии в мазках грамотрицательных палочек изучают их подвижность и ферментативные свойства. Подвижность можно определить в висячей капле или в раздавленной капле, а также по характеру роста в полужидкой среде Гисса или в 0,2% агаре. При наличии подвижности при посеве уколом рост на среде диффузный, среда мутнеет. Для выявления ферментативной активности производят посев на среды Гисса, МПБ, пептонную воду. В пробирки с последними средами опускают (под пробку) индикаторные бумажки для определения индола и сероводорода. Делают также посев на лакмусовое молоко. Четвертый день исследования Учитывают биохимическую активность по результату ферментации углеводных и других сред . Определив морфологические, культуральные и ферментативные свойства выделенной культуры, необходимо провести анализ антигенной структуры . Серологическую идентификацию сальмонелл начинают с реакции агглютинации на стекле с поливалентной О-сывороткой А, В, С, D, Е. При отсутствии агглютинации выделенную культуру испытывают с поливалентной О-сывороткой к редким группам сальмонелл. При положительной реакции с одной из сывороток культуру испытывают с каждой О-сывороткой, входящей в состав поливалентной, для определения О-серогруппы. Установив принадлежность культуры к О-группе, определяют ее Н-антигенны с сыворотками первой, а затем второй фазы .Культуру сальмонелл тифа испытывают также с Vi-сывороткой. Возбудители брюшного тифа, содержащие Vi-антиген, испытывают Vi-фагами. Методика фаготипирования. 1-й метод. В чашки Петри наливают 20- 25 мл агара и подсушивают с открытыми крышками в термостате. Дно чашки делят на секторы. На каждом секторе пишут название фага. Изучают 4-6- часовую бульонную культуру, так как она содержит больше Vi-антигена. На поверхность агара наносят 8-10 капель бульонной культуры и стеклянным шпателем растирают ее по поверхности агара. Чашки с посевами подсушивают с открытыми крышками в термостате. На каждый сектор наносят каплю соответствующего типового фага. После подсыхания капель чашки ставят в термостат на 18-24 ч. Результат учитывают невооружен- ным глазом или с помощью лупы через дно чашки. Наличие лизиса культуры одним или несколькими типовыми фагами позволяет определить принадлежность выделенного штамма к определенному фаготипу. 2-й метод. На питательную среду культуру наносят каплями. На каждую каплю после высыхания культуры в термостате наносят каплю типового фага. Ставят в термостат.Степень лизиса выражают по четырехкрестной системе. Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифа. Реакция Видаля. Для постановки реакции Видаля используют сыворотку больного, набор диагностикумов, изотонический раствор натрия хлорида. Реакцию ставят раздельно с О- и Н-антигенами (диагностикумы). Так как клинически брюшной тиф и паратифы А и В сходны, то для выявления природы заболевания сыворотку больного испытывают одновременно с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифа А и В. Поставить реакцию можно двумя способами: капельным и объемным. В практике чаще используют объемный метод. При постановке линейной реакции агглютинации количество рядов должно соответствовать количеству антигенов (диагностикумы). Возбудителем заболевания считают микроорганизм, диагностикум из которого агглютинировался сывороткой больного. Иногда отмечают групповую агглютинацию, так как возбудители тифа и паратифов обладают общими групповыми антигенами. В этом случае положительным считают результат реакции в ряду, в котором агглютинацию отмечают в большем разведении сыворотки.Если агглютинация возникает только в небольших разведениях сыворотки - 1:100, 1:200, то для отличия реакции при заболевании от прививочной или анамнестической прибегают к повторной постановке реакции агглютинации через 5-7 дней. У больного титр антител повышается, а у привитого или переболевшего не изменяется. В ответ на внедрение в организм возбудителей брюшного тифа, обладающих Vi-антигеном, в крови больного появляются Vi-агглютинины. Их определяют со 2-й недели болезни, но титр их обычно не превышает 1:10. Обнаружение Vi-антител связывают с наличием в организме возбудителей брюшного тифа, поэтому определение этих антител имеет большое эпидемиологическое значение, так как позволяет выявить бактерионосителей. Реакция Vi-гемагглютинации. Принцип реакции заключается в том, что эритроциты человека (I группы) или барана после специальной обработки могут адсорбировать на своей поверхности Vi- антиген и приобретают при этом способность агглютини- роваться соответствующими Vi-антителами. Эритроциты с адсорбированными на поверхности антигенами называют эритроцитарными диагностикумами. Для постановки реакции Vi-гемагглютинации берут: 1) сыворотку крови больного (1-2 мл); 2) эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум; 3)Vi-сыворотку; 4) О-сыворотку; 5) изотонический раствор натрия хлорида. Учет начинают с контроля. Реакцию оценивают в зависимости от степени агглютинации диагностикума. Результаты учитывают по четырехкрестной системе: ++++ эритроциты полностью агглютинированы осадок на дне лунки в виде «зонтика»; +++ «зонтик» меньше, не все эритроциты агглютинировались; ++ «зонтик» маленький, на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов; - реакция отрицательная; эритроциты не агглютинировались и осели на дно лунки в виде пуговки. |