Вирусология экзамен. Вирусология Экз. 1. Предмет и задачи ветеринарной вирусологии. История развития вирусологии

• Название: 1. Предмет и задачи ветеринарной вирусологии. История развития вирусологии
• Анкор: Вирусология экзамен
• Дата: 12.10.2022
• Размер: 0.56 Mb.
• Имя файла: Вирусология Экз.docx
• Тип: Документы; #730245
• страница: 2 из 11

16. Типы взаимодействия вируса с клеткой Известны три типа взаимодействия вируса с клеткой и несколько стадий: • продуктивный тип, завершающийся образованием вирусного потомства; • абортивный тип, не завершающийся образованием новых вирусных частиц, поскольку инфекционный процесс прерывается на одном из этапов; • интегративный тип, или вирогения, характеризующийся встраиванием вирусной ДНК в хромосому клетки-хозяина. 1. Первая стадия представляет собой адсорбцию варионов на поверхности клетки. 2. Вторая стадия состоит в проникновении целого вариона или его нуклеиновой кислоты внутрь клетки- хозяина. 3.Третья стадия называется депротеинизация. В ходе ее происходит освобождение носителя генетической информации вируса. 4. В ходе четвертой стадии на основе вирусной нуклеиновой кислоты происходит синтез необходимых для вируса соединений. 5.В пятой стадии происходит синтез компонентов вирусной частицы. 6. шестой стадии начинает формироваться новые ваприоны путём самосборки.7.Седьмая стадия - представляет собой выход вновь собранных вирусных частиц из клетки-хозяина.

17. Физическая структура вирусов. Одиночные вирусы имеют различную форму: округлую, палочковидную, кристаллическую и др. Внутри вириона содержится нуклеиновая кислота (ДНК или РНК), заключенная в белковую оболочку - капсид. По строению различают две группы вирусов: Простые: состоят из ДНК и одной белковой оболочки; размер - 15-150 нм; капсид чаще кристаллический, палочковидный Сложные: состоят из РНК и 2-3 оболочек: белковой, липо- протеидной и углеводной; размер - 80-350 нм; капсид чаще сферический.

18. Структура вирусов животных. Как и другие вирусы, вирусы животных представляют собой крошечные упакованные частицы, состоящие из белков и нуклеиновых кислот. Эти частицы состоят из белковой оболочки, капсида, и генетического материала, ДНК или РНК, находящегося внутри капсида. Вирусы также могут иметь суперкапсид, дополнительную липидную оболочку. Капсиды бывают разных форм. Одним из самых причудливо выглядящих (по крайней мере, по мнению автора) является вирус Эбола, имеющий длинную, нитевидную структуру, закрученную в петли. Ниже для сравнения приведен более «стандартный» вирус — чикунгунья, который выглядит как сфера, но на самом деле является икосаэдром с 202020 гранями. Геномы вирусов животных состоят из РНК или ДНК, которые могут быть как одноцепочечными так и двухцепочечными. Вирусы животных могут использовать ряд стратегий (включая некоторые удивительные и странные) для копирования и использования своего генетического материала, как мы увидим в следующих разделах. . Чтобы размножаться, вирус должен заразить клетку и перепрограммировать её для создания ещё большего количества вирусов. Первым ключевым этапом инфицирования является молекулярное распознавание: вирус животного имеет на своей поверхности специальные молекулы, которые позволяют ему связываться с рецепторами на внешней мембране клетки-хозяина. После прикрепления к клетке вирусы могут проникать внутрь различными способами: путём эндоцитоза, при котором мембрана прогибается внутрь; через специально образованные каналы в мембране клетки (через который можно вводить ДНК или РНК); или путем слияния с мембраной клетки и высвобождения капсида внутрь неё, что характерно для оболочечных вирусов. После того, как вирус использует ресурсы клетки-хозяина для синтеза вирусных белков и генетического материала, начинается сборка новых вирусных частиц, которые позже покинут клетку. Оболочечные вирусы животных, в процессе формирования, могут отпочковываться от клеточной мембраны хозяина, и покидая клетку захватывать часть её плазматической мембраны или внутренних мембран. В отличие от них, безоболочечные вирусные частицы, например риновирусов, обычно накапливаются в инфицированных клетках, пока клетка не лопнет и/или не умрет, и вирусные частицы не высвободятся наружу.

19. Культура ткани в вирусологии, классификация, принципы получения культур тканей. Большое распространение получили культуры клеток из эмбриональных и злокачественно перерожденных тканей, обладающих более активной по сравнению с нормальными клетками взрослого организма способностью к росту и размножению. В зависимости от техники приготовления различают три вида культур клеток: однослойные - клетки, способные прикрепляться и размножаться на поверхности химически нейтрального стекла лабораторной посуды в виде монослоя; суспензионные - клетки, размножающиеся во всем объеме питательной среды при постоянном ее перемешивании; органные - цельные кусочки органов и тканей, сохраняющие исходную структуру вне организма (применяются ограничено). По числу жизнеспособных генераций культуры клеток подразделяются на: первичные, способные размножаться только на первых генерациях, т.е. в нескольких пассажах после выделения из тканей; перевиваемые, или стабильные, способные размножаться в лабораторных условиях неопределенно длительный срок посредством постоянного пассирования; полуперевиваемые, имеющие ограниченную продолжительность жизни (40 - 50 пассажей). Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчение ткани, разъединение клеток путем трипсинизации, отмывание полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующем суспендированием клеток в питательной среде.

20. Культура клеток и их преимущество перед лабораторными животными и куриными эмбрионами. Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые. Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови. Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование in vitro, и сохраняются на протяжении нескольких десятков пассажей. Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться in vitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др. К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых. О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток. Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности. Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты. Куриные эмбрионы.Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздействиям. Для получения чистых культур риккетсий, хламидий и ряда вирусов в диагностических целях, а также для приготовления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим изменениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его оболочках. О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами. К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очистку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препаратов. Лабораторные животные. Видовая чувствительность животных к определенному вирусу и их возраст определяют репродуктивную способность вирусов. Во многих случаях только новорожденные животные чувствительны к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки — к вирусам Коксаки). Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности выделения тех вирусов, которые плохо репродуцируются в культуре или эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных животных посторонними вирусами и микоплазмами, а также необходимость последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данного вируса, что удлиняет сроки исследования.

21. Первично-трипсинизированные, перевиваемые и диплоидные культуры клеток, их свойства и особенности. Разновидностью суспензионного культивирования является культи- вирование на микроносителях - клетки размножаются в прикрепленном наповерхности мельчайших полимерных частиц состоянии, которые сами находятся во взвешенном состоянии. Для культивирования клеток в виде монослоя пригодны к использованию пробирки в наклоненном положении, либо же специальные матрасы различной площади (от 25 см2 до 150 см2).Культивирование в суспензионном состоянии проводят в специальных аппаратах, называемых биореакторами, и только тех типов культур, которые обладают способностью размножаться во взвешенном состоянии. Существуют биореакторы нескольких типов, отличающихся по принципу работы – биореакторы с механическим механизмом перемешивания, газо-вихревые биореакторы, в которых перемешивание осуществляется за счет воздушного потока, подаваемого через среду, а также комбинированные биореакторы. Рабочий объем названных биореакторов может быть самым разным - от 2 до 28 000 л и даже больше. В зависимости от морфологии культивируемых клеток различают две основные разновидности культур клеток: эпителиоподобные и фибробластоподобные. Клетки первой разновидности характеризуются округлой формой, плотно прилегают друг к другу, формируя слой с очень маленьким количеством межклеточного пространства. Фибробластоподобные клетки представляют собой веретенообразные фибробласты, образуют волокна. Кроме того, существует еще один морфологический тип культур клеток – лейкоцитарная культура, представляющая собой размножающиеся in vitro лейкоциты. 1. Первичные культуры клеток – это культуры клетки, полученные непосредственно из живого организма. Их готовят только перед применением, так как для длительного культивирования они не пригодны. Можно получить первичную культуру из различных органов и тканей человека и животных, однако лучше это удается сделать из эмбриональных органов. Чаще всего используют почки, легкие, кожу, тимус, тестикулы эмбрионов или молодых животных. После соответствующей подготовки их измельчают на кусочки размером 1-2 мм и обрабатывают трипсином (такие культуры называют первично-трипсинизированными или просто первичными). Затем полученную взвесь клеток разливают по пробиркам или в другую посуду, заливают питательной средой, инкубируют в термостате и получают монослой клеток. Обычно он формируется через 3 - 5 дней. Скорость формирования зависит от вида ткани, возраста животного, качества питательной среды, посевной концентрации клеток и других факторов. Питательную среду меняют по мере ее загрязнения продуктами жизнедеятельности клеток. Монослой сохраняет жизнеспособность в течение 7 -21 дня. Из первичных клеток можно получить субкультуры путем снятия их со стекла раствором версена (или смесью версена и трипсина) и ресуспендирования в новой питательной среде. При этом процесс переноса клеток из одной системы в другую называется пассажем. Субкультуры сохраняются в пределах 2-5 пассажей и очень редко до 8-10. Последующие пассажи приводят к изменению морфологии клеток и их гибели.Первичные культуры полностью сохраняют генотип и фенотип исходных клеток, поэтому дают основание достоверно судить о характере взаимодействия вируса с клеткой. Тем не менее, использование первичных культур клеток имеет свои ограничения –ее недолговечность и большая вероятность контаминации другими вирусами. Первичные культуры клеток чаще культивируют в виде монослоя или на микроносителях. 2. Перевиваемые культуры клеток - это клетки, способные к размножению вне организма неопределенно длительное время. В лабораториях их поддерживают путем пересевов из одного сосуда в другой при условии замены питательной среды. Предполагается, что перевиваемой может считаться стабильная культура, которая пассировалась не менее 70 раз с 3-х дневными промежутками.Получают перевиваемые клетки из первичных культур клеток с повышенной активностью роста путем длительных пересевов в определенном режиме культивирования. Эта работа проводится в течение многих месяцев. Полагают, что механизм происхождения перевиваемых клеток — результат их генетической изменчивости. Клетки перевиваемых культур имеют одинаковую форму, гетероплоидный набор хромосом (у первичных культур он диплоидный), стабильны в условиях роста в пробирке, некоторые из них обладают онкогенной активностью. Последнее свойство ограничивает их использование при производстве вакцин. Перевиваемые клетки можно получить из здоровых и опухолевых тканей как животных, так и человека. Примеры перевиваемых культур клеток: ВНК-21 (baby hamster kidney; почка новорожденного хомячка); ППТ (перевиваемая почка теленка); ППО (перевиваемая почка овцы); Нер-2 (карцинома гортани человека); Hep -3 (лимфоидная карцинома человека) и др. 3. Диплоидные культуры клеток представляют собой линии, в оторых 75% клеток имеют кариотип, идентичный таковым клеток, из которой она выведена. По сути дела диплоидные культуры представляют собой перевиваемые культуры, но только с двойным (правильным) набором хромосом. В первых 50-60 пассажах такие культуры остаются диплоидными и их широко используют для решения ряда теоретических и практических задач биологии (приготовление биопрепаратов для человека, выделение онковирусов и др.). Они весьма жизнеспособны, не подвержены морфологическим изменениям, свободны от спонтанного вирусоносительства и т.д.

22. Суспензионные и монослойные культуры клеток. Монослойные культуры. Растут в один слой и если их вовремя не пересадить, то погибают. В случае Мон.Культ. необходимо проводить систем-кие пассажи клеток, используя для этого куль-ры предыдущ. рассева или музейные клетки, сохранившиеся в условиях консервации. Первичные клетки, которые делятся в культуре, могут претерпевать так называемое контактное торможение движения. Когда две клетки приближаются друг к другу, то в зоне контакта прекращаются специфические движения клеточной мембраны. Первичные клетки, следовательно, не могут расти друг над другом, и в большинстве случаев достижение полного монослоя сопров-тся прекращением клеточных делений. Большинство клеток млекопитающих могут расти только в виде монослоя, будучи прикрепленными к субстрату, другим клеткам или стеклу. М.К. имеют ряд преимуществ, являющихся предпосылками их широкого использования: 1. выделение секретируемого продукта многими клетками осуществляется эффективнее в случае их прикрепления к субстрату; 2. возможность быстрой и легкой замены питательной среды; возможность сопоставления времени и количества среды с периодом роста клеток или временем наработки продукта; 3. обеспечение наибольшей гибкости исследований, поскольку в монослой могут быть введены любые типы клеток; 4. достижение искусственно высокой плотности клеток с использованием перфузионной техники; Однако при использовании МК выявл-я и недостатки: 1. сложность масштабирования; 2. отсутствие информативности визуального анализа; 3. трудности с определением и поддержанием таких параметров, как кислотность и содержание О2 и обеспечением гомогенности культуры клеток; 4. необходимость значительных пространств.
Суспензионные культуры. Для наращивания клеточной массы удобнее использовать не монослойные, а СК. Как правило, клетки, отделившиеся от субстрата, на котором они росли, неспособны к росту в суспензии и быстро деградируют. Но если некоторые клетки культивировать во вращающемся флаконе (2 об/мин), не дающем возможности прикрепления клеток к поверхности, в среде, содержащей метилцеллюлозу, предотвращающую агрегацию клеток, можно получить жизнеспособные суспензионные клеточные штаммы.Суспензионное культивирование первичных и перевиваемых клеточных линий проводят в роллерных установках или ферментерах.Суспензионное культивирование дает, по меньшей мере, 2-3-х кратную экономию питательных сред, по сравнению с общепринятым стационарным монослойным культивированием при полном исключении дорогостоящих протеолитических ферментов и буферных растворов. Кроме того, суспензионные культуры представляются предпочтительными с точки зрения получения больших количеств биомассы.

23. Общие принципы диагностики вирусных болезней животных. Вакцины. Типы противовирусных вакцин. Быстрый и правильно поставленный диагноз обеспечивает успех в ликвидации вспышки болезни, так как позволяет четко выяснить эпизоотическую ситуацию и своевременно принять целенаправленные меры по оздоровлению поголовья животных с наименьшими потерями. Для постановки диагноза требуются сбор, изучение, анализ и сопоставление целого комплекса различных данных. На первом этапе диагностики используют данные, которые можно быстро собрать непосредственно в хозяйстве. К таковым относятся: эпизоотологические данные, включающие сведения об охвате болезнью данного поголовья животных, скорости и территориальном распространении болезни, видах заболевших животных, динамике выявления больных и т. д.; клинические признаки болезни. Они включают определение (по сравнению с нормой) температуры тела, частоты и формы дыхания, частоты пульса, нарушения аппетита, поведения, состояния кожных покровов и слизистых оболочек, функционирования органов пищеварения, выделения и т. д.; патологоанатомические изменения, которые обычно устанавливают при вскрытии павших или вынужденно убитых животных. Различают макроскопические изменения (по сравнению с нормой) формы, размера, цвета, консистенции, появление узелков, кровоизлияний, везикул и другие образования, не встречающиеся в норме, а также микроскопические изменения в клетках и тканях, обнаруживаемые гистологическими методами. Чаще всего на основании этих данных можно поставить предварительный диагноз, так как многие вирусные болезни имеют сходные эпизоотологические данные, клинические признаки и патологоанатомические изменения (например, парагрипп-3, вирусная диарея, инфекционный ринотрахеит, респираторно-синцитиальная и аденовирусная инфекции крупного рогатого скота или болезни Ньюкасла и грипп птиц и др.). Кроме того, часто болезнь может быть вызвана не одним, а двумя и более этиологическими агентами (например, вирусом и бактериями или двумя и более вирусами). Даже такое заболевание, как ящур крупного рогатого скота, можно довольно уверенно диагностировать по эпизоотологическим, клиническим и патологоанатомическим данным, однако требуются лабораторные исследования для определения типа и варианта возбудителя. Несмотря на ориентировочный характер предварительного диагноза, он играет весьма важную роль, так как ориентирует ветеринарных специалистов на проведение соответствующих мероприятий. Окончательный диагноз на вирусную болезнь в большинстве случаев может быть поставлен только с учетом результатов лабораторных исследований. В лабораторной диагностике вирусных болезней точность диагноза прежде всего зависит от правильности взятия материала (пробы) от больных и павших животных, его транспортировки, качества приготовления и техники исследования вирусного материала. Материал для исследования следует брать как можно быстрее после проявления четких признаков болезни или не позднее 1—2 ч после клинической смерти или убоя (позже начинается бактериальное обсеменение, и по мере продолжения инфекционного процесса количество вируса может уменьшаться в результате воздействия защитных механизмов организма).При взятии материала для выделения вируса следует исходить из патогенеза предполагаемой инфекции (входные ворота, пути распространения вируса в организме, места его размножения, клинические признаки и пути выделения). В лабораторию направляют тот материал, который с наибольшей вероятностью может содержать возбудителей болезни. При этом необходимо соблюдать следующие общие правила: материал должен быть взят строго асептически; материал должен быть немедленно законсервирован (помещен в термос с охлаждающей смесью или добавлением 50%-ного стерильного глицерина), чтобы предотвратить разрушение вирусов; материал удобнее брать в стерильные пробирки с резиновой пробкой или во флакончики из под антибиотиков. Для исследования вполне достаточно 5—10 г материала; на пробирках должна быть не смываемая этикетка; материал направляют с нарочным и сопроводительным письмом, в котором указывают хозяйство, вид больных животных, предварительный диагноз, вид и количество патологического материала, на что следует провести исследование, дату и фамилию врача. В зависимости от симптомов болезни, а значит, и локализации возбудителя от больного животного может быть взят следующий материал: смывы со слизистой оболочки носа, глаз, с задней стенки глотки, прямой кишки и клоаки у птиц. Берут их стерильными ватными тампонами, которые погружают в пробирки или флаконы, содержащие 3—5 мл соответствующей жидкости (раствор Хенкса, среды Игла, 199 и др.) с антибиотиками; содержимое везикул, пустул, стенки везикул, корочки на коже; ^ фекальные массы непосредственно из прямой кишки; кровь для выделения вируса и кровь для получения парных сывороток крови для обнаружения и определения титра антител. Для этой цели кровь берут дважды у одного и того же животного — в начале болезни и через 2—3 нед, т. е. в начале и в конце болезни. От трупов патологический материал должен быть взят не позднее 1—2 ч после клинической смерти или убоя животного. В качестве патологического материала берут кусочки органов, которые: имеют видимые отклонения от нормы; могут быть поражены и содержать вирус на основании клинической картины болезни; наиболее часто содержат вирус: селезенка, печень, легкие, почки, головной мозг, лимфатические узлы.В лаборатории часть материала берут для исследования, оставшуюся часть хранят в холодильнике на случай дополнительных исследований. Затем составляют план исследования присланного материала, который включает следующие задачи: обнаружение (индикация) вируса в материале; выделение (изоляция) вируса из материала; идентификация выделенного вируса; при необходимости требуется доказать этиологическую роль выделенного вируса.
Вакцины. Типы противовирусных вакцин. Единой, общепринятой, классификации вакцин нет. Основными критериями для классификации противовирусных вакцин могут быть: особенности биологических свойств, количество видов (типов) и жизнеспособностей (способностей к репродукции) штаммов, включенных в состав вакцин, а также технология их изготовления. В зависимости от биологической системы, используемой для культивирования вакцинного штамма, различают тканевые, лапинизированные, авианизированные и культуральные вакцины.
1,Тканевые вакцины в своей основе содержат какую- либо ткань сельскохозяйственных животных, в которой «раз множился» и накопился вакцинный штамм. Например, анти- рабическую вакцину для ветеринарных целен готовят из мозговой ткани овец, зараженных пастеровским «фиксиро ванным» штаммом вируса бешенства.
2.Лапинизированные вакцины являются разновидностью тканевых, их готовят из тканей крольчат, зараженных' адаптированным к ним вакцинным штаммом. В настоящее время выпускается 7 таких вакцин, главным образом против ящура и классической чумы свиней,
3.Авианизированные (эмбрион вакцины) готвят из экстраэмбриональных жидкостей и тканей развивающихся эмбрионов птиц, зараженных вакцинным штаммом. Наибо лее часто для этих целей используют эмбрионы кур, реже уток и японских перепелок. У нас в стране выпускают 13 эмбрионвакцин против классической чумы (гриппа) птиц, болезни Ньюкасла, инфекционного ларинготрахеита, инфекцион.бронхита, оспы птиц и вирусного гепатита утят.
4.Культуральные вакцины готовят из зараженных переживающих тканей или культур клеток, при этом чаще применяют роллерный (ротационный) или суспензионный (реакторный) метод культивирования тканей и клеток. (против ящура, бешенства, болезни Ауески, бо лезни Тешена, чумы кр. р. скота, классической чумы свиней, чумы плотоядных, вирусного энтерита норок, инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 кр. р. скота, трансмиссивного гастроэнтерита свиней, контагиозного пустуллезного стома тита (дерматита) овец и коз, миксоматоза кроликов, болезни Ньюкасла, болезни Марека и вирусного гепатита утят).
В зависимости от видовой принадлежности вакцинного штамма различают гомологические и гетерологические противовирусные вакцины.
1. Гомологические вакцины готовят из того вида ви руса, против которого предполагается создать иммунитет. Например, вакцины против бешенства готовят из ослабленных, атТенуированных штаммов вируса бешенства. Абсолютное большинство выпускаемых вакцин — гомологические.
2. Гетерологические вакцины готовят из вирусов дру гого вида, но имеющих в своем составе аналогичные анти гены и обладающие перекрестной иммуногенностью (явле ние параиммунитета). Например, вакцина против болезни Марека готовится из вируса герпеса индеек, но он защищает кур от болезни Марека.
В зависимости от количества типов или видов возбудителей, включенных в состав вакцины, различают моновалентные, поливалентные, ассоциированные и смешанные вакцины.
1.Моновалентные. содержат антигены одноготипа (вида) вируса.
2.Поливалентные (бивалентные, трехвалентные) готовят из нескольких серологических, типов одного вида вируса. Например, трехвалентная противоящурная фор- молзакцина из культурального вируса ящура А-О-С представляет собой смесь трех моновалентных вакцин.
3.Ассоциированные содержат антигены разных видов возбудителей. Например, вакцина «Бивак» против инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 кр. р скота, «Тетравак» против чумы, аденовироза, инфекционного гепатита и парвовирусного энтерита собак.
4. Смешанные вакцины являются разновидностью ассоциированных, представляют из себя смесь вирусных и бактерийных антигенов, например, вакцина против чумы пло тоядных," ботулизма и вирусного энтерита норок.
В зависимости от жизнеспособности (способности к репродукции) вируса, входящего в состав вакцины, все противовирусные вакцины подразделяются на живые и инактивированные (убитые).
1. Живые вакцины готовят из селекционированных авирулентных или слабовирулентных естественных (выделенных из природы) или из аттенуированных (искусствено ос лабленных) штаммов вирусов. Их называют еще «вирусвак- цинами». В настоящее время в ветеринарной практике при меняется 37 живых противовирусных вакцин.
2. Инактивированные (убитые) вакцины получают путем размножения производственного эпизоотического штам ма (неослабленного возбудителя) с последующей инактивацией (обезвреживанием) его с помощью физических или химических факторов.Понятие «убитые» вакцины, перенесенное из классической микробиологии, применительно к противовирусным вакцинам в какой-то мере условно: в большинстве ннактнвированных. вакцин обнаруживают жизнеспособных вирионов» кроме того, при совместном пребывании в клетке нескольких вирионов с поврежденным геномом в результате генетических и негенетических взаимодействий возможна реактивация, т. е. восстановление жизнеспособности вируса.В животноводстве, птицеводстве и звероводстве применяется 19 инактивированных вакцин.В зависимости от физического состояния вакцины могут быть сухими и жидкими.Наиболее часто живые вакцины выпускают в сухом виде. Все вышеперечисленные разновидности противовирусных вакцин можно считать «полновирионными», т. к. они содержат живых или убитых вирионов, включая геном (РНК или ДНК), белки и оболочки вируса.
Существуют еще химические противовирусные вакцины. Химические вакцины можно считать разновидностью инактивированных, но они не содержат в своем составе генома вируса, поэтому они безопасны. Различают две разновидности химических противовирусных вакцин: сплитвакцины и субъединичные вакцины.
1.«Сплитвакцины» готовят из продуктов химическо го расщепления вирионов, включая в состав вакцины все антигены, освобожденные от генома и липидов за счет чего снижается пирогенность вакцины.
2.Субъединичные вакцины содержат в своем со ставе только протективный антиген, против которого в орга низме вырабатываются вируснейтрализующие антитела.Субъединичные вакцины получают путем выделения необходимого антигена из разрушенных вирионов. При ряде инфекций (болезнь Марека, лейкоз) субъединичные вакцины готовят из вирусспецифических гликопротеидов клеточных мембран.Высокая стоимость субъединичных вакцин, полученных традиционными методами (культивирование, очистка, концентрация вируса, расщепление вирионов и выделение про-тективного антигена) сдерживает их широкое применение, однако в последние годы осваивается технология двух новыхразновидностей субъединичных вакцин: генноинженерных и синтетических.
1.Генноинженерные вакцины представляют из себя очищенные вирусные белки, полученные с помощью клониро ванных вирусных ДНК, при этом в качестве продуцента протективного антигена наиболее часто используют микро организмов (эшерихии, сенная бацилла' дрожжи), в плаз- миду которых «встраивают» ген, ответственный за синтез протективного антигена. Полученный трансформированный штамм культивируют в реакторах, он интенсивно нарабатывает нужный полипептид, который выделяет из бактериальной культуры после разрушения микроорганизмов с по мощью методов молекулярной биологии (изопикническое и скоростное зональное центрифугирование в комбинации с иммуноафииной хроматографией).Выход протективного антигена довольно высокий. Например, из трансформированной культуры эшерихии доля протективного антигена вируса ящура составляет 17% от общего бактериального белка. Таким путем за рубежом получены вакцины против ящура, вирусного гепатита В, гриппа, бешенства, герпеса.
2. Синтетические вакцины получают путем искусст венного синтеза полипептидов с определенным набором и последовательностью чередования аминокислот. Такой син тетический пептид должен соответствовать главной антиген ной детерминанте вируса, выполняющей функции протектив ного антигена. Для получения синтетической вакцины его связывают с Т-независимым носителем — полимерным анти геном, который может вызывать В-клеточный иммунный ответ и без участия Т-лимфоцитов.