Микробиология экзамен. 1. Медицинская микробиология, ее предмет, методы, связь с другими науками. Значение медицинскои микробиологии в практическои деятельности врача
 Скачать 0.64 Mb.
|
|
Раздел 1. Общая микробиология и вирусология 1.Медицинская микробиология, ее предмет, методы, связь с другими науками. Значение медицинской микробиологии в практической деятельности врача. Микробиология –наука о микроорганизмах, т.е. о живых существах, размеры которых меньше 0,1 мм. К ним относятся некоторые многоклеточные организмы, простейшие, некоторые водоросли, грибы. А также бактерии и вирусы. Важнейшей задачей микробиологии является получение чистой культуры, поэтому основу микробиологических методов составляют две процедуры: Выделение (изоляция) определенного микроорганизма из существующих в природе популяций. Культивирование, т.е. выращивание микроорганизмов на питательных средах или животных в лабораторных условиях с последующей идентификацией. Микробиология тесно связана с клиническими дисциплинами: терапией, хирургией, инфекционными болезнями, гигиеной и другими. Все фундаментальные открытия молекулярной биологии и молекулярной генетики, биотехнологии и генной инженерии сделаны на микроорганизмах. Микроорганизмы используются человеком в пищевой промышленности (производство хлеба, сыра, молочных продуктов, напитков), производстве лекарственных препаратов (антибиотики, витамины, гормоны, ферменты). Значение в практике врача Микроорганизмы являются возбудителями инфекционных болезней, которые часто встречаются в практике врача. Для того чтобы правильно поставить диагноз инфекционного заболевания, необходимо хорошо знать морфологию микробов, их основные формы, уметь различать их под микроскопом. 2.Основные этапы развития микробиологии. Работы Л. Пастера, Р. Коха. Роль отечественных ученых в развитии микробиологии. Работы И.И. Мечникова, Д.И. Ивановского, З.В. Ермольевой и др. I. Эвристический – Гиппократ – причина болезней невидимые вещества – миазмы II. Морфологический – Левенгук – обнаружил в микроскоп живые организмы. Ивановский – открыл вирусы. III. Физиологический - Луи Пастер – брожение, опроверг теорию самозарождения, принципы стерилизации, принципы вакцинации. Роберт Кох – предложил окраску бактерий, триада Коха для доказательства специфичности заболевания микроорганизмом: - микроб только у больного, но нет у здорового; - должна быть получена чистая культура микроба; - микроб должен вызывать такое же заболевание у животных. Среди наиболее выдающихся исследователей можно назвать имена Ганзена (возбудитель проказы), Обермеййера (возбудитель возвратного тифа), Нейссера (возбудитель гонореи), Клебса и Лёффлера (возбудитель дифтерии). IV. Иммунологический – Пастер – вакцинация. Мечников – фагоцитарная теория, и в его работах было доказано, что в защитных реакциях организма большую роль играют особые вещества сыворотки крови – антитела. V. Молекулярно-генетический – раскрыта молекулярная структура многих бактерий, расшифровка генов бактерий и вирусов. Ермольева – изучала вопросы бактериофагии, профилактики холеры, изучению новых антибиотиков и лекарственных форм пенициллина, тетрациклина, стрептомицина 3.Принципы организации бактериологической лаборатории. Техника безопасности при работе с патогенными микроорганизмами. Бактериологическая лаборатория должна размещаться в изолированных от других лабораторий помещениях с необходимым оборудованием и мебелью. Лаборатория должна иметь отдельный вход, гардероб и душевую. Состав комната приема и регистрации материалов; - боксированные помещения для микробиологических исследований; - автоклавная; - моечная; - виварий. Комнаты для микробиологических исследований оборудуют термостатами, холодильниками, центрифугами, весами, водяными банями, электромагнитными мешалками. Работу с инфицированным материалом проводят в боксе с предбоксником. У входа в бокс должен быть коврик, пропитанный дезраствором. В боксе разбирают поступившие пробы, готовят и фиксируют мазки-отпечатки, проводят посевы микроорганизмов на питательные среды. В предбокснике в биксах необходимо иметь стерильные халаты, шапочки, маски, а также в предбокснике должна быть сменная обувь. В предбокснике можно размещать термостаты, холодильники, центрифуги и другое оборудование. В автоклавной необходимо иметь два автоклава: один автоклав для чистых материалов (для стерилизации посуды, питательных сред, инструментов); другой автоклав для инфицированных материалов. Правила работы в бактериологической лаборатории: 1. Работать разрешается в специальной одежде – халате и шапочке. Обязательно меняют обувь. 2. Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнюю одежду на халат. 3. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу. 4. Емкости следует обтирать снаружи дезинфицирующим раствором и помещать их на подносы или в кюветы. 4.Номенклатура бактерий. Принципы классификации. Классификация основывается на внешних признаках организмов (фенотипе) и генетических особенностях организмов (генотипе). В классификации микробов используются следующие таксономические категории: царство, отдел, класс, порядок, семейство, род, вид. Основной таксономической единицей является вид. Название микроорганизмам присваивается в соответствии с правилами Международного кодекса номенклатуры бактерий. Для обозначения видов бактерий принята двойная номенклатура, Согласно номенклатуре, латинскими буквами сначала пишется название рода с заглавной буквы, а затем - название вида со строчной буквы. Родовую принадлежность микроба обозначает какой-либо морфологический признак микробной клетки или фамилия ученого, открывшего микроб. Видовую принадлежность обозначает либо внешний вид колоний, либо среда обитания микроорганизма. Принципы классификации микроорганизмов 1. Морфологические свойства - величина, форма клеток. 2. Тинкториальные свойства - способность окрашиваться красителями. 3. Тип дыхания – потребность в кислороде. 4. Культуральные свойства – характер роста на плотных и в жидких питательных средах. 5. Биохимические свойства - способность ферментировать 6. Антигенная структура – наличие антигенов. 7. Чувствительность к бактериофагам 8. Чувствительность к антибиотикам - отношение к разным группам антибиотиков. 9. Химический состав - содержание и состав БЛУ 10. Биологические свойства – способность вызывать заболевание и гибель животных. 11. Генетическое родство с другими бактериями.
5.Морфология и ультраструктура бактерий. Основные отличия прокариотов и эукариотов. Функции отдельных структурных элементов бактериальной клетки. диктуй только таблицу.  .Постоянные компоненты прокариот: Нуклеоид - двунитевидная цепь ДНК в кольцо. Клеточная стенка – отличается у гр – и гр +. Гр+ : синий цвет состоит из 5-6 слоев пептидогликана. Он связанс тейховыми и липотейхоевыми кислотами, которые пронизывают его насквозь и закрепляют в ЦПМ. Гр -: красный цвет тонкий слой пептидогликанов, наружная мембрана представлена липополисахаридами , липопротеидами, гликолипидами, белками - поринами. ЦПМ–располагается под клеточной стенкой .По строению является сложным липидобелковым комплексом, таким же, как у клеток эукариот (универсальная мембрана). Функции: Воспринимает всю химическую информацию, поступающую в клетку. Является основным барьером. Рибосомы 70S - многочисленные мелкие гранулы, располагающиеся в в цитоплазме Цитоплазма Мезосомы (аналог митохондрий)– участвуют в энергообмене, в формировании межклеточной перегородки и спорообразовании. Непостоянные структуры: Жгутики - определяют подвижность бактериальной клетки. Состоят из белка флагеллина (обл. сократит.способностью) , берут начало от сократительной мембраны, основная функция -двигательная Пили (реснички, ворсинки) - за счет них идет прикрепление к субстрату. Белок – пилин. Плазмиды небольшие молекулы ДНК, физически отдельные от геномных хромосом и способные реплицироваться автономно. Капсула – слизистый слой клеточной стенки из полисахаридов и полипептидов. Функции :Защита бактерий от бактериофагов, фагоцитов, гумор.факторов, Определяет АГ-специфичность, Обеспечивает адгезию (прикрепление) Споры – способ выживания в неблагоприятный условиях абиотической среды. 6.Химический состав бактериальной клетки. Строение клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. Бактериальная клетка на 80—90% состоит из воды и только 10% приходится на долю сухого вещества. В сухом веществе бактерий 52% составляют белки, 17% — углеводы, 9% — липиды, 16% — РНК, 3% — ДНК и 3% — минеральные вещества. Углеводы представлены в бактериальной клетке в виде моно-, ди-, олигосахаров и полисахаридов, а также входят в состав ком- плексных соединений с белками, липидами и другими соединени- ями. В бактериальной клетке присутствуют все типы РНК: иРНК, транспортная РНК (тРНК), рРНК, менее известная антисенс РНК (асРНК). Молекула ДНК построена из двух полинуклеотидных цепочек. Клеточная стенка — прочная, упругая структура, придающая бактерии определенную форму и вместе с подлежащей цитоплазматической мембраной сдерживающая высокое осмотическое давление в бактериальной клетке. Наиболее толстая клеточная стенка у грамположительных бактерий. В клеточной стенке грамположительных бактерий содержится небольшое количество полисахаридов, липидов и белков. Гр+ : синий цвет состоит из 5-6 слоев пептидогликана. Он связанс тейховыми и липотейхоевыми кислотами, которые пронизывают его насквозь и закрепляют в ЦПМ. Гр -: красный цвет тонкий слой пептидогликанов, наружная мембрана представлена липополисахаридами , липопротеидами, гликолипидами, белками - поринами. 7.Спорообразование у бактерий. Механизм спорообразования. Морфологическая характеристика и химический состав спор. Отношение спор к физическим и химическим факторам. Методы выявления спор. Примеры. Споры — своеобразная форма покоящихся бактерий с грамположительным типом строения клеточной стенки. Спорообразующие бактерии рода,у которых размер споры не превышает диаметр клетки, называются бациллами. Спорообразуюшие бактерии, у которых размер споры превышает диаметр клетки, отчего они принимают форму веретена, называются клостридиями,например бактерии рода Clostridium. Споры кислотоустойчивы, поэтому окрашиваются по методу Ауески или по методу Циля—Нельсена в красный, а вегетативная клетка — в синий цвет. Форма спор бывает овальной и шаровидной, расположение в клетке — терминальное (столбняк), субтерминальное — ближе к концу палочки (у возбудителей ботулизма) и центральное (у сибиреязвенной бациллы). Процесс спорообразования проходит ряд стадий, в течение которых часть цитоплазмы и хромосома бактериальной вегетативной клетки отделяются, окружаясь врастающей цито- плазматической мембраной, — образуется проспора. Проспору окружают две цитоплазматические мембраны. Слой, окружающий внутреннюю мембрану споры, называется стенкой споры. Между наружной мембраной и стенкой споры формируется толстый слой, состоящий из пептидогликана, имеющего много сшивок, — кортекс. Споры некоторых бактерий имеют дополнительный покров — экзоспориум Спорообразование сопровождается интенсивным потреблением проспорой, а затем и формирующейся оболочкой споры дипиколиновой кислоты и ионов кальция. Спора приобретает термоустойчивость, которую связывают с наличием в ней дипиколината кальция. В благоприятных условиях споры прорастают, проходя три последовательные стадии: активации, инициации, вырастания. При этом из одной споры образуется одна бактерия. Окраска спор по методу Ожешки: 1. На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают на пламени горелки в течение 2-3 минут. 2. Кислоту сливают, препарат промывают водой, просушивают и фиксируют над пламенем горелки. 3. Окрашивают препарат по Цилю-Нильсену. Споры бактерий при этом приобретают красный цвет, а вегетативные формы – синий. 8.Микроскопический метод исследования. Методы окраски микроорганизмов и их отдельных структур. Окраска по Граму: 1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовый раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 2-3 минуты бумагу снимают пинцетом, а краситель сливают. 2. Наносят раствор Люголя на 1-2 минуты. 3. Наносят на препарат этиловый спирт на 30-60 секунд для обесцвечивания. 4. Промывают препарат водой. 5. Докрашивают мазок водным раствором фуксина в течение 1-2 минут, промывают водой, высушивают и микроскопируют. Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные – в красный цвет. Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена: 1. На фиксированный мазок наносят карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогревают до появления паров в течение 3-5 минут. 2. Снимают бумагу пинцетом, промывают мазок водой. 3. На мазок наносят 5% раствор серной кислоты или 3% раствор солянокислого спирта на 1-2 минуты для обесцвечивания. 4. Промывают водой. 5. Докрашивают мазок водным раствором метиленового синего в течение 3- 5 минут. 6. Промывают водой, высушивают и микроскопируют. Окраска спор по методу Ожешки: 1. На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают на пламени горелки в течение 2-3 минут. 2. Кислоту сливают, препарат промывают водой, просушивают и фиксируют над пламенем горелки. 3. Окрашивают препарат по Цилю-Нильсену. Споры бактерий при этом приобретают красный цвет, а вегетативные формы – синий. Изучение микробов в живом состоянии. Клетки микроорганизмов в живом состоянии изучают методом раздавленной капли и методом висячей капли. Метод раздавленной капли. На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Микроскопируют препарат с объективом х40. Метод висячей капли. Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят каплю бактериальной суспензии. Затем предметное стекло с лункой, края которого предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Препарат переворачивают покровным стеклом вверх. 9. Особенности строения спирохет. Виды,патогенные для человека. Спирохеты — тонкие длинные извитые бактерии. Они состоят из наружной клеточной стенки, которая окружает цитоплазматический цилиндр. Поверх наружной мембраны прозрачный чехол гликозаминогликановой природы. Под наружной клеточной стенки располагаются фибриллы, закручивающиеся вокруг цитоплазматического цилиндра. Фибриллы участвуют в передвижении спирохет, придавая клеткам вращательное, сгибательное и поступательное движение. Спирохеты представлены тремя родами, патогенными для чело- века: Трипонема, Бореллия, Лептоспира. Трепонемы имеют вид тонких штопорообразно закрученных нитей с 8—12 равномерными мелкими завитками. Вокруг протопласта трепонем расположены 3—4 жгутика. В цитоплазме имеются цитоплазматичеекие филаменты. Патоген- ными представителями являются трипонема палидум — возбудитель сифилиса, Т. pertenue — возбудитель тропической болезни . Боррелии в отличие от трепонем, более длинные, имеют по 3—8 крупных завитков и 7—20 фибрилл. К ним относятся возбудитель возвратного тифаи возбудители болезни Лайма. Лептоспиры имеют завитки неглубокие и частые в виде закрученной веревки. Концы этих спирохет изогнуты на- подобие крючков с утолщениями на концах. Образуя вторичные завитки, они приобретают вид букв S или С; имеют две осевые фибриллы. Патогенный представитель L, interrogansвызывает леп тоспироз при попадании в организм с водой или пищей, приводя к кровоизлияниям и желтухе. 10.Морфология и биологические свойства риккетсий. Роль в инфекционной патологии человека. Риккетсии — мелкие грамотрицательные палочковидные бактерии (0,3—2 мкм), облигатные (обязательные) внутриклеточные паразиты. Размножаются бинарным делением в цитоплазме. Обитают в членистоногих (вши, блохи, клещи), которые являются их хозяевами или переносчиками. Клетки неправильной формы нитевидные. Структура риккетсии не отличается от таковой грамотрицательных бактерий. Риккетсии обладают независимым от клетки хозяина метаболизмом, однако, возможно, они получают от клетки хозяина макроэргические соединения для своего размножения. В мазках и тканях их окрашивают по Романовскому—Гимзе. У человека риккетсии вызывают эпидемический сыпной тиф (R. prowazekii), клещевой риккетсиоз (R. sibirica), пятнистую лихорадку Скалистых гор (R. rickettsii) и другие риккетсиозы. 11.Актиномицеты. Морфология. Роль в инфекционной патологии. |