Вирусология, антология. 1. биопрепараты их применение при вирусных заболеваниях и принципы изготовления
 Скачать 450.05 Kb.
|
|
Геморрагическая болезнь кроликов (ВГБК) – это острое инфекционное заболевание, поражающее органы животного, в особенности печень и лёгкие. Болезнь также носит название некротический гепатит и геморрагическая пневмония. Она отличается внезапностью своего появления, молниеносным развитием и моментальным наступлением летального исхода. Болезнь очень быстро распространяется среди взрослого поголовья кроликов. Болезнь протекает настолько быстро, что обнаружить какие-либо изменения у животного не удаётся, инкубационный период может составлять от нескольких часов до нескольких дней. То есть, если сегодня кролик выглядит вполне нормальным, не выражая признаков болезни, то уже завтра он может оказаться мёртвым. У животного наблюдаются судороги, кролик отказывается от пищи, становится апатичным и вялым, беременные самки могут абортировать. Через 30 часов после инфицирования у кролика обнаруживаются признаки внутрисосудистого свёртывания крови. Перед смертью у кролика наблюдаются красно-жёлтые выделения из носа, при этом он может издавать стоны и писк. Причиной гибели животных при геморрагической болезни является тяжёлое поражение печени, а также появление отёка в лёгких. Для установления диагноза в лабораторию отправляются свежие трупы кроликов, к ним прилагаются записи с эпизоотологическими данными о хозяйстве. Для того чтобы не возникало риска поражения кроликов ВГБК необходимо проводить профилактические мероприятия – вакцинацию. 28. Понятие об иммунитете и его формы. Противовирусный иммунитет Иммунитетом называют способность организма находить чужеродные тела и вещества (антигены) и избавляться от них. Слово «иммунитет» происходит от латинского immunitas, что значит «избавление от чего-либо». Виды иммунитета: Различают клеточный иммунитет, при котором уничтожение чужеродных тел осуществляют клетки, например фагоциты, и гуморальный иммунитет, при котором посторонние тела удаляются с помощью антител, доставляемых кровью. Клеточный иммунитет был открыт И.И. Мечниковым, а гуморальный — П. Эрлихом. Нобелевская премия была присуждена им обоим. Иммунитет может быть видовым (человек не болеет чумкой собак). К некоторым чужеродным телам иммунитет бывает наследственным (врождённым), к другим он появляется после того, как антиген будет выявлен и опознан, а затем обезврежен (приобретённый иммунитет). Противовирусный иммунитет – состояние устойчивости организма к патогенному вирусу, осуществляемое системой иммунитета. Однако кроме системы иммунитета невосприимчивость к инфекции зависит от неиммунитетных факторов. 29.Сем. парамиксовирусов. Болезнь Ньюкасла Семейство Paramyxoviridae состоит из трех родов: Paramyxovirus — вирусы парагриппа человека (ВПГЧ) типов 1—5, свинки, Сендай, ньюкаслской болезни; Morbillivirus — вирусы кори, собачьей чумы, чумы коров и Pneumovirus — респираторно-синцитиальный вирус. В качестве типичного представителя семейства будет описан вирус Сендай. Вирусы имеют сферическую форму с диаметром 150—200 нм. Это наиболее крупные из РНК-содержащих вирусов. Ньюкаслская болезнь — высококонтагиозная вирусная инфекция главным образом куриных, характеризующаяся пневмонией, энцефалитом и поражением внутренних органов. Наносит огромный экономический ущерб. Относится к опасным инфекциям. Разносится зараженной птицей, с инфицированными предметами, распространяется на большие расстояния (до 15 км) по воздуху. При остром течении болезни характеризуются воспалением слизистых оболочек носа и ротовой полости, полосчатыми кровоизлияниями на слизистой оболочке пищевода. У 60—70 % взрослых кур отмечают точечные кровоизлияния в виде пояска на границе железистого и мышечного отделов желудка. В тонком кишечнике отмечают появление очагов некроза и эрозии, в толстом — везикулярные папулы. В селезенке, печени, лимфоузлах и тимусе обнаруживают атрофию и некроз. Головной и спинной мозг гиперемированы. Проникая в организм через слизистые оболочки, вирус попадает в кровеносные сосуды, в эндотелии которых размножается. Порозность стенок сосудов нарушается, и в них развиваются воспалительно-некротические процессы. Вирус, разнесенный с кровью по организму, вызывает расстройство гемодинамики с некрозодистрофическими изменениями. 30. Приобретенный иммунитет Приобретенный иммунитет — это невосприимчивость к антигену чувствительного к нему организма человека, животных и пр., приобретаемая в процессе онтогенеза в результате естественной встречи с этим антигеном организма, например, при вакцинации. В результате перенесенного инфекционного заболевания или «скрытной» иммунизации, на практике широко используют преднамеренную иммунизацию антигенами для создания к ним невосприимчивости организма. С этой целью применяют вакцинацию, а также введение специфических иммуноглобулинов, сывороточных препаратов или иммунокомпетентных клеток. Приобретаемый при этом иммунитет называют поствакцинальным, и служит он для защиты от возбудителей инфекционных болезней, а также других чужеродных антигенов. Приобретенный иммунитет может быть активным и пассивным. Активный иммунитет обусловлен активной реакцией, активным вовлечением в процесс иммунной системы при встрече с данным антигеном (например, поствакцинальный, постинфекционный иммунитет), а пассивный иммунитет формируется за счет введения в организм уже готовых иммунореагентов, способных обеспечить защиту от антигена. К таким иммунореагентам относятся антитела, т. е. специфические иммуноглобулины и иммунные сыворотки, а также иммунные лимфоциты. Иммуноглобулины широко используют для пассивной иммунизации, а также для специфического лечения при многих инфекциях (дифтерия, ботулизм, бешенство, корь и др.). Пассивный иммунитет у новорожденных детей создается иммуноглобулинами при плацентарной внутриутробной передаче антител от матери ребенку ииграет существенную роль в защите от многих детских инфекций в первые месяцы жизни ребенка. 31. Ингибиторы и их значение в диагностике вирусных инфекций Ингибиторы – неспецифические вирусотропные вещества, подавляющие активность вирусов. Ингибиторы обладают избирательностью действия. В отношении одних вирусов они активны, в отношении других – нет. Вирусы могут адсорбироваться только на определенных клеточных рецепторах. Например, вирусы гриппа – на мукопротеидных. Для этих вирусов ингибиторами являются мукопротеиды, они есть в крови, слюне, моче, органах и тканях. Среди ингибиторов мукополисахаридной природы по устойчивости к температуре различают несколько групп. α-ингибиторы. Термостабильные, выдерживают нагревание до 60 градусов, инактивируются при 75. Блокируют гемагглютинин вирусов. β-ингибиторы.Термолабильные, инактивируются при 60-62 градусах. Содержатся в нормальных сыворотках крови многих видов животных и человека. Также блокируют гемагглютинин вирусов и нейтрализуют инфекционные свойства некоторых вирусов (гриппа, парагриппа и др.) γ-ингибиторы, самые термостабильные, не разрушаются даже при 100 градусах. Высоко активны против вирусов гриппа, но не все типы. Их природа недостаточно изучена. Известно, что это белки, близкие к γ-глобулинам. Механизм действия ингибиторов Ингибиторы вступают в соединения с энзиматически активными участками вируса, т.е. с рецепторами вируса, блокируют их, препятствуют адсорбции вируса на чувствительные клетки. Блокированный ингибитором вирус не может проникнуть в неё. Механизм действия ингибиторов сходен с действием антител. Ингибиторы и антитела дополняют друг друга, но есть и принципиальные отличия: Ингибиторы не обладают видовой специфичностью; Комплекс вирус + ингибитор не обладает способностью фиксировать комплемент; Вирус, блокированный ингибиторами, не теряет способности вступать во взаимодействие со специфическими антителами, антитела даже могут вытеснять вирус из комплекса вирус-ингибитор; При одновременном наличии в сыворотках крови ингибиторов и антител последние быстрее вступают в связь с вирусом, и эта связь более прочная; 32. Взятие и пересылка материала при бешенстве Правила взятия и пересылки материала для вирусологического исследования. Для вирусологических исследований желательно направлять пробы от животных в трех стадиях болезни: от свежих трупов (кровь, кость, лимфоузел и пораженные органы); от убитых в агонии животных (кровь, кость, лимфоузлы и пораженные органы); от выздоравливающих животных (кровь). Пробы необходимо брать асептически, не допуская их загрязнения, в стерильные флаконы. Каждую пробу необходимо брать в отдельный флакон. Все флаконы должны герметически закрываться пробками (обычно резиновыми), продезинфицированы снаружи, высушены и маркированы. Надписи необходимо делать простым карандашом с указанием вида и номера животного, названия органа и даты взятия материала. Лучшие условия— замораживание. Для пересылки образцы должны быть помещены в термосы со льдом или изотермические ящики, приспособленные для пересылки. Если образцы можно доставить в лабораторию в течение суток после отбора, то их не замораживают и не консервируют. Образцы, которые не могут быть доставлена в лабораторию в течение суток или в замороженном виде, необходимо консервировать глицерином. Он должен полностью покрывать кусочки взятых органов. Даже консервированные образцы желательно хранить в холодильнике. Успешная и точная диагностика зависит от быстроты доставки материалов в лабораторию. Взятие проб крови от переболевших животных. Пробы крови берут из яремной вены у крупного и мелкого рогатого скота, лошадей, из хвостовой артерии у свиней и из подкрыльцовой вены у птиц. Кровь можно брать из ушной вены. Перед взятием крови необходимо очистить и продезинфицировать кожу в месте укола или разреза. Каждую иглу или лезвие можно использовать только 1 раз. Отбор проб костей. От мелкого животного можно отрезать небольшой кусочек ребра или трубчатой кости, предварительно освободив их от мышечной и хрящевой тканей от крупных животных можно наскоблить ножом или скальпелем ткань красного мозга из любой трубчатой кости, лопатки, позвонков, грудных концов ребер. Целую кость, освобожденную от мышц, посылают в герметически заклеенном пластиковом мешке. Отбор проб при заболеваниях с поражением эпителиальных покровов (везикулярные поражения). При заболеваниях, которые вызывают поражение эпителиальных покровов, образование язв и абсцессов (ящур, везикулярный стоматит, оспа, бугорчатка и др.), от живых животных берут пробы крови и эпителий с участков поражения. От павших или убитых животных посылают образцы крови, лимфоузлов, кости и кусочков кожи на границе здоровых и пораженных участков. Правила отбора, консервирования, и пересылки образцов остаются такими же. Взятие и подготовка материала для диагностического исследования на лейкоз. Для гематологического исследования кровь берут из яремной вены в пробирки с антикоагулянтом.Не разрешается брать кровь от животных за 15 дней до отела и 15 дней после него. Для серологического исследования кровь берут от животных в возрасте 6 месяцев и старше. В лабораторию в термосе со льдом направляют 5-6 мл сыворотки. Для гистологического исследования кусочки пораженных посылают в свежем виде в термосе со льдом или в 10%-ном растворе формалина. 33. Физические и химические методы исследования вирусов. Физические методы: *Ультрафильтрация. Ультрафильтры: керамические, асбестовые и мембранные. Принцип: определение размера вируса при фильтрации вируссодержащей суспензии через ряд мембранных фильтров с убывающими размерами. *Ультрацентрифугирование. в пробирках с раствором сахарозы с разным градиентом плотности. Принцип: после центрифугирования собираются в той зоне столба, где плотность раствора равна их плотности. *Вес и размер частиц может быть определен также методом диффузии. *Электрофорез - количественное определение подвижности вирусных частиц в электрическом поле. *Адсорбция. адсорбент смешивают с вируссодержащей сусупензией затем адсорбент удаляют из суспензии низкоскоростным центрифугированием или фильтрованием через специальные фильтры. Затем вирус элюируют с адсорбента. Химические *Осаждение солями. Вирусы осаждаются из водных растворов при определенной концентрации нейтральных солей. Для этого применяют сернокислые соли магния, натрия и аммония. *Самоагрегация. При понижении ионной силы раствора сила отталкивания между вирусными частицами уменьшается и они склеиваются. *Образование комплексов. При обработке вируссодержащей суспензии протаминсульфатом образуются комплексы с частицами размером более 50 ммк, которые выпадают в осадок. Частицы менее 50 ммк остаются в надосад очной жидкости. Физико-химические Хроматография - метод очистки и фракционирования вирусов. Различают адсорбционную, ионообменную и молекулярно-ситовую хроматографию. 34. Основные свойства вируса и его отличие от бактериальной клетки. Основные свойства: 1. Ультрамикроскопические размеры; 2. Простое строение (состоят из белковой оболочки – капсида и НК); 3. У некоторых вирусов дополнительная внешняя оболочка — суперкапсид (из липидной мембраны зараженной клетки и вирусных белков); 4. Отсутствие собственных систем синтеза белка. Являются облигатными внутриклеточными паразитами. Отличия: 1. Размеры вируса в нм, у бактерий в мкм; 2. Вирусы проходят через бактериальные фильтры; 3. Содержат 1 НК (ДНК или РНК); 4. Особый цикл репродукции (встраивается в НК инфицированной клетки); 5. Не имеет собственных белок-синтезирующих и энерго- систем; 6. Строго внутриклеточные паразиты; 7. Не культивируются на пит.средах (только в жив. Клетке: культура клеток, курин. Эмбрион, лаб. Ж-ые); 8. Обладают персистенцией (способность встраиваться в ДНК и находиться в дремлющем состоянии до снижения резистентности). 35. Строение вирусов. Вирусы состоят из нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) и белков, образующих оболочку вокруг этой нуклеиновой кислоты, т.е. представляют собой нуклеопротеидный комплекс. В состав некоторых вирусов входят липиды и углеводы. Вирусы содержат всегда один тип нуклеиновой кислоты — либо ДНК, либо РНК. Причем каждая из нуклеиновых кислот может быть как одноцепочечной, так и двухцепочечной, как линейной, так и кольцевой. Размеры вирусов — 10–300 нм. Форма вирусов: шаровидная, палочковидная, нитевидная, цилиндрическая и др. Капсид — оболочка вируса, образована белковыми субъединицами, уложенными определенным образом. Капсид защищает нуклеиновую кислоту вируса от различных воздействий, обеспечивает осаждение вируса на поверхности клетки-хозяина. Суперкапсид характерен для сложноорганизованных вирусов (ВИЧ, вирусы гриппа, герпеса). Возникает во время выхода вируса из клетки-хозяина и представляет собой модифицированный участок ядерной или наружной цитоплазматической мембраны клетки-хозяина. Если вирус находится внутри клетки-хозяина, то он существует в форме нуклеиновой кислоты. Если вирус находится вне клетки-хозяина, то он представляет собой нуклеопротеидный комплекс, и эта свободная форма существования называется вирионом. Вирусы обладают высокой специфичностью, т.е. они могут использовать для своей жизнедеятельности строго определенный круг хозяев. Бактериофаг Вирусы, паразитирующие в бактериальных клетках, называются бактериофагами. Бактериофаг состоит из головки, хвостика и хвостовых отростков, с помощью которых он осаждается на оболочке бактерий. В головке содержится ДНК или РНК. Фаг частично растворяет клеточную стенку и мембрану бактерии и за счет сократительной реакции хвостика «впрыскивает» свою нуклеиновую кислоту в ее клетку. 36. Строение куриного эмбриона и методы заражения.  Наиболее часто используют заражение: На хорионаллонтоисную оболочку (ХАО); 11-13 день инкубации. Для заражения через естеств. возд. камеру на тупом конце яйца вырезают окно, пинцетом снимают подскорлупную оболочку, на обнажившийся участок наносят суспензию, окно заклеивают. Через искусственную: в скорлупе делают два отверстия: над центром воздушной камеры (для отсасывания из нее воздуха), а другое диаметром 0,2-0,5 см сбоку, со стороны зародыша. Через боковое отверстие на поверхность ХАО наносят инфекционную жидкость, отверстие закрывают. (оспа, чума крс и плотоядных, болезнь Ауески и др.). В аллантоисную полость; 9-11 день, (вирусы гриппа, клещевого энцефалита, болезни Ауески). На стороне расположения эмбриона делают отверстие на скорлупе и подскорлупной оболочке, через которое вводят иглу шприца. Реже: В амниотическую полость; 6-10 день, (вирусы гриппа и паротита). Вырезают окно на скорлупе над воздушным мешком, удаляют подскорлупную оболочку, анатомическим пинцетом (14 см) захватывают амниотическую оболочку вместе с ХАО, подтягивают к окну, заражают. В желточный мешок; 5 – 7 дней, иногда и 2 – 3. (для размножения хламидий, вирусов болезни Марека, ринопневмонии лошадей, катаральной лихорадки овец и др). отверстие в скорлупе над центром воздушной камеры и вводят иглу на глубину 3,5-4 см под углом 450 к вертикальной оси в направлении, противоположном месту нахождения зародыша. Совсем редко: В тело зародыша; В кровеносные сосуды ХАО. При овоскопировании на 11-13 день отмечают крупный сосуд. По его ходу удаляют участок скорлупы, иглу вводят в него. Яйцо на штативе горизонтально – на ХАО через искусств.возд.обол. Остальные – вертикально. 37. Клеточный иммунитет (Т- и В-лимфоциты) |