Иммунология,ответы на тесты. Тесты коллоквиум 2 Верно Возможный ответ Неверно Выберите характеристики, относящиеся к ртга (рзга)
 Скачать 2.49 Mb.
|
Реакция нейтрализации широко используется в вирусологической практике.В зависимости от цели исследования применяют два варианта постановки РН: 1 — для идентификации и определения титра вируснейтрализующих антител в исследуемых сыворотках крови (в данном случае соединяют равные объемы разных разведения сыворотки с постоянной дозой вируса); 2 — для идентификации и изучения неизвестного вируса (соединяют равные количества одного и того же разведения сыворотки с убывающими дозами вируса). Результаты реакции как в первом, так и во втором вариантах определяют с использованием лабораторных животных, РКЭ и культур клеток. Компонентами реакции в 1-м варианте постановки РН являются: исследуемая сыворотка, стандартный вирусный антиген, тест-объект, для контрольной реакции — диагностическая и нормальная сыворотки крови. Реакцию ставят в два этапа: первый этап — определение титра вируса; второй — постановка основного опыта РН в этом варианте. Для определения титра вируса готовят 10-кратные разведения вируссодержащего материала, обычно с 10-1 до 10-9, так как его титр редко превышает указанную величину: - Берут 9 стерильных пробирок и в каждую из них вносят по 4,5 мл фосфатно-буферного раствора. - Затем в первую добавляют 0,5 мл вируссодержащего материала (разведение 1:10 или 10-1), смесь перемешивают и 0,5 мл переносят во вторую пробирку (разведение 1:100 или 10-2). - Из второй — 0,5 мл — в третья (10-3) и т.д., пользуясь при этом всякий раз чистой пипеткой. - Каждым разведением вируссодержащего материала заражают лабораторных животных (4 гол.). Объем вводимого материала зависит от метода заражения, который связывают с тропизмом вируса. Например, при заражении нейротропным вирусом, исследуемый материал вводят в мозг, пневмотропным — через нос, дерматропным — на скарифицированную кожу или внутрикожно и т.д. За животными наблюдают в течение 3...30 дней и более, в зависимости от возраста и вида животного и др. факторов. Наибольшее разведение вируса, обеспечивающее гибель половины (50%) зараженных животных, принимают за титр вируса, обозначаемого в данном случае символом ЛД50 (летальная доза 50% использованных для заражения животных). Допустим, вирус в разведении 104 вызвал гибель 50% животных, это разведение и будет соответствовать 1 ЛД50.Следовательно, 100 ЛД50 будет соответствовать разведению 102 (1:100). Это разведение чаще всего используют. Аналогично определяют титр вируса на РКЭ по их гибели (ЭЛД50 — эмбриональная летальная доза) или по патологоанатомическим изменениям (ЭИД50 — эмбрионинфицирующая доза) в культуре клеток по цитопатическому действию (1 ТЦД50 — тканевая цитопатическая доза). Реакция нейтрализации широко используется в вирусологической практике.Постановка реакции. После установления титра вируса готовят двукратные разведения исследуемой сыворотки, начиная с 1:2 до 1:128 и более, в зависимости от предполагаемого титра вируснейтрализующих антител, в объеме 0,5 мл и к каждому разведению сыворотки добавляют по 0,5 мл вируссодержащего материала в разведении, соответствующем 100 ЛД5о- Одновременно ставят контроли: а) контроль вируса (100 ЛД50 вируссодержащего материала соединяют с физиологическим раствором в равных объемах); б) контроль иммунной сыворотки (иммунную сыворотку в рабочем титре соединяют с вируссодержащим материалом в равных объемах); в) контроль нормальной сыворотки (нормальную сыворотку соединяют с 100 ЛД50 вируса в равных объемах), Пробирки встряхивают и выдерживают в термостате при 37 °С в течение 30...60 мин. Смесью из каждой пробирки, в том числе и из контрольных, заражают чувствительных лабораторных животных (4 гол.). Идентификацию вируснейтрализующих антител с применением данного тест-объекта проводят при диагностике ящура, бешенства, лейкоза птиц. Объем и место введения смеси те же, что были выбраны при определении 1 ЛД5о- Сроки наблюдения за животными аналогичны вышеуказанным. Учет результатов. Вначале учитывают результаты контролей. В первом и третьем из них животные должны погибнуть, во втором— остаться в живых. Если исследуемая сыворотка содержит антитела, то они будут нейтрализовать патогенное действие вируса и животное не погибает. Однако, сыворотку используют в разведениях, и, в связи с этим, в определенной пробирке антител окажется недостаточно для нейтрализации вируса. Процент гибели животных будет нарастать в направлении большего разведения. Все это дает возможность определить титр вируснейтрализующих антител, который рассчитывается по методам Рида и Менча или Кербера. За титр антител исследуемой сыворотки принимают то разведение, которое предотвращает гибель 50% лабораторных животных от действия 100 ЛД5о вируса (табл.10). При использовании РКЭ результат РН учитывают по способности вируснейтрализующих антител сыворотки предотвращать гибель эмбрионов, появление фокусов поражения на хорионаллантоисе и снижать титр вирусных гемагглютининов у 50% куриных эмбрионов. Эти методы применимы при определении нейтрализующей активности сывороток по отношению к вирусам гриппа, оспы, болезни Ньюкасла, инфекционного ларинготрахеита и бронхита кур. Результат РН в культуре клеток оценивают по способности вируснейтрализующих антител исследуемой сыворотки в определенных разведениях предотвращать развитие цитопатогенного эффекта (ЦПЭ), что используется при диагностике болезни Ayeски, ринопневмонии лошадей, вирусного гастроэнтерита свиней, болезни Тешена, лейкоза птиц и др. Таблица 10 Схема постановки реакции нейтрализации (определение антител на белых мышах)
Титр антитела = 1:64 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||