эпизотология. Учебное пособие к лабораторным занятиям (Часть I) для студентов высших учебных заведений по специальности 36. 05. 01 Ветеринария
 Скачать 2.16 Mb.
|
|
Тема3: Патологоанатомическая диагностика инфекционных болезней. Цель занятия: изучить основные правила отбора и пересылки патологического материала для лабораторного исследования, а также оформление сопроводительных документов. Оборудование: секционный набор, спецодежда, металлические шпатели, консерванты (30%-й раствор химически чистого глицерина на стерильном физиологическом растворе: фосфатно-солевой буферный раствор (рН 7,6), 10%-й раствор формалина или 96%-й этиловый спирт), дезинфектанты (3-5%-й раствор карболовой кислоты, хлорная известь или 10%-й раствор гидроксида натрия), термос со льдом, стерильные пробирки и флаконы с пробками, предметные стекла, спиртовка, стеклограф или водоустойчивый фломастер, пленка, пергаментная бумага, шпагат, пеналы, деревянный ящик, стеклянные банки, сургуч, парафин, пастеровские пипетки. Место проведения занятий: лаборатория и практикум кафедры эпизоотологии. Отбор материала для прижизненной диагностики. В зависимости от вида инфекции у клинически больных животных берут соответствующий, специфический для данной болезни материал, соблюдая меры личной безопасности. Секрет молочных желез служит объектом исследования при тех заболеваниях, при которых возбудитель активно выделяется с молоком (туберкулез, бруцеллез, сальмонеллез, мастит). У коров вымя обмывают теплой водой с мылом, соски обрабатывают 70%-м спиртом, первые струйки молока сдаивают, в стерильные сосуды набирают 15-20 мл секрета из первой и последней порций, полученных при выдаивании. У овец и коз пробы получают путем пункции цистерны вымени. Поле операции готовят у основания соска, стерильной иглой, соединѐнной со шприцем, делают пункцию, набирают в шприц секрет и переносят его в стерильные пробирки с резиновыми пробками. Моча чаще всего служит объектом исследования при подозрении на лептоспироз. У коров и свиноматок мочу можно брать непосредственно из мочевого пузыря с помощью катетера или собирать, при естественном мочеиспускании в чистые пробирки, банки. Легче всего мочу получать после утреннего подъема животных, и у свиней — в любое время дня после 1-2- часового лежания. Кал берут из прямой кишки в стерильную посуду, которую накрывают плотной крышкой. При обнаружении на стенке прямой кишки слизи, утолщений или других патологических изменений дополнительно делают соскобы; их помещают в отдельную посуду. Выделения из верхних дыхательных путей и ротовой полости собирают в посуду при естественном истечении или поступают следующим образом: крылья носа и переднею часть носовых ходов обмывают водой, после чего выделения собирают стерильными тампонами из глубоких частей носа. Тампоны помешают в стерильные пробирки, содержащие по 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Содержимое синовиальных бурс и абсцессов берут следующим образом. Шерсть выстригают, кожный покров обрабатывают 70%-м спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию и переносят «пунктат» в стерильную пробирку с резиновой пробкой. Материал из язв и ран получают методом соскоба на границе пораженной и здоровой тканей. Волосы и участки кожи исследуют при кожных заболеваниях. При этом волосы выщипывают, а соскобы с кожи делают скальпелем на границе пораженной и здоровой тканей. Кровь для серологических исследований берут в разгар заболевания, а в некоторых случаях повторно через 10-20 дней по 10 мл от двух-трех больных животных в разные пробирки. Отбор материала для посмертной диагностики. Патологический материал необходимо взять как можно раньше: не позднее 12 ч после гибели животного зимой и 6 ч — в теплое время года, законсервировать или отправить в свежем виде. Аутолизированный (разложившийся) патматериал для выделения возбудителя непригоден. Для бактериологического исследования в лабораторию отправляют кусочки кожи, слизистых оболочек, паренхиматозных органов, трубчатую кость, спинной и головной мозг, лимфатические узлы, пробы жидкости из грудной и брюшной полостей, отрезок кишечника, изолированный лигатурами, плод, плодные оболочки и т. д. Пробы из каждого органа помещают в отдельную посуду и маркируют. В каждом случае необходимо брать тот материал, в котором можно обнаружить характерные для данной болезни изменения. Для вирусологического исследования материалом могут служить; кровь или ее сыворотка, смывы из носоглотки и другие жидкости организма, стенки и содержимое афт, папулы (узелки), везикулы (серозные пузырьки), пустулы (гнойные пузырьки), кусочки головного мозга, печени, легких, селезенки или кусочки других органов и тканей, в которых вирус предполагаемого заболевания содержится в наибольшем количестве. Для гистологического исследования патологический материал берут только от свежих трупов. В лабораторию отправляют кусочки площадью 3-4 см 2 , толщиной не более 1 см, при этом следят, чтобы в них вошли пораженные и граничащие с ними неизмененные участки ткани. Поверхность органа или ткани трупа на участке, из которого предполагают брать пробу, очищают от загрязнений, обеззараживают спиртом, 3%-м раствором фенола или прижигают нагретой металлической пластинкой (шпателем). Материал берут стерильными инструментами и помещают в стерильную посуду (пенициллиновые флаконы, пробирки и другие стеклянные сосуды с резиновыми пробками). Другой патологический материал (кровь, слизь, мочу, желчь и т.д.) можно набирать в одноразовые шприцы или пастеровские пипетки, которые затем с обоих концов запаивают. Кроме того, различные выделения можно посылать в виде мазков или мазков-отпечатков, которые фиксируют на воздухе, заворачивают каждый в отдельности в пергаментную бумагу и маркируют. Трупы мелких животных, части трупов крупных животных и отдельные органы в свежем виде направляют для исследования в лабораторию только нарочным. Посылаемый материал тщательно упаковывают в плотный деревянный или металлический ящик, чтобы предупредить рассеивание возбудителя по пути следования. Консервирование патологического материала. Полученные пробы отправляют в лабораторию в свежем виде; если невозможно отправить в течение ближайших 24-30 ч, то их фиксируют консервантом. Патологический материал для гистологического исследования консервируют 10%-м водным раствором формалина или 96%-м этиловым спиртом. Объем консерванта должен в 10 раз превышать объем взятого материала. Материал, предназначенный для бактериологического исследования, фиксируют 30%-м химически чистым глицерином (лучше на физиологическом растворе) или вазелиновым маслом. Соотношение патологического материала и консерванта 1:4 или 1:5. Трубчатую кость и кишечник обычно консервируют поваренной солью. Для вирусологического исследования материал консервируют 30-50%-м глицерином на стерильном физиологическом растворе. Наилучший и простой метод сохранения биологических свойств вирусов в патологическом материале — охлаждение. Надежно закрытые флаконы заворачивают в вату или упаковочную бумагу и плотно укладывают в термос, заполненный на 1/3 снегом или льдом. При этом в термосе в течение 12-24ч удерживается температура 2-6°С, при которой вирусы сохраняются практически без изменений. Оформление документов на отправляемый материал. На взятый цитологический материал ветеринарный врач составляет сопроводительный документ (форма №3). В документе необходимо указать также эпизоотическую ситуацию хозяйства, лечили животное или нет; если лечили, то какими препаратами, как законсервирован материал; число отправленных упаковок с пробами. ВОПРОСЫ И ЗАДАНИЯ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ 1.Какой материал берут для прижизненной диагностики инфекционных болезней. 2. Какой патологический материал берут для посмертной диагностики инфекционных болезней. 3. Консервирование патологического материала. 4. Какие документы выписываются на отправляемый в лабораторию патматериал. Тема 4: Лабораторные методы диагностики инфекционных болезней. Цель занятия: освоить лабораторные методы диагностики инфекционных болезней и оформление документации. Оборудование: таблица лабораторных методов диагностики инфекционных болезней, инструменты и оборудование для лабораторных исследований, бланки специальных исследований. Место проведения занятий: лаборатория и практикум кафедры эпизоотологии. Бактериологический метод. Это основной метод лабораторной диагностики инфекционных болезней. Для бактериологического исследования от больных или павших животных необходимо правильно взять патологический материал и грамотно оформить сопроводительный документ. Пробы из каждого органа помещают в отдельную посуду и маркируют. В каждом случае необходимо брать тот материал, в котором можно обнаружить характерные для данной болезни изменения. Материал для бактериологического исследования можно фиксировать 30%-м химически чистым глицерином (лучше на физрастворе) или вазелиновым маслом. Соотношение патматериала и консерванта 1:5. Трубчатую кость и кишечник консервируют поваренной солью. Патматериал должен поступать вместе с сопроводительным документом. Поступивший патматериал в лаборатории в зависимости от предполагаемой болезни исследуют следующим образом. На первом этапе делают мазки-отпечатки из присланного патматериала (печень, селезенка, сердце, легкие и т.д.) красят их соответствующими методами, выделяют чистую культуру посевом на питательные среды, делают биопробы, заражая лабораторных животных суспензией патматериала или выделенной культурой возбудителя болезни. На основании обнаружения микроорганизмов и определения их патогенности устанавливают этиологический диагноз. Вирусологический метод. Для вирусологического исследования в лабораторию направляют патологический материал от больных животных, взятый в период проявления у них клинических признаков (температурная реакция, угнетение, воспалительные процессы в верхних дыхательных путях, сопровождающиеся серозными или слизистыми истечениями из носовой полости, диарея, образование везикул, афт, иногда аборты), или вынужденно убитых (павших) животных, взятый не позднее чем через 2 ч после их гибели. Для вирусологического исследования материалом могут служить: кровь или ее сыворотка, смывы из носоглотки и другие жидкости организма, стенки и содержимое афт, папулы (узелки), везикулы (серозные пузырьки), пустулы (гнойные пузырьки), кусочки головного мозга, печени, легких, селезенки или кусочки других органов и тканей, в которых вирус предполагаемого заболевания содержится в наибольшем количестве. Для вирусологического исследования материал консервируют 30-50%- м глицерином на стерильном физиологическом растворе. Наилучший и простой метод сохранения биологических свойств вирусов в патматериале – охлаждение. Надежно закрытые флаконы заворачивают в вату или упаковочную бумагу и плотно укладывают в термос, заполненный на 1/3 снегом или льдом. При этом в термосе в течение 12-24 ч удерживается температура 2-6 С 0 , при которой вирусы сохраняются практически без изменений. Вирусологический метод диагностики включает в себя: обнаружение возбудителя в патологическом материале различными методами (электронная, люминесцентная или световая микроскопия, заражение культуры клеток, лабораторных животных и т.д.), выделение и идентификацию вируса в различных серологических реакциях. Гематологический метод. В лабораторию для гематологического исследования отправляют кровь, которую берут с соблюдением правил асептики из яремной вены в пробирки с антикоагулянтом — 10%-м раствором трилона Б, гепарина, цитрата натрия из расчета 0,02 мл раствора на 1 мл крови. Гематологический метод используют как вспомогательный, а при некоторых инфекционных болезнях (лейкоз крупного рогатого скота, инфекционная анемия лошадей) — в качестве основного метода диагностики. При лейкозе крупного рогатого скота диагноз основан на обнаружении в периферической крови повышения количества лейкоцитов и относительного содержания лимфоцитов, а при инфекционной анемии лошадей — на основании снижения количества эритроцитов, гемоглобина и замедления скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Иммунологический метод. Включает в себя серологическую диагностику (в лаборатории исследуют сыворотки крови для обнаружения антител) и аллергическую диагностику (различные способы введения животным и птице аллергенов). ВОПРОСЫ И ЗАДАНИЯ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ 1. Методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний. 2. Особенности бактериологической диагностики инфекционных болезней. 3. Этапы бактериологической диагностики инфекционных болезней. 4. Особенности вирусологической диагностики инфекционных болезней. 5. Особенности гематологической диагностики инфекционных болезней. 6. Особенности иммунологической диагностики инфекционных болезней. Тема 5: Серологический метод диагностики. Техника взятия крови у разных видов животных. Цель занятия: приобрести навыки взятия крови у животных, организации массовых серологических исследований и оформления документации для отправки проб в лабораторию. Оборудование: инструменты для взятия крови (кровобрательная игла Боброва, стеклянные пробирки объемом 10 мл, с резиновыми пробками, 10% раствор Трилона Б). Место проведения занятий: лаборатория и практикум кафедры эпизоотологии, также факультетская клиника. Одним из иммунологических методов диагностики является серологический (от лат. serum - сыворотка), другим - аллергический. Cерологическим методом, в основном, обнаруживают антитела (АТ) в сыворотке крови. В отличие от гематологического метода, для серологического исследования используют не цельную кровь, а ее часть - сыворотку. Серологические исследования используют для диагностики инфекционных болезней, а также для эпизоотологического и иммунологического надзора. С помощью серологических реакций выявляют бактерионосительство, определяют бессимптомный инфекционный процесс, а также эффективность вакцинации (по титру антител). Серологические реакции характеризуются высокой специфичностью и чувствительностью. Специфичность – это способность АТ сыворотки крови вступать во взаимодействие только с гомологичными АГ-ми. Чувствительность – это способность АТ сыворотки крови даже в при еѐ разведении (в 50-15000 раз, в зависимости от вида серологической реакции) взаимодействовать с гомологичными АГ. Суть серологической реакции заключается во взаимодействии антигена (АГ) возбудителя болезни с антителом (АТ). С помощью известных АГ, которые имеются в диагностических наборах лабораторий обнаруживают специфические АТ в организме больного животного и, наоборот, с помощью известных АТ диагностических сывороток, имеющихся в наличии лабораторий обнаруживают АГ возбудителя болезни. В ветеринарии серологические реакции различных модификаций широко используют при диагностике бруцеллеза, лейкоза, сапа, лептоспироза, паратуберкулеза, микоплазмоза и многих других болезней. В необходимых случаях серологические методы исследования сочетают с аллергическими (сап, бруцеллез и др.). Чтобы получить более достоверные результаты при вирусных инфекциях, рекомендуют исследовать парные сыворотки крови, что дает представление о росте титра антител (титр антител может свидетельствовать, например, о переболевании животного). Серологические реакции, особенно их современные модификации (в частности, микрометодики), снижают трудоемкость диагностических исследований, сокращают расходы дефицитных препаратов и реагентов, исключают опасность заражения персонала лаборатории возбудителями инфекционных заболеваний. Техника взятия крови у животных разных видов. Животных фиксируют, подготавливают место прокола: выстригают шерсть (у птиц выщипывают перья, у свиней кончик хвоста обмывают теплой водой с мылом и высушивают чистым полотенцем), дезинфицируют 70%-м этиловым спиртом, спиртовым раствором йода или 3%-м раствором фенола. Иглы перед началом работы тщательно чистят мандреном, промывают водой из спринцовок и стерилизуют кипячением в течение 30 мин (рис.1). Для каждого животного используют отдельную стерильную иглу. Рис. 1. Иглы: инъекционные: 1 — типа Рекорд; 2 — для аллергического исследования; 3 — для спинномозговой пункции; 4— Кассирского для взятия костного мозга; для взятия крови: 5 — И-51; 6 — И-52; 7— Каспера; 8 — Дюфо; 9— Боброва; 10 — Сайковича; 11— Ананьева. Для серологических исследований у животных берут 8-10 мл крови, у птиц — 2-3 мл (для исследования на лейкоз — 3-4 мл, при этом заранее вносят в пробирки 16 ЕД гепарина в 0,2 мл физиологического раствора или 3- 4 капли 10%-ного трилона Б). Кровь берут из яремной вены, желательно утром до кормления животных. Большим пальцем или с помощью жгута пережимают ярѐмную вену. При хорошем наполнении вены прокалывают иглой кожу и стенку вены под углом 45-50° по направлению к голове. К свободному концу иглы подставляют пробирку или надевают резиновую трубку, конец которой заранее опускают в пробирку. Кровь должна стекать струей по стенке пробирки. Взятая по каплям и вспененная кровь скорее гемолизируется и часто бывает непригодной для исследования. Если после прокола кожи кровь не течет, значит, игла еще не попала в вену или прошла вену насквозь. Необходимо уточнить место нахождения конца иглы и спокойно исправить ошибку. Если кровь вытекает каплями, нужно дополнительно сдавить вену пальцем или сильнее затянуть жгут. Овец прогоняют через раскол, рядом с которым выкапывают траншею глубиной около 1 м. Ветеринарный специалист находится и в этой траншее, и к нему по очереди подводят овец. Иногда вместо траншеи делают специальный длинный стол высотой 60-90 см. Овец через раскол и трапы загоняют на стол и фиксируют, ветеринарный врач стоит рядом и берет кровь (яремную вену у овец легко пережать пальцем). Свиней предварительно фиксируют за верхнюю челюсть с помощью веревочной петли и пробы крови берут из уха или хвоста путем прокола или надреза сосудов. На практике чаще всего отрезают скальпелем кончик хвоста. Применяют и такой способ: у зафиксированного животного хвост поворачивают левой рукой так, чтобы вентральная его поверхность была обращена направо и кверху. На границе средней и нижней трети хвоста строго посередине остроконечным скальпелем прокалывают все мягкие ткани до позвоночника. При этом рассекают кожу, подкожную клетчатку, мышцы и вентральную артерию поперек. После прокола тканей хвосту придают естественное положение и приподнимают нижнюю его треть, для того чтобы операционная рана была открыта. Кровь выделяется равномерной струей. Взяв нужное количество крови, место прокола смазывают 5%-м спиртовым раствором йода и хвост отпускают. В результате сокращения мышц хвоста просвет прокола закрывается и, кровотечение в течение 3-5 мин полностью прекращается. Каждую пробирку с кровью закрывают пробкой. На этикетке указывают порядковый номер пробы, кличку или индивидуальный номер животного, фамилию владельца. Пробирки ставят в штатив или связывают по 10 шт. и помещают в ящик. Для стабилизации крови используют 50 ЕД гепарина или 3-4 капли 10%-ного трилона Б. Кровь для лучшей сохранности сыворотки можно консервировать. Для этого используют 5%-ный фенол на изотоническом растворе хлорида натрия (1 мл раствора на 9 мл сыворотки) или борную кислоту 0,05-0,07 г на одну пробирку. ВОПРОСЫ И ЗАДАНИЯ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ 1. Особенности и техника взятия крови у разных видов животных. 2. Особенности взятия крови для серологической и гематологической диагностики инфекционных болезней. 3. Инструменты и инвентарь для взятия крови. 4. Дать определение чувствительности и специфичности серологических реакций. |