Монография исследование водорослей.. Во́доросли. Аутентичного материала
 Скачать 2.99 Mb.
|
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| | Химическая структура |
| Иглокожие Arbacia lixula (Alves et al, 1997) | oso3- oso3-i i 2) 2) [->4)-a-L-Fucp-(l->4)-a-L-Fucp-(l->4)-a-L-Fucp-(l->4)-a-L-Fucp-(l->]n |
| Lytechinus variegates (Berteau; Mulloy, 2003) | oso3" oso3" oso3" 2) 2) 2) [->3-a-L-Fucp-(l->3)-a-L-Fucp-(l->3)-a-L-Fucp-(l->3)-a-L-Fucp-(l->]n 4) 4) t t oso3" oso3" |
47
| Ludwigothurea grisea (Alves et al, 1997; Berteau; Mulloy, 2003; Ribeiro et al, 1994) | oso3" oso3" oso3" 2) 2) 2) [->3)-a-L-Fucp-(l->3)-a-L-Fucp-(l->3)-a-L-Fucp-(l->3)-a-L-Fucp-(l->]n 4) t oso3- |
| Strongylocentrotus pallidus (Vilela-Silva et al., 2002) | oso3" oso3" oso3" oso3" Ф Ф Ф Ф 2) 2) 4) 4) [->3)-a-L-Fucp-(l->3)-a-L-Fucp-(l->3)-a-L-Fucp-(l->3)-a-L-Fucp-(l->]n |
| Бурые водоросли | 1 группа |
| Cladosiphon okamuranus (Nagaoka et al., 1999; Sakai et al, 2003) | GlcA(l i 2) ->3)-a-L-Fuc/> (1^3)-a-L-Fucp (1^3)-a-L-Fucp (1^ 4) t oso3- |
| Chordafilum (Chizhov et al., 1999) | a-L-Fucp-(l CH3OCO a-L-Fucp-(l Ф Ф Ф 2) 2 2) ^3)-a-L-Fucp-(1^3)-a-L-Fucp-(1^3)-a-L-Fucp-(l^ 4 4 4 T T T oso3" oso3" oso3" |
| Laminaria cichorioides (Zvyagintseva et al., 2003) | oso3" oso3" oso3" ф ф Ф 2) 2 2 ^3)-a-L-Fucp-(1^3)-a-L-Fucp-(1^3)-a-L-Fucp-(l^ 4) 4) 4) T T T oso3" oso3" oso3 |
48
| L. sachharina (Usov et al., 1998) | -03SO ct-L-Fucp (1 I I 2) 2) ^3)-a-L-Fucp-(1^3)-a-L-Fucp-(1^3)-ct-L-Fucp-(l^ 4) 4) 4) T T T oso3" oso3" oso3" |
| | 2 группа |
| Fucus distichus (Bilan et al., 2004) | oso3" oso3" oso3" oso3" ф ф ф Ф 2) 2) 2) 2) ^3)-a-L-Fucp-(1^4)-a-L-Fucp-(1^3)-a-L-Fucp-(1^4)-a-L-Fucp-(l^ 4) 4) t t oso3- oso3- |
| F vesiculosus (Patankar et al, 1993) | ^3)-a-L-Fucp-(1^3)-a-L-Fucp-(1^4)-a-L-Fuc/>-(l^ 4) 2) t t a-L-Fucp(l OS03" |
| F evanescens (Bilan et al., 2002) | oso3" oso3" oso3" oso3" Ф Ф Ф Ф 2) 2) 2) 2) ->3)-a-L-Fucp-(l->4)-a-L-Fucp-(l->3)-a-L-Fuc/)-(l->4)-a-L-Fuc/)-(l-> 4) t oso3- |
| F. serratus L (Bilan et al., 2006) | oso3- oso3- i I 2) 2) ->3)-a-L-Fucp (1^4)-a-L-Fucp (1^3)-a-L-Fucp (1^4)-a-L-Fucp (1^ (4 t l)-a-L-Fucp (4^1)-a-L-Fucp (3^1)-a-L-Fucp 4)-» |
| | 3 группа |
| Ecklonia kurome (Nishino et al., 1991b) | (1-ct-L-Fucp (3^1)-ct-L-Fucp-(3^ OS03 I I 2) 2 ->3)-ct-L-Fucp (1^3)-ct-L-Fucp (1^3)-ct-L-Fucp (1^ (4 (4 t t OS03" l)-(3-D-Galp-(4^ |
| L. gurjanovae (Shevchenko et al., 2007) | oso3" ососн3 oso3" Ф Ф Ф 2) 2) 2) ^3)-a-L-Fucp-(1^3)-a-L-Fucp-(1^3)-a-L-Fucp(l^ (4 (4 t t l)-(3-D-Galp-(4^ l)-(3-D-Gak%(4^ |
| Undaria pinnatifida (Lee et al, 2004) | so3- so3- so3- Ф Ф Ф 2 4 2 ^3)-a-L-Fucp-(1^3)-a-L-Fucp-(1^3)-a-L-Fucp-(l^ 4) 4) t t l)-(3-D-Galp-(4^ l)-(3-D-Gak%(4^ |
Ферменты, трансформирующие фукоиЬаны
В настоящее время информация о ферментативной трансформации фукоиданов, равно как и самих ферментах, принимающих в ней участие, чрезвычайно ограничена. Теоретически на фукоиданы может воздействовать достаточно большое количество ферментов разной специфичности: фуканазы, сульфатазы, галактаназы, маннаназы, ксиланазы, различные гликозидазы и т.д. Это могут быть как ферменты высоко специфичные к определенным структурным фрагментам субстрата, так и комплексы ферментов, которые могут совместно действовать на фукоиданы определенной структуры.
Несмотря на трудности, связанные с многообразием и сложностью структур фукоиданов, интерес к ферментам, катализирующим те или иные их превращения, постоянно растет. Он обусловлен возможностями использования ферментов в установлении структуры субстратов, для получения более простых биологически активных фрагментов фукоиданов, более подходящих для создания БАД или лекарственных препаратов.
ФукоиЬаназы. Распространение фукоиданаз
Классификация фукоиданаз до сих пор отсутствует, так как самих ферментов выделено немного. По состоянию на 2011 год в базе данных BRENDA содержатся сведения о 19 источниках фукоиданаз. Для большинства источников показано, что они могут синтезировать ферменты, гидролизующие фукоидан из той или иной бурой водоросли, при этом сведения о структуре субстрата часто очень ограничены, либо вообще отсутствуют. Только из одного источника был получен гомогенный препарат фермента, для двух ферментов изучена специфичность ( Colin et al., 2006, Kusaykin et al., 2006).
Учитывая структуру фукоиданов, имеющих основную цепь, построенную из остатков a-L-фукозы, связанных а-1^3 или а-1^4 связями, фукоиданаз может быть, по крайней мере, две. Первая должна катализировать гидролиз а-1 ^3 гликозидных связей между остатками фукозы в молекулах фукоиданов, вторая - а-1^4.
Фукоиданазы обнаружены в морских беспозвоночных и морских бактериях. В представителях наземной фауны и микроорганизмах фукоиданазы не найдены. Существует несколько публикаций, посвященных распространению фукоиданаз в морских бактериях — эпифитах бурых водорослей и ассоциантов голотурий (Бакунина и др., 2000) и морских беспозвоночных Японского моря (Кусайкин et al., 2003) (Табл. 2.3).
К настоящему времени фукоиданазы выделены из морских микроорганизмов (Vibrio sp. N-5 (Furukawa et al., 1992), Flavobacteriumsp. SA-0082, FucoidanobactermarinusSI-0098 (Sakai et al., 2002)), морских про-теобактерий (PseudoalteromonascitreaKMM 3296, KMM 3297, KMM 3298 (Бакунина и др., 2002)), морских беспозвоночных Haliotussp. (Thanassi and Nakada, 1967), Patinopecten yessoensis (Kitamura et al., 1992) Littorina kurila (Кусайкин и др., 2003)), морского ежа Strongylocentrotus nudus (Sasaki et al., 1996). Ранее было отмечено присутствие фукоиданазы, наряду с другими О-гликозид гидролазами, в экстракте гепатопанкреаса морского моллюска Littorinasp. (Elyakova et al., 1968). Подобный комплекс ферментов был найден и в кристаллическом стебельке моллюска Telescopiumtelescopium(Alexander et al., 1979).
51
Таблица 2.3 Распространение фукоиданаз среди морских бактерий
и беспозвоночных Японского моря
| Таксон | Общее количество образцов | Количество образцов, синтезирующих специфичные ферменты | Общее количество активных образцов | ||
| LcF* | FeF** | LcF, FeF | |||
| Бактерии | |||||
| Acinetobacter | 1 | 1 | 0 | 0 | 1 |
| Alteromonas/ Pseudoaltero monas | 30 | 2 | 1 | 16 | 19 |
| Bacillus | 1 | 0 | 1 | 0 | 1 |
| Corineforms | 6 | 1 | 1 | 3 | 5 |
| Cytophaga/ Flexibacter | 14 | 3 | 0 | 5 | 8 |
| Flavobacterium | 20 | 5 | 0 | 8 | 13 |
| Micrococcus | 5 | 1 | 1 | 1 | 3 |
| Pseudomonas/ Halomonas | 6 | 1 | 0 | 5 | 6 |
| Vibrio | 6 | 1 | 0 | 2 | 3 |
| Неидентифи-цированные | 8 | 1 | 0 | 4 | 5 |
| Всего | 97 | 16 | 4 | 44 | 64 |
| Беспозвоночные | |||||
| Cnidaria | 1 | 0 | 1 | 0 | 1 |
| Sipuncula | 1 | 0 | 1 | 0 | 1 |
| Arthropoda | 4 | 1 | 1 | 2 | 4 |
| Molluska | 15 | 0 | 4 | 9 | 13 |
| Echinodermata | 11 | 1 | 5 | 5 | 11 |
| Chordata | 1 | 0 | 0 | 1 | 1 |
| Всего | 33 | 2 | 12 | 17 | 31 |
*— фукоидан из L. cichorioides, сульфатированный 1->3-а-Ь-фукан
** — фукоидан из Е evanescens, сульфатированный 1->3;1->4-а-Ь-фукан
52
Выделение и очистка фукоиданаз
Основные схемы очистки фукоиданаз из различных организмов представлены в табл. 2.4. Все известные схемы включают осаждение сульфатом аммония, ионообменную хроматографию, гель-фильтрацию и отличаются многостадийностью и использованием весьма чувствительных методов разделения белков, таких как изоэлектрофокусирование и хроматофокусирование. Несмотря на использование самых современных методов очистки ферментов, в большинстве работ авторы получили частично- или высокоочищенные препараты фукоиданаз. Сообщений о выделении гомогенных фукоиданаз, необходимых для установления структуры, практически нет, за исключением фукоиданаз из гепатопан-креаса Patinopectenyessoensis(Kitamura et al., 1992) и штамма бактерии Vibriosp. N-5 (Furukawa et al., 1992), лишь для одной фукоиданазы, выделенной из бактерии FlavobacteriaceaebacteriumSW5, была установлена аминокислотная последовательность (Colin et al., 2006).
Таблица 2.4
Схемы очистки фукоиданаз
| Источник выделения, ссылка | Схема выделения | Субстрат |
| Vibrio sp. (Furukawa et al., 1992) | 1. Экстракция 2. Сульфатное осаждение (60%) 3. Хроматография на DEAE-Toyopearl 650M 4. Гель-фильтрация на сефакриле S-300 HR 5. Хроматофокусирование | фукоиданы из К. crassifolia Cladosiphon decipiens Futomuzuku |
| Flavobacterium sp. SA- 0082 (Pat. USA 6277616, 2001) | 1. Экстракция 2. Сульфатное осаждение (90%) 3. Анионообменная хроматография на DEAE- сефарозе FF 4. Гидрофобная хроматография на фенил-сефа- розе CL-4B 5. Гель-фильтрация на сефакриле S-200 или S-300 6. Гидрофобная хроматография на фенил-сефа- розе HP | фукоидан из К. crassifolia |
53
| Patinopecten yessoensis (гепатопанкреас) (Kitamura et al., 1992) | 1. Экстракция 2. Фракционирование сульфатом аммония 30%, 70% 3. Анионообменная хроматография на DEAE- Toyopearl 650 М 4. Изоэлектрофокусирование 5. Гель-фильтрация на сефакриле S- 300 HR | фукоидан из Nematocystus decipiens |
| Strongylocetrotusnudus(пищеварительная система) (Sasaki etaL, 1996) | 1. Экстракция 2. Сульфатное осаждение 3. Хроматография на DEAE-Toyopearl-650 M 4. Хроматография на сефарозе FF 5. Гель-фильтрация на сефакриле S-200 | 2-сульфо-а-1-фукопиранозил- (1-»2) -пириди-ламинид-фукоза |
| Haliotussp. (гепатопанкреас) (Sasaki etaL, 1996) | 1. Экстракция 2. Сульфатное осаждение (30-70%) 3. Хроматография на КМ-сефадексе А-50 | фукоидан из Fucus gardneri |
| Littorinakurila (гепатопанкреас) (Кусай- кин и др.., 2003) | 1. Экстракция 2. Сульфатное осаждение 3. Хроматография на DEAE-Toyopearl-650 M 4. Хроматография на сефарозе FF 5. Гель-фильтрация на сефакриле S-200 | фукоидан из F. evanescens |
| Pseudoalteromonas titrea (Bakunina et al., 2002) | 1. Экстракция 2. Сульфатное осаждение 3. Хроматография на DEAE-Toyopearl-650 M 4. Хроматография на сефарозе FF 5. Гель-фильтрация на сефакриле S-200 | фукоидан из F. evanescens |
Сведения о свойствах и специфичности фукоиЬаназ
Несмотря на интерес к фукоиданам, фукоиданазы остаются слабо изученными ферментами. В большинстве случаев для фукоиданаз определены лишь некоторые свойства: рН-оптимум, рН-стабильность, температурный оптимум, температурная стабильность, молекулярная масса, предположен тип действия и частично охарактеризованы продукты ферментативного гидролиза. Фукоиданазы, выделенные из различных источников, отличаются друг от друга своими физико-химическими
54
характеристиками и ферментативными свойствами (табл. 2.5). Их молекулярные массы варьируют в пределах от 39,5 кДа (Furukawa et al., 1992) до 460 кДа (Sakai et al., 2002). Изоэлектрические точки лежат как в кислой, так и в щелочной области рН. Фукоиданазы отличаются друг от друга также рН оптимумами действия. Для фермента из S. nudusон расположен при рН 3 (Sasaki et al., 1996), фермент из Fucoidanobactersp. SA-0082 наиболее активен при рН 5-9. рН-Оптимумы активности фукоиданаз моллюсков расположены в интервале от рН 5,0 до 9,0 (Kitamura et al., 1992; Thanassi and Nakada, 1967). В целом, рН-оптимумы ферментов из беспозвоночных находятся в более кислой области по сравнению с оптимумами рН ферментов, выделенных из бактерий.
Установлено, что фукоиданазы морской бактерии Vibriosp. N-5 и морского моллюска Haliotissp. ингибируются ионами Ag+ и двухвалентных металлов (Hg2+, Fe2+, Mn2+) (Furukawa et al., 1992; Thanassi and Nakada, 1967). ЭДТА, ионы Cu2+, Pb2+ не влияют на активность этих же ферментов, тогда как ионы Со2+, Mg2+ слабо активируют их активность.
Таблица 2.5 Физико-химические свойства фукоиданаз
| Источник | Фермент, изо-форма | Тип действия | Т-оптимум, °с | рН-Оптимум | рН-стабильность | Pi | Mr, кДа |
| Vibrio sp. No. 5 | El E2 E3 | экзо экзо экзо | 38-45 38-45 38-45 | 6,0 6,0 7,5 | 4,0-9,0 4,0-9,0 4,0-9,0 | 5,80 5,75 7,65 | 39,5 68,0 68,0 |
| 'Fucanobacter lyticus' SN-1009 | El | эндо | 30-35 | 6,5-8,0 | н.о. | н.о. | 100,0 |
55
| Pseudoalteromonas citrea KMM 3296, KMM 3297, KMM 3298 | El | ЭНДО | н.о. | 6,5-7,0 | н.о. | н.о. | н.о. |
| Mariniflexile fucanivorans SW5 | El | ЭНДО | 20-25 | 7,5 | н.о. | н.о. | 105,0 |
| Patinopecten yessoensis | El | ЭНДО | н.о. | n.d | н.о. | 7,4 | 85,0 |
| Haliotis sp. (rena-топанкреас) | El | ЭКЗО | 38 | 5,4 | 2,0-10,0 | н.о. | 100,0-200,0 |
| Littorina kurila | El E2 | ЭНДО | н.о. н.о. | 5,4 8,5 | н.о. н.о. | н.о. н.о. | н.о. н.о. |
| Strongylocentrotus nudus | El | ЭКЗО | 45 | 3,0-4,0 | 2,0-5,0 | н.о. | 130,0 |
н.о. — не определено
Температурные оптимумы большинства известных фукоиданаз лежат в области 38—45°С. Молекулярные массы ферментов эндо типа действия ниже, чем у ферментов экзо типа, что характерно и для других групп О-гликозид гидролаз.
Исследование и сравнение специфичности фукоиданаз затруднено из-за отсутствия субстратов с установленной структурой, структурного разнообразия последних, а также из-за сложностей, связанных с выделением индивидуальных ферментов.
Известно, что продуктами действия фукоиданаз на фукоиданы являются сульфатированные фукоолигосахариды, точная структура которых чаще всего не была установлена (Furukawa et al., 1992;
56
Kitamura et al., 1992; Pat. USA 6207652, 2001, Pat. USA 6277616, 2001). Возможно, что все известные фукоиданазы различаются по специфичности, так как в качестве субстратов при их изучении использовались фукоиданы, выделенные из разных источников, структура и моносахаридный состав которых значительно различаются.
Более подробные данные о структуре олигосахаридов — продуктов действия фукоиданазы из F. marinusSI-0098 на фукоидан из Kjellmaniellacrassifolia, приведены в работе (Pat. USA 6277616, 2001). Трисахаридные фрагменты — продукты, выделенные из инкубационной смеси, содержали галактозу, связанную а-1^3-гликозидной связью, D-маннозу, которая является точкой разветвления, имеющей в качестве заместителей D-глюкуроновую кислоту, связанную с маннозой (3-1^2-гликозидной связью, и L-фукозу, связанную а-1^3-гликозидной связью. Выделен также пентасахарид, содержащий D-маннозу, связанную а-1^3-гликозидной связью с глюкуроновои кислотой, и ряд других олигосахаридов (Pat. USA 6277616, 2001). Почти все продукты ферментативной реакции имеют на невосстанавливающем конце остатки 4-дезокси-£-эритро-гекс-4-енопиранозилуроновую кислоты, а на восстанавливающем конце — маннозы или ее сульфатированных производных. Авторы предполагают, что в фукоидане из К. crassifoliaприсутствуют чередующиеся дисахаридные фрагменты, построенные из глюкуроновои кислоты и маннозы. Вполне вероятно, что в выделенном из Е marinusSI-0098 препарате фермента наряду с фукоиданазой присутствует лиаза, которая расщепляет О-гликозидные связи по механизму (3-элиминирования. На это указывает присутствие среди продуктов реакции олигосахаридов, имеющих двойную связь в остатке глюкуроновои кислоты на невосстанавливающем конце.
Интересно, что ферментный препарат из морской бактерии F. marinusSI-0098 катализирует расщепление других фукоиданов, выделенных из бурых водорослей сем. Laminarinaceae — Undariapinnatifidaи Lessonianigrescens(Sakai et al., 2002).
В работе Furukawa (Furukawa et al., 1992) была предпринята попытка исследовать специфичность выделенных из штамма бактерии Vibriosp.N-5 фукоиданаз. Показано, что выделенные фукоиданазы (Е-1, Е-2 и Е-3) с одинаково высокой скоростью расщепляли фукоидан из К. crassifolia, несколько хуже - фукоидан из Cladosiphondecipiens, a Futomuzuku-фукоидан вообще не подвергался действию фермента.
Специфичность действия фукоиданаз из морской протеобактерии Pseudoalteromonascitrea(штаммы KMM 3296, KMM 3297, KMM 3298) была исследована (Бакунина и др.., 2002) при помощи фукоиданов из
57
Laminariacichorioidesи F. evanescens, различающихся структурными характеристиками (Табл. 2.2). Фукоидан из L. cichorioides(1^3-a-L-фукан) содержит в 2 раза больше сульфатных групп, чем фукоидан из F. evanescens(1^3;1^4-а-Ь-фукан). Фукоиданазы бактериальных штаммов КММ 3297 и КММ 3298 эффективнее катализировали расщепление фукоидана из L. cichorioides, тогда как ферменты штамма 3296 — фуко-идана из F. evanescens. При действии фукоиданаз из этих источников образовывались высокосульфатированные продукты с молекулярной массой от 1 кДа до 3,5 кДа, заметного количества фукозы и дисахари-дов не образовывалось. Авторы полагают, что исследуемые штаммы синтезируют фукоиданазы эндо-типа действия (Бакунина et al., 2002).
При действии щелочной фукоиданазы из L. kurila(pH 8,5) на фукоидан из F. evanescens(Кусайкин и др., 2003) выход низкомолекулярных сульфатированных продуктов (12>п>2) оказался в три раза выше, чем при действии на него кислой формы фукоиданазы. Это может быть связано с возможностью существования субстрата в протонированной и непротонированной формах. Под действием фукоиданазы при рН 5,4 из L. kurilaна фукоидан из L. cichorioidesобразуется в 3 раза меньше низкомолекулярных сульфатированных продуктов (12>п>2), чем при гидролизе фукоидана из Fevanescens(Кусайкин и др., 2003). Это может быть обусловлено большей доступностью для фермента О-гликозидных связей в низкосульфатированном фукоидане из F. evanescensпо сравнению с высокосульфатированным фукоиданом из L. cichorioides.
Для установления типа расщепляемой связи авторы (Kusaykin et al., 2006) выбрали продукты ферментативного расщепления фукоидана из F. evanescens, полученные под действием фукоиданазы штамма КММ 3296 и фукоиданазы из L. kurilaпри рН 8,5. Использованная в этой работе в качестве субстрата фракция фукоидана из F. evanescensотличалась от раннее описанной в работе Bilan (Bilan et al., 2002). По данным метилирования (Kusaykin et al., 2006) 1^3-связей в ней больше, чем 1^4- в 3,5 раза. В продуктах напротив, преобладали 1^4-связи. (1^3)-а-1-Фукан из L. cichorioidesтакже в небольшой степени подвергался гидролизу обоими ферментами. Из этих экспериментов следует, что в фукоиданах оба исследуемых фермента катализируют гидролиз доступных 1^3-связей и соответственно, являются (1^3)-а-Ь-фуканазами.
При действии препарата фукоиданазы из морского моллюска Littorinakurilaна фукоидан из бурой водоросли Fucusdistichusпроисходило расщепление некоторого количества гликозидных связей субстрата, но ни фукоза, ни низшие олигосахариды не образовывались (Билан и др., 2005). Главным продуктом является полисахарид,
58
построенный из повторяющихся дисахаридных звеньев -*3)-а-Ь-Fucp-(2,4-di-S03)-(1^4)-a-L-Fucp-(2S03)-(l^ и практически не отличающийся по структуре от исходного вещества. В качестве минорного компонента выделена полимерная фракция с углеводной цепью такого же строения, но содержащая сульфатные группы только в положениях 2 и ацетилированная по положениям 3 и 4 остатков фукозы. Вероятно, в этом случае ферментативный гидролиз фукоидана происходит только по гликозидным связям несульфатированных остатков фукозы, содержание которых в исходном полимере весьма невелико. Очевидно, что участки молекул исходного полисахарида, отклоняющиеся от его усредненной структуры, собраны в блоки, в которых сконцентрированы неполностью сульфатированные и ацетилированные повторяющиеся звенья.
В литературе имеются сведения о трансформации фукоидана под действием частично очищенного препарата фукоиданазы из гепато-панкреаса Pectenmaximus. (Daniel et al., 1999). Исследуемый ферментный препарат катализировал деградацию фукоидана из A. nodosum. Авторы показали, что при действии фермента на фукоидан в качестве продукта реакции образуются фрагменты с молекулярной массой около 3 кДа. Моносахаридные остатки в этих фрагментах соединены а-(1^3)-связью, кроме того, имеется 1^4-связанная фукоза. Сульфатные группы присоединены по С2 и, возможно, по С4 положениям остатков фукозы. В исследованной фракции также содержатся не-сульфатированные (1->3)- и (1^4)-связанные остатки a-L-фукозы (Daniel et al., 1999). Авторы этой работы не делают заключений о типе гидролизуемой связи.
Таким образом, в настоящее время исследованы несколько фукоиданаз из различных источников, определены их физико-химические характеристики, для некоторых их них установлен тип действия и специфичность. Остается надеяться, что трудности, связанные с выделением, определением активности и экспрессией генов фукоиданаз со временем будут преодолены, фукоолигосахариды, полученные методом ферментативной трансформации нативных фукоиданов будут выделены, их структура и механизм действия расшифрованы.