Бактериальной клетки. Основные морфологические формы бактерий и методы их изучения. Принципы классификации бактерий по Берджи
 Скачать 3.01 Mb.
|
|
прививки против одного и того же заболеванияпроводят неоднократно в течение жизни человека. 52. Реакции иммунитета с меченными компонентами. РИФ, ИФА, ИХА. Реакция иммунитета - это реакция между антигеном и антителом. Они характеризуются высокой чувствительностью (современные методики позволяют обнаруживать единичные молекулы антигена или антитела) и специфичностью, т.е. в реакцию вступают только соответствующие друг другу антиген и антитело. Для индикации АГ широко используются реакции иммунитета с меченными компонентами (чаще иммунные сыворотки). Это экспресс-методы индикации очень чувствительны и высокоспецифичные. К ним относятся реакция иммунофлюоресценции – РИФ, иммуноферментный анализ – ИФА, радиоиммунный анализ – РИА, иммунохроматографический анализ – ИХА. В качестве меток используются: 1) Флюорохромы – вещества, способные флюоресцировать при облучении ультрафиолетом (поглощают энергию света определенной длины волны и излучают свет большей длины волны): флюоресцеина изотиоцианат (зеленый цвет), фикоэритрин (оранжевый), родамин (красный); используются в РИФ. 2) Ферменты:пероксидаза хрена, галактозидаза, щелочная фосфатаза; вызывают расщепление субстрата с образованием окрашенных продуктов при взаимодействии с хромогеном; используются для ИФА. 3) Радиоактивные метки – используются в РИА. 1. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) - основана на том, что антитела иммунной сыворотки метят флюорохромами. Образовавшийся комплекс антиген-антитело легко обнаружить по наличию этой светящейся метки при люминесцентной микроскопии. Это так называемая реакция прямой иммунофлюоресценции. Недостатком прямого метода является необходимость приготовления широкого наборафлюоресцирующихантисывороток против каждого изучаемого антигена. Реакция иммунофлюоресценции может быть поставлена и в непрямомварианте реакции, когда свечение комплексу антиген-антитело придает меченная флюорохромом антиглобулиновая сыворотка, вступающая во взаимодействие с антителами иммунной сыворотки. Достоинством непрямой РИФ является использование лишь одной светящейся сыворотки (антивидовой или антикомплементарной) при обнаружении различных антигенов. Это значительно удешевляет реакцию. 2. Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) – в этой реакции ее компонент метят не радиоактивной или флюоресцирующей меткой, а ферментом (пероксидаза хрена), который при положительном результате реакции включается в комплекс антиген-антитело. При добавлении к такому комплексу соответствующего субстрата происходит реакция фермент-субстрат, что легко регистрируется по изменению окраски. Интенсивность окрашивания пропорциональна активности фермента, а количество фермента, присоединенного к твердой фазе, соответствует количеству АГ или АТ. Результаты реакции учитывают визуально. Для проведения ИФА необходимы полистироловые планшеты, имеющие лунки с плоским дном и автоматические пипетки. 3. Иммунохроматографический анализ (ИХА) — это иммунохимический метод анализа, основанный на принципе тонкослойной хроматографии и включающий реакцию между антигеном и соответствующем ему антителом в биологических материалах(моча, цельная кровь, сыворотка или плазма крови, слюна, кал и т. д.). Данный вид анализа осуществляется при помощи индикаторных полосок, палочек, панелей или тест-кассет, которые обеспечивают быстроту проведения тестирования. Принцип действия состоит в том, что при погружении тест полоски в биологическую жидкость (или другой жидкий образец), она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с ней движутся нанесенные на нижнюю часть тест-полоски меченые специфические антитела, которые аффинно связываются с анализируемым веществом. 53. Понятие иммунотерапии. Иммунобиологические препараты, применяемые для иммунотерапии. Иммунотерапия – этоиспользованиеиммунологическихзакономерностейдлялечениябольных. В основеданногометодалежитвоздействиенасистемуиммунитета: восстановление,регулирование, временное замещение или подавление ее функций. Для профилактики и лечения заболеваний большое значение имеет создание профилактических, диагностических и лечебных препаратов, объединяемых в группу иммунобиологических препаратов (ИБП). По современной классификации А. А. Воробьева иммунологические препараты включают: антигенные иммунобиологические препараты; иммунобиологические препараты на основеантител; иммуномодуляторы; адаптогены –сложные химические вещества растительного происхождения, обладающие широким спектром биологической активности, действующие на иммуннуюсистему; диагностическиепрепаратыисистемыдлявыявленияантигеновиантител,ферментов,прод уктов метаболизма, биологически активных веществ, чужеродных клеток для постановки кожных проб при аллергиях и иммунопатологическихсостояниях. Для иммунотерапии используются: антительные (иммунные сыворотки, гамма-глобулины, плазма) и значительно реже - антигенные (лечебные вакцины, аутовакцины или анатоксины) препараты. Для лечения заболеваний, возбудители которых продуцируют экзотоксин, острых тяжелых генерализованных форм, некоторых других бактериальных инфекций, используются препараты, содержащие готовые антитела, т.е. экстренно создающие пассивный искусственный иммунитет. Для этих целей используются антитоксические и антибактериальные сыворотки, иммуноглобулины и плазма. Антитоксические сыворотки содержат антитела против экзотоксинов. Их получают путем гипериммунизации животных (лошадей) анатоксином. Активность таких сывороток измеряется в АЕ (антитоксических единицах) или МЕ (международных единицах) - это минимальное количество сыворотки, способное нейтрализовать определенное количество (обычно 100) DLM токсина для животных определенного вида и определенной массы. Антитоксические сыворотки - противостолбнячная, противоботулиническая, противогангренозная, противодифтерийная. Применение антитоксических сывороток является обязательным при лечении соответствующих инфекций. Антимикробные сыворотки содержат антитела против клеточных антигенов возбудителя. Их получаютиммунизацией животных клетками соответствующих возбудителей, и дозируют в мл. Антимикробные сыворотки могут применяться при лечении: сибирской язвы, чумы, стрептококковых, стафилококковой, синегнойной инфекций. Их назначение определяется тяжестью течения заболевания и не является обязательным. Иммунотерапия антигенными препаратами имеет целью стимулировать собственные механизмы специфической защиты. Она применяется для лечения больных с хроническими, длительно, вяло текущими формами инфекций. Обычно используютубитые лечебные вакцины: гоновакцина, бруцеллезная лечебная, стафилококковая вакцины, вакцина СолкоУровак (для лечения хронических инфекций мочевых путей - содержит 6 штаммов кишечной палочки, протеев, клебсиелл и фекальных стрептококков). Особую отдельную группу лечебных вакцин представляют аутовакцины- это вакцины, приготовленные из убитых прогреваниемпри 70-80 о С в течение 1 часа штаммов возбудителей, выделенных от данного больного. Аутовакцины имеют определенные преимущества, т.к. продуцируют иммунный ответ на антигены конкретного возбудителя. При проведении иммунотерапии необходимо помнить, что: противовирусные антительные препараты не используются, т.к. антитела не действуют на внутриклеточные формы вирусов; лечение путем введения антитоксических сывороток должно быть начато, как можно раньше, не дожидаясь результатов микробиологического диагноза, т.к. серотерапия ими эффективна только до адсорбции (фиксации) токсина клетками организма; антитоксические иммунные сыворотки часто содержат лошадиный белок и введение таких сывороток пациентам допустимо лишь в случае отсутствия в течение 20-30 мин выраженной кожной реакции на лошадиную сыворотку (в/к, в разведении 1:100, в объеме 0,1 мл); в некоторых случаях возможно одновременное введение и антигенных, и антительных препаратов: например, при первичной хирургической обработке ран столбнячный анатоксин вводится вместе с противостолбнячным иммуноглобулином, а при множественных укусах животными людей в область головы и шеи, параллельно с антирабической вакциной вводится и специфический антирабический иммуноглобулин; использование иммуноглобулинов, полученных от иммунизированных людей, при иммунотерапии гнойно-воспалительных заболеваний стафилококковой этиологии и столбняка более эффективно, чем использование соответствующих иммунных антитоксических сывороток. 54. Практическое использование явлений иммунитета. Практическое использование учения об иммунитете идет в трех главных направлениях: иммунодиагностики, иммунопрофилактики и иммунотерапии. Иммунодиагностика - это использование иммунологических закономерностей для диагностики инфекционных и неинфекционных болезней. Она основана на использовании реакций иммунитета. Иммунопрофилактика - это использование иммунологических закономерностей для создания искусственного приобретенного иммунитета (активного или пассивного). Иммунопрофилактика бывает: специфическая (направленная против конкретного возбудителя) неспецифическая (активизация иммунной системы организма в целом) активная (выработка защитных антител самим организмом в ответ на введение вакцины) пассивная (введение в организм готовых антител) Для иммунопрофилактики можно использовать антигенные препараты (вакцины, анатоксины), при введении которых формируется искусственный активный иммунитет, или антительные препараты (иммунные сыворотки, иммуноглобулины, плазма), с помощью которых создается искусственный пассивный иммунитет. Иммунотерапия - это использование иммунологических закономерностей для лечения больных. Это раздел практической иммунологии, задача которого — лечение инфекционных больных иммунологическими препаратами: вакцинами, сыворотками иммунными, гамма- глобулинами и др. С этой целью используются антительные (иммунные сыворотки, гамма-глобулины, плазма) препараты. Сыворотки и гамма-глобулины применяют при острых формах заболевания (дифтерия, столбняк, ботулизм, цереброспинальный менингит и др.). Значительно реже используются антигенные (лечебные вакцины, аутовакцины или анатоксины) препараты. Вакцины вводят при лечении затяжных, вяло текущих и хронических форм инфекций (дизентерия, бруцеллёз, туляремия и др.). И сочетают с лечением антибиотиками и химиотерапией. 55. Реакции иммунитета. Механизмы взаимодействия АГ и АТ. Простые и сложные реакции иммунитета. Реакции иммунитета - это реакции между антигеном и антителом. Они характеризуются высокой чувствительностью (современные методики позволяют обнаруживать единичные молекулы антигена или антитела) и специфичностью, т.е. в реакцию вступают только соответствующие друг другу антиген и антитело. Реакцию иммунитета можно описать в виде простейшего равенства: АНТИГЕН + АНТИТЕЛО = РЕЗУЛЬТАТ. Исходя из принципа специфичности, результат реакции будет положительным, если антиген и антитело, участвующие в ней, соответствуют друг другу. Если же они не соответствуют, то результат будет отрицательным. Но каким бы он ни был (положительный или отрицательный), он всегда известен, т.к. регистрируется визуально или с помощью тех или иных приборных методов. Поэтому появляется возможность по известному результату и одному из компонентов реакции (антиген или антитело) определять второй, неизвестный компонент (соответственно, антитело или антиген). Таким образом все реакции иммунитета делятся на 2 большие группы. Первая - это реакции, в которых по результату и известному антигену определяют природу антител. Эти известные антигены представляют собой взвеси микроорганизмов (бактерий, грибов, вирусов) или их антигены, адсорбированные на тех или иных (эритроциты, частицы латекса) носителях. Такие препараты называются диагностикумы(соответственно, бактериальные, эритроцитарные, латексные). Вторая группа - это реакции, в которых по результату и известному антителу определяют природу антигена. Известный компонент реакций - антитела содержатся в стандартных диагностических (агглютинирующих, преципитирующих и т.п.) иммунных сыворотках, которые получают на специализированных производствах путем иммунизации животных соответствующими антигенами. Антитела могут быть сорбированы на тех или иных (эритроциты, частицы латекса, клетки стафилококков) носителях. Такие диагностические препараты называют антительные эритроцитарные (латексные, КоА-) диагностикумы. Эти два типа реакций можно представить в виде следующих равенств: АГ + хАТ=результат или хАГ + АТ=результат. С помощью реакций первого типа (определение антител) реализуется метод серодиагностики (серум-сыворотки). Реакции второго типа (определение антигенов) составляют сущность метода иммуноиндикации. Реакции иммунитета делят на простые (прямые, двухкомпонентные, осадочные) и сложные (непрямые, многокомпонентные). К первым относят реакции агглютинации и преципитации, ко вторым - РСК, РИФ, РИА и др Механизм взаимодействия АГ и АТ. 1. Любая реакция иммунитета начинается с взаимодействия антигена с антителом. Это так называемая иммунологическая фаза реакции. Она специфична, ноне видима. Она происходит в первые минуты реакции и сопровождается выделением тепла. В ходе этой фазы образуется комплекс антиген-антитело. Его дальнейшая судьба определяется различными факторами. Это и природа антигена (растворимый, корпускулярный) и характер реакции (прямые, осадочные или многокомпонентные, непрямые) и ряд других условий. 2. При прямых осадочных реакциях комплексы антиген-антитело, образовавшиеся в первой фазе, укрупняются и выпадают в осадок. Это вторая, физико-химическая фаза таких реакций. Она неспецифична, но зато видима. Для ее реализации необходим электролит. Оптимальным электролитом является физиологический раствор. Простые и сложные реакции иммунитета. К простым реакциям иммунитета относятся: 1. Реакция агглютинации - это склеивание и осаждение корпускулярного антигена (например, бактерий, эритроцитов, лейкоцитов и т.д.) под действием антител в присутствии электролита. Существуют различные модификации постановки реакции агглютинации: а) объемная агглютинация в пробирках (классическая); б) агглютинации на предметном стекле. Модификации реакции агглютинации имеют более высокую чувствительность и легче регистрируются. Широкое распространение получили реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА или РПГА), латекс-агглютинации, ко-агглютинации. В РПГА один из компонентов (антиген, или антитело) адсорбирован на эритроцитах, которые при образовании комплекса антиген-антитело склеиваются и выпадают в осадок. В латекс-агглютинации в качестве сорбента используют частицы латекса. В ко-агглютинации -в качестве сорбента -клетки стафилококков. Кроме вышеперечисленных необходимо упомянуть об еще одном варианте использования реакции агглютинации - определении антигенного строения возбудителей инфекционных заболеваний с целью определения (установления) их таксономического положения, т.е. их сероидентификация. Используемая для этой цели реакция применяется как заключительный этап бактериологического исследования и носит название реакция агглютинации по идентификации - это простая, прямая реакция иммунитета между известным антителом (агглютинирующей сывороткой) и неизвестным антигеном (чистой культурой исследуемых бактерий). Они используются для определения родовой - с помощью поливалентной агглютинирующей сыворотки, групповой - с помощью групповых агглютинирующих сывороток или видовой - с помощью моновалентных видовых агглютинирующих сывороток принадлежности бактерий. 2. Реакция преципитации - это осаждение антигена (полисахариды, токсины, ферменты, глобулины) из раствора под действием антител в присутствии электролита. Существует несколько методик для реализации этой реакции - преципитация в геле (агаре), кольцепреципитация, иммунофорез. По своей сущности реакция преципитации аналогична реакции агглютинации. Основным различием между ними является то, что в реакции агглютинации участвует корпускулярный антиген, а в реакции преципитации – растворимыйантиген. Реакция преципитации используется для определения токсигенности дифтерийных бактерий, концентрации иммуноглобулинов разных классов в сыворотке (реакция Манчини). К сложным реакциям иммунитета относятся: 1. Реакция связывания комлемента (РСК) - сложная, многокомпонентная непрямая реакция иммунитета. В ней участвуют две системы: исследуемая, состоящая из антигена и антитела (один из них неизвестен), и индикаторная, состоящая из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним, а также комплемент. Если в исследуемой системе |