Вирусология, антология. 1. биопрепараты их применение при вирусных заболеваниях и принципы изготовления
 Скачать 450.05 Kb.
|
|
Предубойная диагностика. В развитии болезни различают три стадии: продромальную, возбуждения и параличей. Продромальная стадия характеризуется повышением чувствительности животных к шуму, свету, прикосновениям, извращениям аппетита, нарушением зрения, повышением температуры тела. Стадии возбуждения свойственны приступы буйства, ярости, расстройства чувствительности и сознания, оглумообразное состояние, судороги. Наблюдаются парезы жевательных мышц и мышц глотки, сужение зрачков, учащенные позывы к мочеиспусканию. Лихорадка достигает максимума Послеубойная диагностика. При осмотре туши и внутренних органов специфичные изменения не обнаруживаются. У крупного рогатого скота отмечают переполнение преджелудков кормовыми массами вследствие их атонии, обезвоживание организма, истощение, мелкие кровоизлияния в слизистой сычуга и подбрюшиной. Печень и почки наполнены кровью. Брыжеечные лимфатические узлы набухшие. В головном и спинном мозге гиперемия, отек мозгового вещества и мягкой мозговой оболочки. На ранних стадиях заболевания многие из указанных признаков могут отсутствовать. Лабораторная диагностика : Патологический материал: свежие трупы мелких животных, от крупных животных — голова или головной мозг, кровь. Схема лабораторной диагностики бешенства. I. Экспресс-методы: РИФ, РГА, обнаружение телец Бабеша — Негри, ИФА. Различают два вируса бешенства: - дикий (уличный) вирус, циркулирующий среди животных, патогенный для человека; - фиксированный вирус бешенства (virus fixe), полученный Л. Пастером путем многократного пассирования дикого вируса через мозг кроликов. Фиксированный вирус утратил вирулентность для других видов животных и человека, не образовывал телец включений и не выделялся со слюной от больных животных. Антирабическая вакцина. Антирабическая вакцина (прививка от бешенства) вводится пациенту после укуса животным или человеком, у которого установлено, либо подозревается заражение вирусом бешенства (рабиес). А так же в случаях открытого контакта (без укуса), здорового человека, со слюной больного бешенством. Вакцина от бешенства не убивает вирус, а заставляет организм хозяина вырабатывать специфический антиген к инфекции. 46.РДП Реакция диффузионной преципитации (РДП). Основана на встречной диффузии антител (иммунной сыворотки) и растворимых антигенов в агаровом геле (двойная диффузия). РДП может быть поставлена в чашках Петри (макрометод) и на предметных стеклах (микрометод) Методика постановки макрометода по технике принципиально не отличается от постановки микрометода, только в этом случае в чашку Петри наливают 20—25 мл расплавленного агара и в застывшем геле делают лунки диаметром 5—6 мм по специальной схеме (расстояние между лунками 4—5 мм ) и вносят соответствующие компоненты При постановке РДП на предметных стеклах препарат можно через 48—72 ч высушить и окрасить раствором амидного черного, что позволит его сохранить и сфотографировать Достоинства РДП: простота техники постановки; быстрота получения ответа; не требует стерильной работы, особой чистоты компонентов; возможность документирования результата путем фотографирования. Недостаток РДП — низкая чувствительность.  47. Сем. Тогавирусов ( вирусная диарея КРС) Название тогавирусы (от лат. toga — плащ) впервые было предложено для обозначения оболочечных РНК-содержащих вирусов, имеющих нуклеокапсид с кубической симметрией. Семейство тогавирусов (ТГВ) включает два основных рода вирусов альфавирусы и рубивирусы, которые различаются между собой по строению и серологическим свойствам. Кроме того, существуют 2 «плавающих» рода: дельтавирусы (вирус гепатита дельта) и вирус гепатита Е и ему подобные вирусы. Ареал распространения ТГВ ограничен определенными географическими зонами, которые определяются зонами обитания членистоногих-переносчиков и естественных хозяев-позвоночных. Представители Alphavirus Вирусы: Синдбис; Венесуэльского, Восточного, Западного энцефаломиелитов лошадей; Карельской лихорадки; лихорадки Чикунгунья, ОʹНьонгНьонг, леса Семлики Rubivirus: Вирус краснухи  48. Сплит-вакцины. Методы получения Сплит-вакцины или расщеплённые (Ваксигрип, Бегривак, Флюарикс) содержат разрушенные инактивированные вирионы вируса гриппа — в её состав входят все вирионные белки вируса, не только поверхностные, но и внутренние антигены. За счёт высокой очистки в ней отсутствуют вирусные липиды и белки куриного эмбриона. Выделенные вирусы (вирионы) очищают, а затем разрушают каким–нибудь химическим веществом (например, диэтиловым эфиром). Такая вакцина содержит все вирусные белки: гемагглютинин, нейраминидазу и белки нуклеопротеида вируса. За счет дополнительной очистки в такой вакцине еще меньше токсичных субстанций, в т.ч. липидов, по сравнению с любой цельновирионной вакциной. Следовательно, она значительно менее реактогенная, при этом сплит–вакцина сохраняет максимальную иммуногенность. Расщепленные (сплит-вакцины) состоят из частичек разрушенных вирионов. Методы выделения из бактерий или вирусов протективных антигенов: осаждением спиртами, высаливанием нейтральными солями; очистка ультрафильтрацией, хроматографией, центрифугированием. 49. Физическая структура вирусов Вирусы состоят либо ДНК, либо РНК, составляющей сердцевину вируса, и окружающей эту сердцевину защитной белковой оболочкой, которую называют капсидом. Полностью сформированная инфекционная частица называется вирионом. У некоторых вирусов, таких, как вирусы герпеса или гриппа, есть еще и дополнительная липопротеидная оболочка, которая возникает из плазматической мембраны клетки-хозяина. Вирусы не имеют клеточного строения. Оболочка вирусов часто бывает построена из капсомеров. Непременным компонентом вирусной частицы является какая-либо одна из двух нуклеиновых кислот, белок и зольные элементы. Эти три компонента являются общими для всех вирусов. По морфологическим признакам все вирусы подразделяются на: 1)Палочковидные 2)Шаровидные 3)Кубоидальные 4)Булавовидные 5)Нитевидные В зависимости от расположения капсомеров в белковой оболочке все вирусы подрываются на 3 группы: 1)Спиральный тип. Капсомеры у них уложены в виде спирали с разным диаметром. Нуклеиновая кислота скручена в виде пружины и располагается витками в виде белковых молекул. 2)Кубический тип. У таких вирусов капсомеры располагаются в виде правильного многогранника. Она скручена в виде клубка и находится в центре. 3)Комбинированный. Головка с поверхности покрыта белковой оболочкой, которая состоит из однородных белковых субъединиц. В полости головки располагается 1 из нуклеиновых кислот. Хвостовой конец состоит из полого стержня. Заканчивается шестиугольной пластинкой на конце. У большинства вирусов капсомеры имеют форму 5-6 гранных призм. 50. Репродукция вирусов. Вирусы не способны размножаться на питательных средах – это строгие внутриклеточные паразиты. Составные части вируса – нуклеиновые кислоты и белковые молекулы синтезируются в клетке хозяина раздельно, в разных частях клетки – в ядре и цитоплазме. Клеточные белоксинтезирующие системы подчиняются вирусному геному, его НК. Репродукция вируса в клетке происходит в несколько фаз: 1)первая фаза – адсорбция вируса на поверхности клетки, чувствительной к данному вирусу. 2)вторая фаза – проникновение вируса в клетку хозяина. 3)третья фаза – «раздевание» вирионов, освобождение нуклеиновой кислоты вируса от суперкапсида и капсида. У ряда вирусов проникновение нуклеиновой кислоты в клетку происходит путем слияния оболочки вириона и клетки-хозяина. 4)четвертая фаза – синтез компонентов вириона. Нуклеиновая кислота вируса образуется путем репликации. На рибосомы клетки транслируется информация вирусной иРНК, и в них синтезируется вирус-специфический белок. 5)пятая фаза – сборка вириона. Путем самосборки образуются нуклеокапсиды. 6)шестая фаза – выход вирионов из клетки. Простые вирусы при выходе из клетки разрушают ее. Сложноорганизованные вирусы, например, вирус гриппа, выходят из клетки путем почкования. Внешняя оболочка вируса формируется в процессе выхода вируса из клетки. Описанные типы взаимодействия вируса с клеткой называются продуктивными, так как приводят к продукции зрелых вирионов. Интегративный – после проникновения вируса в клетку и «раздевания» вирусная нуклеиновая кислота интегрирует в клеточный геном, то есть встраивается в определенном месте в хромосому клетки и затем в виде провируса реплицируется вместе с ней. Провирус несет дополнительную генетическую информацию, поэтому клетка приобретает новые свойства. 51. Хроматография и ее применение в вирусологии Хроматография - метод очистки и фракционирования вирусов. Различают адсорбционную, ионообменную и молекулярно-ситовую хроматографию. 1. Адсорбционная хроматография. Метод основан на различной степени адсорбции вирусных смесей при фильтровании через неподвижный твердый адсорбент. Решающее значение имеют поверхностные свойства вирусной частицы и адсорбента, а также состав буфера, в котором суспендирован вирус. В качестве адсорбентов для наполнения хроматографических колонок в вирусологической практике широкое распространение получили фосфат калия и гидроксилапатит. 2. Ионообменная хроматография. Ионообменниками называют такие соединения, которые содержат фиксированные функциональные группы и подвижные противоионы. В качестве матрицы могут быть использованы синтетические смолы, полисахарид, белки и целлюлоза. 3. Молекулярно-ситовая хроматография. Метод основан на способности пористых материалов, работающих по принципу «обратных молекулярных сит», разделять смесь веществ по размеру и молекулярному весу компонентов. Эти молекулярные сита почти не обладают сорбционным сродством к фракционируемым веществам. В качестве таких пористых материалов используют гранулированные гели полисахаридов, биогели и пористое порошковое стекло. 52. Химический состав вирусов В составе вирусов имеются белки и одна из нуклеиновых кислот. Вирусы крупных и средних размеров содержат еще и липиды, углеводы. Большая часть белка и связанных с ним липидов и углеводов - оболочка. Белки - основная часть (20 АК). Значение вирусных белков - защитная функция (формирование капсиды). В состав вируса входят ферменты, имеющие белковую природу (адсорбция, адресная функция), наделены иммунными свойствами (обуславливают антигенные свойства). Особенности вирусных белков: 1. Обладают свойством самосборки (по мере их накопления вирусные белки агрегируются). 2. Обладают избирательной чувствительностью 3. Не подвергаются гидролизу под действием протеолитических ферментов. Белки от 50-75% массы вирионов составляют. Зараженные вирусным геном клетки кодируют синтез 2 групп белка: Структурные Несруктурные 1. Струкурные - количество в составе вириона, в зависимости от сложности организации вириона. Сложноорганизованные вирусы содержат оба типа белков. Неструктурные вирусные белки - предшественники вирусных белков, ферменты синтеза ДНК/РНК полимеразы, обеспечивают транскрипцию и репликацию вирусного генома, белки регуляторы, полимеразы. Липиды - в сложных вирусах находятся в составе суперкапсида (от 15 до 35 процентов). Липидный компонент стабилизирует структуру вирусной частицы. Углеводы - до 10-13%. Входят в состав гликопротеидов. Играют существенную роль в структуре и функции белка. Нуклеиновые кислоты - постоянная составная часть. Типы ДНК 1. Линейная двуспиральная с открытыми концами. 2. Линейная двуспиральная с замкнутыми концами. 3. Линейная односпиральная. 4. Кольцевая односпиральная. Типы РНК 1. Линейная односпиральная. 2. Линейная фрагментированная. 3. Кольцевая односпиральная. 5. Линейная двуспиральная фрагментированная. 53. РН (реакция нейтрализации) Реакции нейтрализации (РН) основаны на способности AT связывать различные возбудители или их метаболиты, лишая тем самым их возможности реализовать свои биологические свойства (иными словами, AT нейтрализуют возбудителей). На практике РН применяют для выявления вирусов и различных токсинов. В определённой степени к ним же относят реакции торможения вирусиндуцированной гемагглютинации и иммобилизации. Реакции нейтрализации вирусов: В сыворотке крови переболевших лиц циркулируют AT, нейтрализующие вирусы. Их наличие выявляют смешиванием культуры возбудителя с сывороткой с последующим введением лабораторному животному или заражением культуры клеток. На эффективность нейтрализации указывает выживание животного либо отсутствие гибели клеток в культурах. 54. Дифференциальная диагностика вирусов классической чумы от псевдочумы птиц. Ньюкаслская болезнь (псевдочума) птиц — остро протекающее и быстро распространяющееся вирусное заболевание, характеризующееся поражением органов дыхания, желудочно-кишечного тракта и центральной нервной системы, вызывающий массовый падеж птицы. У вакцинированной птицы с ослабленным иммунитетом болезнь может протекать без ярко выраженных клинических и патологоанатомических признаков. Дифференциальная диагностика. Необходимо исключить пастереллез, инфекционный ларинготрахеит, тиф, спирохетоз, классическую чуму, отравления птиц. Для острогопастереллеза характерна восприимчивость всех видов птиц, быстрая гибель заболевших. Из внутренних органов удается выделить вирулентных пастерелл. При инфекционном ларинготрахеите у птиц поражается конъюнктива, трахея, отсутствуют изменения в желудочно-кишечном тракте. У павших находят кровоизлияния и слизисто-геморрагические пробки в трахее. Спирохетоз наблюдается в южных зонах страны, связан с наличием клещей переносчиков. У павших птиц селезенка увеличена в несколько раз, в мазках крови удается обнаружить спирохет. Классическая чума: поражается взрослая птица; короткий инк.период, отечность головы и иммунобиологические отличия выделенных штаммов вируса при постановке РГА, РЗГА. При отравлениях поражается определенная группа птицы, получавшая ядовитые корма. 55. РИФ (Реакция иммунофлюоресценции) Реакция иммунофлюоресценции - РИФ (метод Кунса). Различают три разновидности метода прямой, непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе. 56. ИФА Иммуноферментный анализ. Исп. Сыворотку, меченную ферментом пероксидазой и субстрат ОФД. Сущность: если в исслед. мат-ле есть специфич. АГ, то при добавлении АТ, меченных ферментом, образуется комплекс АГАТ с пероксидазой и при добавлении субстрата ОФД происходит окрашивание => реакция +. Прямой метод: в лунку вносим 0,1 мл вирус. суспензии + 0,1 мл сыворотки, меченной фер-ом, контакт 1 час, промываем, добавляем 0,1 мл субстрат ОФД, контакт при комн. темп. 15-20 мин. Непрямой: к исслед-й сыворотке добавляем АГ, образуется комплекс АГАТ, добавляем антивидовую сыворотку, меченную пероксидазой, образуется комплекс АГАТ + пероксидаза, добавляем ОФД => окрашивание. 57. Репродуктивно-респираторный синдром свиней. Репродуктивно-респираторный синдром свиней («синее ухо», эпизоотический поздний аборт свиней, РРСС) — контагиозная болезнь, характеризующаяся массовыми абортами свиноматок в конце срока супоросности, рождением нежизнеспособных поросят и сопровождающаяся поражением дыхательной системы. Возбудитель - Arterivirus suis, относящийся к семейству Arteriviridae. Это мелкий (28,4 нм) оболочечный РНК-содержащий вирус, имеющий сферическую форму. Маркером артеривируса является способность к размножению в культурах клеток эпителия трахеальных колец свиньи. Устойчивость. Вирус инактивируется нагреванием при 55 °С в течение 45 мин, при 37 °С — через 48 ч. Он чувствителен к действию рассеяного света и УФ-лучам, оттаиванию после замораживания, обработке диоксидом углерода, а также к изменению рН среды. В помещениях, не подвергаемых дезинфекции, вирус сохраняет вирулентность в течение 3 нед после удаления больных животных. |