Микробиология. билеты все (копия). Строение бактериальной клетки. Споры и капсулы структура, расположение в клетке. Значение для бактериальной клетки. Методы обнаружения спор и капсул. Методы обеззараживания спороносной культуры
 Скачать 382.85 Kb.
|
|
3. Юноша П., 17 лет, заявил врачу, что он заразился гонореей от женщины, больной гонореей и состоящей на учете в диспансере. Последний факт при проверке подтвердился. 1. Сообщить родителям. 2. Вакцины, АБ, презервативы. 3. Микроскопический, серологический, микробиологический. 4. Гонококки – это диплококки, состоящие из 2-х бобовидных кокков, лежащих вогнутыми сторонами друг к другу формы, Гр-, неподвидны 5 билет 1. Питание, типы питания микробной клетки. Механизм поступления питате Питание- в качестве питательных веществ и источников энергии микроорганизмы используют различные органические и неорганические соединения, для нормальной жизнедеятельности им требуется также микроэлементы и факторы роста. Типы питания определяются по характеру усвоения углерода и азота. По усвоению углерода микроорганизмы делят на 2 типа: Автотрофы- способны синтезировать сложные органические вещества из простых неорганических соединений. Автотрофами являются многие почвенные бактерии. Гетеротрофы- для своего роста и развития нуждаются в готовых органических соединениях. Они могут усваивать углерод из углеводов, многоатомных спиртов, органических кислот, аминокислот. Гетеротрофы представляют обширную группу микроорганизмов, среди которых различают: Сапрофиты- получают готовые органические соединения от отмерших организмов. (бактерии гниения) Паразиты- живут и размножаются за счет органических веществ живой клетки растений, животных или человека. (вирусы, некоторые простейшие) По способу усвоения азота: Аминоавтотрофы- для синтеза белка клетки используют молекулярный азот воздуха или усваивают его из аммонийных солей. Аминогетеротрофы- получают азот из органических соединений- аминокислот, сложных белков. (все патогенные микроорганизмы) По источникам энергии среди микроорганизмов различают: Фототрофы- используют для биосинтетических реакций энергию солнечного света. Хемотрофы- которые получают энергию за счет окисления неорганических веществ и органических соединений. Транспорт питательных веществ Транспорт питательных веществ в клетку и выход из нее продуктов метаболизма осуществляется через цитоплазматическую мембрану. Питательные вещества проникают в клетку несколькими способами: 1.Пассивная диффузия- перемещение веществ через толщу мембраны, в результате чего выравниваются концентрация веществ и осматическое давление по обе стороны оболочки. Таким путем могут проникать питательные вещества, когда концентрация в среде значительно превышает концентрацию веществ в клетке. 2.Облегченная диффузия: проникновение питательных веществ в клетку с помощью активного переноса их особыми молекулами-переносчиками- пермиазами. Без затраты энергии. 3.Активный транспорт: осуществляется также с помощью пермиаз, но этот процесс требует затрату энергии. В этом случае питательное вещество может проникнуть в клетку, если концентрация его в клетке значительно выше концентрации в среде. 4. В ряде случаев транспортируемое вещество может подвергаться химической модификации и такой способ переноса веществ получил название переноса радикалов или транслокации химических групп. По механизму передачи этот процесс сходен с активным транспортом. Выход веществ из микробной клетки осуществляется или в виде пассивной диффузии, или в процессе облегченной диффузии с участием пермиаз.льных веществ в клетку. 2. Семейство Энтеробактериациа. Род Эшерихия. Характеристика биологических свойств. Классификация диареегенных кишечных палочек. Заболевания. Методы микробиологической диагностики эшерихиозов. (Продолжить) Бактерии этого семейства являются наиболее частыми возбудителями кишечных инфекций.. Это короткие, не образующие спор, палочки с закругленными концами, подвижные (перитрихи) или неподвижные, некоторые имеют капсулы. Аэробы или факультативные анаэробы. Характерна отрицательная окраска по Граму. Хорошо растут на обычных питательных средах с мясном экстрактом. На большинстве плотных сред энтеробактерии образуют круглые выпуклые блестящие S- (гладкие) колонии, а также часто обусловленные потерей капсулы плоские, неровные и зернистые R- (шероховатые) формы. Для них характерна ферментация глюкозы (и других углеводов) с образованием кислоты и газа. По отношению к лактозе их делят на лактоза- ферментирующие и лактоза - неферментирующие. Каталаза - положительны, восстанавливают нитраты в нитриты.Наибольшее значение для человека имеют рода Escherichia, Salmonella, Shigella, Yersinia, Proteus, Klebsiella и др. Род Escherichia. Эшерихии - наиболее распространенные аэробные бактерии кишечника, способные при определенным условиях вызывать обширную группу заболеваний человека, как кишечной (диарея), так и внекишечной (бактеремия, инфекции мочевыводящих путей и др.) локализации. Основной вид - E.coli (кишечная палочка) - самый распространенный возбудитель инфекционных заболеваний, вызываемых энтеробактериями. Этот возбудитель является показателем фекального загрязнения, особенно воды. Коли - титр и коли - индекс часто использовали как санитарные показатели. Эшерихии входят в состав микрофлоры толстого кишечника млекопитающих, птиц, пресмыкающихся и рыб. Культуральные свойства. На жидких средах E.coli дает диффузное помутнение, на плотных средах образует S- и R- формы колоний. На основной для эшерихий среде Эндо лактозоферментирующие кишечные палочки образуют интенсивно красные колонии с металлическим блеском, не ферментирующие - бледно- розовые или бесцветные колонии с более темным центром, на среде Плоскирева - красные с желтоватым оттенком, на среде Левина - темно- синие с металлическим блеском. Биохимические свойства. Кишечная палочка в большинстве случаев ферментирует углеводы (глюкозу, лактозу, маннит, арабинозу, галактозу и др.) с образованием кислоты и газа, образует индол, но не образует сероводород, не разжижает желатин. Антигенная структура. Какие - либо существенные морфологические различия между патогенными и непатогенными кишечными палочками не обнаружены. Их дифференциация основана на изучении антигенных свойств. Среди поверхностных антигенов выделяют полисахаридные О- антигены, жгутиковые Н- антигены и капсульные полисахаридные К- антигены. Известно более 170 вариантов О- антигенов (это соответствует принадлежности возбудителя к определенной серогруппе) и 57 - Н- антигенов (принадлежность к серовару). В состав диареегенных (вызывающих диарею) кишечных палочек входят 43 О- группы и 57 ОН- вариантов. Основные факторы патогенности диареегенных E.coli. 1. Факторы адгезии, колонизации и инвазии, связанные с пилями, фимбриальными структурами, белками наружной мембраны. Они кодируются плазмидными генами и способствуют колонизации нижних отделов тонкой кишки. 2. Экзотоксины: цитотонины (стимулируют гиперсекрецию клетками кишечника жидкости, нарушают водно - солевой обмен и способствуют развитию диареи) и энтероцитотоксины (действуют на клетки стенки кишечника и эндотелия капилляров). 3. Эндотоксин (липополисахарид). В зависимости от наличия различных факторов патогенности диареегенные кишечные палочки разделены на пять основных типов: энтеротоксигенные, энтероинвазивные, энтеропатогенные, энтерогеморрагические, энтероадгезивные. 4. Для патогенных кишечных палочек характерна выработка бактериоцинов (колицинов). Энтеротоксигенные E.coli имеют высокомолекулярный термолабильный токсин, схожий по действию с холерным, вызывают холероподобную диарею (гастроэнтериты у детей младшего возраста, диарею путешественников и др.). Энтероинвазивные кишечные палочки способны проникать и размножаться в клетках эпителия кишечника. Вызывают профузную диарею с примесью крови и большим количеством лейкоцитов (показатель инвазивного процесса) в испражнениях. Клинически напоминает дизентерию. Штаммы имеют некоторое сходство с шигеллами (неподвижные, не ферментируют лактозу, обладают высокими энтероинвазивными свойствами). Энтеропатогенные E.coli - основные возбудители диареи у детей. В основе поражений - адгезия бактерий к эпителию кишечника с повреждением микроворсинок. Характерна водянистая диарея и выраженное обезвоживание. Энтерогеморрагические кишечные палочки вызывают диарею с примесью крови (геморрагический колит), гемолитико - уремический синдром (гемолитическая анемия в сочетании с почечной недостаточностью). Наиболее частый серотип энтерогеморрагических кишечных палочек - О157: Н7. Энтероадгезивные E.coli не образуют цитотоксины, слабо изучены. Лабораторная диагностика. Материал для исследования 1. Испражнения. 2. Рвотные массы. При необходимости исследуют отделяемое из носа и зева, гной из уха, кровь, мочу, кусочки органов трупа. При возникновении очага заболеваний коли-энтеритом исследуют (по эпидемиологическим показаниям) пищевые продукты, смывы с рук обслуживающего персонала, игрушек и других предметов. Первый день исследования Испражнения,рвотные массы-Собранный материал засевают на среду Эндо илиЭМС. Посев следует производить на 2-3 чашки,набирая для каждой чашки материал заново. Чашкис посевом ставят в термостат Второй день исследования Вынимают из термостата засеянные накануне чашки ипросматривают их в падающем или проходящем свете.При наличии малиново-красных колоний на среде Эндо (сметаллическим блеском или без него) или фиолетовых насреде ЭМС ставят пробную реакцию агглютинации настекле для дифференциации ЭПКП от других разновидностей эшерихий.Постановка пробной реакции агглютинации. На одно или два предметных стекла наносят 10 капель поливалентной сыворотки (или иммуноглобулина). В каждую каплю вносят часть намеченной колонии и растирают ее. Колонии, давшие реакцию агглютинации,отсевают в пробирки со скошенным агаром и ставят втермостат на 18-20 ч. Если ни одна из 10 колоний не дала реакции агглютинации, дают отрицательный ответ. Третий день исследования Вынимают из термостата посевы и просматривают их.На МПА энтеропатогенные кишечные палочки образуют влажный, блестящий, сероватый налет, реже он бывает мутным. Выросшую на скошенном агаре культурупроверяют повторно в реакции агглютинации на стекле споливалентными эшерихиозными сыворотками (или иммуноглобулинами). Если выделенная культура дает реакциюагглютинации с поливалентной сывороткой (иммуноглобулином), то ее агглютинируют с каждой типовой сывороткой (иммуноглобулином) раздельно в разведении 1:5-1:10. Агглютинация с живой культурой имеет ориентировочное значение. Далее производят посев культуры на полужидкиесреды Гисса с лактозой, глюкозой, маннитом, сахарозой,мальтозой и другими сахарами, а также на бульон илипептонную воду для определения образования индола исероводорода. Одновременно определяют подвижность бактерий: делаютпосев в полужидкий (0,2%) агар уколом. Подвижные бактерии дают помутнение всей среды, неподвижныерастут только по уколу. Для окончательной идентификации выделенной культуры ставят развернутую реакцию агглютинации с живой игретой культурами: с живой - для определения К-антиге- на, с гретой - для определения О-антигена. Пробирки встряхивают и помещают в термостат на18-24 ч. Четвертый день исследования Производят учет изменений сред Гисса, регистрируютобразование индола и сероводорода.Большинство представителей эшерихий ферментируетуглеводы с образованием кислоты и газа, расщепляетбелковый питательный субстрат до образования индола. Учет пробирочной реакции агглютинации проводят припомощи лупы или агглютиноскопа. Агглютинация с живойкультурой крупнохлопчатая, с убитой - мелкозернистая.Реакцию считают положительной, если агглютинация сгретой культурой отмечается в разведении сыворотки нениже половины титра сыворотки, а живая культура агглютинируется сывороткой, разведенной не менее чем1:200. Играет роль и соотношение антител к гретой и живой культуре. Разведение сыворотки, в котором отмечается с гретой культурой , должно превышать разведение сыворотки, в котором агглютинируется живая культура, не менее чем в 2 раза. 3. В диспансер обратился больной Д., 27 лет, у которого врач диагностировал хроническую гонорею. До этого больной Д. 4 раза болел гонореей. ОТВЕТ 1. Отделяемое из слизистых оболочек уретры 2. А - бактериологический, серологические : РСК, ИФА. Б – микроскопия. 3. Боли при мочеиспускании, артриты, эндокардиты, конъюнктивы, выделение гноя из влагалища/ уретры. 4. Специфической профилиактики нет.Санитарное просвещение. Повышение культурногигиенического уровня: коррекция образа жизни, использование презервативов. Для профилактики гонорейного конъюктивита(бленнореи) новорожденным сразу вводят 1- 2 капли 30% альбуцида в конъюктивальный мешок. 6 билет 1. Дыхание. Типы дыхания (охарактеризовать). Методы культивирования анаэробов. Дыхание- это совокупность биохимических процессов, в результате которых освобождается энергия, необходимая для жизнедеятельности микробных клеток. По типу дыхания все микроорганизмы подразделяются на: Облигатные аэробы- живут и развиваются при свободном доступе кислорода. Микроаэрофилы- нуждаются в малых количествах кислорода. Облигатные анаэробы- способны жить и размножаться только в отсутствии свободного кислорода воздуха. Факультативные анаэробы- могут размножаться как при наличии молекулярного кислорода, так и при его отсутствии. Для культивирования анаэробов необходимо создать бескислородные условия. Физические методы основаны на создании вакуума в специальных аппаратах- анаэростатах. Анаэростат- небольшой цилиндр с герметично закрывающейся крышкой и краном для откачивания воздуха. Культивирование в атмосфере инертного газа. Воздух в анаэростате замещается азотом, смесью азота с углекислым газом или водородом. Культивирование в высоком столбике агара с глюкозой-микроорганизмы растут на дне, защищенные от воздуха высоким слоем среды. Метод Виньяля-Вейона. Посев производят в пробирку с расплавленным и остуженным до 45 агаром. Содержимое пробирки насасывают пастеровской пипеткой, заполняя ее до верха. Тонкий конец пипетки запаивают, опускают в пробирку с ватой на дне и переносят в термостат. В толще агара вырастают изолированные колонии. Распилив капилляр пипетки, их извлекают. Химические методы заключаются в том, что при культивировании материала на плотных средах помещают химические вещества. - для поглощения кислорода используют пирогаллол. Биологический метод основан на одновременном культивировании анаэробов и аэробов на плотных питательных средах в чашках Петри, плотно закупоренных. В чашку Петри наливают толстым слоем агар с 5% крови. По диаметру чашки делают желобок, чтобы культуры не смешивались. На одну половину засевают культуру аэроба, на другую-анаэроба. Края чашки заливают парафином. Посевы помещают в термостат. Сначала вырастают аэробы, после поглощения кислорода начинаю расти анаэробы. Добавление в среду окисляющих веществ. Используют среду Китта-Тароции, содержащую в качестве окисляющих веществ 0,5% раствор глюкозы и кусочки мяса. Перед посевом среду кипятят 20 мин на водяной бане-удаляют кислород. Быстро остужают до 45 и засевают. После посева в пробирку на поверхность среды наливают стерильное масло слоем 1-1,5 см, чтобы защитить среду от воздуха. Посевы выращивают в термостате. 2. Патогенные спирохеты. Род Трепонема. Характеристика биологических свойств. Заболевания. Методы микробиологической диагностики сифилиса. Спирохеты относятся к семейству Spirochaetaceae. Представляют собой тонкие, извитые микроорганизмы, тело которых состоит из осевой нити и окружающей ее спиралевидной цитоплазмы, что придает им штопора- образную форму. B ультрасрезах обнаружена трехслойная наружная мембрана. У некоторых спирохет в электронном микроскопе видны на концах нитевидные образования. Жгутиков, капсул, спор они не образуют. Очень подвижны. Обладают четырьмя видами движения: поступательным, сгибательным, волнообразным и вращательным. Размеры спирохет колеблются от 5 до 500 мкм в длину и 0,3-0,75 мкм в ширину. К патогенным для человека спирохетам относятся представители следующих родов: 1. Treponema - возбудители сифилиса и фрамбезии 2. Borrelia - возбудители возвратного тифа эпидемиче- ского, эндемического и ангины Венсана 3. Leptospira - возбудители лептоспирозов Морфологически спирохеты отличаются друг от друга количеством и глубиной завитков спирали и отношением к окраске. Основной метод окраски по Романовскому-Гимзе. Этим способом лучше всех окрашиваются боррелии- в сине-фиолетовый цвет, хуже - трепонемы – в бледно-розовый цвет. Спирохеты изучают в живом состоянии. Заболевания, вызываемые спирохетами, называются спирохетозами. Treponema pallidum - возбудитель сифилиса, включен в род Treponema. Морфология. Т. pallidum - спиралевидная нить размером 8-18 × 0,08-0,2 мкм с мелкими, равномерными завитками. Число завитков 12-14. Концы трепонемы заострены или закруглены. Подвижны. Обладают четырьмя видами движения. По Р-Г окрашиваются в бледно-розовый цвет. Плохое окрашивание объясняется малым содержанием нуклеопротеидов. Спирохеты можно выявлять в препаратах, окрашенных по Бурри, серебрением. Кроме того, их изучают в живом состоянии - в темном поле. Спор и капсул не имеют. Культивирование. Очень требовательны к питательным средам. На искусственных пит. средах они растут только в присутствии кусочков мозга или почек кролика и асцитической жидкости. Растут медленно, 5-12 дней при температуре 35-36° С в анаэробных условиях. Бледные трепонемы хорошо размножаются в курином эмбрионе (поперечным делением). При выращивании на искусственных питательных средах трепонемы теряют вирулентность. Такие культуры называются культуральными. Культуры, выращенные в курином эмбрионе, называют тканевыми. Они обычно сохраняют вирулентность. Ферментативные свойства. Не обладают. Однако культуральные штаммы различаются между собой по способности образовывать индол и сероводород. Токсинообразование. Не установлено. Антигенная структура. Бледная трепонема содержит несколько антигенных комплексов: полисахаридный, липидный и протеиновый. Серогруппы и серовары не установлены.Микробиологическая диагностика. Микробиологическая диагностика. Материал: содержимое твердого шанкра (первичный период),содержимое розеол, папул, везикул (вторичный период), кровь (вторичный, третий и четвертый периоды). Основные методы исследования: 1. Микроскопический. 2. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). 3. Серологический: а) реакция Вассермана (РСК); б) осадочные реакции. 4. Реакция иммобилизации трепонем (РИТ). Микроскопический метод Способ 1-микроскопия в темном поле, 2-3 капли жидкости из язвы наносят на предметное стекло, которое накрывают покровным. Микроскопируют в темном поле зрения (объектив 40×, окуляр 10×). Возбудитель сифилиса имеет вид двигающейся тонкой светлой спирали на темном фоне. Способ 2- мазок из полученной жидкости окрашивают по методу Романовского- Гимзы и микроскопируют. В препарате видна бледно-розовая спирохета. Способ 3- метод Левадити. Собранную жидкость импрегнируют серебром и микроскопируют. В препарате трепонема имеет вид черной спирали на светлом фоне. Иммунофлюоресценция (реакция строго специфична) Реакция Вассермана. Реакцию ставят по принципу реакции связывания комплемента. Отличается она тем, что при реакции Вассермана может быть использован неспецифический антиген. Например, липоидный экстракт из бычьего сердца- кардиоантиген. Ввиду не специфичности антител, реагирующих с этим антигеном, их называют реагинами. Реакция с неспецифическим антигеном объясняется тем, что в сыворотке крови больного повышается содержание глобулинов и изменяется степень их дисперсности. Глобулины, вступая в соединение с липидными экстрактами, образуют комплекс, который связывает комплемент, и поэтому гемолиз не происходит (в гемолитической системе). Отсутствие гемолиза-положительная реакция - серологически подтверждает диагноз «сифилис». При постановке серологических реакций нужно использовать также специфические антигены из тканевых трепонем и культуральные. 1) ++++ полная задержка гемолиза; - гемолиз; 2) антиген № 1 неспецифический (липоидная фракция бычьего сердца); 3) антигены № 2 и 3 специфические, приготовленные из культур трепо- нем. Осадочные реакции. 1. Реакция Кана. Сыворотку больного инактивируют при 56 °C 30 мин. К антигену (экстракт липидов бычьего сердца) прибавляют 0,6% холестерина для повышения чувствительности реакции. Учет результата: появление преципитации отмечается как положительная реакция. 2. Реакция Закса-Витебского (цитохолеваяосадочная реакция) является модификацией реакции Кана.Авторы применили более концентрированный антиген, ккоторому прибавлен холестерин, что способствует болеебыстрому образованию преципитата. Реакция иммобилизации трепонем (РИТ). Это ниболееспецифичная реакция в диагностике сифилиса.В настоящее время разработана методика этой реакции: взвесь трепонем получают из измельченного яичкакролика, зараженного T.pallidum, и сохраняют в специальной среде, не угнетающей подвижность трепонем. Впробирку вносят 1,7 мл взвеси тканевых трепонем, добав- ляют 0,2 мл испытуемой сыворотки, 0,1 мл свежего комплемента.Контроли: в 1-ю пробирку вместо испытуемой сыворотки вносят сыворотку здорового лица; во 2-юналивают инактивированную сыворотку морской свинки.Все пробирки помещают в эксикатор или анаэростат,заполняют их смесью газов (1 объем углекислоты и 19объемов азота) и ставят в термостат при 35°C. Затемисследуемый материал наносят на стекло и изучаютподвижность трепонем в темном поле. Принцип реакции заключается в том, что сыворотка больного сифили- сом в присутствии комплемента угнетает движение бледной трепонемы. Определяют процент иммобилизованныхтрепонем.Результат считают положительным, если иммобилизованных трепонем выше 50%; слабоположительным-от 30- 50%; отрицательным- ниже 20%. 3. При массовом обследовании детей школы-интерната, где выявлен и госпитализирован больной с диагнозом менингит, 1. Назофарингит 2. Стерильным изогнутым тампоном под углом 135*. 3. Избегать высушивание и охлаждения материала. 1 день - забор материала и засев его в чашки Петри с сывороточным агаром ставят в термостат. 2 день – отбирают подозрительные колонии, делают мазок, окрашивают по Грамму, микроскопируют и делают пересев на сывороточный агар для выделения чистой культуры. 3 день – проверяют чистоту выделенной колонии, делают мазок, окрашивают, микроскопируют и делают посевы: на агар без сыворотки, агар с сывороткой при температуре 37* и 22*, на ст Гисса. И ставят пробы на наличие оксидазы – колонии приобретают розовый цвет. 4 день – учет рез-ов. 7.билет 1. Дать определение понятий: «чистая культура», «смешанная культура», «штамм», «клон». Этапы выделения чистой культуры, определение видовой принадлежности - идентификация. Смешанная культура (mixed culture). Смешанная культура (mixed culture) [лат. cultus — возделывание, обрабатывание] — культура клеток, содержащая клетки различного происхождения. Напр., при пересадке органов для оценки совместимости донора и реципиента по антигенам создают С.к. лимфоцитов донора и реципиентов. Смотрите также: Словарь терминов по биотехнологии В.З. Тарантула: алфавитный указатель. Штамм (от нем. Stamm, букв. — «ствол; род») — чистая культура бактерий, грибов, риккетсий и иных микроорганизмов, выделенная из определённого источника и идентифицированная по тестам современной классификации. Чи́стая культу́ра (или аксеничная культура) — совокупность микроорганизмов одного вида, имеющих одинаковые морфологические и биохимические свойства и одинаковые свойства их культур. Чистые культуры используются при: изучении систематики и изменчивости микроорганизмов; диагностике для идентификации возбудителей порчи пищевых продуктов; диагностике инфекционных болезней Клон (отводок) – культура микроорганизмов, полученная в результате размножения одной бактериальной клетки и проявляюшая фенотипические и генотипические признаки свойственные типовому виду. первый день (1 этап исследования) в стерильную посуду (пробирка, колба, флакон) забирают патологический материал. Его изучают за внешним видом, консистенцией, цветом, запахом и другим признаками, готовят мазок, красят и исследуют под микроскопом. На второй день (2 этап исследования) на поверхности плотной питательной среды микроорганизмы образуют сплошной, густой рост или изолированные колонии. Чашки тщательным образом рассматривают и изучают изолированные колонии, которые выросли на поверхности агара. Обращают внимание на величину, форму, цвет, характер краев и поверхности колоний, их консистенцию и другие признаки. При потребности исследуют колонии под лупой, малым или большим увеличением микроскопа. На третий день (3 этап исследования) изучают характер роста чистой культуры микроорганизмов и проводят ее идентификацию. Сначала обращают внимание на особенности роста микроорганизмов на среде и делают мазок, крася его за методом Грама, с целью проверки культуры на чистоту. Если под микроскопом наблюдают бактерии однотипной морфологии, размеров и тинкториальних (способность краситься) свойств, делают вывод, что культура чиста. В некоторых случаях уже за внешним видом и особенностями их роста можно сделать вывод о виду выделенных возбудителей. Определение вида бактерий за их морфологическими признаками называется морфологической идентификацией. Определения вида возбудителей за их культуральными признаками называют культуральной идентификацией. К основным видовым признакам бактерий относятся: • морфология микробной клетки; • тинкториальные свойства — особенности окрашивания с помощью простых и сложных методов окраски; • культуральные признаки — особенности роста микроба на питательных средах; в биохимические признаки — наличие у бактерий фермен тов, необходимых для синтеза или расщепления (фер ментации) различных химических соединений. В бактериологической практике чаще всего изучают сахаро-литические и протеолитические ферменты. 2. Патогенные кокки.Стрептококки.Характеристика биологических свойств. Патогенные свойства,заболевания.Методы микробиологической диагностики стрептококковых инфекций. В семейство Streptococcaceae входит семь родов, из которых для человека наибольшее значение имеют стрептококки (род Streptococcus) и энтерококки (род Enterococcus). Наиболее значимые виды - S.pyogenes (стрептококки группы А), S.agalactiae (стрептококки группы В), S.pneumoniae (пневмококк), S.viridans (зеленящие стрептококки, биогруппа mutans), Enterococcus faecalis. Морфология. Стрептококки (от греч. streptos - цепочка и coccus - зерно) - грамположительные цитохромнегативные бактерии шаровидной или овоидной формы, растущие чаще в виде цепочек, преимущественно неподвижные, не имеют спор. Патогенные виды образуют капсулу (у пневмококка имеет диагностическое значение). Факультативные (большинство) или строгие анаэробы. Культуральные свойства. Стрептококки плохо растут на простых питательных средах. Обычно используют среды с кровью или сывороткой крови. Чаще применяют сахарный бульон и кровяной агар, содержащий 5% дефибринированной крови. На бульоне рост придонно - пристеночный в виде крошковатого осадка, бульон чаще прозрачен. На плотных средах чаще образуют очень мелкие колонии. Оптимум температуры +37о С, рН - 7,2-7,6. На плотных средах стрептококки группы А образуют колонии трех типов: - мукоидные (напоминают капельку воды) - характерны для вирулентных штаммов, имеющих капсулу; - шероховатые - плоские, с неровной поверхностью и фестончатыми краями - характерны для вирулентных штаммов, имеющих М- антигены; - гладкие - характерны для маловирулентных штаммов. Предпочитают газовую смесь с 5% СО2. Способны образовывать L- формы. Для дифференциации стрептококков используют различные признаки: рост при +10о и 45о С, рост на среде с 6,5% NaCl, рост на среде с рН 9,6, рост на среде с 40% желчи, рост в молоке с 0,1% метиленовым синим, рост после прогревания в течение 30 мин. при 60о С. Наиболее распространенный S.pyogenes относится к 1 группе (все признаки отрицательны), энтерококки (3 группа) - все признаки положительны. Существует ряд классификаций стрептококков. Наиболее проста классификация, основанная на особенностях роста этих микроорганизмов на агаре с кровью барана (по отношению к эритроцитам). Бета - гемолитические стрептококки при росте на кровяном агаре образуют вокруг колонии четкую зону гемолиза, альфа - гемолитические - частичный гемолиз и позеленение среды (превращение окси- в метгемоглобин), гамма- гемолитические - на кровяном агаре гемолиза незаметно. Альфа - гемолитические стрептококки за зеленый цвет среды называют S.viridans (зеленящими). Антигенная структура. Серологическая классификация имеет практическое значение для дифференциации имеющих сложное антигенное строение стрептококков. В основе классификации - группоспецифические полисахаридные антигены клеточной стенки. Выделяют 20 серогрупп, обозначенных заглавными латинскими буквами. Наибольшее значение имеют стрептококки серогрупп А,В и D. У стрептококков серогруппы А имеются типоспецифические антигены - белки М, Т и R. По М- антигену гемолитические стрептококки серогруппы А подразделены на серовары (около 100). Стрептококки имеют перекрестно - реагирующие антигены с антигенами клеток базального слоя эпителия кожи, эпителиальных клеток корковой и медуллярной зон тимуса. В клеточной стенке стрептококков обнаружен также антиген (рецептор II), способный взаимодействовать с Fс- фрагментом IgG. Факторы патогенности стрептококков. 1. Белок М- главный фактор. Определяет адгезивные свойства, угнетает фагоцитоз, определяет типоспецифичность, обладает свойствами суперантигена. Антитела к М- белку обладают протективными свойствами. 2. Капсула - маскирует стрептококки за счет гиалуроновой кислоты, аналогичной гиалуроновой кислоте в тканях хозяина. 3. С5а - пептидаза - расщепляет С5а - компонент комплемента, чем снижает хемоатрактивную активность фагоцитов. 4. Стрептококки вызывают выраженную воспалительную реакцию, в значительной степени обусловленную секрецией более 20 растворимых факторов - ферментов (стрептолизины S и О, гиалуронидаза, ДНК- азы, стрептокиназа, протеазы) и эритрогенных токсинов. 5.Эритрогенин - скарлатинозный токсин, обусловливающий за счет иммунных механизмов образование ярко красной скарлатинозной сыпи. Выделяют три серологических типа этого токсина (А,В и С). Токсин обладает пирогенным, аллергенным, иммуносупрессивным и митогенным действием. Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат: 1) слизь из зева при ангине и скарлатине; 2) кровь при эндокардите и подозрении на сепсис; 3) гнойное отделяемое из очага поражения; 4) мокрота при заболеваниях органов дыхания; 5) моча при заболеваниях почек и мочевыводящих путей. Чаще всего исследуют слизь из зева и кровь. Слизь из зева, взятую стерильным ватным тампоном, засевают на чашки с кровяным агаром. Посевы выдерживают в термостате при 37°С 18—20 ч (первый день). На второй день просматривают колонии, делают мазки, микроскопируют. Колонии, окруженные зоной гемолиза, отсевают в пробирку с бульоном Мартена или кровяным бульоном. На третий день учитывают характерный рост стрептококка на бульоне Мартена и проводят определение серологической группы стрептококка с помощью реакции преципитации, определяют серологический тип стрептококка в реакции агглютинации на стекле по методу Гриффитса с типовыми антистрептококковыми сыворотками. Посев 5—10 мл крови для бактериологического исследования производят в колбы с 10-кратным объемом сахарного бульона или печеночного бульона Китта — Тароцци. Посевы выдерживают в термостате 17,2—2 мес, делая контрольные высевы на чашки с кровяным агаром каждые 2—3 дня. Дальнейший ход исследования аналогичен бактериологическому изучению мазков из зева. Серологический метод диагностики стрептококковых инфекций используют главным образом для определения антител к стрептолизину О, фибринолизину, гиалуронидазе. 3. При исследовании испражнений ребенка О., 2 лет, находящегося на лечении в дизентерийном отделении инфекционной больницы, выделена культура Гр- и лактозоотрицательных бактерий со среды Плоскирева. - Какие исследования необходимо провести, чтобы определить вид возбудителя? Бактериологический и серологическую идентефикацию Вынимают чашки из термостата (инкубация 18-24 ч) и просматривают выросшие колонии невооруженным глазом и при помощи лупы. Несколько (5-6) подозрительных колоний выделяют на среду Олькеницкого или Рассела. Посев производят следующим образом: снятую колонию осторожно, не задевая края пробирки, вносят в конденсационную жидкость, затем штрихами засевают всю скошенную поверхность среды и делают укол в глубину столбика для выявления газообразования. Укол следует производить в центр агарового столбика. Пробирки с посевами ставят в термостат. Если исследуемый материал был посеян на среду обогащения, то через 18-24 ч производят высев со среды обогащения на чашки с дифференциальными средами. Дальнейшее исследование ведут по общей схеме. 3 день: Вынимают пробирки с посевами из термостата и просматривают характер роста. Культуру, расщепляющую только глюкозу, подвергают дальнейшему изучению: делают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. При наличии в мазках грамотрицательных палочек изучают их подвижность и ферментативные свойства. Подвижность можно определить в висячей капле или в раздавленной капле, а также по характеру роста в полужидкой среде Гисса или в 0,2% агаре. При наличии подвижности при посеве уколом рост на среде диффузный, среда мутнеет. Для выявления ферментативной активности производят посев на среды Гисса, МПБ, пептонную воду. В пробирки с последними средами опускают (под пробку) индикаторные бумажки для определения индола и сероводорода. Делают также посев на лакмусовое молоко. Тиф все до кислоты расщепляет ,паратиф до кислоты и газа ( речь о мальтозе,глюкозе и манните,лакмусовое молоко, остальное -) индол -, сероводород у тифа и паратифа В +,у Пар А – Серологическую идентификацию сальмонелл начинают с реакции агглютинации на стекле с поливалентной О-сывороткой А, В, С, D, Е. При отсутствии агглютинации выделенную культуру испытывают с поливалентной Осывороткой к редким группам сальмонелл. При положительной реакции с одной из сывороток культуру испытывают с каждой О-сывороткой, входящей в состав поливалентной, для определения О-серогруппы. Установив принадлежность культуры к О-группе, определяют ее Н-антигены с сыворотками первой, а затем второй фазы озбудители брюшного тифа, содержащие Vi-антиген, испытывают Vi-фагами (их 86). Определение фаготипа имеет большое эпидемиологическое значение (см. рис. 43). Методика фаготипирования. 1-й метод. В чашки Петри наливают 20-25 мл агара и подсушивают с открытыми крышками в термостате. Дно чашки делят на секторы. На каждом секторе пишут название фага. Изучают 4-6-часовую бульонную культуру, так как она содержит больше Vi-антигена. На поверхность агара наносят 8-10 капель бульонной культуры и стеклянным шпателем растирают ее по поверхности агара. Чашки с посевами подсушивают с открытыми крышками в термостате. На каждый сектор наносят каплю соответствующего типового фага. После подсыхания капель чашки ставят в термостат на 18-24 ч. Результат учитывают невооруженным глазом или с помощью лупы через дно чашки. Наличие лизиса культуры одним или несколькими типовыми фагами позволяет определить принадлежность выделенного штамма к определенному фаготипу. 2-й метод. На питательную среду культуру наносят каплями. На каждую каплю после высыхания культуры в термостате наносят каплю типового фага. Ставят в термостат. Степень лизиса выражают по четырехкрестной системе - Какие агглютинирующие сыворотки необходимо использовать для идентификации возбудителя? В какой последовательности? Сначала с поливалентной О-сывороткой, потом с каждой О-сывороткой по отдельности,после определяются Н антигены с сывороткой первой а затем второй фазы - На который день исследования будет получен результат микробиологического исследования? На 3-4 день 8 билет 1. Стерилизация (определение). Виды стерилизации (охарактеризовать). Физическая стерилизация. Сухожаровой шкаф – устройство, режимы работы, назначение. Стерилизация – это полное уничтожениевсех форм м.о (как патогенных, так и непатогенных, как споровых так и неспоровых). Виды: 1) физическим-воздействие высокой температуры, УФ-лучей, использование бак фильтров;2) химическим- использование различных дезинфектантов, антисептиков;3) биологическим – применение антибиотиков. Физическая стерилизация: 1)Сухожаровая стерилизация-печь Пастера.А)160-165®С-60мин; б) 180®С-15мин; в) 200®С-5мин. 2) Стерилизация паром под давлением – автоклав. А)1 атм. 120®-20-30 мин; б)0,5 атм 112®-10-15 мин. 3) стерилизация текучим паром- аппарат Коха-3 дня подряд при 100®-30-60 мин. Устройство: шкаф с двойными стенками, изготовленный из термостойких материалов- металла и асбеста. Нагревают шкаф с помощью электронагревательных прибор. Шкафы снабжены регуляторами, обеспечивающими необходимую температуру. Для контроля температуры имеется термометр. Назначение: Сухим жаром стерилизуют всю стеклянную, фарфоровую посуду, бактериальные чашки, пипетки, хирургические инструменты. Режим работы: 1. Проверка исправности прибора; 2. Загрузить посуду завернутую в бумагу не более чем на 70% и закрыть дверь; 3. Вкл. Шкаф. Начала стерилизации начинается с момента показания прибора 180®4.По окончания стерилизации выкл. Обогрев, дать упасть температуре до 85®, открыть дверцу, затем разгрузить при 60 2. Возбудители вирусных инфекций. Семейство Рабдовирусов. Вирус бешенства. Характеристика биологических свойств. Методы вирусологической диагностики бешенства. Специфическая профилактика. Возбудитель вируса бешенства - Rabies virus, относится к семейству Rhabdoviridae, род Lyssavirus. Вирус бешенства – инфекционное заболевание человека и теплокровных животных, протекает остро, передается при укусе, через слюну больных животных, и характеризуется тяжелым поражением ЦНС с летальным исходом. Классификация: − Дикий вирус – опасен для человека и животных. − Фиксированный вирус – не опасен для человека и животных. Используют для приготовления антирабической вакцины (т.к. сохранил АГ свойства). Искусственно сделан. Морфология: Возбудитель бешенства имеет палочковидную форму, один конец плоский, другой – вытянутый: • размер 80-180 нм; • вирион содержит однонитчатую РНК, окруженную капсидом. Снаружи он покрыт суперкапсидной оболочкой, в состав которой входят гликопретеиды и гликолипиды. В оболочке имеются шиловидные образования – пепломеры; • в цитоплазме пораженных вирусом клеток образуются специфические включения, тельца Бабеша-Негри. Величина телец от 3-4 до 20 мкм, чаще сферической формы. Кислые красители окрашивают их в рубиново-красный цвет. Тельца располагаются в цитоплазме нервных клеток головного мозга. Обнаружение их имеет диагностическое значение. Культивирование: Вирус бешенства культивируют в мозговой ткани белых мышей, сирийских хомяков, кроликов, крыс, овец, в диплоидных клетках человека. У зараженных животных развиваются параличи конечностей, затем они погибают. Вирус культивируют в культурах тканей и в желточном мешке куриного эмбриона. АГ-структура: Имеет сердцевинные и поверхностные антигены гликопротеидной природы. Белок шипов, 3. Педиатр приглашен на дом по поводу заболевания 2-х детей, 1 и 3-х лет. У них болезнь началась 1. Произвести микроскопическое исследование 2. Рвотные массы, кал, слизь из зева и носа, моча 3. 6% солевой МПА, кровяной агар. Для испражнений-глицериновая смесь 30%, посев на д\д среды Эндо, Плоскирева, висмут-сульфатный агар ,на обогащения среду Мюллера Кауфмана 4. При выявлении в биоматериале из носа и зева. 9 билет 1. Стерилизация (определение). Виды стерилизации (охарактеризовать). Физическая стерилизация. Сухожаровой шкаф – устройство, режимы работы, назначение. Стерилизация – это полное уничтожениевсех форм м.о (как патогенных, так и непатогенных, как споровых так и неспоровых). Виды: 1) физическим-воздействие высокой температуры, УФ-лучей, использование бак фильтров;2) химическим- использование различных дезинфектантов, антисептиков;3) биологическим – применение антибиотиков. Физическая стерилизация: 1)Сухожаровая стерилизация-печь Пастера.А)160-165®С-60мин; б) 180®С-15мин; в) 200®С-5мин. 2) Стерилизация паром под давлением – автоклав. А)1 атм. 120®-20-30 мин; б)0,5 атм 112®-10-15 мин. 3) стерилизация текучим паром- аппарат Коха-3 дня подряд при 100®-30-60 мин. Устройство: шкаф с двойными стенками, изготовленный из термостойких материалов- металла и асбеста. Нагревают шкаф с помощью электронагревательных прибор. Шкафы снабжены регуляторами, обеспечивающими необходимую температуру. Для контроля температуры имеется термометр. Назначение: Сухим жаром стерилизуют всю стеклянную, фарфоровую посуду, бактериальные чашки, пипетки, хирургические инструменты. Режим работы: 1. Проверка исправности прибора; 2. Загрузить посуду завернутую в бумагу не более чем на 70% и закрыть дверь; 3. Вкл. Шкаф. Начала стерилизации начинается с момента показания прибора 180®4.По окончания стерилизации выкл. Обогрев, дать упасть температуре до 85®, открыть дверцу, затем разгрузить при 60 2. Патогенные кокки.Стафилококки. Характеристика биологических свойств. Патогенные свойства,заболевания.Методы микробиологической диагностики стафилококковых инфекций. Семейство Staphilococcoceae, род Staphilicoccus. Заболевания у человека – пиодермия, фурункулы, панариции, абсцессы; воспалительные процессы раличных органов и тканей; ангины, циститы, остеомиелиты, холециститы, маститы; сепсис и септикопиемия; пищевые токсикоинфекции. Основные представители, играющие основную роль в патологии человека относятся к 3-м основным семействам. 1)Микрококкация - основной представитель род Стафилококкус; 2) Стрептококкация - основной представитель род Стрептококкус; 3) Нейссериация – род Нейсерия. Все представители данной группы имеют шаровидную форму, неспорообразующие, неподвижны, большинство из представителей обладают способностью вызывать гнойно-воспалительные процессы. Отличаются: ферментативной активностью, способностью продуцировать различные ферменты агрессии и токсины, отношению к окраске по Граму, способностью поражать определенные органы и ткани. Основным методом диагностики является микробиологический метод исследования. Стафилококки относятся к семейству Микрококкация род Стафилококкус.Стафилококки обнаружены Пастером в 1897г. Подробно они были изучены Огстоном (1882) и Розенбахом (1884). Морфология. Грамположительные кокки, для которых характерно взаиморасположение скоплениями в виде гроздей винограда, т.к. они делятся во взаимоперпендикулярных плоскостях. Имеют микрокапсулу, спор не образуют, жгутиков не имеют. Культуральные свойства. Факультативные анаэробы, хемоорганотрофы. Хорошо растут на простых питательных средах, в том числе на средах с 5- 10% NaCl. Температурный оптимум от +35 до +37о С, рН 6-8 (лучше слабощелочная реакция среды). На плотных средах образуют непрозрачные круглые (2-4 мм в диаметре) ровные колонии, окрашенные в цвет липохромного пигмента (кремовый, желтый, оранжевый). Кроме S- форм колоний могут образовывать R- формы. На жидких средах дают равномерное помутнение, затем выпадает рыхлый осадок. Биохимические свойства. Обладают высокой биохимической активностью, образуют различные ферменты, во многом определяющие патогенность. Каталаза- положительны, оксидаза- отрицательны. Углеводы ферментируют до кислоты без газа, разжижают желатин с образованием воронки, образуют сероводород. По наличию коагулазы их делят на две группы - коагулаза- положительные и коагулаза- отрицательные. Среди патогенных видов коагулаза - положителен лишь S.aureus, остальные - отрицательны. Антигенная структура очень сложная (более 50 типов антигенов). По специфичности антигены подразделяют на родовые (общие для стафилококков), перекрестнореагирующие (с изоантигенами эритроцитов, кожи и почки человека), видо- и типоспецифические. Видоспецифическими антигенами являются тейхоевые кислоты, белок А золотистого стафилококка. Антигенными свойствами обладают токсины. Факторы патогенности. К ним относят микрокапсулу, компоненты клеточной стенки (тейхоевые кислоты, белок А), ферменты и токсины. 1. Факторами адгезии являются высокие гидрофобные свойства поверхностных структур. 2. Компоненты клеточной стенки стимулируют развитие воспалительных реакций, основное значение в них имеют нейтрофилы. 3. Разнообразные ферменты стафилококков играют роль факторов агрессии и защиты. Главным фактором является плазмокоагулаза, свертывающая сыворотку (плазму) крови и образующая тромбиноподобное вещество, обвалакивающее стафилококки и препятствующее действию защитных реакций организма. Кроме нее - фибролизин, ДНК- аза, лецитиназа, фосфатаза. 4. Стафилококки синтезируют обширный комплекс экзотоксинов. Мембраноповреждающие токсины могут повреждать эритроциты (гемолизины), лейкоциты, макрофаги, тромбоциты и др. Выделяют несколько типов, отличающихся по антигенной структуре, спектру лизируемых клеток, скорости действия. Эксфолиативные токсины оказывают дерматонекротическое действие (пузырчатка новорожденных). Экзотоксин, вызывающий синдром токсического шока. Высокосорбционные тампоны вызывали тяжелый эндотоксический шок у женщин. Энтеротоксины, с которыми связаны пищевые интоксикации. Энтеротоксины - термостабильные белки со свойствами суперантигенов. Они вызывают избыточный синтез интерлейкина 2, который и обусловливает интоксикацию. Интоксикации чаще связаны с употреблением инфицированных стафилококками молочных продуктов. 5. Ряд экзотоксинов и других структур стафилококков обладают аллергизирующим действием, обусловливая эффект развития ГЗТ. Наличие перекрестно - реагирующих антигенов способствует развитию аутоиммунных процессов. 6. Факторы, угнетающие фагоцитоз - капсула, белок А, тейхоевые кислоты, пептидогликан, токсины. Диагностика. Применяют бактериологические, микроскопические и серологические методы. Основным является бактериологический метод. Материал для исследования - кровь, гной, слизь из носа и зева, отделяемое ран, мокрота (при пневмонии), испражнения (при колите), подозрительные продукты, рвотные массы и промывные воды желудка, испражнения - при пищевых интоксикациях. Первый день: 1) микроскопия материала, окрашенного по Граму, позволяет составить ориентировочное представление о виде микроба и степени обсемененности материала; 2) посев исследуемого материала в солевой бульон, на чашки с молочно-солевым агаром (или желточно-солевым) и 5% кровяным агаром. Посевы помещают в термостат при 37°С на 18—24 ч. Второй день: просмотр чашек с посевами. На чашке с желточно-солевым агаром отмечают образование зоны помутнения вокруг колонии с радужным венчиком (в случае наличия фермента лецитовителлазы), на кровяном агаре — гемолиз. Подозрительные колонии микроскопируют и отсевают на скошенный агар для выделения чистой культуры. Из солевого бульона делают высев на чашки с молочно-солевым или желточно-солевым агаром. Далее исследуют, как первичные посевы на плотных средах. Третий день: культуру, выросшую на скошенном агаре, изучают, определяя признаки патогенности: ставят реакцию плазмокоагуляции, засевают в пробирку с маннитом и определяют чувствительность к антибиотикам. В целях эпидемиологического анализа проводят фаготипирование. Четвертый день: учет реакции плазмокоагуляции, ферментации маннита, чувствительности к антибиотикам, фаготипирования. Культуры, коагулирующие плазму, сбраживающие маннит в анаэробных условиях, относят к патогенным. 3. В посёлке в течение 3-х дней остро заболело 17 человек. У них заболевание проявилось тошнотой, рвотой, в виде «сетки» перед глазами, 1) Поставить биопробу, произвести м/б исследование. 2) Остатки рыбы, кровь, рвотные массы, промывные воды. 3-4) 1 день-Их помещают в стерил ступку + изот р-р и растирают. Первую |