Гнойно-воспалительные, желудочно-кишечные, анаэробные инфекции. Тема занятия. Микробиологические аспекты лабораторной
 Скачать 444.63 Kb.
|
|
Лабораторная диагностика. Исследуемый материал – испражнения, рвотные массы остатки пищевых продуктов. 1.микроскопический метод – не применяется, так род определить невозможно. 2.бактериологический метод: Первый день - испражнения, рвотные массы засевают на среды Эндо и Левина. Второй день – исследуют крупные изолированные колонии малинового цвета на среде Эндо и темно-синие на среде Левина. С каждой чашки исследуют не менее 10 колоний в реакции агглютинации с комплексной ОК(В)-коли сывороткой для выявления патогенных вариантов кишечной палочки. Агглютинирующую колонию накапливают на среде Ресселя. Третий день – отмечают изменение всего столбика цвета среды Ресселя. Для определения серотипа ставится реакция агглютинации с типовыми ОК(В)-коли сыворотками. При наличии агглютинации с одной из сывороток ставят развернутую реакцию агглютинации с этой же сывороткой.С живой культурой для установления В-антигена и с культурой, прогретой в течение 2 ч при 100 0 С, для установления О-антигена. 3.серологический метод – не применяется. 4.аллергический метод – не применяется. 5.биологический метод - не применяется. Лечение и профилактика Специфическая профилактика коли-инфекций не разработана. Этиотропная терапия – ампициллин, норфлоксацин, амоксициллин. Блок контроля теоретических знаний. Вопросы для контроля. 1. Опишите морфологические и культуральные свойства возбудителей кишечно-тифозной группы бактерий. 2. Назовите основные группы возбудителей коли-инфекций. 3. Назовите источники коли - инфекции, пути передачи, входные ворота. 4.Назовите основные клинические формы коли-инфекции. 5.Назовите исследуемый материал и основные методы лабораторной диагностики коли-инфекции. 6. Как определить патогенные варианты кишечной палочки? 7.Перечислите дифференциально-диагностические среды для тифозно-кишечной группы бактерий, их состав и назначение. 8. Назовите средства специфической и этиотропной терапии коли-инфекции. 9. Какова специфическая профилактика коли-инфекции? Тестовый контроль обязательного уровня знаний 1.Назовите к какому роду относится возбудитель коли-инфекции. а) Staphylococcus б) Salmonella в)Esherichia г)Shigella д)Corynebacterium 2. Выберите антигены патогенных вариантов кишечной палочки. а). О-антиген б). Н-антиген в). КВ – антиген г). К-антиген д).КA-антиген е).КL-антиген 3. Выберите основные методы лабораторной. диагностики коли-инфекции. а).микроскопический б).бактериологический в).серологический г).аллергический д).биологический 4.Укажите морфологические признаки возбудителя коли-инфекции. а).грамотрицательный б).грамположительный в).палочковидная форма г).имеет бобовидную форму д). имеет кокковую форму е.подвижен ж).неподвижен 5.Перечислите патогенетические факторы кишечной палочки а).ферменты агрессии б).эндотоксин в).экзотоксин г).пили Ситуационный задачи Задача 1 В детскую инфекционную клинику доставлен ребенок 5 лет с признаками гастроэнтерита. Ребенок посещает старшую группу детского сада. В приемном отделении был взят исследуемый материал. Диагноз гастроэнтерит подтвердился, состояние ребенка средней тяжести. 1. Какие методы лабораторной диагностики использовались для постановки диагноза? 2. Какой исследуемый материал был взят у ребенка? 3. Какие возбудители могли вызвать подобную инфекцию? Блок контроля практических навыков. Протокол № 1 Овладение методом изучения культуральных свойств E. сoli. .Опишите культуральные свойства колоний на средах Эндо и Левина, полученных от посева испражнений больного. Сделать заключение. Оформить протокол. Протокол №2 Овладение методом постановки реакции агглютинации (РА) Поставить реакцию агглютинации на стекле с каждой из 10 отмеченных колоний с целью сероидентификации колипатогенных штаммов. Сделать заключение. Оформить протокол. Протокол № 3.Изучение биохимических свойств культуры по результатам посева в «пестрый ряд». Сделать заключение. Оформить протокол. Блок информации Брюшной тиф – острое инфекционное заболевание, сопровождающееся бактериемией, специфическим поражением лимфатического аппарата тонкого кишечника и явлениями общей интоксикации. Интоксикация проявляется сильной головной болью, помрачнением сознания, бредом (тиф). Возбудители брюшного тифа относятся к семейству Enterobacteriaceae, роду Salmonella, который включает в себя большую группу бактерий, но только три из них (S.typhi, S.paratyphi A и S.paratyphi B) вызывают заболевание у человека с клинической картиной брюшного тифа. Эпидемиология Источник инфекции брюшного тифа и паратифа А – больные люди и бактерионосители; паратифа Б – кроме человека, животные и птицы. Путь передачи инфекции – фекально-оральный. Факторы передачи инфекции - пищевые продукты (особенно молоко), вода. Входные ворота – слизистая желудочно-кишечного тракта. Патогенез Инкубационный период в среднем 2 недели. Патогенез и клиническая картина брюшного тифа и паратифов очень сходны. В развитии болезни выделяют несколько стадий. I стадия – пищеварительно-дигестивная. Это начало инкубационного периода. Длится 6-8 часов ( это время от момента попадания возбудителя в ротовую полость до достижения им тонкого кишечника). II стадия – инвазии. Возбудитель внедряется в лимфоидный аппарат тонкого кишечника (пейеровы бляшки и солитарные фолликулы), размножается в нем с развитием воспалительного процесса. Эта стадия длится 2 недели (инкубационный период). В инкубационный период происходит сенсибилизация организма и лимфатического аппарата кишечника. В конце инкубационного периода, за два дня до заболевания появляются продромальные симптомы: недомогание, боли в животе, субфебрильная температура. III стадия – бактериемии. Возбудитель в большом количестве через воспаленный лимфоидный аппарат тонкого кишечника проникает в кровь. Под действием бактерицидных свойств крови идет массовый распад бактерий с выделением эндотоксина, что сопровождается повышением температуры. Это начало заболевания. Стадия бактериемии длится 1 неделю. IY стадия – паренхиматозной диффузии. Током крови возбудитель разносится по организму и оседает в паренхиматозных органах (костный мозг, селезенка, легкие, кожа, почки, печень). В большом количестве возбудитель накапливается в желчных ходах печени и в желчном пузыре, где он находит благоприятные условия для своего размножения. Эта стадия длится 1 неделю и соответствует 2-ой неделе заболевания (разгар болезни). Y стадия – выделительно – аллергическая. Из желчного пузыря возбудитель опять поступает в тонкий кишечник, откуда часть его выделяется с испражнениями, а часть вновь внедряется в лимфоидный аппарат кишечника. Вторичное внедрение в уже сенсибилизированный лимфоидный аппарат вызывает в нем гиперергическую реакцию в виде некроза и язв. (ГЗТ) Выделение возбудителя из организма может также происходить с мочой, потом и молоком кормящей матери. Эта стадия длится 1 неделю и соответствует 3-ей неделе заболевания. YI стадия – выздоровление. Клинически этот период характеризуется очищением язв от некротических масс и заживлением. Это происходит на 5-6-ой неделе заболевания.Постинфекционный иммунитет – клеточный и гуморальный. Лабораторная диагностика. Исследуемый материал зависит от стадии патогенеза. Таблица Стадия патогенеза Период клинических проявлений Исследуемый материал Метод исследования I.Пищеварительно- дигес- тивная Инкубационный период - - II. Инвазии Инкубационный период - - III. Бактериемии Первая неделя Кровь из вены 5-10 мл Гемокультура IY. Паренхиматозной диффузии Вторая неделя Кровь из вены 20 мл Желчь Моча Сыворотка крови Гемокультура Биликультура Уринокультура РНГА Y. Выделительно – аллергическая Третья неделя Желчь Испражнения Моча Сыворотка крови Биликультура Копрокультура Уринокультура РНГА, РА Видаля YI. Выздоровление Четвертая неделя - 2 мес. Желчь Испражнения Сыворотка крови Биликультура Копрокультура РНГА, РА Видаля YII. Носительство Более 2-х мес. Сыворотка крови Желчь Испражнения - Р-я VI- гемагглютинации Биликультура Копрокультура Кожно-аллергическая проба с VI-тифином 1.Микроскопический метод – имеет ориентировочное значение. Морфологически сальмонеллы представляют собой грамотрицательные палочки с закругленными концами, подвижны. перитрихи, спор и капсул не образуют. 2. Бактериологический метод: Первый день – посев исследуемого материала: кровь на жидкие питательные среды - 10% желчный бульон или среду Раппорт; желчь, мочу, испражнения на плотные питательные среды Левина, Плоскирева, висмут-сульфит агар. Посевы выдерживают в термостате при 37 C а течение суток. Второй день. На среде Левина и Плоскирева, отмечают бесцветные колонии сальмонелл, не разлагающие лактозы. На висмут-сульфит агаре сальмонеллы тифа и паратифа Б дают черного цвета колонии (за счет образования сероводорода). Бактерии с элективных и из жидких питательных сред исследуют в окрашенных по Граму мазках на чистоту и в «висячей капле» на подвижность, пересевают на скошенный агар и среду Ресселя. Посевы ставят в термостат при 37 C на 24 часа. Третий день. Проверяют чистоту культуры со скошенного агара в мазках по методу Граму. Отмечают характер роста на среде Ресселя: сальмонеллы, разлагающие только глюкозу, дают двухцветное окрашивание среды( изменяется цвет поверхности среды и по ходу укола). Идентификация возбудителя проводится в реакции агглютинации на стекле с адсорбированными сыворотками S.typhi, S.paratyphi A и S.paratyphi B. Биохимическая идентификация осуществляется путем посева возбудителей в пестрый ряд, содержащий среды Гисса с глюкозой, лактозой, мальтозой, маннитом, сахарозой. S.typhi разлагает углеводы (глюкозу, мальтозу, маннит) до кислоты, а S.paratyphi A и S.paratyphi B до кислоты и газа. 3. Серологический метод – реакция непрямой гемагглютинации( РНГА) дает положительные результаты на 5 день болезни. Специфические антитела определяются в диагностическом титре 1:200. РА Видаля ставится на 7-8 день заболевания с брюшнотифозными О- и Н- диагностикумами и паратифозными А и Б диагностикумами. Если титр О- антител превышает титр Н-антител – это Видаль инфекционный; Если титр Н-антител превышает титр О-антител – это Видаль анамнестический; если Н-антитела не определяются – это Видаль поствакцинальный. Для реакции Видаля с паратифозными А и Б диагностикумами диагностический титр 1:200. 4. Биологический метод не применяется. 5. Аллергический метод – кожно-аллергическая проба с VI-тифином для диагностики брюшнотифозного носительства. Лечение и профилактика брюшного тифа. Этиотропная терапия - антибиотики левомицетин, ампициллин, тетрациклины, канамицин, гентамицин, цепорин. Специфическая терапия применение поливалентного брюшнотифозного бактериофага. Специфическая профилактика – разработано три типа вакцин – убитая (эффкт до 70%) живая аттенуированная, вакцина из Vi -Аг S typhi, химическая сорбированная брюшно-тифозная вакцина TABte. Блок контроля теоретических знаний. Вопросы для контроля. 1. Назовите виды сальмонелл, являющихся возбудителями брюшного тифа. 2. Дайте общую характеристику возбудителям брюшного тифа. 3. Назовите источники брюшнотифозной инфекции, пути передачи, входные ворота. 4. Назовите стадии патогенеза брюшнотифозной инфекции. 5. Назовите исследуемый материал и основные методы лабораторной диагностики брюшного тифа. 6. Опишите морфологическую картину мазка из исследуемого материала при брюшном тифе. 7. Назовите средства этиотропной терапии брюшного тифа. 8. Какова специфическая профилактика брюшного тфа? Тестовый контроль обязательного уровня знаний. Выберите один правильный ответ. 1.Назовите к какому роду относится возбудители брюшного тифа. а). Staphуlococcus б). Salmonella в). Esсherichia г). Shigella д). Corynebacterium 2. Выберите возбудителей брюшного тифа. а).кишечная палочка б).сальмонелла паратифа А в).палочка перфрингенс тип А г).сальмонелла тифа д).сальмонелла энтеритидис е).сальмонелла паратифа Б ж).стафилококк з).энтерококк 3. Выберите основные методы лабораторной диагностики брюшного тифа а).микроскопический б).бактериологический в).серологический г).аллергический д).биологический 4.Укажите морфологические признаки возбудителей брюшного тифа а).грамотрицательный б).грамположительный в).палочковидная форма г).имеет бобовидную форму д). имеет кокковую форму е). перитрих ж).неподвижен 5.Перечислите патогенетические факторы сальмонелл а).ферменты агрессии б).эндотоксин в).экзотоксин г).пили Ситуационные задачи Задача 1 В клинику инфекционных болезней на 3-ий день заболевания был доставлен больной с клиническим диагнозом: «Брюшной тиф». 1. Если клинический диагноз верен, то какая это стадия патогенеза заболевания? 2. Что может служить материалом для исследования? 3. Учитывая, что брюшной тиф – полимикробная инфекция, как в данном случае можно установить вид возбудителя? 4. Какие препараты целесообразно применить для этиотропной терапии? Блок контроля практических навыков. Определение видовой принадлежности возбудителей брюшного тифа, выделенных методом гемокультур. Протокол № 1 Поставить реакцию агглютинации с видовыми неадсорбированными сыворотками для сероидентификации сальмонелл. Оформить протокол. Блок информации Дизентерия - острая кишечная инфекция, характеризующаяся язвенным поражением слизистой оболочки толстого кишечника и явлениями общей интоксикации организма. Возбудители дизентерии относятся к семейству Enterobacteriaceae, роду Shigella. В соответствии с антигенной структурой О-АГ и биохимическими свойствами выделяют 4 вида возбудителей дизентерии: S.dysenteriae, S.flexneri, S.boydii и S.sonnei. Эпидемиология Источник инфекции – больные люди, бактерионосители. Путь передачи инфекции – фекально-оральный. Факторы передачи инфекции – вода и пищевые продукты (молоко и молочные продукты). При тесном общении с больным человеком возможен контактно-бытовой путь передачи инфекции. Входные ворота – слизистая желудочно-кишечного тракта. Патогенез Инкубационный период в среднем 2-5 дней. Возбудитель через ротовую полость проникает в кишечник и поражает слизистую оболочку нисходящего отдела толстого кишечника (сигмовидная и прямая кишка). Поражение слизистой кишечника носит циклический характер: адгезия, колонизация, внедрение шигелл в цитоплазму энтероцитов, их внутриклеточное размножение, разрушение и отторжение эпителиальных клеток, выход возбудителя в просвет кишечника. Вслед за этим начинается очередной цикл. В результате повторяющихся циклов на слизистой кишечника образуются язвы, вследствие чего в испражнениях появляется кровь, слизисто-гнойные комочки, полиморфно-ядерные лейкоциты. Клиника Клиника дизентерии во многом определяется тем, какой тип токсинов в большей степени продуцируется возбудителем: цитотоксины разрушают энтероциты, энтеротоксин вызывает диарею, эндотоксины обусловливают общую интоксикацию. Наиболее типичными клиническими проявлениями дизентерии являются понос, частые позывы, тенезмы (болезненные спазмы прямой кишки) и общая интоксикация.Постинфекционный иммунитетносит кратковременный типоспецифический характер, прочного перекрестного иммунитета не возникает. Лабораторная диагностика. Исследуемый материал – испражнения, сыворотка крови. 1.Микроскопический метод – имеет ориентировочное значение. Морфологически шигеллы представляют собой грамотрицательные палочки с закругленными концами, неподвижны, спор и капсул не образуют. 2. Бактериологический метод (ведущий): Первый день – посев исследуемого материала (испражнения) на дифференциальные плотные питательные среды Плоскирева и Левина. Посевы выдерживают в термостате при 37 C а течение суток. Забор исследуемого материала следует производить до начала лечения. Второй день. На среде Левина и Плоскирева, отмечают бесцветные колонии шигелл, не разлагающие лактозы. Бактерии из бесцветных колоний исследуют в окрашенных по Граму мазках на чистоту и в «висячей капле» на подвижность, пересевают на скошенный агар и среду Ресселя. Посевы ставят в термостат при 37 C на 24 часа. Третий день. Проверяют чистоту культуры со скошенного агара в мазках по Граму. Отмечают характер роста на среде Ресселя: шигеллы, разлагающие только глюкозу, двухцветное окрашивание. Идентификация возбудителя проводится в реакции агглютинации на стекле при помощи видовых дизентерийных агглютинирующих сывороток. Биохимическая идентификация осуществляется путем посева возбудителей в пестрый ряд, содержащий среды Гисса с глюкозой, лактозой, и маннитом. Все 4 вида возбудителей дизентерии расщепляют глюкозу до кислоты. Кроме того S.flexneri расщепляет манит, а S.sonnei – лактозу( только через двое суток) и манит до кислоты. Если по каким-либо причинам возбудителя выделить не удается (например, забор исследуемого материала осуществлен после приема больным антибиотиков, при хронической дизентерии) прибегают к вспомогательным методам, основанным на косвенном подтверждении возбудителя в испражнениях: реакция кольцепреципитации с гаптеном и реакция нарастания титра фага. 3. Серологический метод – реакция непрямой (РНГА) дает положительные результаты на 5 день болезни. Специфические антитела определяются в диагностическом титре 1:200.Реакция агглютинации( РА) ставится на 7-8 день заболевания и считается положительной, если специфические антитела определяются при разведении сыворотки больного не менее 1:200 (диагностический титр). 4. Биологический метод – кератоконъюнктивальная проба на морских свинках с целью установления принадлежности выделенной культуры к роду шигелл ( у морских свинок развивается кератит и коньюнктивит) . 5.Аллергический метод – кожно-аллергическая проба Цуверкалова с дизентерином при хронической дизентерии. |