1. Классификация микроорганизмов по морфологическим свойствам, и их расположение в мазке. Привести примеры. Шаровидныебактери и
 Скачать 265.13 Kb.
|
|
30.Возбудитель какого заболевания определяется по окраске Циль-Нильсена. Какой основной материал берется для исследования. Основной путь передачи заболевания. Методы диагностики. M. tuberculosis - туберкулез.Материалом для исследования служат мокрота,промывные воды бронхов и промывные воды желудка, эксудат, гной, ликвор, моча и др.Чаще всего исследуют мокроту. Источником инфекции являются больные люди и животные. Основной механизм заражения при туберкулезе – воздушный (аэрогенный) с соответсвующими ему воздушно-капельным и воздушно-пылевым путями передачи инфекции. Лабораторная диагностика туберкулеза проводится бактериоскопическим, бактериологическим и биологическим методами. В исследуемом материале обнаруживают микобактерии туберкулеза путем микроскопии мазков, окрашенных по Цилю-Нильсену и с применением люминесцентных красителей (чаще всего аурамина). Бактериоскопию рассматривают как ориентировочный метод. Бактериологический метод является основным в лабораторной диагностике туберкулеза. Посевы делают на среду Левенштейна-Йенсена и инкубируют при 37°С в термостате в течение 3 мес. Выделенные культурыидентифицируют и определяют их чувствительность к химиотерапевтическимпрепаратам. Для ускоренного обнаружения микобактерийделают посевы по методу Прайса, позволяющего получить микрокультурытуберкулезных бактерий и определить наличие корд-фактора, когда микобактерии располагаются в форме кос и жгутовВ некоторых случаях, например, при туберкулезе почек, прибегают кбиологической пробе — заражению морских свинок с последующимвыделением чистой культуры. Кожно-аллергические туберкулиновыепробы (реакция Манту) ставят с целью выявления лиц, инфицированныхтуберкулезными микобактериями, для оценки течения туберкулезногопроцесса у больных, а также для контроля эффективностивакцинации и отбора лиц для ревакцинации BCG. В последние годы большое внимание уделяется новым методам диагностики туберкулеза — цепной полимеразной реакции (ЦПР) и др. 31.Проба Манту. Для какой цели ставится данная проба. Постановка и интерпретация результата. Кожно-аллергические туберкулиновые пробы (реакция Манту) ставят с целью выявления лиц, инфицированных туберкулезными микобактериями, для оценки течения туберкулезного процесса у больных, а также для контроля эффективностивакцинации и отбора лиц для ревакцинации BCG. В основе данных проб лежит развитие гиперчувствительности 4 типа, что свидетельствует об инфицированности. Для пробы Манту - PPD-L, содержащий в 0,1 мл одну дозувводят на внутренней поверхности средней трети предплечья.Результаты пробы оцениваются через 48-72 ч. Реакция считается положительной при наличии выраженного инфильтрата (папулы) диаметром 5 мм и более (3 мм и более при безыгольном методе). Проба свидетельствует не о заболевании, а об инфицировании. 32. Возбудитель ботулизма. Морфология, культуральные свойства, факторы патогенности. Опишите ВЧК возбудителя по Цейсслеру. Методы профилактики заболевания. Бактерии разного размера с перитрихиально расположенными жгутиками. Образует споры, которые придаютбактериальной клетке вид теннисной ракетки. Размножаются на глюкозо–кровяномагаре, образуя небольшие прозрачные колонии с ровнымиили изрезанными краями, окруженные зоной гемолиза. На жидких средах наблюдается равномерное помутнение и осадок. Патогенность клостридий ботулизма связана с его токсином, являющимся самым сильным ядом, 1 мкг которого может убить взрослого человека. Экзотоксин является нейротоксином. Как и многие другие экзотоксины состоит из двух субъединиц, одна из которых отвечает за адсорбцию на рецепторах чувствительных клеток — нейронов, другая — за проникновение в них путем эндоцитоза и развитие последующих событий. Вакцинопрофилактика не проводится. Для лечения используют противоботулиническую поливалентную сыворотку, поскольку антитела к одному серовару токсина не нейтрализуют другие серовары. Эту сыворотку вводят и с целью поздней профилактики лицам, подозреваемым в употреблении зараженных продуктов.
33.Возбудитель менингококковых инфекций. Морфология и культуральные свойства. Методы лечения и профилактики заболевания. Менингококки (N. meningitidis), вызывающие у людей менингококковую инфекцию, Клетки менингококка имеют сферическую или слегка овоидную форму. В препаратах, приготовленных из спинномозговой жидкости, клетки располагаются попарно. Обращенные друг к другу поверхности уплощены. Менингококки хемоорганотрофны, требовательные к условиям культивирования; аэробы, обладают цитохромоксидзой и каталазой. Культивируют менингококки на средах, содержащих нормальную сыворотку или дефибринированную кровь барана либо лошади. На сывороточномагаре образуют бесцветные нежные колонии вязкой консистенции. Рост менингококков стимулируется в условиях повышенной концентрации С 0 2 и повышенной влажности. Менингококки проявляют слабую сахаролитическую активность, расщепляют с образованием кислоты глюкозу и мальтозу. Образуют гиалуронидазу и нейраминидазу. Из химиотерапевтических препаратов применяют антибиотики, главным образом, Р-лактамы, пенициллины и цефалоспорины. Специфическая профилактика менингококковой инфекции проводится с помощью менингококковой химической вакцины, приготовленной из полисахаридных антигенов сероваров А и С, тех коллективов людей, где распространено носительство упомянутых сероваров. 34.Возбудитель гонококковых инфекций. Морфология, культуральные свойства, факторы патогенности. Методы профилактики заболевания. Гонококки имеют бобовидную форму,располагаются в виде диплококков,окружены микрокапсулой, жгутиков не имеют, спор не образуют, аналогично менингоккам. В клеточной стенке имеется наружная мембрана, белки которой подразделяют на три группы по их функциональному значению. Для гонококков характерно наличие пилей, которые отличаются друг от друга по своим антигенным свойствам (16 антигенных вариантов). Гонококки культивируют на питательных средах, содержащих нативный белок (сыворотка крови, асцитическая жидкость). Лучше растут при содержании 3-5%С02. На асцит-агаре образуютпрозрачные колонии с ровными краями.Не вызывают гемолиза на средах, содержащих кровь, Через 24 ч. На плотных питательных средах гонококки, содержащие в клеточной стенке протеин 2, образуют слегка мутные бесцветные колонии, бактерии не содержащие протеин 2 образуют круглые прозрачные колонии в виде капель росы с ровными краями. На жидких питательных средах растут диффузно и образуют поверхностную пленку, через несколько дней оседающую на дно. Факторы патогенности: капсула, пили, эндотоксин, поверхностные белки наружной мембраны, протеазы. Капсула обладает анти фагоцитарным действием, пили обеспечивают адгезию к эпителию. Клеточная стенка содержит эндотоксин. Синтезируют IgA1 – протеазу, они инактивируют АТ, препятствующие адгезии, что облегчает прикрепление к рецепторам эпителиальных клеток, а также защищает бактерии от фагоцитоза, опосредованного АТ. Для химиотерапии гонореи используют антибиотики: бета-лактамы (пенициллины, цефалоспорины) и другие антибиотики. Вакцинопрофилактика гонореи не проводится ввиду отсутствия эффективных вакцин. Для предупреждения бленнореи всем новорожденным закапывают на конъюнктиву глаза раствор одного из перечисленных антибиотиков. 35.Возбудитель дифтерии. Опишите его морфологические и тинкториальные свойства. Методы профилактики и лечения заболевания. Коринебактерии дифтерии имеют характерную для всего рода форму. Они располагаются под углом друг к другу в виде римских пятерок. Зерна волютина выявляются при окраске уксуснокислой синькой по методу Нейссера, которая окрашивает только включения, не затрагивая цитоплазму. Дифтерийная палочка окружена микрокапсулой и имеетпили. С. diphtheriaeтребовательны к питательному субстрату. Они нуждаютсяво многих аминокислотах, углеводах, минеральных солях.Обычно их культивируют на свернутой сыворотке крови и на кровяномагаре с теллуритом калия. На последнейсреде образуют колонии двух типов: gravis — темно-серого цвета иmitis — черного цвета, которые отличаются друг от друга и по биохимическимпризнакам. С. diphtheriaeкроме дифтерии гортани,вызывает дифтерию раневых поверхностей и половых органов.К дифтериеподобнымкоринебактериям относятся следующие: С. Xerosisвызывает хронические конъюнктивиты, С. ulcerans — легкие формыдифтериеподобных заболеваний, С. pyogenes и С. haemolyticum —язвенно-некротические фарингиты, тонзиллиты, гингивостоматиты.С. pseudodyphtheriae является постоянным обитателем кожи и слизистых.Вакцинопрофилактика дифтерии проводится при введении дифтерийного анатоксина,полученного при обработке дифтерийного токсина формалином.В нашей стране для вакцинации используют АКДС — адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину. Антитоксическую сыворотку применяют для специфической терапии, а антибиотики— для санации бактерионосителей. Из антибиотиков используют пенициллин, ванкомицин, эритромицин и др. 36.Холера. Морфология, культуральные свойства и антигенная структура. Специфическая и неспецифическая профилактика заболевания. Слегка изогнутая грамотрицательная полиморфная палочка. Монотрих. Спор и капсул не образует. Вибрионы хорошо растут на простых средах при щелочной реакции pH = 8,5-9,0. На плотных средах образуют небольшие прозрачные круглые с ровными краями, маслянистые, голубоватые в проходящем свете колонии, колонии старых культур желтеют, грубеют. На желатиновом столбике вызывают воронкообразное разжижение.На жидких средах вибрионы вызывают образование поверхностной пленки, которая разрушается при встряхивании. Вибрионы — факультативные анаэробы, образуют цитохромоксидазу. Холерные вибрионы имеют два антигена: О-антиген типоспецифический термолабильный и Н-антиген жгутиковый видоспецифический термостабильный. Возбудители холеры имеют 01-антиген. Вибрионы, относящиеся к серогруппам 02, 03, 04 могут вызвать энтериты и гастроэнтериты. 01-антиген состоит из трех компонентов— А, В, С, разные сочетания которых образуют серовары Огава (ЛИ), Инаба (АС), Гикошима(АВС). Часто выделяются вибрионы, не агглютинирующиеся 01 антисывороткой. Их называют неагглютинирующимисяНАГ-вибрионами. Основные средства борьбы с холерой — раннее выявление больных и вибрионосителей, а также лиц, контактировавших с ними с последующей их изоляцией. Для вакцинопрофилактики используют несколько видов вакцин: корпускулярная убитая, холероген-анатоксин, живая для перорального применения. В нашей стране массовая вакцинация не проводится. Для поздней профилактики и лечения чаще всего применяют тетрациклин. 37.Стафилакокки. Элективная питательная среда, используемая для культивирования данного микроба. Факторы патогенности, вырабатываемые данным микробом. S.aureus. Отдельные клетки стафилококков,имеющие форму правильного шара, Грам положительные, при размножении образуют скопленияв виде гроздьев винограда (staphyle— виноградная грозд. В препаратах из патологического материала, в частности из гноя стафилококки располагаются парами или небольшимископлениями. Золотистые стафилококки образуют микрокапсулу. Стафилококки — факультативные анаэробы, но лучше развиваются в аэробных условиях. На поверхности плотных питательных сред образуют круглые, выпуклые, пигментированные (золотистые, палевые, лимонно-желтые, белые) колонии с ровными краями; в жидких средах дают равномерное помутнение. В лабораториях используют способность стафилококков размножаться в средах с большим количеством (6-10%) хлорида натрия. Такую концентрацию соли другие бактерии не переносят, вследствие чего солевые среды являются элективными для стафилококков. Штаммы золотистых стафилококков, продуцирующие гемолизины дают на кровяном агаре колонии, окруженные зоной гемолиза. Факторы вирулентности стафилококков, особенно S. aureus, связаны с их адгезией на рецепторах чувствительных клеток, колонизацией и агрессивными свойствами, проявляющимися и подавлении фагоцитоза. Существенную роль в патогенезе заболеваний играют плазмокоагулаза, гиалуронидаза, лецитиназа, фибринолизин, ДНК-аза. Стафилококки секретируют ряд токсинов, отличающихся друг от друга по механизму действия. К ним относятся мембраноповреждающиетоксины или мембранотоксины. Они образуют каналы в цитоплазматической мембране эритроцитов, лейкоцитов и других клеток, что приводит к нарушению осмотического давления и лизису соответствующихклеток. Ранее их называли гемолизинами, полагая, что они лизируют только эритроциты. Мембранотоксины отличаются друг от друга по антигенным свойствам, ≪мишени≫ и другим признакам, її-токсин обладает еще дермонекротическим и кардиотоксическим действием. Он представляет собой белок с выраженными иммуногеннымисвойствами. Из него получен анатоксин, использующийся для лечения и профилактики стафилококковых заболеваний. (3-токсин наряду с мембраноповреждающим действием на эритроциты и соединительные тканные клетки, угнетает хемотаксис полиморфно-ядерных лейкоцитов, х-токсин разрушает эритроциты, лейкоциты и клетки соединительной ткани. Золотистые стафилококки могут образовывать гистотоксины, к которым относятся энтеротоксины, вызывающие пищевую интоксикацию. Известно 6 энтеротоксинов (А, В , С, D, Е, F), различающиеся по антигенным свойствам. Некоторые стафилококки продуцируют экзотоксин, вызывающий синдром ≪токсического шока≫. 38.Возбудителем, какого заболевания является Clostridium tetani. Какой материал берется для исследования. Основной путь передачи заболевания. Методы диагностики. Возбудитель столбняка. Клетки С. tetani — крупные прямые, перитрихи, капсулу не образуют. Споры круглые, больше диаметра клетки, расположены терминально. Для анализа берут различные материалы взятого вместе ранения, а также во внимание возможность генерализации инфекции забирают кровь и кусочки печени и селезенки. Возбудитель столбняка широко распространен в природе. Заражение наступает только при проникновении спор в организм через раневую поверхность, особенно при создании в них анаэробных условий. Входные ворота инфекции- бытовые и производственные травмы, причем наиболее часто поверхностные или колотые, когда больной не обращается за медицинской помощью. Механизм передачи – контактный, путь-раневой. В основном бактериологическое исследование на наличие возбудителя и его спор осуществляется для проверки стерильности перевязочного материала и препаратов, предназначенных для парэнтерального введения. Для диагностики применяют бактериоскопический, бактериологический и биологический. Обнаружение в мазках из материала, взятого от больного или трупа, тонких длинных грамположительных палочек с круглыми терминальными спорами «барабанные палочки» вызывает подозрение на наличие С. Tetani, однако на основании бактериоскопии нельзя делать заключение о присутствии возбудителя, так как в материале могут находиться морфологически сходные с ним клостридии. Бактериологический метод. Исследованию подлежат материал от больного или трупа, перевязочный или шовный хирургический материал, а также почва, пыль и воздух. Исследуемый материал засевают на среду КИтта-Тароцци, инкубируют в термостате 3-4 суток, после чего пересевают на плотные среды для получения колоний. Выделенную культуру идентифицируют и определяют ее токсигенностьна белых мышах или РП в геле. Паралельно с бактериологическим методом проводят обнарудение столбнячного токсина в РПГА с иммуноглобулиновым столбнячным диагностикумом или биологической пробе на мышах. 39.Возбудители анаэробной раневой газовой инфекции. Морфология и тинкториальные свойства. Специфическая и неспецифическая профилактика и лечение заболевания. С.perfringens — крупные, утолщенные грамположительные спорообразующие палочки. На кровяном агаре окружены зоной гемолиза, на желточном агаре — зоной помутнения, что свидетельствует о наличии фермента лецитиназы. В столбике агара колонии имеют вид чечевичных зерен. Вакцинопрофилактика не проводится. Для пассивной профилактики, так же как и для терапии, применяют антитоксическую поливалентную сыворотку или иммуноглобулин, полученный из этой сыворотки, который вводят внутримышечно в возможно более короткие сроки после ранения. В случае идентификациивозбудителя показано введение антитоксической сыворотки против токсинов клостридий данного вида. Для этиотропного лечения применяют антибиотики (бета-лактамы, аминогликозиды), которые эффективны против клостридий, а также возбудителей вторичной инфекции. Анатоксин не получил применения для профилактикиэтого заболевания вследствие его низкой иммуногенности. Для специфической профилактики проводится плановая или экстренная иммунизация. Для создания искусственного активного иммунитета применяют секстанатоксин, в состав которого кроме столбнячного анатоксина и ботулинических анатоксинов типа А, В, Е входят анатоксины C. Perfingens. При травмах проводится хирургическая обработка раны, соблюдение правил асептики и антисептики при операциях, борьба с травматизмом. Clostridiumnovyi Крупные, слегка изогнутые подвижные грамположительные палочки, имеют 20-25 жгутиков. Полиморфны. Молодые клетки хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. Споры овальные. Облигатный анаэроб. На плотных- круглые сочные сероватые полупрозрачные колонии, иногда с зернистой поверхностью и неровными краями. В жидких- помутнение, затем обр-е осадка. Clostridiumhistolyticum Грамположительны, в мазках обр-ют цепочки или пары. Почти на всех средах быстро обр-ют субтермальные споры с трехслойной оболочкой, не деформирующие клетку. Анаэроб. На кровяном агаре- прозрачные, выпуклые колонии окруженные зоной гемолиза. Жидкие среды- помутнение с протеолизом кусочков мяса на дне; через 2 суток становится прозрачной, с осадком Clostridiumsepticum Полиморфные подвижные палочки. При контакте с кислородом теряют подвижность. Анаэробы. На плотных средах- блестящие полупрозрачные колонии с неровными краями. В столбике агара- переплетающиеся нити. Лечение: нейтрализация гангренозных токсинов антитоксином, хирургическое удаление некрозных тканей, применение антитоксических сывороток, антибиотиков и применяют гипербарическую оксигенацию. Профилактика: хирургическая обработка раны, соблюдение правил асептики и антисептики при операциях, борьба с травматизмом. Для специфической- плановая или экстренная иммунизация. Для искусственного иммунитета- секстанатоксин, в состав которого кроме столбнячного анатоксина и ботулинических анатоксинов А, В, Е входят анатоксины C. Perfringens. 40.Возбудитель брюшного тифа. Морфология и тинкториальные свойства. Серологическая реакция, используемая для подтверждения диагноза брюшного тифа -Название реакции__________________________________________ -Компоненты реакции_______________________________________ -Механизм реакции_________________________________________ S. typhi, Сальмонеллы представляют собой мелкие палочки, окруженные микрокапсулой, подвижны за счет перитрихиально расположенных жгутиков, грамнегативные. Брюшной тиф- острая антропонозная системная инфекция, хар-ся циклическим течением, поражением лимфатического аппарата тонкого кишечника, бактериемией, лихорадкой, сыпью и интоксикацией организма. Возбудитель- S.Typhi Морфология: Мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами размером, в мазках располагаются беспорядочно, подвижны (перетрихи), имеют пили I и II типов, S. typhi – микрокапсулу, спор не образуют. Факультативные анаэробы, хемоорганогетеротрофы. Тинкториальные св-ва: Хорошо окрашиваются всеми анилиновыми красителями, грамотрицательны. рН 6,8-7,2. Хорошо растут на простых питательных средах (МПБ, МПА). В МПБ наблюдается рост в виде диффузного помутнения с последующим образованием осадка. На МПА образуют колонии в S-формы средних размеров, гладкие, блестящие, полупрозрачные с голубоватым оттенком. На дифференциально-диагностических средах Эндо, Левина и Плоскирева образуют бесцветные колонии. На висмут-сульфитном агаре – колонии черного цвета с металлическим блеском, окруженные черным ободком прокрашенной среды. В практике серологической диагностики брюшного тифа широко применяется реакция Видаля, а также РПГА (реакция пассивной гемагглютинации). Для проведения РА необходимы: АГ (агглютиноген); AT (агглютинин); раствор электролита (изотонический раствор хлорида натрия). В реакции агглютинации принимают участие только корпускулярные антигены (бактерии, эритроциты, нагруженные антигеном частицы латекса). Механизм: На обезжиренное предметное стекло пипеткой наносят каплю диагностической сыворотки (разведение сыворотки 1:10 - 1:20). Бактериологической петлей берут чистую культуру исследуемого микроорганизма с поверхности скошенного агара, переносят в каплю сыворотки и перемешивают. Результат реакции учитывают невооруженным глазом через 3-5 мин. При положительной реакции в капле сыворотки отмечают появление хлопьев (крупных или мелких), хорошо видимых на темном фоне при покачивании предметного стекла. В случае отрицательной реакции жидкость остается равномерно мутной. Эритроциты, адсорбировавшие на себе антиген, называются сенсибилизированными данным антигеном, а иммунная реакция, в которой они участвуют, — реакцией непрямой, или пассивной гемагглютинации (РНГА, или РПГА). Механизм: РПГА ставят в специальных полистироловых пластинках с луночками, имеющими полусферическое дно. При использовании ее для серологической диагностики в этих луночках готовят двукратные разведения в физиологическом растворе исследуемой сыворотки, и затем добавляют к ней в качестве диагностикума взвесь сенсибилизированных эритроцитов. Учет результатов проводят через 2 ч инкубации при 37 °С по четырехкрестной системе. При положительной реакции агглютинировавшиеся эритроциты оседают на дно луночки и равномерно покрывают его в виде перевернутого зонтика. При отрицательной реакции эритроциты тоже оседают, жидкость становится прозрачной, осадок выглядит в виде маленького «диска» в центре луночки. Титром сыворотки в РПГА считается последнее ее разведение, которое еще дает ярко выраженную гемагглютинацию без значительных признаков наличия «диска». 41.Возбудитель чумы. Морфологические свойства, культуральные особенности, факторы патогенности. Возбудитель в роли биологического оружия. Возбудитель чумы – Yersiniapestis. Морфологические свойства. Неподвижная палочка овоидной формы, размером 1,5х0,7 мкм, с биполярным окрашиванием анилиновым красителем. Образует нежную капсулу. Культуральные особенности. Факультативные анаэроб. Растёт на простых питательных средах. Оптимальная температура – 28 градусов C. На плотных средах через 8-12 часов образует колонии в виде “битого стекла”. Через 18-20 часов вирулентные бактерии образуют колонии в R-форме, которые имеют форму “кружевных платочков”. Менее вирулентные бактерии образуют колонии в S-форме. На жидких средах бактерии растут в виде плёнки, от которой спускаются сталактиты. Основные биохимические свойства, необходимые для идентификации: Не разжижает желатину, не расщепляет мочевину, Не ферментирует рамнозу и сахарозу, Ферментирует декстрин. Факторы патогенности (ФП). ФП детерминируются хромосомой и тремя плазмидами: pPst, pCad, pFra. pPst детерминирует синтез фибринолизина, плазмокоагулазы и пестицина. pFra – F1-антиген (препятствует поглощению микроба фагоцитами), F2-фракция, “мышиный токсин”. pCad – V- и W-антигены, которые обеспечивают способность бактерий сохраняться в фагоцитах. Возбудитель в роли биологического оружия. В ходе Второй мировой войны японскими вооружёнными силами были разработаны образцы биологического оружия, предназначенного для массового сброса специально подготовленного носителя чумы — инфицированных блох. Кроме того, трупы, заражённые чумой, использовали для загрязнения водоёмов. 42. В вирусологической лаборатории проведено заражение куриных эмбрионов смывом из носоглотки больного острой респираторной инфекцией. Вирусолог выделил вирус, вызвавший агглютинацию 1% взвеси куриных эритроцитов. Укажите методы заражения куриного эмбриона и порядок его вскрытия и серологическую реакцию, используемую для идентификации вируса. Методы заражения. А – заражение в полость аллантоиса. Б – заражение в амнион закрытым способом. В – заражение в амнион открытым способом. Г – заражение на хорионаллантоисную оболочку. Порядок вскрытия. В случае А вскрытие производят по следующим правилам: 1. Яйцо устанавливается на подставке так, чтобы воздушный мешок находился наверху, скорлупу над ним стерилизуют. 2. Скорлупу срезают немного выше границы воздушного пространства. 3. Удаляют пинцетом скорлупную оболочку, после чего хорионаллантоисную оболочку прокалывают пастеровской пипеткой в том месте, где нет сосудов, и насасывают аллантоисную жидкость. 4. Аллантоисную жидкость переносят в стерильную пробирку, а часть засевают в бульон для проверки на бактериологическую стерильность. В случае Г: 1. Яйцо помещают на подставку так, чтобы воздушное пространство было наверху, проводится стерилизация места вскрытия. 2. Срезают скорлупу по границе воздушного пространства. 3. Снимают скорлупную оболочку по границе. Обнажённую хорионаллантоисную оболочку подрезают вдоль края скорлупы. Через образовавшееся отверстие выливают всё содержимое яйца в чашку. 4. Оставшуюся внутри скорлупы хорионаллантоисную оболочку осторожно извлекают пинцетом и помещают в стерильную чашку с физиологическим раствором. Здесь её расправляют и изучают изменения. Серологическая реакция для идентификации вируса. Реакция (РСК). Реакция торможения гемагглютинации (РТГА). Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). 43.Как называются видимые изменения в клетке при действии на нее вируса? Методы индикации и идентификации вирусов. Цитопатическое действие вируса - возникновение дегенеративных изменений в клеточных культурах, связанное с размножением вирусов. Цитопатическое действие вируса (ЦПД), имеют три основных типа: кругло- или мелкоклеточная дегенерация; образование многоядерных гигантских клеток (симпластов); развитие очагов клеточной пролиферации, состоящих из нескольких слоев клеток; Внутриклеточные включения, располагающихся в цитоплазме и/или в ядрах пораженных клеток. Методы индикации. Индикация вирусов с помощью реакции гемагглютинации (РГА). Под действием вирусного гемагглютинина in vitro происходит склеивание эритроцитов. Индикацию вирусов можно проводить по их цитопатогенному действию (ЦПД) на культуру клеток. Существуют методы титрования (количественное определение) вирусов. Методы идентификации. Основными серологическими реакциями, используемыми для идентификации вирусов, являются: реакция торможения гемагглютинации, реакция нейтрализации в культуре клеток и иммуноферментный метод (ИФА), основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы. Реакция торможения гемагглютинации РТГА. Постановка РТГА: вначале соединяют вируссодержащую жидкость с разведениями диагностических сывороток в лунках и оставляют для контакта на 30-40 минут при комнатной температуре. Затем во все лунки вносят взвесь эритроцитов. Учет реакции производят через 1 -2 часа. Если тип вируса соответствует типу сыворотки, то вирусный гемагглютинин будет блокироваться антителами сыворотки, что проявляется отсутствием агглютинации эритроцитов. Такая реакция учитывается как положительная. Визуально в лунках определяется осадок эритроцитов с ровными краями, в виде «пуговицы». При отрицательной реакции будет виден «перевёрнутый зонтик». Реакция нейтрализации (РН) в культуре клеток. Постановка РН: вначале выделенный цитопатогенный вирус смешивают в пробирках со специфическими диагностическими сыворотками. Смеси выдерживают 1 час при комнатной температуре. Затем этими смесями заражают флаконы с культурой клеток. Если тип вируса соответствует типу сыворотки, то произойдет нейтрализация вируса антителами сыворотки и культура клеток будет без изменений (положительная реакция). 44.Возбудитель ВИЧ-инфекции. Общая характеристика. Основные группы риска. Понятие о СПИДе. Микробиологическая диагностика и профилактика ВИЧ-инфекции. Возбудитель – Retroviridae Lentivirus. Общая характеристика. Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) – вызывает ВИЧ-инфекцию, которая заканчивается синдромом приобретённого иммунного дефицита (СПИД). ВИЧ – РНК-содержащий вирус. Вирусная частица имеет сферическую форму. Оболочка состоит из двойного слоя липидов, пронизанного гликопротеинами. Сердцевина имеет конусовидную форму и состоит из капсидных белков p24 и p25. Геном вируса состоит из 3 основных структурных генов (gag, pol, env) и 7 регуляторных. Жизненный цикл состоит из 4 стадий: Адсорбция и эндоцитоз в клетку; Высвобождение вирусной РНК, синтез и интеграция ДНК-провируса; Синтез РНК вируса, трансляция и формирование вирусных белков; Сборка, созревание и высвобождение. Вирус поражает в основном T- и B-лимфоциты. Выделяют 2 типа вируса – ВИЧ-1 и ВИЧ-2, отличающиеся по структуре и антигенам. Основные группы риска. Женщины легкого поведения и их клиенты, Лица, употребляющие инъекционные наркотики, Мужчины нетрадиционной сексуальной ориентации, Люди, у которых не один половой партнер, Лица, которым сделали переливание инфицированной донорской крови, Дети, матери которых инфицированы ВИЧ. Понятие о СПИДе. СПИД – синдром приобретенного иммунодефицита. Это заболевание вызывается вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Вирус иммунодефицита человека ослабляет иммунную систему, в результате чего организм теряет возможность противостоять различным заболеваниям. Термином СПИД обозначили конечную стадию ВИЧ-инфекции; она характеризуется поражением иммунной системы человека, на фоне которого развиваются сопутствующие заболевания легких, органов желудочно-кишечного тракта, головного мозга. Болезнь заканчивается смертью. Микробиологическая диагностика. ИФА, ИБ, ПЦР. Для подтверждения диагноза определяют антитела к белкам gp41, gp120, gp160 и p24 у ВИЧ-1. Культивируется ВИЧ на культуре клеток Т-лимфоцитов и моноцитов человека, но для этого требуется присутствие ИЛ-2. Профилактика. Специфическая – не разработана. Неспецифическая – механическая защита от инфицирования с помощью презервативов, пользование одноразовыми шприцами и др. 45.Возбудитель гепатита А, таксономия, антигенная структура, патогенез, клиническая картина, профилактика и лечение Возбудитель – Picornaviridae Hepatovirus. Таксономия. Вирус гепатита А относится к семейству Picornaviridae роду Hepatovirus. Антигенная структура. Является РНК-содержащим вирусом. Имеет один вирусоспецифический антиген. Патогенез. Вирус гепатита А попадает в организм человека с водой или пищей, репродуцируется в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки и регионарных лимфоидных тканях. Затем возбудитель попадает в кровоток с развитием кратковременной вирусемии. Максимальные титры вируса в крови выявляют в конце инкубационного и в преджелтушном периодах. В это время возбудитель выделяется с фекалиями. Основная мишень для цитопатогенного действия – гепатоциты. Репродукция вируса в их цитоплазме приводит к нарушению внутриклеточных метаболических процессов и гибели клеток. Цитопатический эффект усиливают иммунные механизмы, в частности NК-клетки, синтез которых индуцируется вирусом. Поражение гепатоцитов сопровождается развитием желтухи и повышением уровня трансаминаз. Далее возбудитель с желчью попадает в просвет кишечник и выделяется с фекалиями, в которых отмечается высокая концентрация вируса. Вирус гепатита А вызывает развитие острого высококонтагиозного заболевания, который может протекать субклинически или давать типичные клинические формы. После перенесения клинически выраженной или бессимптомной инфекции формируется пожизненный гуморальный иммунитет. Клиника. Инкубационный период при гепатите А занимает от 15 до 45 дней, чаще от 20 до 30. Вирусный гепатит может принимать желтушную, безжелтушную и субклиническую форму. Также выделяют острое (до 2 месяцев), затяжное (до 6 месяцев). Хроническое течение заболевания для ГА не доказано. Начало острое с преджелтушного этапа, занимающего, в среднем, от 2-х дней до недели. Этот период также характеризуется продромальными явлениями: кратковременный подъём температуры тела, снижение аппетита, тошнота, рвотные позывы, тянущие боли в области печени, задержка стула ,увеличение печени и незначительное-селезёнки, может появиться потемнение мочи и осветление кала. В желтушной стадии появляется и в течение 2-3 дней нарастает желтуха, иногда сопровождаемая зудом кожных покровов, но явления интоксикации в типичных случаях идут на убыль.. Выздоровление характеризуется постепенным уходом желтухи и нормализацией самочувствия, но увеличение размеров печени и повышение активности трансаминаз могут держаться до 3-6 мес., и лишь к этому времени следует отнести истинное выздоровление от этой инфекции. Профилактика. Неспецифическая – улучшение водоснабжения и повышение санитарной культуры. Контроль очага болезни в течение 45 дней, проведение мер по его дезинфекции. Изоляция на условиях карантина пациента с диагностированным гепатитом А. Срочное обследование и при отсутствии иммунитета вакцинация против ГА всех контактных лиц. После выздоровления обязательное отслеживание состояния пациента в условиях диспансера в течение 6 мес. Осуществление мер по предотвращению распространения вируса гепатита А фекально-оральным путем за счет соблюдения санитарно-эпидемиологических норм. Пропаганда здорового образа жизни среди населения, распространение информации об особенностях гепатита А и путях его предотвращения. Специфическая пассивная – иммуноглобулин. Активная – убитая вакцина на основе штамма СR 326. Лечение. Средства специфической противовирусной терапии отсутствуют. Симптоматическое. 46. Возбудитель гепатита В, таксономия, антигенная структура, патогенез, клиническая картина, методы диагностики, профилактика и лечение. Таксономия. Вирус гепатита В (ВГВ) относится к семейству Hepadnaviridae роду Orthohepadnavirus. Антигенная структура. В суперкапсиде содержит HBs-антиген, в формировании которого участвуют 3 ролипептида (preS1, preS2, S). Белки оболочки различаются по антигенной специфичности. Существует 4 антигенных фенотипа вируса (ayr, ayw, adr, adw). Сердцевинные антигены – HBc и HBe. HBx – трансактиватор. Патогенез и клиника. Заражение происходит при инъекциях инфицированной крови или препаратов крови; через загрязненные медицинские инструменты, половым путем и интранатально, возможно внутриутробное инфицирование. Место первичной репликации вируса неизвестно; размножение в гепатоцитах наблюдают только через 2 недели после инфицирования. При этом репликативный цикл не сопровождается гибелью гепатоцитов. Во второй половине инкубационного периода вирус выделяют из крови, спермы, мочи, фекалий и секрета носоглотки. Патологический процесс начинается после распознавания вирусиндуцированных антигенов на мембранах гепатоцитов иммунокомпетентными клетками, т. е. он обусловлен иммунными механизмами. Инкубационные период 3-6 месяцев. Инфекционный процесс наступает после проникновения вируса в кровь. ВГВ из крови эндоцитозом проникает в гепатоцит, затем происходит достраивание плюс-нити ДНК , после чего возможно развитие двух типов вирусной инфекции: интегративной (интеграция кольцевой ДНК вируса в хромосому гепатоцита с образование провируса) и продуктивной (формирование новых вирусных частиц). Клиническая картина характеризуется симптомами поражения печени, в большинстве случаев сопровождается развитием желтухи. Клинические проявления варьируются от бессимптомной и безжелтушной форм до тяжелой дегенерации печени. Течение гепатита В более тяжелое, с постепенным началом, длительным инфекционным циклом, более высоким уровнем летальности, чем при гепатите А. Возможна хронизация процесса. Диагностика. Используют серологический метод и ПЦР. Методами ИФА и РНГА в крови определяют маркеры гепатита В: антигены (HBs и HBe) и антитела (анти-HBc-IgM, анти-HBs, анти-HBe-IgM). Профилактика. Неспецифическая – предотвращение попадания вируса при парентеральных манипуляциях и переливании крови. Специфическая – вакцинация рекомбинантной генно-инженерной вакциной, содержащей HBs-антиген. Лечение. Интерферон и интерфероногены. 47. Возбудитель гепатита С, таксономия, антигенная структура, патогенез, клиническая картина, лечение и профилактика Таксономия. Вирус гепатита С (ВГС) относится к семейству Flaviridae роду Hepacivirus. Антигенная структура. Антигены: гликопротеины оболочки (gp-антигены), Е1 и Е2. Сердцевинный антиген HCc-антиген. Неструктурные белки (NS2, NS3, NS4, NS5). Патогенез и клиника. Источником инфекции являются больные острым и хроническим гепатитом С и вирусоносители. Вирус передается парентеральным путем, половым путем и от матери плоду (при пери– и постнатальном инфицировании). Характерны преобладание безжелтушных форм и частый переход в хроническую форму заболевания. Вирус является одним из факторов развития первичной гепатоцеллюлярной карциномы. Инкубационный период 6-12 недель. Часто встречаются безжелтушные формы. В 50% случаев острая форма переходит в хроническую с развитием цирроза и первичного рака печени. Профилактика и лечение. Неспецифическая – предотвращение попадания вируса при парентеральных манипуляциях и переливании крови. Специфическая – не разработана. Для лечения применяют интерферон и рибовирин. 48. Возбудитель сибирской язвы, морфология, культуральные свойства, микробиологическая диагностика, лечение и профилактика. Возбудитель – Сибиреязвенные бациллы (Bacillusanthracis). Морфология. Крупные грамположительные палочки с обрубленными концами. В мазке располагаются в виде цепочек. Неподвижны. Образуют споры и капсулу. Для обнаружения капсул мазки окрашивают метиленовой синькой Леффлера (клетки – синие, капсула – красные). Культуральные свойства. Аэробы. Хорошо растут на простых питательных средах, бактерии можно выращивать на сыром или варёном картофеле, настое соломы. На жидких средах даёт придонный рост в виде комочка ваты, не вызывая помутнения среды; на плотных средах – крупные с неровными краями шероховатые матовые колонии (R-форма). Под лупой колонии напоминают гриву льва. На свёрнутой лошадиной сыворотке растёт в виде гладких прозрачных S-форм колоний. Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – содержимое пузырьков, кровь, моча, мокрота. Первоначально производят окраску по Граму, а для обнаружения капсул – по Романовскому-Гимзе. Наличие в мазках крупных грамположительных стрептобацилл, окружённых капсулой позволяет выставить предварительный диагноз. Культивируют на МПА и МПБ. Биологический метод на морских свинках. Серологический метод – РПГА, РИФ, ИФА, РСК, Реакция Асколи. Профилактика. Неспецифическая – устранение источника и разрыв механизма передачи. Специфическая – живая сибиреязвенная вакцина. Лечение. Антибиотики (пенициллин, тетрациклин) и сибиреязвенный иммуноглобулин. 49. Возбудитель простого герпеса, таксономия, патогенез, лабораторная диагностика, лечение и профилактика. Таксономия. ВПГ относится к семейству Herpesviridae роду Simplexvirus. Заражение вирусом простого герпеса, обычно называемого герпесом, может быть вызвано либо вирусом простого герпеса первого типа (ВПГ-1), либо вирусом простого герпеса второго типа (ВПГ-2). ВПГ-1 главным образом передается при оральном контакте, вызывая инфицирование внутри или вокруг рта (оральный герпес). ВПГ-2 передается почти исключительно половым путем и проявляется в генитальной или анальной области (генитальный герпес). Тем не менее ВПГ-1 через орально-генитальный контакт также может передаваться на область половых органов и вызывать генитальный герпес. Инфицирование оральным и генитальным герпесом в основном проходит бессимптомно, но может сопровождаться легкими симптомами либо вызывать образование болезненных пузырьков или язв в инфицированной зоне. Патогенез. Различают первичный и рецидивирующий простой герпес. Везикула – типичное проявление простого герпеса. Вирусы проходят через чувствительные нервные окончания к телу нейрона. Репродукция вируса в нейроне заканчивается его гибелью. Некоторые вирусы герпеса способны приводить к латентной инфекции, при которой нейрон не погибает, но содержат в себе вирусный геном. Острая форма болезни У лиц со слабой иммунной системой, например у лиц, находящихся на поздней стадии заражения ВИЧ, ВПГ-1 может вызвать более тяжелые симптомы и более частые рецидивы. В редких случаях инфекция ВПГ-1 также может вызвать более тяжелые осложнения, например, энцефалит или кератит (глазная инфекция). Неонатальный герпес Развитие неонатального герпеса может происходить при контакте новорожденного с ВПГ в половых путях во время родов. Это заболевание является редким, составляя примерно 10 случаев на 100 000 деторождений в мире, однако оно может приводить к длительной неврологической инвалидизации или смерти. Риск развития неонатального герпеса особенно высок, если первичное инфицирование матери ВПГ происходит на поздних сроках беременности. У женщин, перенесших генитальный герпес до беременности, риск передачи ВПГ детям крайне низок. Психосоциальные последствия Рецидивы симптомов орального герпеса могут вызывать дискомфорт и приводить к социальной стигматизации и появлению психологических расстройств. При генитальном герпесе эти факторы могут оказывать серьезное неблагоприятное воздействие на качество жизни и сексуальные отношения. Однако со временем большинство людей с одной из форм герпеса приспосабливаются к жизни с инфекцией. Лабораторная диагностика. Материал – содержимое везикул, слюны, кровь. В окрашенных мазках наблюдают гигантские многоядерные клетки. Для выделения вируса исследуемым материалом заражают клетки HeLa, Hep-2, человеческие эмбриональные фибропласты. Заражают также куриные эмбрионы. Выделенный вирус идентифицируют в РИФ и ИФА. Серологические методы: РСК, РИФ, ИФА. Профилактика. Специфическая – многократное введение инактивированной культуральной герпетической вакцины. Неспецифическая - ВПГ-1 наиболее контагиозен во время обострения орального герпеса с проявлением симптомов, однако может передаваться и в тех случаях, когда симптомы не ощущаются и не наблюдаются. Лицам с проявляющимися симптомами орального герпеса следует избегать орального контакта с другими людьми и совместного пользования предметами, которые были в контакте со слюной. Также им следует воздерживаться от оральных половых сношений, чтобы не допустить передачу герпеса на гениталии полового партнера. Лицам с симптомами генитального герпеса следует воздерживаться от половых сношений, пока у них наблюдаются какие-либо симптомы. Лица, уже инфицированные ВПГ-1, не могут заразиться повторно, однако могут заразиться вирусом простого герпеса второго типа (ВПГ-2), поражающим генитальную область (см. ниже). Беременным женщинам с симптомами генитального герпеса следует информировать об этом своих медработников. Предотвращение первичного инфицирования вирусом генитального герпеса особенно важно на поздних сроках беременности, поскольку именно в таких случаях существует максимальный риск развития неонатального герпеса. Лечение. Интерферон, Ацикловир. 50. Возбудители бруцеллеза, таксономия, факторы патогенности, микробиологическая диагностика, лечение и профилактика. Таксономия. Возбудители бруцеллёза относятся к роду Brucella, который включает в себя следующие виды: B.melitensis, B.abortus, B.suis. Факторы патогенности. Фермент агрессии – гиалуронидаза. Основные факторы вирулентности – эндотоксин и капсула. Микробиологическая диагностика. Материал – кровь, моча, пунктат красного костного мозга. Питательные среды: сывороточно-декстрозный и кровяной агар. На плотных средах – мелкие круглые выпуклые гладкие прозрачные голубовато-серые колонии. Используются все методы микробиологической диагностики. Для биопробы используют белых мышей и морских свинок. Применяемые реакции: Райта (для выявления агглютинирующих антител), РПГА, РИФ, ИФА. Для диагностики бруцеллеза наиболее широко применяют серологические методы исследования. Начиная со 2-й недели заболевания, ставят развернутую реакцию агглютинации Райта по типу реакции Видаля. Сыворотку больного разводят от 1 : 50 до 1 : 800 и добавляют единый бруцеллезный диагностикум. Окончательный учет проводят через 24 ч. Диагностическим считают титр антител 1 : 100. Реакция Райта иногда сохраняется положительной в течение 2—4 лет. Применяют реакцию агглютинации на стекле (реакция Хеддлсона), которая является методом ускоренной диагностики бруцеллеза; она высокоспецифична и чувствительна, так как используют неразведенную сыворотку больного и концентрированный антиген. Для постановки реакции Хеддлсона на стеклянную пластинку наносят сыворотку больного в количестве 0,08—0,04—0,02—0,01 мл, добавляют диагностикум Хеддлсона по 0,03 мл к каждой капле сыворотки и ставят два контроля: контроль диагностикума (0,03 мл диагностикума +0,03 мл изотонического раствора хлорида натрия) и сыворотки (0,02 мл сыворотки+ 0,03 мл изотонического раствора хлорида натрия). При наличии антител в течение 2—5 мин появляется агглютинация. Кроме этих реакций, используют РПГА, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) для выявления антител в сыворотке крови и опсонофагоцитарную реакцию. Для диагностики бруцеллеза широко используют кожно-аллергическую пробу (реакция Бюрне). Эта реакция высокочувствительна и специфична; в основу ее положена способность организма, сенсибилизированного бруцеллами, специфически отвечать местной реакцией на введение бруцеллина (фильтрат 3-недельной бульонной культуры бруцелл). Бруцеллин вводят внутрикожно в предплечье в дозе 0,1 мл. При положительной реакции через 24—48 ч возникают покраснение и инфильтрат. Реакция на бруцеллин появляется через 1—2 нед после начала заболевания и сохраняется длительное время после исчезновения клинических симптомов (иногда годами). Необходимо помнить, что реакция Бюрне бывает положительна у вакцинированных лиц, а также в случае латентной инфекции. Профилактика. - ликвидация источника инфекции, разрыв механизма передачи, создание невосприимчивости коллектива. Специфическая – живая бруцеллёзная вакцина. Неспецифическая профилактика. Плановые обследования в животноводческих хозяйствах, на пастбищах, в убойных пунктах, на мясных и молочных комбинатах. Специфическая профилактика. Вакцинация живой вакциной В. abortus (штамм 19-ВА). Прививки проводят накожным методом однократно, ревакцинируют через 8-12 мес. Лечение. Антибиотики широкого спектра при остром и хроническом бруцеллёзе. Для предупреждения рецидивов используют также бруцеллезный иммуноглобулин. |