Вирусология, антология. 1. биопрепараты их применение при вирусных заболеваниях и принципы изготовления
 Скачать 450.05 Kb.
|
|
Инфекционный гастроэнтерит свиней) — остро протекающая, высококонтагиозная болезнь. Поражает главным образом поросят до 3-месячного возраста. Проявляется рвотой, тяжелой диареей и высокой смертностью среди поросят до 2-недельного возраста. Характеристика возбудителя. Вирус относится к семейству Coronaviridae роду Coronavirus. Вирионы полиморфны, Вирион содержит геном в виде односпиральной плюс-РНК и капсида кубического типа симметрии. Нуклеокапсид покрыт оболочкой с булавовидными отростками (пепломерами), которые и придают оболочке вид солнечной короны. Оболочка вириона клеточного происхождения. Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, но устойчив к трипсину. Хорошо инактивируется дезинфицирующими растворами, устойчив к замораживанию (сохраняется до 8 нед). Антигенная активность ВИГС выражается способностью индуцировать синтез вируснейтрализующих антител, активность которых после переболевания обусловлена IgA, а после иммунизации — IgG. Вирусный нуклеопротеин (N) не способен индуцировать синтез вируснейтрализующих антител. Пассивный иммунитет поросят против кишечной инфекции обусловлен получением IgA с молозивом и молоком, в которых титр антител выше, чем в сыворотке крови свиноматок. Высокий уровень IgA в молозиве и молоке обнаруживают только после поедания свиноматками вируссодержащего материала. Поросята в течение нескольких недель могут получать IgA с молозивом и молоком от свиней-реконвалесцентов. Культивирование вируса. Лабораторные животные к вирусу нечувствительны. Естественно-восприимчивые животные, лучше поросята-сосуны в возрасте 1 — 15 дней, легко заражаются введением вируса интраназально. Клинические признаки. Инкубационный периоду 1 — 15-дневных поросят длится всего 12—18 ч.. С возрастом животных инкубационный период увеличивается, смертность уменьшается. У больных кормящих свиноматок снижается продукция молока. Высокую чувствительность новорожденных к вирусу ИГС связывают со снижением у них и у свиноматок при опоросе цитотоксичности лимфоцитов в отношении клеток, инфицированных вирусом. В этих условиях поросята могут быть защищены только антителами матери, полученными с молозивом и молоком. Различают три стадии болезни: предклиническую, клиническую и выздоровления. В предклинической стадии наблюдают снижение аппетита, сонливость, повышенную жажду.. Клинический период характеризуется сильной диареей с выделением газов. Фекалии серо-красного или желто-зеленого цвета. У свиноматок, зараженных при контакте с больными поросятами, повышается температура тела, исчезает аппетит. Патологоанатомические изменения. У поросят-сосунов, павших в первые 3 дня жизни, в желудке и тонком кишечнике находят свернувшееся молозиво, набухание и покраснение слизистой. Труп поросят 2-недельного возраста истощен, слизистые бледные.. Источник инфекции. Основной источник ИГС —Инфекцию могут распространять собаки и лисицы, которые являются инапарантным (бессимптомным) источником для свиней. Вирус может передаваться и домашними мухами, в тонком кишечнике которых его можно обнаружить в течение 3 мес, а в органах дыхания — до 11 дней. Диагностика. Диагноз ставят на основании анализа эпизоотологических данных, симптомов болезни и результатов лабораторных исследований. Патологический материал для лабораторных исследований берут от 8—9 больных поросят (2—3 поросенка из помета) в начальной стадии проявления клинических признаков болезни. Берут отрезок тощей или подвздошной кишки длиной 10—12 см с содержимым, мезентериальные лимфатические узлы. Для выделения вируса поросят убивают через 24 ч после появления диареи, и полученные от них материалы подвергают вирусологическому исследованию. Идентификацию выделенного вируса проводят: гистологическими исследованиями. Обнаруживают атрофию ворсинок в тонком кишечнике; в цитоплазме эпителиальных клеток выявляют вакуоли; РИФ; PH в культуре клеток и на восприимчивых поросятах в возрасте 1—5 дней; твердофазным ИФА с использованием моно — и поликлональных антител. 11. Вирус африканской чумы свиней Вирус африканской чумы свиней - контагиозная болезнь свиней, характеризующаяся лихорадкой, геморрагическим диатезом и некродистрофическими изменениями паренхиматозных органов. Семейство -Asfarviridae, содержит ДНК. Вирионы округлой формы, состоят из плотного нуклеотида, двухслойного икосаэдрического капсида и наружной оболочки. Двухслойный капсид из 1892–2172 капсомеров; тип укладки капсомеров кубический. Устойчивость. Вирус исключительно устойчив в широком диапазоне температур и рН среды, включая высушивание, замораживание и гниение, поэтому длительно сохраняется во внешней среде . Культивирование. Используюь подсвинков 3–4-месячного возраста, которых заражают любым способом. К вирусу чувствительны культуры лейкоцитов крови и макрофагов костного мозга свиней с развитием ГАД и ЦПД без адаптации. Антигенные свойства. Вирус содержит комплементсвязывающий, преципитирующий и гемадсорбирующий антигены, но не обладает иммуногенной активностью.. Патогенез. Вирус первоначально проникает в лимфоидную ткань и кровь, репродуцируется, распространяется по всему организму, вызывает генерализованную инфекцию с явлениями токсикоза. В результате возникают тяжелые сосудистые расстройства в виде множественных кровоизлияний, тромбозов сосудов, инфарктов и некрозов тканей, что приводит к массовой гибели заболевших животных. Предубойная диагностика. Инкубационный период составляет 2–7 суток. различают молниеносное, острое, подострое и хроническое течение и латентную форму болезни. При молниеносном течении животные гибнут без характерных признаков; при остром повышается температура тела до 42,5°С, пропадает аппетит, Послеубойная диагностика. Многочисленные кровоизлияния на коже, слизистых и серозных оболочках. Лимфатические узлы увеличены. В грудной и брюшной полости экссудат Восприимчивы домашние и дикие свиньи всех возрастов. Источник возбудителя инфекции — больные животные. Факторы передачи вируса — корм, пастбища. Лабораторная диагностика. Диагноз ставят на основании анализа эпизоотологических данных, клинических признаков и патоло-гоанатомических изменений с обязательным проведением, особенно при первичном возникновении болезни, лабораторных исследований. Патологический материал: кровь, кусочки сердца, легких, печени, селезенки, почек и лимфатических узлов. Схема лабораторной диагностики. I. Экспресс-метод: РИФ. II. Вирусологические исследования: 1) выделение вируса в культуре клеток лейкоцитов и костного мозга свиней, на подсвинках 2–4 месячного возраста; 2) идентификация выделенного вируса в РИФ, РСК, РДП, радиоиммунологический метод, метод рестрикционного анализа. III. Ретроспективная диагностика: РНИФ, РЗГАД, РДП, иммуноэлектрофорез, РИД, радиоиммунологический метод. Дифференциальный диагноз. Необходимо исключить КЧС, болезнь Ауески, пастерелез и рожу. Срок исследования — до 10 суток. 12. Интерференция, интерферон. Механизм действия интерферона. Интерференция вирусов (; гибель, уничтожение_) антагонистическое, или ингибиторное, действие одного вируса или его компонентов на репродукцию другого вируса и течение инфекционного процесса, вызываемого последним. Первый вирус, обусловливающий феномен, называют интерферирующим, а второй — претендующим или интерферируемым. При одновременном введении вирусов возможна двусторонняя интерференция. Явление Интерференции вирусов используется при лабораторной диагностике и вакцинной профилактике некоторых вирусных инфекций. Так, вирусологические лаборатории применяют методы, основанные на интерференции, для обнаружения, выделения и титрования нецитопатогенных вирусов, а также антител к ним (напр., при выделении и изучении вируса краснухи). В практике иммунизации обнаружено положительное, обусловленное интерференцией, действие живых вирусных вакцин на заболеваемость, вызываемую как гомологичными, так и гетерологичными агентами. Однако феномен интерференции может играть и отрицательную роль при иммунизации, напр, наличие энтеровирусов в кишечнике человека уменьшает приживляемость вакцинных штаммов полиовируса и, следовательно, эффективность вакцинации. Кроме того, возможность проявления интерференции должна учитываться при составлении поливалентных вакцин, а также схем вакцинации. ИФ-альфа, продуцируется лейкоцитами, противовирусным, антипролиферативным, противоопухолевым действием. Нарушает репродукцию вирусов, активируя в клетки ингибиторов релекации вируса. ИФ-бэта, продуцируется фибробластами, противоопухолевым и противовирусным действием. ИФ-гамма, продукт Т – хелперов, противовирусное действия. Влияет на рост клеток, активирует макрофаги, повышает продукцию ИЛ-1. Интерферон относится к важным защитным белкам иммунной системы. Открыт при изучении интерференции вирусов, т. е. явления, когда животные или культуры клеток, инфицированные одним вирусом, становились нечувствительными к заражению другим вирусом. Оказалось, что интерференция обусловлена образующимся при этом белком, обладающим защитным противовирусным свойством. Этот белок назвали интерфероном. Интерфероны : по структуре и биологическим свойствам интерфероны подразделяются на три вида: α-интерфероны β- интерфероны γ- интерфероны. По способу получения выделяют: лейкоцитарные, лимфобластоидные и рекомбинантные интерфероны. Наиболее широко как противовирусные препараты используются рекомбинантные интерфероны альфа. По своему механизму действия и клинической эффективности наиболее схожи α-интерфероны и β-интерфероны. Механизм действия интерферонов. Наиболее изученным свойством интерферона является его способность препятствовать размножению вирусов. Он образуется в клетках в ответ на вирусную инфекцию. Интерфероны не обладают прямым противовирусным действием, они подавляют синтез вирусных белков и в некоторых случаях сборку и выход вирусных частиц путём активации олигоаденилатциклазы. Все интерфероны обладают противовирусным, иммуномодулирующим, противоопухолевым и антипролиферативным эффектами. Помимо общих свойств, интерфероны обладаю рядом отличий. Противовирусный эффект интерферонов заключается в подавление синтеза вирусной РНК, подавление синтеза белков оболочки вируса. Механизмом этого эффекта является активация внутриклеточных ферментов, таких например как протеинкиназа или аденилатсинтетаза. Протеинкиназа разрушает фактор инициации синтеза белка с матричной РНК, что подавляет белковый синтез. Аденилатсинтетаза – вызывает синтез веществ разрушающих вирусную РНК. Иммуномодулирующий эффект интерферонов – способность регулировать взаимодействие клеток участвующих в иммунном ответе. Эту функцию интерфероны выполнят, регулируя чувствительность клеток к цитокинам и экспрессию на мембранах клеток молекул главного комплекса гистосовместимости I типа (ГКГ1). Усиление экспрессии ГКГ1 на вирус-инфицированных клетках значительно повышает вероятность того, что они будут распознаны иммунокомпетентными клетками и элеминированы из организма. Наиболее выраженными иммуномодулирующими свойствами обладает ИНФ-γ, являясь продуктом Т-лимфоцитов-хелперов I типа он вместе с другими провоспалительными цитокинами активирует макрофаги, Т-цитотоксические лимфоциты, клетки-естественные киллеры (NK-клетки), подавляет активность Влимфоцитов, активизирует простагландиновую и кортикостероидную системы. Все эти факторы усиливают фагоцитарные и цитотоксические реакции в зоне воспалительного очага и способствую эффективной элиминации инфекционного агента. Противоопухолевый эффект интерферонов связан с их способностью замедлять или подавлять рост культуры клеток и активировать противоопухолевые механизмы иммунной системы. 13. Вирусные болезни птиц Болезнь Ньюкасла птиц ( вирус семейства Paramyxoviridae) и классическая чума птиц вирус семейства Orthomyxoviridae) высоко контагиозные болезни птиц, сопровождающиеся высокой летальностью. Ввиду большого сходства клинических признаков, патологических изменений и эпизоотических данных обеих инфекций их точно дифференцировать можно только лабораторными методами. Необходимость типирования возбудителей этих болезней связана с особенностью их специфической профилактики. производится путем: – выделения возбудителя в развивающихся куриных эмбрионах; – постановки биопробы на птицах; – типирования выделенного вируса в реакциях задержки гемагглютинации, нейтрализации и связывания комплемента; МЕТОДИКА ОБНАРУЖЕНИЯ Исследуемый материал: больная птица или трупы не позднее двух часов с момента гибели. Из селезенки, или печени, легких, мозга, почек готовят 10%-ую суспензию на физ.растворе с соблюдением правил асептики .Делают навеску 1г., помещают ее в стерильную ступку и растирают снебольшим песка до получения гомогенной массы+ 9 мл физиологического раствора, содержащего 100 ед./мл тетрациклина и 1:10000 теомерсана (0,1 на 1000мл физраствора). Полученную массу переносят пипеткой в пробирку или пенициллиновый флакон. Для освобождения взвеси от крупных частиц суспензию подвергают 15 минут центрифугированию при 3000 об/мин. Или отстаивают два часа при температуре от 0 до 40С. В дальнейшее используем только надосадочную жидкость. Из полученной жидкости делают дополнительно разведение 1:1000 на физиологическом растворе. Исследуемым материалом в разведениях 1:10 и 1:1000 заражают по 6 куриных эмбрионов. Для заражения используют чистые куриные эмбрионы с белой скорлупой в возрасте 10 дней. ПОСТАНОВКА БИОПРОБЫ Проводят только в сомнительных случаях (при отсутствии клинических признаков и патологических изменений у птиц или при выделении вируса из гомогенатов исследуемых органов только в разведении 1:10). Биопробу проводят к болезни Ньюкасла или классической чуме птице того же возраста и породы, на которой установлено заболевание. Четырем птицам внутримышечно вводят 10%-ную суспензию исследуемых органов или аллантоисную вируссодержащую жидкость. За зараженной птицей устанавливают наблюдение в течение 10 дней. При наличии в исследуемом материале вирулентного вируса болезни Ньюкасла птица заболевает через 3-7 дней после заражения и погибает через 1-5 дней после начала заболевания, при классической чуме птица заболевает через 1-5 дней после заражения и погибает через 10-72 часа после появления клинических признаков заболевания. При отрицательном результате биопробы заражение птицы должны оставаться живыми. При гибели хотя бы одной из четырех зараженных птиц биопроба считается положительной 14. Вирусология как наука. Назначение и задачи вирусологии Вирусология — наука о вирусах — микроскопических надмолекулярных созданиях природы, которые являются своеобразной паразитической формой жизни. Общая вирусология изучает природу вирусов, их строение, размножение, биохимию, генетику. Медицинская, ветеринарная и сельскохозяйственная вирусология исследует патогенные вирусы, их инфекционные свойства, разрабатывает меры предупреждения, диагностики и лечения вызываемых ими заболеваний. Вирусология решает фундаментальные и прикладные задачи и тесно связана с другими науками. Раздел вирусологии, изучающий наследственные свойства вирусов, тесно связан с молекулярной генетикой. Вирусы не только предмет изучения, но и инструмент молекулярно-генетических исследований, что связывает вирусологию с генетической инженерией. Вирусы — возбудители большого количества инфекционных заболеваний человека, животных, растений, насекомых. С этой точки зрения вирусология тесно связана с медициной, ветеринарией, фитопатологией и другими науками. Назначение-изучает строение систематику, генетику размножение вирусов, их взаимодействие с клеткой 15. Болезнь Ауески. Диагностика и профилактика. Болезнь Ауески (псевдобешенство, бешеная чесотка) — остропротекающая болезнь сельскохозяйственных животных всех видов, пушных зверей и грызунов. Вирус относится к семейству Herpesviridae, содержит двуспиральный линейный ДНК-нуклеоид. В составе вириона определено до 32 белков. Установлена роль отдельных белков в вирулентности и индукции иммунного ответа. Антигенная активность. В оболочке вируса болезни Ауески различают 3 основных гликопротеина, на которые при инъекции свиньям образуются антитела. Их обнаруживают в PH, РСК и РДП. Комплементсвязывающие антитела появляются в сыворотке крови через 3 дня после заражения, и титр их удерживается до 30— 40 дней. Вируснейтрализующие антитела появляются на 5—7-й день, количество их достигает максимума через 3—4 нед, титр их сохраняется до 1,5 лет. Антигенная вариабельность. Не установлена. Установлено антигенное родство вируса болезни Ауески с вирусом простого герпеса. Гемагглютинирующие свойства. Гемагглютинин вируса сорбируется на мышиных эритроцитах при температуре 4, 22 и 37 °С. Диагностика. Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, Для лабораторной диагностики от больных свиней направляют носовые секреты, плоды и плаценту от абортировавших животных. От трупов являются миндалины, головной мозг, кусочки легких,. От латентно инфицированных свиней вирус может быть выделен из ганглиев тройничного нерва. Лабораторная диагностика. Индикацию вируса в патологическом материале можно проводить с помощью экспресс-методов (ПЦР, РИФ, РИГА, ИФА) и биопробой. (ПЦР) как метод индикации вируса обладает 100%-ной чувствительностью и 94,2%-ной специфичностью. РИФ дает возможность видеть при малом увеличении широкие полоски флуоресцирующих нейронов коры головного мозга с отдельными флуоресцирующими клетками. РИГА при использовании эритроцитарного иммуноглобулинового диагностикума обнаруживают вирусный антиген. ИФА прямым иммунопероксидазным методом обнаруживает антиген вируса болезни Ауески в мазках-отпечатках из мозга и слизистой оболочки гортани. Активный вирус в патологическом материале можно обнаружить путем биопробы на лабораторных животных и в культуре клеток. Из лабораторных животных наиболее чувствительны к вирусу кролики массой 2—2,5 кг, которым внутримышечно или подкожно вводят по 1 мл 10%-ной суспензии исследуемого материала. Биопробу считают положительной, если кролики погибают с признаками болезни Ауески (нервная форма, зуд, расчесы) через 2—10 дней после заражения. Если кролики погибают без признаков болезни, биопробу повторяют, используя патологический материал второго пассажа. Гибель кроликов при биопробе без признаков зуда и расчесов может свидетельствовать о выделении вакцинных штаммов вируса болезни Ауески. Материалом для выделения вируса от погибших кроликов служат ткани головного и спинного мозга, а также паренхиматозные органы (легкие, печень). Биопроба в первично-трипсинизированных культурах клеток (почек и щитовидной железы свиней, семенников телят, фибробластов КЭ), перевиваемых культурах клеток (РК-15, ВНК-21) эффективна даже при диагностике атипичного течения болезни, при которой биопроба на кроликах может дать отрицательный результат. Идентификацию выделенного вируса осуществляют PH в той же живой системе, на которой был выделен вирус. Могут быть использованы более быстрые методы идентификации: РИГА, РИФ, РДП, ИФА. Дифференциальная диагностика. Болезнь Ауески у свиней следует дифференцировать от болезни Тешена, чумы, бешенства, гриппа, сальмонеллеза, отечной болезни, пастереллеза, стрептококкоза, гипогликемии, солевого отравления, аскаридоза, авитаминоза. Специфическая профилактика. Для специфической профилактики болезни Ауески у животных многих видов в нашей стране применяют живые вакцины (ВГНКИ, штаммы БУК 628 и УНИИЭВ-18) и инактивированную культуральную вакцину. Живые вакцины, в отличие от инактивированных, обеспечивают напряженный клеточный и относительно слабый гумморальный иммунитет. С учетом этого строится стратегия специфической профилактики. 16.Диагностика вируса бешенства Бешенство (Rabies, Lyssaгидрофобия – острая инфекционная болезнь теплокровных, вызываемая нейротропным вирусом. Одна из самых опасных и тяжелых инфекционных болезней человека и животных. Протекает болезнь с признаками поражения центральной нервной системы, характеризуется необычным поведением, непровоцируемой агрессивностью и параличами. Возбудитель болезни - относительно крупный РНК – содержащий вирус семейства Rhabdoviridae, род Lyssavirus его удается обнаружить в таких органах, как молочная железа, селезенка, почки. Культивируется вирус в живых клетках, для накопления больших количеств вируса животных заражают непосредственно в мозг. В последнее время вирус адаптировали к куриным и утиным эмбрионам. Изменчивость - одно из важнейших биологических свойств вируса бешенства. Диагностика бешенства Диагноз бешенства ставится на основании следующих данных: Наличие контакта с больным или неизвестным животным за последний год (учитываются укусы животных и другие возможные контакты со слюной, обработка шкур животных и пр.) Наличие симптомов, характерных для бешенства. Результаты анализов на бешенство у подозрительного животного (если оно было поймано). Результаты анализов на бешенство у человека. |