Вирусология, антология. 1. биопрепараты их применение при вирусных заболеваниях и принципы изготовления
 Скачать 450.05 Kb.
|
|
Клеточный иммунитет — тип иммунного ответа, в котором не участвуют ни антитела, ни система комплемента. В процессе клеточного иммунитета активируются макрофаги, натуральные киллеры, антиген -специфичные цитотоксические Т-лимфоциты, и в ответ на антиген выделяются цитокины. Большую роль в клеточном иммунитете играю макрофаги. Когда возбудители размножаются внутри фагоцитов внутриклеточное уничтожение происходит лишь после того как макрофаги получают стимул от спецсенсибилизированных Т-лимфоцитов. Т-лимфоциты активируют макрофаги за счет выделения лимфокинов. Т- лимфоциты. Обычно локализуются в Т- зависимых зонах периферических лимфоидных органов. Функции: распознают процессированный и представленный на поверхности антиген- представляющих клеток (А) антиген, отвечают за клеточный иммунитет, иммунные реакции клеточного типа. При дифференцировке Т- лимфоциты приобретают определенный набор мембранных CD- маркеров. Т-клетки разделяют на субпопуляции в соответствии с их функцией и профилем CD- маркеров. Т- лимфоциты распознают антигены с помощью двух типов мембранных гликопротеинов- Т- клеточных рецепторов (семейство Ig- подобных молекул) и CD3, нековалентно связанных между собой. Они распознают пептидные фрагменты, представляемые им А- клетками. Иммунная реакция опосредована клетками - цитотоксическими Т-лимфоцитами и Т-хелперами. Цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТК) непосредственно контактируют с чужеродными клетками и разрушают их, а Т-хелперы вырабатывают биологически активные вещества — цитокины, активирующие макрофаги. По способности вырабатывать разные цитокины и участвовать в регуляции клеточного и гуморального иммунитета Т-хелперы подразделяются на Тh1и Th2. Первые вырабатывают интерферон γ и интерлейкин-2, стимулируют пролиферацию цитотоксических Т-лимфоцитов и активируют макрофаги, вторые вырабатывают интерлейкины-4, -5, -6, стимулируют пролиферацию и дифференцировку В-лимфоцитов, а также синтез антител разных классов. ЦТК имеют рецепторы, с помощью которых происходит связывание АГ и запускаются процессы, запускающие лизис клетки. Литическая активность Т-клеток начинается с тесного взаимодействия между киллерной клеткой и клеткой-мишенью, происходит изменение мембранной проницаемости клетки-мишени, заканчивающееся разрывом клеточной мембраны. Лимфоциты, способные переносить ГЧЗТ, являются Т-клетками и называются ТГЗТ-лимфоцитами, могут активизироваться и реагировать на белковые АГ, аллоантигены, антигены опухолей, на АГ вирусов, бактерий, грибов, простейших. В- лимфоциты.Основная функция В- клеток- эффекторное участие в гуморальных иммунных реакциях, дифференциация в результате антигенной стимуляции в плазматические клетки, продуцирующие антитела. Образование В- клеток у млекопитающих происходит в костном мозге. Большинство антигенов, индуцирующих синтез антител, для индукции иммунного ответа требуют участия Т- клеток (Тимус- зависимые антигены).Тимус- независимые антигены (ЛПС, высокомолекулярные синтетические полимеры) способны стимулировать синтез антител без помощи Т- лимфоцитов. В- лимфоцит с помощью своих иммуноглобулиновых рецепторов распознает и связывает антиген. Одновременно с В- клеткой антиген по представлению макрофага распознается Т- хелпером (Тh2), который активируется и начинает синтезировать факторы роста и дифференцировки. Активированный этими факторами В- лимфоцит претерпевает ряд делений и одновременно дифференцируется в плазматические клетки (ПК), продуцирующие антитела. Способность непосредственно лизировать широкий набор клеток-мишеней, в особенности опухолевых, обладают ПК – они могут лизировать клетки независимо от продуктов МНС (интерферон и ИЛ-2 усиливают литическую активность ПК). 38. Сем. Герпесвирусов. ИРТ. Это семейство крупных (диаметром 150-200 нм) ДНК-содержащих вирусов, поражающих половую, дыхательную, нервную системы, кожные покровы. Нуклеокапсид герпесвирусов организован по типу кубической симметрии; геном представлен двухнитевой молекулой ДНК. В отличие от прочих одетых вирусов, суперкапсиды герпесвирусов образованы фрагментами ядерных мембран. Суперкапсид герпесвирусов пронизывают гликопротеиновые шипы, образованные белками внутренней ядерной мембраны поражённых клеток. Между нуклеокапсидом и суперкапсидом герпесвирусов расположен покровный слой-тегумен, толщина которого варьирует у различных вирусов. Герпесвирусы относительно нестабильны при комнатной температуре, термолабильны и быстро инактивируются растворителями и детергентами. Герпесвирусы вызывают острые и латентные инфекции, а также обладают определённым онкогенным потенциалом. Доказана роль герпесвирусов в развитии болезней злокачественного роста у животных, а также эпидемиологическая связь с образованием некоторых опухолей у человека. Современная систематика разделяет семейство Herpesviridae на подсемейства Alphaherpesviruses, Betaherpesviruses и Gammaherpesviruses. ИРТ – острое контагиозное заболевание, характеризующееся поражением дых. путей и половых органов. Сопровождается катарально-некротическим поражением слиз. обол., респираторного тракта, конъюнктивитами, энцефалитами и абортами. Возбудитель - ДНК-содержащий вирус сем. Herpesviridae. Снаружи покрыт двуслойной липопротеиновой оболочкой, на которой имеются короткие ворсинки – а/г. В своем составе имеет 18 структурных белков, на которые в организме вырабатываются вируснейтрализующие, комплементсвязывающие и преципитирующие а/т. Для культивирования используют первично трипсинизированные среды и перевиваемые органные культуры клеток. При 56°C инактивация через20 мин, при 37°C – через 4-10 дн. Растворы хлорамина и формалина вызывают гибель. Клинич. признаки: в зависимости от ворот инфекции различают 5 форм проявления: респираторную, генитальную, энцефалитную, конъюнктивитная и артритная. У телят вызывает пневмонию. Летальность до 20%. Диагностика: в лаб. направляют носовую, влагалищную и конъюнктивальную слизь, соскобы со слиз. обол. дых. путей и послед от абортированных плодов; парные сыворотки крови. От трупов – кусочки паренхиматозных органов. Выделение возбудителя осущ. на культуре клеток, а идентификация – в РН, РДП, РНГА и РИФ. 39. Живые вакцины и методы их получения. Достоинства и недостатки. Живые вакцины - препараты, действующим началом в которых являются ослабленные тем или иным способом, потерявшие свою вирулентность, но сохранившие специфическую антигенность штаммы патогенных бактерий. Способы получения вакцинных штаммов: 1. Использование аттенуированных штаммов, возникших в естественных условиях; 2. Исскуственно полученные аттенуированнштаммы в лаб. условиях (выращивание на культуре клеток (для вирусов), искусств. пит. среде (для бактерий), переводом возбудителя на др. восприимчивый вид животного/ переводом возбудителя на не восприимчивый вид животного); 3. ослабление вакцинных штаммов прямым воздействием на ген возбудителя мутагенами физической природы (проникающая радиация, ультрафиолетовое излучение, пониженная или повышенная температура и др.); 4. комбинированные методы получения вакцинных штаммов в лаб. усл. Для приготовления вакцин аттенуированные штаммы возбудителей культивируют на специальных питательных средах в реакторах, куриных эмбрионах или культурах клеток и тканей. Полученную биомассу очищают от балластов и после проверки на безвредность, микробную загрязненность и активность в соответствии с общепринятыми методами используют для иммунизации животных и птиц. Преимущества: высокая напряженность и длительность вызываемого ими иммунитета; как правило, вводятся однократно. Недостатки: необходимость соблюдать меры предосторожности, транспортировка и хранение при t° 4-10°C, способны вызывать вакцинную инфекцию. Чаще вызывают аллергические реакции. Примеры: сибиреязвенная вакцина, чумная вакцина, бруцеллёзная вакцина, БЦЖ вакцина, оспенная дермальная вакцина. 40. Взятие, пересылка и подготовка материала для вирусологического исследования. Для вирусологических исследований желательно направлять пробы от животных в трех стадиях болезни: 1.от свежих трупов (кровь, кость, лимфоузел и пораженные органы); 2.от убитых в агонии животных (кровь, кость, лимфоузлы и пораженные органы); 3.от выздоравливающих животных (кровь). Образцы материалов от трупов должны быть отобраны в возможно короткие сроки после проявления клинических признаков болезни или не позднее 2-3 ч после клинич. смерти или убоя животного. Пробы необходимо брать асептически, не допуская их загрязнения, в стерильные флаконы Каждую пробу необходимо брать в отдельный флакон. Масса каждой пробы— не менее 5—10 мл, или грамм. Все флаконы должны герметически закрываться пробками продезинфицированы снаружи, высушены и маркированы. Надписи необходимо делать простым карандашом с указанием вида и номера животного, названия органа и даты взятия материала. Дополнительные данные, относящиеся к анамнезу, заболеваемости, размеру очага или вспышки, симптоматике, применявшимся вакцинам, препаратам и т. п., отражают в специальной карте или сопроводительном письме. Лучшие условия для сохранения проб материалов — замораживание. Образцы, которые не могут быть доставлена в лабораторию в течение суток или в замороженном виде, необходимо консервировать: глубоким замораживанием в жидком азоте, смесью льда (уксусн. к-та + этиловый спирт 1:1), 50% р-р глицерина на физ. р-ре или смесью снега с солью 3:1. Упаковка должна быть трехслойной, водонепроницаемой и герметичной. Поверхностный слой защищает от мех. повреждений. Материал можно отправлять в 2-х видах: лиофилизированный (высушенный) препарат или в виде водной суспензии. Перед отправкой в лабораторию составляют сопроводительные документы, где указывают фамилию и адрес отправителя и получателя, внутрь упаковки помещают сопроводительный акт. При распаковке материала необходимо протирать упаковку дез. р-ром и ставить материал на поднос или в кювет. Далее материал освобождают от консерванта, оттаивают, отмывают от глицерина, взвешивают или измеряют. Часть материала берут для вирусологических исследований, оставшуюся часть хранят в холодильнике на случай дополнительных исследований. 41. Антитела – фактор специфического противовирусного иммунитета К специфическим факторам противовирусного иммунитета относятся антитела, в образовании которых, решающую роль играют Т и В-лимфоциты и их кооперация с макрофагами. Антитела (иммуноглобулины, ИГ, Ig) — это особый класс гликопротеинов, присутствующих на поверхности В-клеток в виде мембраносвязанных рецепторов и в сыворотке крови и тканевой жидкости в виде растворимых молекул. Они являются важнейшим фактором специфического гуморального иммунитета. Антитела используются иммунной системой для идентификации и нейтрализации чужеродных объектов — например, бактерий и вирусов. Антитела выполняют две функции: антиген-связывающую и эффекторную . Антитела синтезируются плазматическими клетками, которыми становятся В-лимфоциты в ответ на присутствие антигенов. Для каждого антигена формируются соответствующие ему специализировавшиеся плазматические клетки, вырабатывающие специфичные для этого антигена антитела. Антитела распознают антигены, связываясь с определённым эпитопом — характерным фрагментом поверхности или линейной аминокислотной цепи антигена. Антитела состоят из двух лёгких цепей и двух тяжелых цепей. У млекопитающих выделяют пять классов антител (иммуноглобулинов) — IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, различающихся между собой по строению и аминокислотному составу тяжёлых цепей и по выполняемым эффекторным функциям. 42. Роль антител и фагоцитов в противовирусном иммунитете. Роль антител в противовирусной защите. Антитела являются мощным механизмом связывания герпесвирусов и наряду с другими факторами ограничивают их распространение с крово- и лимфотоком. Образующиеся антитела действуют на вирус или на инфицированные клетки. Выделяют две основные формы участия антител в устранении вирусной инфекции: Нейтрализация вируса. Иммунный лизис вируса. Нейтрализация вируса антителами препятствует прикреплению вируса к клетке и проникновению его внутрь (эффект усиливается в присутствии комплемента, кофактора и антиидиотипических антител, появляющихся на поздних стадиях инфекционного процесса) и связывают иммуноглобулиновые эпитопы иммунного комплекса, состоящего из вирусных частиц и антител. Иммунный комплекс связывается с Fc-рецептором макрофага с последующим его фагоцитозом и лизисом вируса. 43. Условия транспортировки и хранения вируссодержащего материала в лаборатории Материал берут прижизненно и посмертно, объемом 10-15 граммов, стерильно, посмертно материал берут не позднее 2-3 часов после смерти, материал берут с учетом его максимальной концентрации и тропизма, для сохранения вируса в материале либо консервируют (в 50% глицерине), либо замораживают (-15градусов снег и лед, -70 градусов сухой лед, этиловый спирт, -196 жидкий азот). Жидкий патматериал можно набирать в одноразовые шприцы или пастеровские пипетки, которые затем с обоих концов запаивают. Кроме того, различные выделения можно посылать в виде мазков или мазков-отпечатков, которые фиксируют на воздухе, заворачивают каждый в отдельности в пергаментную бумагу и маркируют. Трупы мелких животных, части трупов крупных животных и отдельные органы в свежем виде направляют для исследования в лабораторию только нарочным. Посылаемый материал тщательно упаковывают в плотный деревянный или металлический ящик, чтобы предупредить рассеивание возбудителя по пути следования. Консервирование патологического материала. Полученные пробы отправляют в лабораторию в свежем виде; если невозможно отправить в течение ближайших 24...30 ч, то их фиксируют в консерванте. 44. Особенности работы вирусологической лаб. И ее оборудование. Вирусологические лаборатории должны размещаться в отдельном здании или изолированном блоке не выше второго этажа и обязательно иметь два входа: один для персонала, второй для поступления материала для исследования; - помещения в вирусологической лаборатории должны быть расположены так, чтобы обеспечить поточность продвижения поступившего на исследование материала; - помещения лаборатории должны быть разделены на зоны: «чистая зона», «заразная зона», «заразный» блок, блок помещений для работы с лабораторными животными (виварий). В «чистой» зоне размещают помещения административно-бытовые, вспомогательно-подготовительные, кладовые. Работа в этих помещениях не связана с вируссодержащим материалом. В «заразной» зоне проводится работа с вирусами III-IV группе патогенности. В заразной зоне находятся помещения для индикации и идентификации вирусов. «Заразный» блок является строго изолированной группой помещений, сообщающийся с остальными помещениями «заразной» зоны через санитарный шлюз (помещения для переодевания и обработки защитной одежды) и передаточный шлюз (для прохождения материала). В «заразной» зоне располагаются помещения: для приготовления культуры ткани; для индикации и идентификации респираторных вирусов; для исследования крови на краснуху и паротит; для индикации и идентификации энтеральных ротавирусов; для исследований по санитарной вирусологии; для исследований на вирусный гепатит; для серологических исследований; для проведения исследований с использованием ИФА; для индикации и идентификации арбовирусов. Каждое помещение «заразной» зоны состоит из рабочей комнаты и боксов с предбоксником для работы с культурой ткани. Боксы должны располагаться смежно с рабочей комнатой и сообщаться с последнеей через предбоксник: - помещения для подготовки лабораторной посуды включают: моечную, стерилизационную, препараторскую, автоклавную; - виварий следует разместить в отдельно стоящем здании и оборудовать двумя входами: один - для персонала, другой - для поступления лабораторных животных; - лаборатории должны быть обеспечены вентиляцией, канализацией, энергопитанием, централизованным отоплением, иметь достаточное естественное и искусственное освещение. Стены должны быть облицованы глазуревой плиткой на высоту 1,5 м или выкрашены масляной краской, полы покрыты плиткой или линолеум, боксы и предбоксники оборудованы автономной приточно-вытяжной вентиляцией; - для обеззараживания воздуха лаборатории должны быть оборудованы бактерицидными лампами. 45. Вирус бешенства. Уличный и фиксированный вирусы бешенства. Патогенность, диагностика, антирабические прививки Бешенство — остро протекающая инфекционная болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением ЦНС, восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также человек. Болезнь регистрируется в различных странах земного шара. Не отмечено случаев проявления болезни в Австралии, Великобритании, Японии. Возбудитель. Вирус принадлежит к семейству Rabdoviridae, роду Lyssavirus. Вирион пулевидной формы, длиной 180 нм, толщиной 70–80 нм, содержит односпиральную РНК; число капсомеров — 1200–1700, спиральный тип укладки. Наружная оболочка имеет була- 19 вовидные выпячивания. Репродукция происходит в цитоплазме нервных клеток. Культивирование. Вирус бешенства хорошо культивируется на естественно-восприимчивых животных, белых мышах, кроликах, развивающихся куриных эмбрионах и культурах клеток. Патогенез. Восприимчивы все теплокровные животные. При заражении вирус непродолжительное время сохраняется на месте внедрения, а затем по центростремительным нервным волокнам проникает в спинной и головной мозг. Репродукция вируса в сером веществе мозга обусловливает развитие диффузного негнойного энцефалита. Из мозга по центробежным нервным путям вирус попадает в слюнные железы. Здесь он репродуцируется в нервных узлах и после дегенерации нервных клеток выходит в протоки желез, инфицируя слюну. Из мозга вирус нейрогенным путем транспортируется также в сетчатку и роговую оболочку глаз, надпочечники, где, видимо, тоже репродуцируется. |