Иммунология,ответы на тесты. Тесты коллоквиум 2 Верно Возможный ответ Неверно Выберите характеристики, относящиеся к ртга (рзга)
Скачать 2.49 Mb.
|
ИММУНОЛОГИЯ ТЕСТЫ КОЛЛОКВИУМ 2 Верно Возможный ответ Неверно Выберите характеристики, относящиеся к РТГА (РЗГА) Выберите один или несколько ответов: определение титра антител или антигена данную реакцию используют для вирусов, обладающих гемадсорбирующей способностью - гемагглютинирующией является индикаторной, ориентировочной реакцией использование 1% суспензии эритроцитов простая серологическая реакция Выберите один или несколько ответов: Определение титра антител Определение титра антигенов Не является серологической реакцией Использование 1% суспензии эритроцитов Использование рабочей дозы антигена Сущность иммуноферментного анализа (ИФА) основана на использование в диагностики АНТИГЕНОВ, меченных ферментами (пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза) Выберите один ответ: Верно Неверно Выберите характеристики, относящиеся к РГА Выберите один или несколько ответов: диагностика бактериальных и вирусных болезней оценка реакции осуществляется в крестах определение рабочей дозы антигена для постановки РТГА (РЗГА) не все вирусы обладают гемагглютинацией активностью не является серологической реакцией Выберите один или несколько ответов: Использование суспензии эритроцитов Приготовление двукратных разведений сывороток крови Приготовление двукратных разведений антигена Использование суспензии бактериальных клеток Приготовление десятикратных разведений антигена Выберите один или несколько ответов: Является специфической позволяющая идентифицировать возбудителя Диагностика вирусных болезней Определение рабочей дозы антигена для постановки РНГА (РПГА) Используется только для качественного или количественного определения антигена Серологическая реакция Выберите характеристики, относящиеся к РП Выберите один или несколько ответов: приготовление десятикратных разведений антигена образования видимого под световым микроскопом иммунного комплекса определение титра антител и антигена качественная или количественная объемный или капельный метод постановки РП…проявляется в виде: Выберите один или несколько ответов: Полос Пуговки Мути Зонтика Непрозрачного кольца * помутнение среды, видимое как серо-белый диск (кольцо, преципитат). Сущность реакция не прямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА) основана на способности многих вирусов адсорбироваться на эритроцитах, не вызывая их агглютинацию. Но при добавлении специфической сыворотки происходит агглютинация эритроцитов за счет адсорбированных на их поверхности вирусов и антител иммунной сыворотки Выберите один ответ: Верно Неверно Выберите характеристики, относящиеся к РНГА (РПГА) Выберите один или несколько ответов: использование 1% суспензии эритроцитов серологическая реакция объемный (пробирочный) или капельный метод постановки используется только для определения титра антител определение рабочей дозы антигена для постановки РТГА (РЗГА) Выберите один или несколько ответов: с использованием эритроцитарного диагностикума С 5% суспензией эритроцитов С использованием плотных или жидких сред Качественный или количественный метод Розбенгал проба *серологичсекая Лошадиная сыворотка 1% Что произойдет при постановке одного из контролей РСК, когда соединяют: отрицательную сыворотку + физиологический раствор + комплимент + гемолитическая система Выберите один ответ: гемолиз эритроцитов образование хлопьев образование «зонтика» данного контроля не существует образование осадка эритроцитов Реакцию торможения (задержки) гемагглютинации (РТГА, РЗГА) оценивают положительно при формировании эритроцитами в лунке хорошо выраженного «зонтика», а отрицательно – при формировании «пуговки». За титр антител принимают наибольшее разведение сыворотки, дающее четко выраженную агглютинацию в виде «зонтика» Выберите один ответ: Верно Неверно Компонент набора для постановки ИФА, который представляет собой антитела (АТ) меченые ферментами: …… Конъюгат Компонент набора для постановки ИФА, который останавливает реакцию: ….. стоп-раствор? Что произойдет при постановке одного из контролей РСК, когда соединяют положительную сыворотку + физ + комплимент + гем система Выберете один ответ: Гемолиз эритроцитов Образование зонтика Образование хлопьев Образование осадка эритроцитов Данного контроля не существует Выберите характеристики, относящиеся к РА Выберите один или несколько ответов: объемный или капельный метод постановки определение рабочей дозы антигена для постановки РТГА (РЗГА) диагностика бактериальных и вирусных болезней не является серологической реакцией оценка реакции осуществляется в крестах Выберите один или несколько ответов: Является индикаторной, ориентировочной реакцией (+розбенгал) Не является серологической Использование 2,0-2,5% суспензии эритроцитов барана Диагностика только вирусных болезней Определение титра антител или антигена ДОПОЛНИТЕЛЬНО к РА Невооруженным глазом Агглютиноскопом Зонтик при разбивании глыбки ++++ Пуговка + Муть и пуговка - Поставьте в правильной последовательности этапы постановки РТГА (РЗГА) Пунктов 9 в ответах 8 …; 9, 6,4, 3,2,1,8,5, 1 2 3 4 5 6 7 точно нет 8 не было в учебнике 9 Поставьте в правильной последовательности этапы постановки РГА с использованием иммунологического планшета 6 ответов ( вариантов пока нет) Схема постановки РГАРГА ставят в пластиковых панелях с равномерно округлым гладким дном. Вначале готовят 2-кратные последовательные разведения вируссодержащего материала (от 1:2 до 1:320 и выше) (рис.16). С этой целью в ряд лунок приливают 0,1 мл физраствора. Затем в 1-ю лунку добавляют 0,1 мл исследуемого вируссодержащего материала, перемешивают и 0,1 мл смеси переносят во 2-ю лунку и т.д. Из последней лунки 0,1 мл выливают в дезинфицирующий раствор. Во все лунки добавляют по 0,1…1%-ной взвеси отмытых эритроцитов. Одновременно ставят контроль эритроцитов для исключения возможности спонтанной гемагглютинации. Для этого к 0,1 мл физиологического раствора добавляют 0,1 мл 0,5...1%-ной взвеси эритроцитов. Панели встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 30...60 мин (табл.6). Таблица 6 Поставьте в правильной последовательности этапы постановки РГАд 5 ответов (9 варианотов) 1 Выращивание культуры клеток в пробирках 2 Заражение культуры клеток вирусом 3 Внесение 0,5% суспензии эритроцитов 4 Промывание 5 Учет реакции с использованием светового микроскопа Приготовление двукратных разведений Внесение эритроцитарного диагностикума Учет реакции с использованием люм Внесение сыворотки крови *не серологическая Сущность реакции агглютинации РА …… Выберите один ответ: Верно Неверно Варианты (виды) постановки РП реакции преципитации в плотной среде Выберите один или несколько ответов: РИЭОФ Реакция кольце преципитации РИД (РДП) по Манчини По типу флокуояции РИД (РДП) по Оухтерлони Сущность реакции гемадсорбции (РГАд) основана на нейтрализации гемагллютинирующей или адсорбирующей способности зараженных вирусом клеток культур тканей специфическими антителами. Вследствие чего эритроциты не адсорбируются на поверхности клеток культур тканей. Выберите один ответ: Верно Неверно Выберите характеристики, относящиеся к ИФА: Выберите один или несколько ответов: Является индикаторной, ориентировочной реакцией Диагностика вирусных и бактериальных болезней Использование иммунологических планшетов с адсорбированным специфическим антителом Использование иммунологических планшетов с адсорбированным специфическим антигеном Не является серологической Для постановки ИФА используют Расходный материал(наконечники, ванночки, титротрубки и т.п.) Компьютер с установленной программой Автоматические дозаторы Ридер (спектрофотометр) Вошер Реакция связывания комплемента- это сложная серологическая реакция, протекающая в 2 фазы. Первая - соединение АГ с АТ с участием комплемента. Во второй фазе выявляют степень связывания комплемента путем добавления гемолитической (индикаторной ) системы. Верно Неверно Поставьте в правильной последовательности этапы постановки РТГАд (РЗГАд) Ответов 9 вариантов 11 Приготовление двукратных разведений вируса 9 Учет реакции с использованием светового микроскопа 4 Контакт в термостате 40-60 минут Внесение эритроцитарного диагностикума 3 Внесение сывороток 1 Выращивание культуры клеток в пробирках 7 Контакт 10-15 мин 6 Внесение 0,5% суспензии эритроцитов 2 Заражение КК вирусом 8 Второе промывание раствором Хенкса 5 Первое промывание раствором Хенкса Поставите в правильной последовательности этапы постановки реакции по Асколи Контакт при комнатной температуре 1 час Контакт в термостате 37 30 минут Внесение диагностикума 1 Приготовление двукратных разведений антигена Учет реакции с использованием светового микроскопа Внесение в пробирки антигена Учет реакции невооруженным глазом В пробирки в равных объемах с помощью пастеровской пипетки наслаивают антиген на сыворотку Сущность реакции иммуноэлектроосмофареза, заключается в диффузии специфического антитела и антигена на встречу друг другу, при размещении их на определенном расстоянии друг от друга в агаровом геле и образованием на мести их встречи полос преципитации Выберите один ответ: Верно Неверно Варианты (виды) постановки РГА Выберите один или несколько ответов: с использованием иммунологических планшетов капельный метод на стекле чашечный метод кровяно-капельная реакция агглютинации ККРА Варианты (виды) постановки реакции преципитации (РП) Выберите один или несколько ответов: с использованием плотных или жидких сред капиллярный метод кольцепреципитации роз-бенгал проба капельный метод на стекле пробирочный метод кольцепреципитации Выберите характеристики, относящиеся к РГАд Выберите один или несколько ответов: диагностика вирусных болезней сложная серологическая реакция использование взвеси бактериальных клеток определение титра антител или антигена является индикаторной, ориентировочной реакцией Выберите характеристики, относящиеся к РА Выберите один или несколько ответов: не является серологической реакцией объемный или капельный метод постановки оценка реакции осуществляется в крестах определение рабочей дозы антигена для постановки РТГА (РЗГА) диагностика бактериальных и вирусных болезней Что произойдет при постановки одного из контролей РСК, когда соединяют: отрицательную сыворотку + физиологический раствор + комплимент + гемолитическая система Выберите один ответ: образование «зонтика» данного контроля не существует гемолиз эритроцитов образование осадка эритроцитов образование хлопьев Варианты (виды) постановки РНГА (РПГА) Выберите один или несколько ответов: чашечный метод с использованием пробирок или планшет роз-бенгал проба капельный метод на стекле кровяно-капельная реакция агглютинации Реакция связывания комплимента – это сложная серологическая реакция, протекающая в две фазы. Первая фаза – это соединение гемолизина с эритроцитами барана с участием комплемента. Во второй фазе выявляют степень связывания комплемента в гемолитической системе путем добавления в нее АГ с АТ. Выберите один ответ: Верно Неверно Сущность реакции агглютинации (РА) заключается в том, что гемагглютинины вируса при помощи фермента муциназы вступают во взаимодействие с рецепторами эритроцитов. Происходит адсорбция вирусов на эритроцитах. Вирионы, адсорбированные на одном эритроците способны свободными поверхностями соединяться с другими эритроцитами, образуя между ними мостики, что и приводит к агглютинации (склеиванию) эритроцитов. Выберите один ответ: Верно Неверно ИММУНОПЦР 9 /10 ТЕКСТ ИЗ ЭИОСА РА при диагностике бактериальных болезней. РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ (РА) ИЛИ ПРЯМАЯ РА Антигены – взвесь живых и убитых микроорганизмов. Идентификацию вида (серотипа) микроба, выделенного от больного или внешней среды, определяют по известному антителу (диагностической иммунной сыворотки). Положительный результат реакции укажет на то, что неизвестный микроб идентичен тому, который был взят в качестве антигена для приготовления иммунной диагностической сыворотки. Для приготовления взвеси испытуемого микроорганизма, суточную агаровую культуру бактерий смывают 1-2 мл физиологическим раствором, доводя концентрацию до 2-х млрд. микробных клеток в 1 мл. При определении неизвестных антител в сыворотке крови больного или реконвалесцента принято пользоваться заранее заготовленными диагностикумами - микробами, убитыми формалином, спиртом, прогреванием, которые готовятся в производственных условиях. При лабораторной диагностике некоторых инфекционных заболеваний, например, сальмонеллеза, имеет значение раздельное определение О- и Н-антител в исследуемых сыворотках, т.к. время их появления у больных и сохранение у реконвалесцентов различно. Для этих исследований необходимо располагать соответственно О- и Н-диагностикумами. Антитела (сыворотки): а) испытуемая сыворотка от больного или реконвалесцента получается из крови, взятой стерильно.Готовят последовательно, чаще двухкратные, разведения сыворотки. Обычно разводят в соотношении от 1:50 до 1:400 (крупные животные) и 1:25 до 1:200 (мелкие животные). Количество неизвестных агглютинирующих антител в сыворотке оценивается по титру – наибольшему разведению сыворотки, которое еще дает реакцию агглютинации (выпадение осадка – агглютинат); б) агглютинирующая диагностическая иммунная сыворотка готовится в производственных условиях путем иммунизации кроликов (реже лошадей) соответствующими антигенами (взвесью живых с ослабленной вирулентностью или убитых микроорганизмов, эритроцитов и т.д.). Полученную иммунную сыворотку, определив его титр, разливают по ампулам с добавлением консерванта. Иногда употребляют высушенную сыворотку. Изотонический раствор хлорида натрия- 0,85 % химически чистой поваренной соли, рН 7,2-7,4. РА должна сопровождаться контролем АГ и контролем АТ (сыворотки) для исключения спонтанной самопроизвольной агглютинации, которая может наступить в 2-х случаях: а) при потери антигеном специфичности (он диссоциирован на S-формы в R); б) при изменении рН реакции в кислую сторону. Существует несколько модификаций постановки РА: 1) ориентировочная РА на предметном стекле, наступающая в течении нескольких минут. Применяется только с целью идентификации вида (серотипа) выделенной из организма больного чистой культуры по его специфичности как АГ к серотипу АТ; 2) макроскопическая объёмная развернутая РАв пробирках (классический метод), применяется с целью идентификации микроба и обнаружения АТ в сыворотке крови; 3) микропипеточный; 4) розбенгалпроба (пластичетая реакция); 5) кольцевая реакция с молоком (КР); 6) реакция микроагглютинации (РМА) РА входит в группу методов, в которых реакция протекает в две фазы: 1) соединение АГ с АТ (специфическая фаза); 2) выпадение образовавшегося комплекса АГ-АТ (агглютината) в растворе солей (электролите) в осадок (неспецифическая фаза). Антигены поливалентны, а антитела двух – (IgG) или более валентны (IgМ). Соединение их приводит к образованию макроконгломератов, выпадающих в осадок. Причем характер осадка зависит от свойств антигена: жгутиковые бактерии, имеющие Н-АГ, склеиваются жгутиками, при этом образуются крупнохлопчатый осадок, который наступает в течение двух часов при 37 ºС. У безжгутиковых бактерий, имеющих соматический О-АГ, происходит склеивание непосредственно самих клеток и образование мелкозернистого осадка. Такой осадок образуется медленно, в течение 18-24 часов при комнатной температуре. РА на стекле. При постановке ориентировочной реакции агглютинации на предметном стекле используют сыворотки с большей концентрацией антител (в разведениях не более чем 1:10 или 1:20). Пастеровской пипеткой наносят на стекло по одной капле физиологического раствора и сыворотки. Затем к каждой капле добавляют петлей небольшое количество микробов и тщательно размешивают до получения гомогенной взвеси. Через несколько минут при положительной реакции в капле с сывороткой появляется заметное скучиванье микробов (зернистость), в контрольной капле остается равномерное помутнение. Ориентировочной реакцией агглютинации чаще всего пользуются для определения видовой принадлежности микробов, выделенных из исследуемого материал. Полученный результат позволяет ориентировочно ускорить постановку диагноза заболевания. Постановка РА классическим (пробирочным) методом.Исследуемые сыворотки разводят в чистых сухих пробирках с ровным сферическим дном. Для каждой сыворотки берут отдельную пипетку. В зависимости от инфекции используют соответствующие степени разведения сывороток (согласно инструкции). Например, сыворотки разводят:1: 50; 1:100; 1: 200; 1:400- крупные животные; 1: 25;1: 50; 1:100; 1: 200 – мелкие животные. Удобно разведения производить следующим образом. В отдельной пробирке готовят основное (исходное) разведение сыворотки —1:25, смешивая 0,1 мл испытуемой сыворотки с 2,4 мл физиологического раствора. В опытные пробирки разливают по 1 мл физиологического раствора. Затем из исходного разведения 1 мл жидкости переносят в первую опытную пробирку, смешивают с физраствором (разведение 1:50) и 1 мл переносят во вторую пробирку (1:100), из второй 1 мл — в третью и т.д. Из последней пробирки 1 мл выливают в сливную чашку, чтобы в каждой пробирке осталось по 1 мл разведенной сыворотки. Во все пробирки добавляют по 0,5 мл стандартного антигена (концентрация 10 млрд микробных тел в 1 мл), смешивают встряхиванием и выдерживают в термостате 4—6 ч при 37 °С, а затем при комнатной температуре 14—16 ч. При постановке РА (как при каждой серологической реакции) обязательно проведение контроля: в тех же разведениях испытывают сыворотку нормальную (от здорового животного) и позитивную (от заведомо больного животного или стандартную биофабричного производства) с тем же антигеном. Компоненты при постановке реакции вносят в пробирки индивидуальными мерными пипетками с резиновыми грушами или дозаторами, групповыми дозаторами и автоматическими пипетками с изменяющимися объемами (5—250 мкл). Учет РАУчет РА проводят невооруженным глазом или с помощью агглютиноскопа, начиная с контрольных пробирок. Результат РА принято выражать количеством крестов: ++++ — полное просветление жидкости, образовавшийся агглютинат имеет вид перевернутого зонтика, при встряхивании он разбивается в глыбки, хлопья разной величины, жидкость остается прозрачной; + + + — неполное просветление жидкости, агглютинат, как и в предыдущем случае, имеет вид зонтика, при встряхивании разбивается на более мелкие глыбки, комочки; + + — так обозначают неполную реакцию агглютинации с неполным просветлением жидкости, агглютинат имеет вид зонтика, но при встряхивании разбивается на хлопья разной величины, жидкость мутная; + — наличие небольшого нехарактерного осадка в виде «пуговки», жидкость над ним мутная. При встряхивании такой осадок легко разбивается, увеличивая мутность; — (минус) — вся жидкость в пробирке мутная, на дне пробирки небольшой осадок антигена с ровными краями в виде «пуговки», при встряхивании он разбивается в равномерную муть. Результаты РА, показавшие 3—4 креста, учитывается как положительная степень проявления агглютинации, один креста — сомнительная, отсутствие агглютината — отрицательный результат. Реакцию оценивают не только по степени выраженности РА (++ + +, + + + или + +), но и по высоте титров, т.е. степени разведения сывороток, давших положительный результат РА. Например, при диагностике бруцеллеза крупных животных диагностическим титром считают положительный результат РА с сывороткой в разведении не ниже 1:100, при сальмонеллезном аборте кобыл — выше 1:500. Розбенгалпроба (РБП, пластинчатый)Розбенгалпроба (РБП, пластинчатый) используют для быстрого обследования поголовья животных в лаборатории и в условиях хозяйства. На чистую стеклянную пластинку наносят микропипеткой по 0,04; 0,02; 0,01 и 0,005 мл исследуемой сыворотки. К каждой сыворотке добавляют по одной капле антигена (окрашенный розовым бенгальским) определенной концентрации, постепенно их смешивают чистой стеклянной палочкой, начиная с наименьшего количества сыворотки. Условно считают, что сыворотка в первой капле соответствует разведению 1:50, во второй — 1:100, в третьей — 1:200, в четвертой — 1:400. Через 2—3 мин производит учет. Положительный результат — образование в капле сыворотки комплекса антиген—антитело в виде крупинок, хлопьев, жидкость становится прозрачной. При отрицательном результате капля смеси сыворотки и антигена остается равномерно мутной (отсутствие в сыворотке антител). Этим методом РА пользуются также для ориентировочного определения вида микроба или его идентификации (типизации). Кольцевая проба (реакцию) с молокомКольцевую пробу (реакцию) с молокомв основном используют при обследовании крупного рогатого скота на бруцеллез и при контроле сборного молока. В агглютинационные пробирки наливают по 2—3 мл свежего цельного молока и добавляют по 0,2 мл (2 капли) антигена (окрашенного гематоксилином). Пробирки встряхивают до равномерного окрашивания молока, выдерживают на водяной бане (или в термостате) при 37 °С 45—60 мин. Если в молоке имеются антитела, образуется комплекс антиген—антитело, который адсорбируется на капельках жира и при отстаивании всплывает наверх, образуя синее кольцо в нижнем слое сливок; столбик молока обесцвечивается. Отрицательная реакция характеризуется синей окраской всего молока в пробирке и слегка желтоватым слоем сливок. |