Микробиология экзамен. 1. Медицинская микробиология, ее предмет, методы, связь с другими науками. Значение медицинскои микробиологии в практическои деятельности врача
 Скачать 0.64 Mb.
|
|
К факторам роста относятся витамины, аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания. Некоторые бактерии (особенно прихотливые или мутанты с наследственными дефектами) могут расти только в среде, дополненной определёнными компонентами, которые сами микроорганизмы синтезировать не могут. Эти компоненты известны как ростовые факторы, а подобные бактерии называют ауксотрофами. Если ауксотрофия возникает в результате мутации, то «дикий», или основной тип, не нуждающийся в определённом факторе роста, называют прототрофным. Вещества, присутствие которых обязательно для роста бактерий. Это может быть определённая аминокислота, например гистидин, для штамма Salmonella thyphimurium his (гистидин-отрицательный), ауксотрофного по гистидину, либо набор витаминов (лактофлавин, тиамин, биотин, фолиеван и пантотеновая кислота) и аминокислот, без которых нельзя вырастить молочнокислые бактерии. Факторы, отсутствие которых не вызывает полной остановки роста культуры. Обычно это определённые витамины, входящие в состав простетических групп ферментов и необходимые в очень малых количествах. 22.Дыхание бактерий. Аэробный и анаэробный типы дыхания. Методы культивирования анаэробов. Важнейшие патогенные анаэробы. По отношению к кислороду, а также по использованию его в процессах получения энергии микроорганизмы подразделяются на три группы: облигатные аэробы, облигатные анаэробы, факультативные анаэробы. Облигатные аэробы растут и размножаются только в присут- ствии кислорода, используют кислород для получении энергии путем кислородного дыхания. Энергию получают оксидативным метаболизмом, используя кислород как терминальный акцептор электронов в реакции, катализируемой цитохромоксидазой. Облигатные аэробы подразделяются на строгие аэробы, которые растут при парциальном давлении воздуха, и микроаэрофилы, которые, используя кислород в процессах получения энергии, растут при его пониженном парциальном давлении. Облигатные анаэробы не используют кислород для получения энергии. Облигатные анаэробы подразделяются на две группы: строгие анаэробы и аэротолерантные. Строгие анаэробы характеризуются тем, что молекулярный кислород для них токсичен: он убивает микроорганизмы или ограничивает их рост. Энергию строгие анаэробы получают маслянокислым брожением. Аэротолерантные микроорганизмы не используют кислород для получения энергии, но могут существовать в его атмосфере. К ним относятся молочнокислые бактерии, получающие энергию гетеро- ферментативным молочнокислым брожением. Факультативные анаэробы способны расти и размножаться как в присутствии, так и при отсутствии кислорода. Они обладают смешанным типом метаболизма. Процесс получения энергии у них может происходить кислородным дыханием в присутствии кислорода, а при его отсутствии переключаться на брожение. Для этих бактерий характерно наличие анаэробного нитратного дыхания. 23. Бактериологический метод изучения микроорганизмов. Принципы и методы выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий. Бактериологический метод диагностики 1 этап: Забор исследуемого материала для диагостики 2 этап: Получение изолированных колоний, в связи с чем проходит посев на питательные среды методом разобщения для накопления чистой культуры 3 этап: Изучение культуральных и морфологических свойств изолированных колоний. (отсев типичных колоний на МПА для накопления чистой культуры) 4 этап Идентификация чистой культуры. Признаки: морфологические, тинкториальные,культуральные, б/х, АГ-е, токсигенные, чувствительность к АБ и БФ . Основные принципы выделения и идентификации чистых культур бактерий Чистую культуру бактерий получают для проведения дифференциально-диагностических исследований - идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимических и других признаков микроорганизмов. Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами и нативных препаратов. Культуральные свойства характеризуются питательными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах. Они устанавливаются по характеру роста на питательной среде. 24.Изменчивость микроорганизмов. Фенотипическая изменчивость (модификации). Теоретическое и практическое значение учения об изменчивости. Модификации возникают как адаптивные реакции отдельных мик робных клеток или всей популяции в целом в ответ на изменяющиеся условия окружающей среды. Модификации проявляются в изменении морфологических, биохимических и многих других признаков с последующей их реверсией к первоначальному фенотипу после устранения действия фактора. Биохимическую основу модификации составляет индуцибельный синтез ферментов, заключающийся в индукции и репрессии соответствующих структурных генов, контролируемых регуляторными генами. Стафилококки только в присутствии пенициллина синтезируют фермент, разрушающий данный антибиотик. К модификациям можно отнести также запрограммированные изменения генетической информации, в основе которых лежат миграции гена на хромосоме и встраивание его с разной частотой в определенные локусы, в результате чего происходит изменение признаков. Модификации могут возникать под непосредственным действием антибиотиков, например пенициллина. Образующиеся при этом L- формы бактерий, лишенные клеточной стенки, могут сохраняться и даже размножаться внутри клеток хозяина и вновь реверсировать к исходной форме после прекращения действия пенициллина. 25.Мутации. Типы мутаций. Фенотипическое проявление мутаций у микроорганизмов. Мутации — это изменения в последовательности отдельных нуклеотидов ДНК, которые фенотипически ведут к таким проявлениям, как изменения морфологии бактериальной клетки, возникновение потребностей в факторах роста. Мутации могут быть спонтанными, т.е. возникающими само- произвольно, без воздействия извне, ииндуцированными. Точенные спонтанные мутации возникают в результате ошибок при репликации ДНК, что связано с таутомерным перемещением электронов в азотистых основаниях. По фенотипическим проявлениям мутации подразделяютна: 1) морфологические, в результате которых изменяется ряд морфологических признаков 2) биохимические, среди которых отмечены следующие: • определяют зависимость от дополнительных факторов роста, или ауксотрофные; • обеспечивают устойчивость к ингибиторам, антибиотикам, бактериоцинам, ядам или бактериофагам; • связаны с чувствительностью к повышенной температуре (условно-летальные); 26.Генетические рекомбинации. Трансформация. Трансдукция (неспецифическая и специфическая). Конъюгация. Генетическая рекомбинация — это взаимодействие между дву- мя ДНК, обладающими различными генотипами, которое приво- дит к образованию рекомбинантной ДНК, сочетающей гены обоих родителей. Конъюгация Передача генетического материала от клетки-донора в клетку- репипиент путем непосредственного контакта клеток называется конъюгацией. Необходимым условием для конъюгации является наличие в клетке-доноре трансмиссивной плазмиды. Трансмиссивные плазмиды кодируют половые пили, образующие конъюгационную трубочку между клеткой-донором и клеткой-реципиентом, по которой плазмидная Д Н К передается в новую клетку. Механизм передачи плазмидной ДНКиз клетки в клетку заключается втом, что специальный белок знает определенную последовательность в Д Н К плазмиды Затем цепь ДНК, с которой связан белок, переносится в клетку-реципиент, а неразорванная комплементарная цепь остается в клетке-доноре. Клетки- доноры, обладающие F-фактором, обозначаются как Р+-клетки, а клетки-реципиенты, не имеющие F-фактора, обозначаются как F - клетки. Трансдукция Трансдукцисй называют передачу бактериальной ДНК посред- ством бактериофага. В процессе репликации фага внутри бактерий фрагмент бактериальной ДНК проникает в фаговую частицу и переносится в реципиентную бактерию во время фаговой инфекции. Существует два типа трансдукции: общая трансдукция — перенос бактериофагом сегмента любой части бактериальной . Специфическая трансдукция наблюдается в том случае, когда фаговая ДНК интегрирует в бактериальную хромосому с образованием профага. В процессе исключения ДНК- фага из бактериальной хромосомы в результате случайного процес- са захватывается прилегающий к месту включения фаговой ДНК фрагмент бактериальной хромосомы, становясь дефектным фагом Трансформация Процесс трансформации может самопроизвольно происходить в природе у некоторых видов бактерий, В. subtilis, И, influenzae, S. pneumoniae, когда ДНК, выделенная из погибших клеток, за- хватывается реципиентными клетками. Процесс трансформации зависит от компетентности клетки-реципиента и состояния до- норской трансформирующей ДНК. Компетентность — это способность бактериальной клетки поглощать ДНК. Трансформирующей активностью обладает только двунитевая высокоспирализованная молекула ДНК. Это связано с тем, что в клетку-реципиент проникает только одна нить ДНК, тогда как другая — на клеточной мембране — подвергается деградации с вы- свобождением энергии, которая необходима для проникновения в клетку сохранившейся нити. 27.Дезинфекция. Основные группы дезинфицирующих и антисептических веществ, механизмы действия Дезинфекция— комплекс мероприятий по уничтожению во внешней среде не всех, а только определенных возбудителей инфекционных заболеваний. Различают механический, физический и химический способы дезинфекции. Механическийметод заключается в удалении микроорганизмов без их гибели путем встряхивания, выколачивания, влажной уборки . Физический метод предполагает воздействие на микроорганизмы высокой температуры, УФ-излучения. Кипячение применяют для дезинфекции хирургических инструментов, игл, резиновых трубок. Пастеризация — это обеззараживание многих пищевых продуктов, где уничтожение спор не происходит УФ-лучи применяют для дезинфекции воздуха в микробиологических лабораториях, боксах, операционных. Галогенсодержащие соединения. Гипохлориты, органические соединения хлора , хлороформ и другие, оказывают выраженное антимикробное действие на большинство бактерий, вирусов и простейших. Окислители. Механизм антимикробного действия окислителей связан с выделением атомарного кислорода, который оказывает на микроорганизмы сильное повреждающее действие. Наибольшей антимикробной активностью обладают катионные вещества, из которых широкое применение получили четвертичные аммониевые соединения. Они широко используются в качестве антисептиков. Спирты. Чаще всего используются в медицине алифатические спирты (этанол и изопропанол) как антисептическое средство (70% спирт для обработки рук хирурга, 90—95% спирт для дезинфекции хирургических инструментов). Спирты вызывают коагуляцию бел- ков микробной клетки, однако грибы, вирусы и споры бактерий обладают к спиртам выраженной устойчивостью. Альдегиды характеризуются дезинфицирующими, антисептическими и химиотерапевтическими свойствами. Формалин используют для обработки рук и стерилизации инструментов, а также для дезинфекции белья, одежды и особенно обуви. 28.Стерилизация. Методы стерилизации. Стерилизация — освобождение от всего живого, полное уничтожение в материалах всех микроорганизмов и их спор. Различают физические, химические и механические способы стерилизации. Прокаливанием на пламени спиртовки стерилизуют металли- ческие инструменты, бактериологические петли, иглы, пинцеты, предметные стекла. Стерилизация сухим жаром применяется для обеспложивания стеклянной посуды, пробирок, колб, чашек Петри и пипеток. Для этой цели используют сухожаровые шкафы (печи Пастера), в ко- торых необходимый эффект достигается при температуре 160 °С в течение 2 ч или при температуре выше 170 "С в течение 40 мин. Стерилизация паром под давлением .Паром под давлением стерилизуют раз- личные питательные среды (кроме содержащих нативные белки), жидкости, приборы, резиновые предметы, стеклянную посуду с резиновыми пробками. Стерилизация текучим паром (дробная стерилизация) — это обеспложивание объектов, разрушающихся при температуре выше 100 °С .Обеспложивание проводят в паровом стерилизаторе при открытом спускном кране и незавинченной крышке или в аппарате Коха по 15—30 мин в течение 3 дней подряд. Тиндализация — это стерилизация материалов, легко разрушаю- щихся при высокой температуре (сыворотки, витамины); стерильность достигается повторным прогреванием объекта при 60 СС по 1 ч ежедневно в течение 5—6 дней подряд. Лучевая стерилизация осуществляется либо с помощью у-излучения, либо с помощью ускоренных электронов, под влия- нием которых повреждаются нуклеиновые кислоты. Химическая стерилизация предполагает использование токсич- ных газов: окиси этилена, смеси ОБ (смесь оксида этилена и бро- мистого метила в весовом соотношении 1:2,5) и формальдегида. 29.Нормальная микрофлора тела человека, ее значение в физиологических процессах и роль в патологии. Функции нормальной микрофлоры • Создание колонизационной резистентности • Регуляция газового состава, редокс-потенциала кишечника и других полостей организма хозяина. • Продукция ферментов, участвующих в метаболизме белков, углеводов, липидов, а также улучшение пищеварения и усиление перистальтики кишечника. • Участие в водно-солевом обмене. • Участие в обеспечении эукариотических клеток энергией. • Детоксикация экзогенных и эндогенных субстратов и метаболитов преимущественно за счет гидролитических и восстановительных реакций • Продукция биологически активных соединений • Иммуногенная функция. Микрофлора кожи. Основные представители микрофлоры кожи: коринеформные бактерии, плесневые грибы, спорообразующие аэ- робные палочки (бациллы), эпидермальные стафилококки, микро- кокки, стрептококки и дрожжеподобные грибы рода Malas-sezia. Микрофлора верхних дыхательных путей. В верхние дыхательные пути попадают пылевые частицы, нагруженные микроорганизма ми, большая часть которых задерживается и погибает в носо- и ротоглотке. Здесь растут бактероиды, коринеформные бактерии, •ч-мофильные палочки, лактобактерии, стафилококки, стрептокок- ки, нейссерии, пептококки, пептострептококки и др. Гортань, трахея, бронхи и альвеолы обычно стерильны. Пищеварительный тракт. Рот. Здесь обитают разнообразные бактерии: бактерои- ды, превотеллы, порфиромонады, бифидобактерии, эубактерии, фузобактерии, лактобактерии, актиномицеты, гемофильные па- лочки. Пищевод практически не содержит микроорганизмов. Желудок. Чаще всего встречаются лактобактерии, поскольку они устойчивы в кис- лой среде. Нередки и другие грамположительные бактерии: микро- кокки, стрептококки, бифидобактерии. Толстая кишка. Облигатная микрофлора представлена в основном бифидобактериями, эубактериями, лактобактериями, бактероидами, фузобактериями, пропионобактериями, пептострептококками, пептококками, клостридиями, вейлонеллами. Все они высокочувствительны к действию кислорода. Микрофлора мочеполового тракта. Почки, мочеточники, моче- вой пузырь обычно стерильны. В уретре встречаются коринеформные бактерии, эпидермаль- ный стафилококк, сапрофитные микобактерии (A/, smegmatis), не- клостридиальные анаэробы (превотеллы, порфиромонады), энте- рококки. Основными представителями микрофлоры влагалища у женщин репродуктивного возраста являются лактобактерии. Нормальная микрофлора влагалища включает бифидобакте- рии (встречаются редко), пептострептококки, пропионибактерии, превотеллы, бактероиды, порфиромонасы, коринеформные бак- герии, коагулазоотрицательные стафилококки. 30.Нормальная микрофлора желудочно-кишечного тракта, ее роль в физиологических процессах и патологии. Понятие о дисбактериозе. Препараты, используемые для лечения дисбактериоза. Рот. Здесь обитают разнообразные бактерии: бактерои- ды, превотеллы, порфиромонады, бифидобактерии, эубактерии, фузобактерии, лактобактерии, актиномицеты, гемофильные па- лочки, лептотрихии, нейссерии, спирохеты, стрептококки, ста- филококки, пептококки, пептострептококки, вейлонеллы и др. Анаэробы обнаруживаются прежде всего в карманах десен и зуб- ных бляшек. Пищевод практически не содержит микроорганизмов. Желудок. Чаще всего встречаются лактобактерии, поскольку они устойчивы в кис- лой среде. Нередки и другие грамположительные бактерии: микро- кокки, стрептококки, бифидобактерии. Тонкая кишка. Чаще всего встречаются лактобактерии, стрептококки и актиномицеты. Толстая кишка. Облигатная микрофлора представлена в основном бифидобактериями, эубактериями, лактобактериями, бактероидами, фузобактериями, пропионобактериями, пептострептококками, пептококками, клостридиями, вейлонеллами. Все они высокочувствительны к действию кислорода. Аэробные и факультативно анаэробные бактерии представлены энтеробактериями, энтерококками и стафилококками. Дисбактериоз Это клинико-лабораторный синдром, возникающий при делом ряде заболеваний и клинических ситуаций, который характеризу- ется изменением качественного и количественного состава нормо- флоры определенного биотопа, а также транслокацией определен- ных ее представителей в несвойственные биотопы с последующими метаболическими и иммунными нарушениями. Пробиотики — живые микроорганизмы (молочнокислые бак- терии, иногда дрожжи), которые относятся к обитателям кишеч- ника здорового человека, оказывают положительное воздействие на физиологические, биохимические и иммунные реакции орга- низма, через оптимизацию микрофлоры хозяина. В Российской Федерации зарегистрированы и широко используются следующие группы пробиотиков. • Бифидосодержащие препараты. • Лактосодержащие препараты. • Колисодержащие препараты, например колибактерин. И Пребиотики — препараты немикробного происхождения, не способные адсорбироваться в верхних отделах пищеварительного тракта. Они способны стимулировать рост и метаболическую актив- ность нормальной микрофлоры кишечника. Синбиотики — комбинация пробиотиков и ттребиотиков. Эти вещества избирательно стимулируют рост и метаболическую актив- ность индигенной микрофлоры. 31.Распространение микробов в природе. Микрофлора почвы, воды, воздуха, ее санитарно- гигиеническое значение. В почве живут спорообразующие палочки родов BacillusиClost- ridium. Непатогенные бациллы (Вас. megaterium, Вас. subtilisи др.) наряду с псевдомонадами., протеем и некоторыми другими бакте- риями являются аммонифицирующими, составляя группу гнилост- ных бактерий, осуществляющих минерализацию органических ве- ществ. Представители семейства кишечных бактерий (семейство Enterobacteriaceae) — кишечная палочка, возбудители брюшного тифа, сальмонеллезов и дизентерии, попав в почву с фекалиями, отмирают. В чистых почвах кишечная палочка и протей встре- чаются редко; обнаружение бактерий группы кишечной палочки (колиформные бактерии) в значительных количествах является показателем загрязнения почвы фекалиями человека и животных . В пресных водоемах находятся различные бактерии: палочковидные (псевдомонады, аэромонады и др.),кок- ковидные (микрококки), извитые и нитевидные (актиномицетьт). На дне водоемов, в иле увеличивается количество анаэробов.При загрязнении воды органическими веществами появляется большое количество непостоянных (аллохтонных) представителей микро- флоры воды, которые исчезают в процессе самоочищения воды. Вода — фактор передачи возбудителей многих инфекционных шболеваний. Вместе с загрязненными ливневыми, талыми и сточ- ными водами в озера и реки попадают представители нормаль- ной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, ци- тробактер, энтеробактер, энтерококки, клостридии) и возбудители кишечных инфекций (брюшного тифа, паратифов, дизентерии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций, криптоспори- диоза и др.). Некоторые возбудители могут даже размножаться в поде (холерный вибрион, легионеллы). Микрофлора воздуха Здесь обнаруживаются кокковидные и палочковидные бактерии, бациллы, клостридии, актиномицеты, грибы и вирусы. Воздух рассматривают как фактор передачи респираторных инфекций, при которых возбудитель передается воздушно-капельным или воздушно-пылевым путем. Солнечные лучи и другие факторы способствуют гибели микрофлоры воздуха. 32.Санитарно-показательные микроорганизмы и их использование для оценки микробной обсемененности объектов окружающей среды. Санитарно-показательные микроорганизмы используют в основном для косвенного определения возможного присутствия в объектах окружающей среды патогенных микроорганизмов. Их наличие свидетельствует о загрязнении объекта выделениями человека и животных, так как они постоянно обитают в тех же органах, что и возбудители заболеваний, и имеют общий путь выделения в окружающую среду. Санитарно-показательные микроорганизмы должны отвечать следующим основным требованиям: 1. должны обитать только в организме людей или животных и постоянно обнаруживаться в их выделениях; 2. не должны размножаться или обитать в почве и воде; 3. сроки их выживания и устойчивость к различным факторам после выделения из организма в окружающую среду должны быть равными или превышать таковые у патогенных микробов; 4. их свойства должны быть типичными и легко выявляемыми для их дифференциации; Прямой подсчёт количества бактерий. Проводят с помощью специальных камер (например, Петрова или Гельбера) либо специальных электронных счётчиков. Содержание СПМ выражают в титрах и индексах. Титр санитарно-показательных микроорганизмов — наименьший объем исследуемого материала (в мл) или весовое количество (в г), в котором обнаружена хотя бы одна особь санитарно-показательный микроорганизм. Индекс санитарно-показательных микроорганизмов — количество СПМ, обнаруженное в определённом объеме или количестве исследуемого объекта. 33. Морфология, ультраструктура и химический состав вирусов Вирусы - мельчайшие формы жизни, имеющие неклеточноестроение, облигатные внутриклеточные паразиты. Не имеют собственного биосинтетического и энергетического аппарата. Строение. Вирусная частица называется вирионом. Размеры вириона у самых мелких вирусов (парвовирус, полиовирус) составляют 20-25 ммк, у самого крупного (вирус натуральной оспы) - 450 ммк. Вирионы состоят из нуклеиновой кислоты и белка. НК расположена в центре вириона и является вирусным геномом. Она покрыта белковым чехлом-капсидом. Капсид построен из повторяющихся субъединиц - капсомеров - состоящих из одной или нескольких молекул белка. У просто устроенных вирусов имеется только НК и капсид (полиовирусы, аденовирусы). У сложных вирусов капсид покрыт дополнительной оболочкой - суперкапсидом или пеплосом, который состоит из липопротеинов или гликопротеинов. Между суперкапсидом и капсидом располоджен слой белка. Геном ДНК-содержащих вирусов. Однонитчатая линейная ДНК (парвовирусы). 2-нитчатая линейная (вирус герпеса0. 2-нитчатая кольцевая (папилломавирус). 2-нитчатая кольцевая с дефектом одной цепи (гепатит В). Геном РНК-содержащих вирусов. 1-нитчатая линейная + РНК (полиовирус). 1-нитчатая линейная -РНК (парагрипп). 1-цепочечная линейная фрагментированная-РНК (грипп). 2-цепочечная линейная фрагментированная (ротавирус). Геном вируса кодирует следующие виды белков: Структурные. Белки капсида, белки суперкапсида, некоторые ферменты. Неструктурные. Ферменты репродукции (ДНК- и РНК-полимеразы, белки регуляторы, ферменты, белки (протеазы). Функции вирусных белков: Защитная. Антигенная. Речепторная. Морфопоютическая. Регуляторная. Ферментативная. 34. Взаимодействие вируса с клеткой Цикл репродукции вирусов состоит из ряда последовательных событий: Специфическая адсорбция вируса на поверхности клетки Проникновение внутрь клетки Дезинтеграция вириона, освобождение НК. Синтез вирусных компонентов Сборка вириона. Выход из клетки. Адсорбция.Осуществляется за счет специфического взаимодействия рецептора вириона с комплементарными антирецепторами мембраны клетки хозяина. Проникновение.Пенетрация осуществляется путем эндоцитоза - образуется эндоцитарная вакуоль, содержащая вирион. Дезинтеграция вириона осуществляется клеточными ферментами, разрушающими капсид. Вирус на время как бы исчезает. Эта стадия называется эклипс. Синтез вирусных компонентов. У некоторых вирусов в цикле репродукции имеется стадия интеграции генома в геном клетки хозяина (вирусы герпеса, гепатита В, ВИЧ). Интегрированная вирусная ДНК называется провирусом. Выход вирионов из клетки может осуществляться двумя путями: Деструкция клетки (литические вирусы). Путем почкования через мембрану без деструкции клетки (вирус гепатита В). Персистенция вирусов (лат. persisto постоянно пребывать, оставаться) длительное пребывание вирусов в организме животных и человека, которое может вызывать развитие заболевания. Сегодня является общепризнанным мнение, что наиболее распространенной формой взаимодействия вируса с хозяином (человек, животные, насекомые, растения, бактерии) является персистенция, особенно ее скрытая форма. Персистенция вируса в организме может сопровождаться его выделением в окружающую среду. При скрытой форме персистенции такое выделение будет носить скрытый и, естественно, неконтролируемый характер, наиболее ярким примером которого служит персистенция вируса простого герпеса в чувствительных узлах тройничного нерва. До 35-летнего возраста вирусом герпеса заражается до 90% населения. Формы клинического проявления инфекционного процесса, вызываемого одним и тем же вирусом, могут глубоко отличаться друг от друга в зависимости от длительности пребывания вируса в организме. Так, при острой краснухе наблюдаются кожные высыпания, генерализованная лимфоаденопатия, сопровождающиеся незначительным повышением температуры. Через 3-5 дней наступает полное выздоровление. 35. Методы культивирования вирусов Культивирование вирусов. Путем заражения лабораторных животных. Путем заражения куриных эмбрионов. Путем заражения клеточных культур, которые получают из нормальных или злокачественных клеток человека, или животных. Виды клеточных колоний: полуперевиваемые перевиваемые. ПРОДОЛЖЕНИЕ В 36 ВОПРОСЕ 36.Виды клеточных культур. Способ получения. Использование для диагностики и профилактики вирусных инфекций. Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и лабораторных животных. Наиболее широкое применение нашли однослойные культуры трипсинизированных клеток, а также перевиваемые клеточные линии, которые получают из различных органов и тканей животных и человека. Эмбриональные ткани обладают большей потенцией к росту, чем ткани взрослых животных. Для культивирования вирусов в курином эмбрионе вируссодержащий материал вводят в амниотическую, аллантоисную Полость, желточный мешок, внутривенно, в мозг, в тело эмбриона, на аллантоисную мембрану. Специфические поражения в куриных эмбрионах развиваются в виде очагового поражения, диффузного помутнения оболочек, отека с обильными язвами, участками некроза, кровоизлияний, пустул, пузырьков и др. (рис. 24). Эти изменения эмбриона характеризуют специфический вирусный инфекцион-ный процесс. Репродукцию вируса в курином эмбрионе обнаруживают реакцией гемагглютинации. Культивирование вирусов проводят также в организме чувствительных лабораторных животных, особенно тех вирусов, которые не репродуцируются в культурах тканей и куриных эмбрионах. 37. Принципы и методы лабораторной диагностики вирусных инфекций. При постановке диагноза инфекционной болезни, как и при диагностике любых других заболеваний, основываются на жалобах больного, анамнезе болезни, эпидемиологическом анамнезе, результатах осмотра, данных лабораторных и инструментальных исследований. Из Эпидемиологического анамнеза мы можем выяснить, присуще ли заболеванию пациента заразительность ( болеет ли в настоящий момент или в определённые сроки до настоящего времени заболеванием со схожими симптомами люди из близкого окружения); в какие сроки укладывается инкубационный период заболевания (например, сыпь при эпидемическом сыпном тифе появляется на 4-6 день болезни, а при брюшном тифе на 8-10 день); Из анамнеза заболевания : порядок возникновения клинических симптомов заболевания ( например, при пищевых токсикоинфекциях, сначала появляется рвота, затем диарея, при холере-наоборот, диарея предшествует рвоте). Из анамнеза жизни пациента мы можем выяснить какими заболеваниями он переболел, тем самым можем сразу исключить из дифференциально-диагностического ряда ранее перенесённые инфекционные заболевания, сформировавшие специфический иммунитет (например, детские инфекции). Процесс специфической лабораторной диагностики основан на выявлении возбудителя и ответной реакции организма человека в ходе инфекционного процесса. Он состоит из трех этапов: сбора материала, транспортировки и его исследования в лаборатории. Лабораторные методы диагностики различны по чувствительности и специфичности. Чувствительность метода отражает вероятность того, что результат теста будет положительным у инфицированного пациента и определяется отношением общего числа положительных результатов к общему числу инфицированных пациентов. Критерий специфичности отражает вероятность того, что результат теста будет положительным у неинфицированного пациента, и его вычисляют как отношение общего числа отрицательных результатов к общему числу неинфицированных пациентов. 38. Вирусы бактерий – фаги. Фаги вирулентные и умеренные, их взаимодействие с бактериальной клеткой. Профаг. Лизогения. Фаговая конверсия. . Выделяют 5 основных типов бактериофагов в зависимости от типа нуклеиновых кислот (ДНК-содержащие и РНК-содержащие фаги), строения, типа симметрии: Нитевидные ДНК-содержащие фаги, которые лизируют клетки бактерий, несущих F-плазмиду. Фаги с аналогом отростка, РНК-содержащие И однонитевой ДНК-фаг. Фаги Т3 и Т7 с коротким отростком. Фаги с несокращающимся чехлом и 2-нитевой ДНК. Головка Т-фагов имеет кубический тип симметрии, довольно ригидна, состоит из белковой оболочки, построенной из отдельных субъединиц и заключенного в ней ДНКового генома, размеры головки около 100нм. Геном фагов образован спирально упакованной двойной нитью ДНК. Отросток (хвост) Т-фагов имеет длину около 100 нм, включает полый стержень, сконструированный по типу спиральной симметрии и мократительный чехол, присоелдиняющийся к воротничку, окружающему стержень головки. Чехол образован 120-140 белковыми молекулами. Взаимодействие с бактериальной клеткой строго специфично, т.е. они способны инфицировать бактерии только определенного вида. Происходит в несколько этапов. Адсорбция на бактерии происходит за счет наличия на поверхности бактериальной специфических рецепторов для бактериофага. Внедрение вирусной ДНК (инъекция фага). После адсорбции происходит расщепление фрагмента клеточной стенки лизоцимом, который содержится в капсиде фага. Репродукция фага. Происходит в 3 этапа: синтез фаговых белков, затем репликация нуклеиновых кислот, сборка фага. Существует другой тип взаимодействия, которыйназывают интегративным или интегративной инфекцией. Вызывают его умеренные фаги. В случае интегративной инфекции ДНК вируса встраивается в геном бактериальной клетки – образуется профаг. Репликация вирусной ДНК происходит вместе с бактериальной, полноценного синтеза вирусспецифических белков и НК фактически не происходит. Бактерия приобретает новые свойства – происходит лизогенная (фаговая) конверсия. Бактерии, содержащие профаг, называют лизогенными. Практическое применение бактериофагов. Фаготипирование и дифференцировка бактериальных культур. Эпидемиологические наблюдения – определение количества бактериофагов в водоемах позволяет оценить количество патогенных бактерий. 39. Антибиотики. Классификация антибиотиков по происхождению, механизму и спектру действия. Побочное действие антибиотиков на организм. Антибиотики – продукты жизнедеятельности (или их синтетические аналоги и гомологи) живых клеток (бактериальных, грибковых, растительного или животного происхождения), избирательно подавляющие функционирование других клеток- микроорганизмов, опухолевых клеток, применяемые для лечения инфекционных и опухолевых заболеваний. β– лактамные антибиотики: В основе молекулярного строения бета- лактамов лежит четырехчленное бета-лактамное кольцо, с которым связана их антимикробная активность. К ним относятся следующие группы:пенициллины, цефалоспорины, монобактамы, карбапенемы. Пенициллины: А) Препараты пенициллинов, получаемые путем биологического синтеза (биосинтетические пенициллины) бензилпенициллиновая натриевая соль феноксиметилпеницилин ( оспен, клиацил) бензилпенициллина новокаиновая соль бициллины Б)Полусинтетические - пенициллиназоустойчивые оксациллин клоксациллин диклосациллин метициллин - широкого действия и не устойчивые к пенициллиназе (аминопенициллины) ампициллин амоксициллин бакампицллин пенамециллин карбенициллин В)Комбинированные препараты, устойчивые к пенициллиназе: содержащие 2 пенициллина: ампиокс (ампициллин+оксациллин) клонокам ( ампициллин + клоксациллин) - пенициллины с ингибиторами бета- лактамаз • ампициллин/Сульбактам (Уназин) • амоксициллин/Клавулановая кислота («Аугментин», «Амоксиклав»,Кловацин», «Моксиклав», «Курам») • тикарциллин/Клавулановая кислота (Тиментин) пиперациллин\ тазобактам ( Тазоцин) Общие побочные эффекты антибиотиков Аллергические реакции Устойчивость микроорганизмов к антибиотику Дисбактериоз и как следствие: - кандидоз - реакции бактериолизиса - суперинфекция (эндогенная – сапрофиты и экзогенная – патогенны) - нарушение в обмене витаминов Токсические эффекты (нейро-, нефро-, гепато-, гемато-, ото-токсичность и др.) Эмбриотоксичность и тератогенность. 40. Сульфаниламидные препараты. Характеристика. Механизм действия. Побочное действие сульфаниламидов на организм Сульфаниламидные препараты — лекарственные средства, относящиеся к группе соединений с общей формулой (амид сульфаниловой кислоты) и обладающие химиотерапевтической активностью. МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ СУЛЬФАНИЛАМИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ Механизм действия сульфаниламидных препаратов представляет собой конкурентный антагонизм с парааминобёнзойной кислотой (ПАБК). ПАБК является соединением, необходимым для синтеза микробной клеткой фолиевой кислоты, без которой невозможен рост и размножение бактерий (ПАБК—>дигидрофолиевая кислота—> тетрагидрофолиевая кислота —> пуриновые и пиримидиновые основания —> РНК и ДНК). ПОБОЧНЫЕ ЭФФЕКТЫ СУЛЬФАНИЛАМИДОВ 1. Кристаллурия - выпадают микрокристаллы в канальцах почек за счет плохой растворимости препаратов, особенно ацетилированных производных. Наиболее часто вызывают кристаллурию норсульфазол, сульфадимезин. Не вызывают кристаллурию сульфадиметоксин и уросульфан. 2. Аллергические реакции в 5-10 %, чаще в виде лихорадки, красной сыпи (пятен) на коже. 3. Угнетение кроветворения с развитием лейкопении, агранулоцитоза, тромбоцитопении. 4. Гемолитическая анемия. 5. Фотосенсибилизация. 6. Нервно-психические нарушения (усталость, головная боль, парестезии, миалгии, невриты, головокружения, судороги). 7. Дисбактериоз, гиповитаминоз В1, В2, РР, В6, В12, пантотеновой кислоты. 8. Образование метгемоглобина, развитие гипоксии, ацидоза, цианоза, образование сульфогемоглобина. Для профилактики - восстановители и антиокислители - витамины С и Е, глюкоза. 9. Возможно угнетение функции половых желез и щитовидной железы. 41. Химиотерапевтические препараты. Понятие о химиотерапевтическом индексе. Основные группы химиотерапевтических препаратов, механизмы их действия. Химиотерапевтические препараты – это лекарственные вещества, используемые для подавления жизнедеятельности и уничтожения микроорганизмов в тканях и средах больного, обладающие избирательным, этиотропным действием. По направленности действия химиотерапевтические препараты делят на: 1) противопротозойные; 2) противогрибковые; 3) противовирусные; 4) антибактериальные. По химическому строению выделяют несколько групп препаратов: 1) сульфаниламидные препараты (сульфаниламиды) – производные сульфаниловой кислоты. Они нарушают процесс получения микробами необходимых для их жизни и развития ростовых факторов – фолиевой кислоты и других веществ. К этой группе относят стрептоцид, норсульфазол, сульфаметизол. 2) производные нитрофурана. Механизм действия состоит в блокировании нескольких ферментных систем микробной клетки. К ним относят фурацилин, фурагин. 3) хинолоны. Нарушают различные этапы синтеза ДНК микробной клетки. К ним относят налидиксовую кислоту, циноксацин. 4) азолы – производные имидазола. Обладают противогрибковой активностью. Ингибируют биосинтез стероидов, что приводит к повреждению наружной клеточной мембраны грибов и повышению ее проницаемости. К ним относят клотримазол, кетоконазол. 5) диаминопиримидины. Нарушают метаболизм микробной клетки. К ним относят триметоприм, пириметамин; 6) антибиотики – это группа соединений природного происхождения или их синтетических аналогов. химиотерапевтический индекс - показатель широты терапевтического действия химиотерапевтического средства, представляющий собой отношение его минимальной эффективной дозы к максимальной переносимой. Химиотерапевтический индекс — величина, выражающая отношение максимально переносимой (толерантной) или 50 % дозы химиотерапевтического средства к его минимальной (или 50 %) лечебной или ингибирующей (микробоцидной, микробостатической) дозе, или наоборот. 42. Лекарственная устойчивость бактерий, механизмы возникновения. Понятие о госпитальных штаммах микроорганизмов. Госпитальный штамм — это микроорганизм, изменившийся в результате циркуляции в отделении по своим генетическим свойствам, в результате мутаций или переноса генов (плазмид) обретший некоторые несвойственные «дикому» штамму характерные черты, позволяющие ему выживать в условиях стационара. Основные черты приспособления — это устойчивость к одному или нескольким антибиотикам широкого спектра действия, устойчивость в условиях внешней среды, снижение чувствительности к антисептикам[9]. Госпитальные штаммы очень разнообразны, в каждой больнице или отделении возможно появление своего характерного штамма со свойственным только ему набором биологических свойств. Антибиотикорезистентность — это устойчивость микробов к антимикробным химиопрепаратам. Бактерии следует считать резистентными, если они не обезвреживаются такими концентрациями препарата, которые реально создаются в макроорганизме. Резистентность может быть природной и приобретенной. Природная устойчивость. Некоторые виды микробов природно устойчивы к определенным семействам антибиотиков или в результате отсутствия соответствующей мишени, или в результате бактериальной непроницаемости для данного препарата. Приобретенная устойчивость. Приобретение резистентности — это биологическая закономерность, связанная с адаптацией микроорганизмов к условиям внешней среды. Генетические основы приобретенной резистентности. Устойчивость к антибиотикам определяется и поддерживается генами резистентности и условиями, способствующими их распространению в микробных популяциях. Приобретенная лекарственная устойчивость может возникать и распространяться в популяции бактерий в результате: • мутаций в хромосоме бактериальной клетки с последующей селекцией (т. е. отбором) мутантов. • переноса трансмиссивных плазмид резистентности (R-плазмид). • переноса транспозонов, несущих r-гены Реализация приобретенной устойчивости. • модификация мишени. • «недоступность» мишени за счет снижения проницаемости клеточной стенки и клеточных мембран или «эффлюко-механизма, когда клетка как бы «выталкивает» из себя антибиотик. • инактивация препарата бактериальными ферментами. |