Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
Стерильный иммунитет. Большинство возбудителей исчезает из организма при выздоровлении человека. Этот вид иммунитета называют стерильным (корь, оспа и др.). Нестерильный иммунитет. Восприимчивость к возбудителю инфекции сохраняется только в период пребывания его в организме хозяина. Такой иммунитет называют нестерильным или инфекционным. Этот вид иммунитета наблюдают при туберкулезе, сифилисе и некоторых других инфекциях. 2.Пищевые токсикоинфекции, интоксикации – основные возбудители. Характеристика биологических свойств. Методы микробиологической диагностики пищевых отравлений. Пищевые отравления - это острые кишечные заболевания, возникающие в результате употребления пищевых продуктов, зараженных различными видами микроорганизмов и их токсинами. Классификация Микробные: токсикоинфекции, интоксикации Немикробнве: отравление продуктами ядовитыми по своей природне, ядовитые примеси Основными возбудителями токсикоинфекций являются: -кишечная палочка – E. Coli; -протеи – P. vulgaris, P. mirabilis идр; - cальмонеллывсех сероваров (кроме S.typhi, S.paratyphiA и B); - шигеллы – S. zonnei; стрептококки – S. faecalis, var. liquefacienszymogenes; а также возбудителями пищевых отравлений могут быть: клебсиеллы, иерсинии, псевдомонады, некоторые представители микроскопических грибов. Все возбудители продуцируют энтеротоксины, которые попадают в кровь и обуславливают интоксикацию. Основными возбудителями интоксикаций являются: - S. aureus, - C. Botulinum. Материал для исследования. - пищевые продукты. Жидкие или полужидкие продукты тщательно размешивают, 2-3 капли засевают на дифференциальные среды и среды обогащения. При исследовании плотных продуктов стерильным шпателем или ножом берут 5-10 г из глубины, эмульгируют в изотоническом растворе натрия хлорида в соотношении 1:5 или 1:10 и засевают на дифференциальные среды и среды обогащения. Если вырастают подозрительные колонии, дальнейшее исследование ведут по общей схеме. Стафилококки наиболее часто размножаются в молоке и молочных продуктах, мясных и рыбных продуктах, фарше, изделий с заварным кремом. - рвотные массы; - промывные воды желудка; - испражнения; - кровь. Характеристика биологических свойствкишечной палочки Морфология. E.coli- короткие, в среднем 0,5 3,0×0,5-0,8 мкм палочки. Грамотрицательны. В большинстве случаев они подвижны, перитрихи. Однако некоторые варианты кишечной палочки неподвижны. Многие штаммы образуют капсулу. Спор не образуют. Культивирование.Кишечная палочка-факультативный анаэроб. Хорошо растет на простых питательных средах при 37 °C и рН среды 7,2-7,8. Штаммы E.coli, выделенные из кишечника человека и животных, развиваются и при 43…45°С, а кишечные палочки холоднокровных при этих условиях не размножаются. Это различие в свойствах E.coli разного происхождения используют для определения санитарного состояния объекта, так как только обнаружение E.coli теплокровных свидетельствует о санитарном неблагополучии. На МПА кишечная палочка образует мутноватые, слегка выпуклые влажные колонии с ровным краем. На МПБ дает равномерное помутнение. Культуры, имеющие капсулу, растут в виде слизистых колоний. Для идентификации эшерихий используют дифферен- циально-диагностические среды: Эндо и агар с эозинметиленовым синим (ЭМС). На среде Эндо кишечная палочка растет в виде малиново-красных колоний с металлическим блеском или без него. На среде ЭМС -в виде темнофиолетовых колоний. Ферментативные свойства.E.coli обладают значительной ферментативной активностью. Расщепляют лактозу,глюкозу, маннит, мальтозу, сахарозу и другие углеводы и спирты с образованием кислоты и газа. Протеолитические свойства: образуют индол. Желатин не расщепляют. Отдельные биовары не ферментируют лактозу и сахарозу. Токсигенность. Эшерихии обладают эндотоксином (липополисахарид). Антигенная структура.Эшерихии различаются по антигенной структуре микробной клетки, что положено в основу классификации бактерий этого рода. Различают три типа антигенов эшерихий: О-антиген (соматический), К-антиген (капсульный) и Н-антиген (жгутиковый). Термостабильный О-антиген является липополисахариднопротеиновым комплексом и расположен в клеточной стенке бактерий. О-антиген определяет принадлежность куль- туры к серологической группе. Описано более 170 такихгрупп. Некоторые компоненты О-антигена являются общими для разных О-групп эшерихий, а иногда и других энтеробактерий (шигелл, сальмонелл и др.). К-антигены эшерихий различны: А, В, L и М. Антигены А и M- термостабильны, В и L- термолабильны. К-антиген расположен в микробной клетке более поверхностно, чем О-антиген, и поэтому в его присутствии реакция агглюти- нации живой культуры с О-сывороткой не происходит. Для выявления О-антигена культуру прогревают в течение часа при 100 °С: К-антиген при прогревании разрушается,a О-антиген становится способным вступать во взаимодействие с сывороткой. Установлено, что у эшерихий имеется около 100 типов К-антигенов, в основном типа В-антигенов (термолабильных). Н-антиген имеется только у подвижных штаммов, так как он связан с жгутиками. У эшерихий известно более 50 типов Н-антигена. Определение Н-антигена позволяет установить серовариант выделенной куль- туры. Характеристику антигенного состава выделенной культуры эшерихий дают на основании результатов реакции агглютинации с сыворотками, содержащими О-, К- и Н-антитела. При этом определяют, какие антигены имеются в культуре, а их сочетание характеризует антигенную формулу выделенной культуры, т. е. ее серовариант. Сальмонеллы. Морфология. Прямые грамотрицательные палочки размером 2-4 x 0,5 мкм. Подвижны благодаря наличию перитрихиально расположенных жгутиков. Культуральные и биохимические свойства. Факультативные анаэробы, хорошо растут на простых питательных средах. Оптимум рН- 7,2-7,4, температуры - +37. Метаболизм - окислительный и бродильный. Сальмонеллы ферментируют глюкозу и другие углеводы с образованием кислоты и газа (серотип Salmonellatyphi газообразования не вызывает). Обычно не ферментируют лактозу (на средах с этим углеводом - безцветные колонии), сахарозу. Оксидаза- отрицательны, каталаза - положительны. Реакция Фогеса - Проскауэра отрицательна. На основании биохимических (ферментативных) свойств сальмонеллы разделены на четыре группы. Характерные признаки сальмонелл - образование сероводорода, отсутствие продукции индола и аэробность. Для выделения используют дифференциально - диагностические среды (висмут - сульфит агар, среды Эндо, Плоскирева, SS агар) и среды обогащения (селенитовый бульон, желчный бульон, среда Раппопорта). S- формы образуют мелкие (от 1 до 4 мм) прозрачные колонии (на среде Эндо - розоватые, на среде Плоскирева - безцветные, на висмут - сульфит агаре - черные, с металлическим блеском). На жидких средах S- формы дают равномерное помутнение, R- формы - осадок. Антигенная структура. Выделяют О-, Н- и К- антигены. К группе К- антигенов относят Vi- антигены (антигены вирулентности). Благодаря более поверхностному расположению (чем О- антигены) Vi- антиген может препятствовать агглютинации культур сальмонелл О- специфической сывороткой (экранирование). Для дифференциации сальмонелл применяют схему (серологическую классификацию) Кауфманна - Уайта. В соответствии со структурой О- антигенов сальмонеллы подразделяют на О- группы (67 серогрупп), в каждую из которых входят серологические типы, отличающиеся строением Н- антигенов. Принадлежность сальмонелл к определенному серовару устанавливают при изучении антигенной структуры в соответствии со схемой Кауфманна - Уайта. Примеры: серотип S.paratyphi A относится к серогруппе А, S.paratyphi В - к серогруппе В, S.paratyphi С - к группе С, S.typhi - к серогруппе D. Факторы патогенности. 1.Факторы адгезии и колонизации. 2. Способность к внутриклеточному паразитированию, препятствовать фагоцитозу, размножаться в клетках лимфоидной ткани выражены у возбудителей брюшного тифа, паратифов А и В, способствуя хроническому носительству. 3.Эндотоксин (ЛПС). 4. Термолабильные и термостабильные энтеротоксины. 5. Цитотоксины. 6. Существенное значение имеют плазмиды вирулентности и R- плазмиды. 7. Vi - антиген ингибирует действие сывороточных и фагоцитарных бактериоцидных факторов. Основными факторами патогенности сальмонелл является их способность проникать в макрофаги и размножаться в лимфоидных образованиях собственно слизистого слоя тонкого кишечника (пейеровы бляшки, солитарные фолликулы), а также продукция эндотоксина. Шигеллы. Морфология. Шигеллы - это небольшие (2-3×0,4-0,6 мкм) палочки с закругленными концами. Отличаются от остальных представителей семейства Enterobacteriaceae отсутствием жгутиков. Они не имеют спор и капсул.Грамотрицательны. Культивирование. Шигеллы- факультативныеанаэробы. Неприхотливы к питательным средам. Размножаются на МПА и МПБ при температуре 37° С и рН7,2-7,4.ЭлективнымиИдифференциально-диагностическими средами для них являются среды Плоскирева, Эндо, ЭМС. Растут в виде небольших, полупрозрачных, сероватых, круглых колоний, размером 1,5-2 мм в S-форме. Исключением являются шигеллыЗонне, которые часто диссоциируют, образуя крупные, плоские, мутные, с изрезанными краями колонииR-формы (рис. 44). В жидких питательных средах шигеллы дают равномерную муть, R-формы образуют осадок. Ферментативные свойства. Ферментативные свойствашигелл менее выражены, чем у других представителейEnterobacteriaceae: они расщепляют углеводы без газообразования, не расщепляют лактозу и сахарозу. Исключе- нием являются шигеллыЗонне, которые на 2-3-и сутки расщепляют эти углеводы. Протеолитические свойства у шигелл мало выражены-образование индола и сероводорода непостоянно,молоко они свертывают, желатин не разжижают. По отношению к манниту все шигеллы делятся на расщепляющие и нерасщепляющиеманнит. В настоящее время шигеллыЗонне делят на четыре ферментативные типа. Различаются они по способности расщеплять рамнозу и ксилозу. Токсинообразование. Шигеллы обладают эндотоксинном. Исключением являются шигеллы Шаги, которыепомимо эндотоксина выделяют экзотоксин, оказывающий нейротоксическое действие. Антигенная структура и классификация. Шигеллысодержатсоматические антигены, к которым относятся групповые и типовые антигены. По Между- народной классификации шигеллы подразделяют на четыре группы, обозначаемые латинскими большими буквами А, В, С, D. Группа AS. dysenteriae: 1 … Григорьева Шиги; 2- Штутцера - Шмитца; 3- 7- Лардж -Сакса и 8-10-провизорные. Представители этой группы имеют только типовые антигены, обозначаемые арабскими цифрами. Группа В S. flexneri. Микробы этой группы имеют более сложную антигенную структуру-они содержат типовые антигены, обозначаемые римскими цифрами, и групповые антигены, обозначаемые арабскими цифрами. Шигеллы Флекснера имеют 6 серовариантов. Шигеллы Флекснер 6 раньше обозначали как подвид S. newcastle. Группа C S. boydii. Имеет только типовые антигены. В этой группе Протей Род Proteus семейства энтеробактерий объединяет несколько видов, отличающихся способностью ферментировать многие питательные субстраты. Морфология. Бактерии всех видов этого рода мелкие, полиморфные грамотрицательные палочки. Средний размер 0,4--0,6×1,0-3,0 мкм. Подвижны, перитрихи. Спор и капсул не образуют. Культивирование. Протеи-факультативные анаэробы, хорошо растут на простых питательных средах при 20-37°С. Некоторые виды дают ползучий рост на плотной питательной среде, а при посеве в конденсационную воду скошенного агара - рост по всей поверхности среды (способ выделения чистой культуры по Шукевичу) Ферментативные свойства. Обладают сахаролитическими и протеолитическими ферментами. Токсинообразование. Содержат эндотоксин. Антигенная структура. Протеи содержат 0- и Н-антигены. В настоящее время известно более 150 О-антигенов и около 80 Н-антигенов. Сочетание О- и Н-антигенов в микробной клетке определяет принадлежность возбудителей к той или иной О-серогруппе или серовару. Характеристика биологическмх свойств стафилококка Морфология. Грамположительные кокки, для которых характерно взаиморасположение скоплениями в виде гроздей винограда, т.к. они делятся во взаимоперпендикулярных плоскостях. Имеют микрокапсулу, спор не образуют, жгутиков не имеют. Культуральные свойства. Факультативные анаэробы, хемоорганотрофы. Хорошо растут на простых питательных средах, в том числе на средах с 5- 10% NaCl. Температурный оптимум от +35 до +37о С, рН 6-8 (лучше слабощелочная реакция среды). На плотных средах образуют непрозрачные круглые (2-4 мм в диаметре) ровные колонии, окрашенные в цвет липохромного пигмента (кремовый, желтый, оранжевый). Кроме S- форм колоний могут образовывать R- формы. На жидких средах дают равномерное помутнение, затем выпадает рыхлый осадок. Биохимические свойства. Обладают высокой биохимической активностью, образуют различные ферменты, во многом определяющие патогенность. Каталаза- положительны, оксидаза- отрицательны. Углеводы ферментируют до кислоты без газа, разжижают желатин с образованием воронки, образуют сероводород. По наличию коагулазы их делят на две группы - коагулаза- положительные и коагулаза- отрицательные. Среди патогенных видов коагулаза - положителен лишь S.aureus, остальные - отрицательны. Антигенная структура очень сложная (более 50 типов антигенов). По специфичности антигены подразделяют на родовые (общие для стафилококков), перекрестнореагирующие (с изоантигенами эритроцитов, кожи и почки человека), видо- и типоспецифические. Видоспецифическими антигенами являются тейхоевые кислоты, белок А золотистого стафилококка. Антигенными свойствами обладают токсины. Факторы патогенности. К ним относят микрокапсулу, компоненты клеточной стенки (тейхоевые кислоты, белок А), ферменты и токсины. 1. Факторами адгезии являются высокие гидрофобные свойства поверхностных структур. 2. Компоненты клеточной стенки стимулируют развитие воспалительных реакций, основное значение в них имеют нейтрофилы. 3. Разнообразные ферменты стафилококков играют роль факторов агрессии и защиты. Главным фактором является плазмокоагулаза, свертывающая сыворотку (плазму) крови и образующая тромбиноподобное вещество, обвалакивающее стафилококки и препятствующее действию защитных реакций организма. Кроме нее - фибролизин, ДНК- аза, лецитиназа, фосфатаза. 4. Стафилококки синтезируют обширный комплекс экзотоксинов. Мембраноповреждающие токсины могут повреждать эритроциты (гемолизины), лейкоциты, макрофаги, тромбоциты и др. Выделяют несколько типов, отличающихся по антигенной структуре, спектру лизируемых клеток, скорости действия. Эксфолиативные токсины оказывают дерматонекротическое действие (пузырчатка новорожденных). Экзотоксин, вызывающий синдром токсического шока. Высокосорбционные тампоны вызывали тяжелый эндотоксический шок у женщин. Энтеротоксины, с которыми связаны пищевые интоксикации. Энтеротоксины - термостабильные белки со свойствами суперантигенов. Они вызывают избыточный синтез интерлейкина 2, который и обусловливает интоксикацию. Интоксикации чаще связаны с употреблением инфицированных стафилококками молочных продуктов. 5. Ряд экзотоксинов и других структур стафилококков обладают аллергизирующим действием, обусловливая эффект развития ГЗТ. Наличие перекрестно - реагирующих антигенов способствует развитию аутоиммунных процессов. 6. Факторы, угнетающие фагоцитоз - капсула, белок А, тейхоевые кислоты, пептидогликан, токсины. Ботулизма 1.Морфология Clostridiumbotulinum: *полиморфные палочки с закругленными концами, размером 4-9 × 0,6-1 мкм; *грамположительные;образуют споры, которые располагаются субтерминально, величина споры превышает поперечник палочки, что придает вид теннисной ракетки;капсул не образует; *подвижны (перитрихии). 2.Культуральные свойства Возбудитель ботулизма является: *строгим анаэробом; оптt роста 28-35 C;рН - 7,3-7,6;требовательны к питательным средам. Для выращивания применяют: -среду Китта-Тароцци; -плотные питательные среды: печеночный агар, железосульфитный агар, глюкозно-кровяной агарЦейсслера. -В среде Китта-Тароцци и МПБ в анаэробных условиях рост клостридий ботулизма сопровождается равномерным помутнением и небольшим газообразованием, при этом отмечается запах прогорклого масла. На плотных питательных средах в анаэробных условиях: -печеночном или сахарном агареклостридии ботулизма формируют шероховатые колонии (R-форма); -кровяном агаре - колонии с ровными или изрезанными краями, блестящей поверхностью, окруженные зоной гемолиза; -железо-сульфитномагаре (среде Вильсона-Блера) - колонии черного цвета за счет образования сульфида железа под влиянием продуцируемого бактериями сероводорода; -желатиновой среде - сероватые колонии, окруженные зоной разжиженного желатина. Биохимическиеи свойства Сахаролитические свойства: ферментирует с образованием газа и кислоты: глюкозу, левулезу, мальтозу, глицерин, декстрин, салицин, адонит, инозит; не ферментирует галактозу, сахарозу, дульцит, маннит, арабинозу и рамнозу. Протеолитические свойства - гидролизуют желатин и эскулин; отдельные представители могут проявляют липазную активность. По биохимическим свойствам выделяют 4 группы Cl. botulinum: I группа обладают выраженными протеолитическими свойствами, ферментируют глюкозу и мальтозу, проявляют липазную активность (включает штаммы типа А, B и F); II группа не обладают сахаро- и протеолитической активностью; III группа обладают липазной активностью и слабыми протеолитическими свойствами (включает штаммы, продуцирующие токсины типов С и D); IV группа обладают протеолитической активностью, сахароитическую и липазную активность не проявляют (включает штаммы, продуцирующие токсины типа G). Антигенная структура В вегетативных клетках возбудителя ботулизма выявляют соматический О-антиген (групповой) и жгутиковый Н-антиген (типоспецифический). Эти антигены идентифицируются в реакции агглютинации. |