Иммунология,ответы на тесты. Тесты коллоквиум 2 Верно Возможный ответ Неверно Выберите характеристики, относящиеся к ртга (рзга)
 Скачать 2.49 Mb.
|
Реакция нейтрализации в микробиологической практике.Ботулизм – возбудитель Cl.botulinum. Реакцию нейтрализации применяют для обнаружения токсина в исследуемом материале, а также для подтверждения токсигенных свойств выделенной культуры возбудителя, который продуцирует токсины семи типов: A, B, C, D, E, F, G. Все семь сероваров экзотоксина иммунологически специфичны, что выявляют в реакции нейтрализации. Для обнаружения токсина исследуемый материал (20-30гр) растирают в физиологическом растворе (в соотношении 1:2), экстрагируют при комнатной температуре 2 ч, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, или центрифугируют при 3000 об.мин. в течение 15-20 мин. и делят на две части, одну часть прогревают при 100 с 20-30 мин. другую не прогревают, иногда делают третью пробирку (с ферментом) термостатируют при 37 0С в течение 1ч, переодически перемешивая содержимое. Обработка протеолитическим ферментом необходима для выявления протоксина Cl.botulinum, активизирующегося под действием трипсина. Биологическую пробу ставят непосредственно после окончания обработки исходной жидкости протеолитическим ферментом. Фильтрат из каждой пробирки вводят двум белым мышам массой 16-18 г внутривенно или внутрибрюшинно в дозе 0,5 см3. При наличии ботулинистического токсина животное, зараженное непрогретым фильтратом (из 2-й и 3-й пробирки) или только фильтратом, обработанным трипсином (из 3-й пробирки), заболевают и погибают в течение 2-5 сут, а иногда даже в течение первых 4-12 часов с характерной клинической картиной ботулизма. Шерсть у мышей взъерошена, дыхание затруднено, мышцы брюшной стенки ослаблены и западают («осиная талия»), наблюдаются судороги, паралич задних конечностей и смерть. При очень высокой концентрации токсина гибель животных может наступить в течение 1-2 ч без характерных признаков ботулизма; в этих случаях биопробу повторяют с разведением исходной жидкости 1:10-1:100. Мыши, которым введена исходная жидкость без трипсина, могут переболеть и остаться живыми или погибнуть позже. Тип ботулинистического токсина определяют в реакции нейтрализации токсина. Вначале ставят РН со смесью противоботулинистических сывороток. Смешивают равные объему моновалентных сывороток А, В, С, E, F и 0,6 см3 полученной смеси Добавляют в пробирку к 2,4 см3 исследуемого фильтрата. В другую (контрольную) пробирку к 2,4см3 исследуемого фильтрата 0,6 см3 физиологического раствора. Содержимое пробирок перемешивают и выдерживают в течение 30 мин при комнатной температуре. Для биологической пробы анализируемый фильтрат (центрифугат) вначале отбирают из контрольной, а затем из опытной пробирки по 1см3 вводят двум белым мышам. Наблюдение за животными ведут на протяжении 2,4,6,24 ч и в течение 4 сут. У мышей, которым вводили смешанный с сывороткой фильтрат (центрифугат), признаков болезни ботулизмом не наблюдается. Реакция нейтрализации широко используется в вирусологической практике.Она предназначена для идентификации выделенного вируса, определения наличия антител и изменения их титра в сыворотке крови больных и переболевших животных, установления количественного содержания антител в лечебных, профилактических и диагностических препаратах (гамма-глобулины, диагностические сыворотки). Сущность реакции нейтрализации заключается в способности вируснейтрализующих антител иммунных сывороток подавлять инфекционные свойства вируса. В результате этого вирус утрачивает способность размножаться и вызывать поддающиеся учету изменения в чувствительной к нему биологической системе (культура клеток, развирающийся куриный эмбрион, организм восприимчивого лабораторного животного). Достоинствами реакции нейтрализация являются ее универсальность и высокая специфичность. К недостаткам относятся: высокая трудоемкость, необходимость строгого соблюдения стерильности материалов и инструментов, высокая стоимость тест-объектов, необходимость проведения математических расчетов, относительная длительность при постановке реакции. Реакция нейтрализации широко используется в вирусологической практике.На результаты РН, особенно на их достоверность и воспроизводимость, оказывают влияние ряд факторов: методика постановки реакции, способ и правильность ее учета, концентрация используемых сывороток и вирусов, метод разведения компонентов реакции и др. Вируснейтрализующие антитела накапливаются в организме в период выздоровления (реконвалесценции) и остаются в нем длительное время. Оптимальные сроки для обнаружения антител в каждом случае различны и зависят от особенностей иммунитета при той или иной инфекции. Например, при гриппе свиней максимальный титр вируснейтрализующих антител регистрируется между 14 и 27-м днями и снижается к 6 месяцам. При лейкозе птиц антитела выявляются спустя 4 недели после заражения и сохраняются в течение всей жизни. Сыворотки, применяемые в РН, должны быть предварительно освобождены от термолабильных ингибиторов. Для этого их прогревают при разведении не менее чем в два раза в течение 30 мин при 56 °С. Однако, антитела к некоторым вирусам (парагриппа, респираторно-синцитиальной инфекции) чувствительны к прогреванию, поэтому при постановке РН с такими сыворотками его следует избегать. При хранении сывороток титр антител постепенно снижается. Долго хранившиеся сыворотки активизируют добавлением к ним 1/10 объема комплемента, увеличивающего авидность антител. Вируснейтрализующие антитела хорошо сохраняются в лиофильно высушенном или замороженном состоянии (-20 °С). Для разведения вирусов при постановке РН на лабораторных животных или в куриных эмбрионах используют фосфатно-буферный раствор (рН 7,0... 7,2). При работе с культурами клеток используют ту среду, которую применяют в качестве поддерживающей для данного вида клеток (среда 199, 2,5...5%-ный гемогидролизат и др.). Не следует применять раствор обычного изотонического хлорида натрия, поскольку в нем быстро инактивируются многие вирусы. |