паразитология. Паразитология и природная очаговость болезней. Лекция 15. Трансмиссивные и природноочаговые заболевания на территории Беларуси Лекция 16. Ветеринарносанитарные мероприятия по борьбе с возбудителями паразитарных
 Скачать 1.84 Mb.
|
|
Лейшмании (Leischmania). 52 Систематическое положение: тип Sarcomastigophora, класс Mastigophora, подкласс Zoomastigina, отряд Kinetoplastida. Паразиты позвоночных животных, которые переносятся насекомыми-москитами рода Phlebotomus. Простейшие существуют в двух формах: амастигота и промастигота (лептомонада). Амастигота - безжгутиковая стадия - внутриклеточный округлый паразит различных млекопитающих имеет округлое тело размером 2-5 мкм. Органеллы движения отсутствуют. Имеется ядро и кинетопласт. Эта стадия живет внутри фагоцитирующих клеток (макрофагов), которые «заглатывают» амастигот, но лизировать их не могут. Амастиготы размножаются в клетке, которая со временем разрушается, а выпавших из погибшей клетки амастигот поглощают другие фагоциты. Москиты во время кровососания на больных животных и людях заглатывают так же и амастигот (рис.10). Рис. 10. Амастиготы лейшманий в макрофаге В течение суток в кишечнике москита амастиготы трансформируются – тело их вытягивается и появляется жгутик. Таким образом, формируется промастигота (лептомонада). Тело этой стадии веретеновидное, 10-20 мкм в длину. Имеется длинный жгутик, обеспечивающий высокую степень подвижности. Размножаются промастиготы в кишечнике переносчика продольным делением. Через 4-5 дней простейшие мигрируют в преджелудок, а еще через 4-5 дней – в глотку. При следующем питании насекомого на хозяине промастиготы попадают в организм млекопитающего, где превращаются в амастиготную форму. Лейшмании цист не образуют. L. tropica вызывает кожный лейшманиоз человека и других млекопитающих (пендинская язва, болезнь Боровского). Основной симптом кожного лейшманиоза - образование на открытых частях тела на месте укуса москита долго незаживающей язвы. Для жизни опасности эта болезнь не представляет. Распространение: юг Европы, Азия (в том числе среднеазиатская часть СНГ), Центральная Америка. Различают антропонозный и зоонозный кожный лейшманиоз. Первая 53 разновидность распространена в основном, в городах, вторая – в сельских местностях. Источником возбудителей антропонозного лейшманиоза являются люди. Болеют так же и собаки, хотя эпидемиологическая роль их не выяснена. При зоонозном лейшманиозе источником заражения являются различные мелкие млекопитающие, чаще – грызуны (рис.11). Рис. 11. Пендинская язва (Кожный лейшманиоз). Основными природным носителями лейшманий этой формы являются большая и краснохвостая песчанки, зараженность которых местами достигает 100%. При анторопонозном лейшманиозе инкубационный период длится 2-8 месяцев и болезнь может тянуться десятилетиями. При зоонозном лейшманиозе инкубационный период не превышает 2 месяцев и болезнь заканчивается к 3-6 месяцу. L. donovani возбудитель висцерального лейшманиоза человека (кала-азар) и животных. Поражаются лимфатические узлы, печень и селезенка. Природный резервуар - в основном, собаки, а так же крысы и суслики. У животных поражается кроме внутренних органов так же и кожа, что повышает вероятность заражения москитов. У людей в крови и в коже простейшие практически не встречаются, так что передача заболевания от человека к человеку происходит очень редко. Болезнь проявляется бледностью, снижением аппетита. Затем начинается неправильная лихорадка с 2-3 пиками в течение суток. К 3-6 месяцу болезни сильно увеличивается селезенка. Наблюдается так же увеличение печени и лимфатических узлов. Развивается анемия. Без лечения болезнь продолжается 1,5-3 года может закончиться смертью больного. При своевременном лечении, как правило, наступает выздоровление. Различные подвиды L. donovani распространены в разных частях земного шара - в странах Южной Европы, Африки, на Ближнем Востоке, в Средней Азии (в том числе и в СНГ), в Китае, Индии, а так же в странах Южной Америки. 54 Диагностика основана на изучении окрашенных препаратов мазков из язвы (кожный лейшманиоз) или мазка из селезенки, печени или костного мозга (висцеральный лейшманиоз). Основной мерой профилактики лейшманиозов является борьба с москитами-переносчиками и животными-резервуарами заболевания (грызуны, собаки). Трихомонады (Trichomonas). Систематическое положение: тип Sarcomastigophora, класс Mastigophora, подкласс Zoomastigina, отряд Trichomonadida. Простейшие имеют округлое или слабо вытянутое тело длиной 5- 40 мкм. Органеллы движения - 3-5 свободных жгутиков и один образующий ундулирующую мембрану. Через все тело проходит аксостиль - опорная органелла, которая оканчивается шипом. Размножение бесполое - продольное деление. Патогенные виды поражают мочеполовую систему млекопитающих, вызывая воспалительные процессы - трихомониазы. Передаются половым путем. Есть также виды, населяющие пищеварительную систему. Трихомонада мочеполовая (T. vaginalis) паразитирует у человека, встречаясь с одинаковой частотой как у женщин, так и у мужчин. Вызывают воспаление слизистых оболочек половых органов. Из-за неправильного лечения (самолечения) появились штаммы трихомонад, которые устойчивы к большинству препаратов и вызывают хронический трихомониаз. Однако следует знать, что человек редко заражается только трихомонадами. Обычно регистрируется комплексное заражение трихомонозом, уреаплазмозом, хламидиозом и гонореей. Лечение таких «букетов» затруднено из-за того, что трихомонады могут фагоцитировать гонококков, хламидий, где они не подвергаются воздействию антибиотиков. T. foetus – паразит мочеполовой системы крупного рогатого скота. Симптомы - ранние аборты, яловость, снижение удоя. У быков регистрируется импотенция (рис.12). Рис. 12. Trichomonas foetus. Делящаяся особь. 55 Кишечная трихомонада (T. hominis) обитает в кишечнике человека. В южных странах случаются вспышки кишечного трихомониаза, который сопровождается диареей. Паразиты передаются через воду. Ряд видов трихомонад обитают в кишечнике различных животных (в том числе и сельскохозяйственных), однако патогенность их не доказана. Диагностика всех трихомонозов производится в основном микроскопическими методами. Профилактика мочеполового трихомоноза состоит в возможно раннем и полном выявлении и лечении инвазированных и их партнеров. В гинекологических учреждениях должны соблюдаться меры, исключающие возможность внутрибольничного распространения трихомоноза. Профилактика коровьего трихомоноза заключается также в выявлении больных животных и применении искусственного осеменения. 4 Паразитические инфузории, распространение, места обитания, экология, значения в жизни животных и человека. Балантидиаз - протозойная болезнь, вызываемая Balantidium coli, ха- рактеризующаяся язвенным поражением толстой кишки и симптомами интоксикации. Систематическое положение: тип Инфузории (Infusoria), класс Ресничные (Ciliata), отряд равноресничных (Holotrichia).Единственный вид инфузорий, паразитирующий у человека. В. coli - наиболее крупный из всех паразитических простейших ки- шечника человека. Размеры его вегетативной формы колеблются от 30 до 200 мкм в длину и 20-70 мкм в ширину, средняя длина -50-80 мкм. Тело овальное, асимметричное. Передний конец тела несколько сужен, задний - округлый, широкий. Снаружи тело покрыто оболочкой - пелликулой, придающей инфузории постоянную форму, но допускающей и некоторые изменения ее при движении. Под пелликулой в эктоплазме располагаются ряды базальных телец, от которых берут свое начало органоиды движения - реснички длиной до 4-6 мкм, выходящие через отверстия в пелликуле. Размножение балантидиев бывает бесполым и половым. При бесполом способе размножения происходит поперечное деление вегетативных форм на две дочерние особи. Иногда наблюдается многократное последовательное деление инфузорий под общей материнской пелликулой. Бесполое размножение встречается наиболее часто, наблюдается при исследовании испражнений больных и в культуре балантидиев. Периодически бесполое размножение паразита чередуется с половым размножением. 56 Вегетативные формы балантидиев при температурах, близких к комнатнымным, выживают в испражнениях до 30 ч, в водопроводной и сточной воде - до 7 суток, в кишечнике трупов - до 3 суток. При замораживании и температуре, близкой к +40°С, они сохраняются живыми до 1 ч. В желудочном соке с пониженной кислотностью балантидии выживают более 2 ч. При инцистировании инфузория покрывается двухслойной оболочкой, утрачивая свой ресничный покров. Цисты бывают овальной или шаровидной формы. Размеры их 50-60 мкм в диаметре. Цисты балантидиев отличаются значительной устойчивостью к различным факторам внешней среды. Во нлажной среде при комнатной температуре цисты не утрачивают своей жизненеспособности до 2 мес.; в сухом виде в затемненных местах они выжи-м.пот 1-2 нед.; при температуре 37°С, будучи высушенными, цисты сохраняю гея живыми около 2 сут. Прямой солнечный свет убивает их в течение 1ч. В желудочном соке цисты выживают около 12ч, в желчи-15 ч, а и моче - 10 дней. В 5% растворе карболовой кислоты цисты сохраняют жиз- неспособность до 3 ч, в 10% растворе формалина - 4 ч. Балантидии паразитируют в толстой кишке, наибольшее количество ихобнаруживается в слепой кишке. В лабораторных условиях балантидии гра мнительно легко культивируются на искусственных питательных средах(Павловой, Рейса и др.). У больных балантидиазом в испражнениях, как правило, обнаруживаются вегетативные формы балантидиев, реже - цисты. Источником заражения служат свиньи, которые заражены очень часто, но болезнь протекает чаще всего в скрытой форме. Балантидиаз протекает по типу кровавого поноса. Заболеванием страдают, в основном, работники свиноводческих ферм и владельцы частных хозяйств. Диагноз устанавливается на основании нахождения инфузорий и их цист в фекалиях. Профилактика заключается в строгом соблюдении правил личной гигиены. 5 Класс Споровики как группа исключительно паразитических простейших. Малярия — собирательное название для группы инвазий, вызываемых простейшими рода Plasmodium, с трансмиссивным механизмом передачи. Протекает циклически с рецидивами и проявляется лихорадочными пароксизмами, анемией и гепатоспленомегалией. Возбудители малярии относятся к типу Споровики (Sporozoa), отряду гемоспоридии (Haemosporidia), семейству Plasmodiidae, роду Plasmodium. Более 100 видов плазмодиев паразитируют у позвоночных жи- вотных: ящериц, птиц, грызунов, обезьян. Четыре вида могут паразитиро- 57 вать у человека: 1) P.vivax - возбудитель трехдневной малярии, 2) P.ovale - возбудитель ovale-малярии или типа трехдневной, 3) P.malariae - возбуди- тель четырехдневной малярии, 4) P.falciparum - возбудитель тропической малярии. Возбудители малярии отличаются друг от друга по своей морфоло- гии, по биологическим признакам (вирулентности, иммуногенности) и по способности вызывать разную клиническую картину заболевания. Таким образом, малярия - это полиэтиологичное заболевание, кото- рое может быть вызвано одним, двумя, тремя и даже всеми четырьмя ви- дами возбудителей. Жизненный цикл малярийных паразитов состоит из двух последова- тельных стадий развития: половой цикл (спорогония) в организме комара рода Anopheles и бесполый цикл (шизогония, что означает бесполое мно- жественное деление) в организме человека. Спорогония. Комары рода Anopheles заражаются при кровососании на больных людях или паразитоносителях (гаметоносителях), с кровью которых в желудок комара попадают половые формы плазмодиев - мужские и женские гаметоциты. Мужские (микрогаметоциты) делятся на несколько частей (эксфлагелляция), образуя 6-8 подвижных микрогамет. Женские гаметоциты, находящиеся в эритроцитах, пре- вращаются в неподвижные женские гаметы. В результате слияния муж- ских и женских половых клеток образуется подвижная зигота (оокинета). При этом возможно слияние половых клеток, сформированных различными популяциями паразитов, в разное время проникших в организм одного и того же переносчика. Это способствует обмену генетической информацией между генофондами популяций плазмодиев и повышение адаптационных способностей паразитов. Под наружной серозной оболочкой желудка комара оокинета округляется и превращается в ооцисту. В зависимости от числа половых клеток, попавших в желудок комара, образуется разное количество ооцист - от единичных до 500. Ооциста растет, в ней много- кратно делится ядро, и образуются спорозоиты, имеющие форму веретена. Число спорозоитов в ооцисте достигает нескольких тысяч. Созревшие ооцисты разрываются, спорозоиты попадают в гемолимфу и концентрируются в слюнных железах комара, где сохраняются до 45 дней, т. е. практически на протяжении всей жизни самки комара. Продолжительность спорогонии зависит от температуры воздуха. При температуре воздуха ниже +16°С плазмодии в комаре не развиваются. Шизогония. В организме человека плазмодии малярии проходят два бесполых цикла развития: 1) в клетках печени - экзоэритроцитарная (тканевая) шизогония и 2) в эритроцитах - эритроцитарная шизогония. 58 Заражение человека происходит при укусе комара, который вместе со слюной вводит в кровь человека малярийных паразитов на стадии спорозоита. Спорозоиты через 20-30 минут заносятся током крови в печень, где они проникают в гепатоциты. В клетках печени паразиты совершают цикл тканевой шизогонии: растут (стадия трофозоита), затем делятся (стадия шизонта) на тысячи мерозоитов. Все виды маля- рийных плазмодиев совершают в печени только один цикл развития, ко- торый длится у P.falciparum - 6 дней, у P.vivax и P. ovale - 8-9 дней и у P. malariae -14-16 дней. Этот цикл протекает бессимптомно и соответствует практически инкубационному периоду. В популяции P.vivax и P. ovale имеются 2 типа спорозоитов: тахиспорозоиты и брадиспорозоиты. Тахиспорозоиты (быстро проявляющиеся), попав в печень, совершают сразу же цикл тканевой шизогонии и вызывают заболевание с короткой инкубацией. Брадиспорозоиты (медленно проявляющиеся, «гипнозоиты»), попав в печень, совершают тканевой цикл развития только через 7-11 месяцев и позже, вызывая малярию с длительной инкубацией. Мерозоиты, образовавшиеся в клетках печени, выходят в кровь и внедряются в эритроциты, где совершают цикл эритроцитарной шизогонии, проходя те же стадии развития - трофозоит, шизонт, мерозоит. Мерозоиты, разрушая эритроциты, выходят в кровь и быстро проникают в новые эритроциты, повторяя аналогичный цикл развития. Каждый цикл эритроцитарной шизогонии длится у P.vivax, P.ovale и P.falciparum 48 часов, у P.malariae - 72 часа. Следует отметить, что все клинические проявления при малярии обусловлены только эритроцитарной шизогонией. Началом клиники является приступ лихорадки (малярийный пароксизм), который обусловлен массовым выходом мерозоитов в кровь и массовым разрушением эритроцитов. Последующие пароксизмы при трехдневной, ovale и тропической малярии будут наблюдаться через день, или на каждый третий день от начала первого приступа. При четырехдневной - приступы лихорадки через 2 дня, т. е. на каждый четвертый день от начала первого приступа. После нескольких циклов эритроцитарной шизогонии часть мерозоитов превращается в незрелые половые клетки - гаметоциты. Гаметоциты являются единственной стадией паразита, являющейся инвазивной для переносчика. При трехдневной, ovale и четырехдневной малярии гаметоциты появляются в крови больных уже с первых циклов эритроцитарной шизогонии, т. е. с первого дня болезни. Однако срок их жизни непродолжителен и ограничивается несколькими днями, поэтому пациенты сразу после выздоровления не представляют эпидемической опасности для окружающих. При тропической малярии гаметоциты медленно созревают и появляются в периферической крови только к 7- 59 10 дню болезни и могут длительно сохраняться в крови переболевших (до 18 недель). Малярийные плазмодии человека (Plasmodium). У человека паразитируют 4 вида плазмодиев: P. vivax, возбудитель трехдневной малярии. Экзоэритроцитарная шизогония длится 8 суток, эритроцитарная – 48 часов. Самый пластичный вид – развитие в комаре происходит при температуре от 16 до 35°С в течение 7-45 суток. Распространен на всех континентах. В печени человека некоторые спорозоиты способны находиться без развития до нескольких месяцев (брадиспорозоиты), в отличие от тахиспорозоитов – они развиваются быстро. Такое разделение спорозоитов - эволюционное приспособление паразита. При укусе комара в конце лета гаметоциты в крови больного образуются только следующей весной или летом, когда появятся комары. В России чаще всего встречается именно этот вид. В мазке крови обнаруживаются все эритроцитарные стадии. P. falciparum – возбудитель тропической малярии (эритроцитарная шизогония длится 48 часов, экзоэритроцитарная (в печени) – 6 суток). Этоменее пластичный вид. Развитие в комаре происходит в пределах 22-30°С (7-12 сут.). Распространена болезнь на юге Европы и Азии, северной Африке и на соответствующих широтах Америки. Пораженные эритроциты задерживаются в капиллярах паренхиматозных органов, где и происходит дальнейшее развитие плазмодия. Тропическая малярия имеет злокачественное течение: часто происходит отек легких и мозга, нарушается работа почек. Вследствие этих и других осложнений наступает смерть. Диагностика зачастую затруднена из-за частого отсутствия в периферической крови паразита. В мазке крови обнаруживаются только кольцевидные формы. Гаметоциты этого вида хорошо отличаются от других видов плазмодиев своей вытянутой, «бананообразной» формой. P. malarie – возбудитель 4-дневной малярии (эритроцитарная шизогония длится 72 часа, экзоэритроцитарная - 15 суток). Заболевание распространено в приэкваториальной части материков. Созревание спорозоитов в комаре происходит 10-12 дней при 26-28°С. Инкубационный период может достигать 50 лет. В мазке крови обнаруживаются все эритроцитарные стадии. P.ovale – возбудитель 3-дневной малярии (эритроцитарная шизогония длится 48 часов, экзоэритроцитарная - 9 суток). Болезнь распространена в очагах в экваториальной части Африки и Америки. Развитие спорозоитов в комаре идет при 25 С за 10 дней. Для очагов характерны именно такие климатические условия (чаще всего это 60 горная местность). В мазке крови обнаруживаются все эритроцитарные стадии. Иногда люди одновременно заражаются несколькими видами малярии. Развитие очага малярии невозможно в местностях, где количество дней с температурой выше 15°С меньше 30. При количестве дней с указанной температурой 30-90 вероятность эпидемии низкая; в районах, где более 150 дней создаются благоприятные условия возникновения эпидемии. В тропических странах часто имеет место скрытое (бессимптомное) носительство. Малярия занимает 5 место по причине смертности среди населения южных стран. По данным ВОЗ, ежегодно заболевают около 500 миллионов человек, и 2-3 миллиона из них умирают. Около 2,5 млрд. человек живет в зонах, неблагополучных по малярии. Проблема малярии всегда была актуальной в нашей стране. В дореволюционной России ежегодно болело до 3 миллионов человек. Благодаря активным действиям медицинских и других служб к 60-м годам в СССР малярия была полностью ликвидирована. Однако с началом войны в Афганистане стали часты завозные случаи, которые быстро лечили. Пик таких случаев пришелся на 80-е годы. В настоящее время в связи с массовой миграцией населения и высокой температурой летом в наших широтах появляются сообщения не только о завозных, но и о местных случаях малярии. В основном болеют переселенцы из Азербайджана и Таджикистана. Чаще всего регистрируется 3-дневная малярия. Профилактика малярии заключается в полном излечении больных для предотвращения распространения заболевания, а в активных очагах малярии наряду с этим проводится борьба с комарами-переносчиками. Кокцидии (Coccidia) Систематическое положение: тип Споровики (Sporozoa), отряд кокцидиевые (Coccidiida) Кокцидии являются внутриклеточными паразитами многих позвоночных и беспозвоночных животных. Органеллы движения у кокцидий отсутствуют. Развитие идет без смены хозяина, но с выходом в наружную среду. Заражение происходит при попадании зрелой ооцисты (содержит 8 спор) в кишечник с пищей или водой. Чаще всего поражаются органы пищеварительной системы - кишечник и печень. В клетках хозяина происходит шизогония, гаметогония и оплодотворение, в результате чего образуется ооциста, которая выходит наружу, где в ней происходит спорогония. У каждого вида кокцидий проходит перед гаметогонией строго определенное количество шизогоний. Кокцидии очень видоспецифичны. Они способны жить только в организме 61 определенного хозяина. Кокцидии разрушают эпителиальные клетки (до 500 миллионов в сутки), вследствие чего повреждаются кровеносные сосуды и нервные клетки. Нарушается целостность кишечной стенки, присоединяется вторичная инфекция. Переболевшие животные становятся носителями и служат постоянным источником инвазии. Широко распространенные виды способны вызвать массовое заражение и гибель молодняка сельскохозяйственных животных и птиц. Например, у кроликов в кишечникепаразитируют Eimeria magna, E. Intestinalis, E. Media, E. Caecicola, а в печени - E. Stiedae. . У человека в кишечнике паразитируют Isospora belli и I. hominis, которые встречаются очень редко. Цисты сохраняются несколько месяцев. Болезнь длится до 40 суток. Температура тела повышается до 39 ° С, начинается понос. Это заболевание опасно для людей с ослабленным иммунитетом, особенно для больных СПИД. Для них кокцидиоз может закончится смертью. Диагностика кокцидиозов основана на нахождении ооцист в фекалиях животных и человека. Профилактика кокцидиозов заключается в тщательном уходе за животными, правильном их кормлении. Молодняк изолируется от взрослых. Особое значение имеет своевременная уборка мест содержания животных, чтобы исключить заражение. В последнее время проводится вакцинация животных. Токсоплазма (Toxoplasma gondii) относится к тому же отряду, что и кокцидии. Это так же внутриклеточные паразиты, развивающиеся со сменой хозяев и с выходом в наружную среду. Основной хозяин – кошка, промежуточные – многие птицы, млекопитающие (включая человека). Кошки заражаются токсоплазмой при поедании мяса, содержащего скопления паразитов (цисты). В кишечнике кошки цисты разрушаются и токсоплазмы проникают в эпителий кишечника, где происходит шизогония с образованием мерозоитов, которые дают начало гаметоцитам. В результате оплодотворения образуется зигота, а затем и ооциста, выходящая наружу с фекалиями. Эти ооцисты после созревания становятся инвазионными для млекопитающих и птиц. В организме этих промежуточных хозяев спорозоиты выходят из ооцисты и поражают различные ткани, образуя в них скопления. Паразиты дугообразные, достигают 6 мкм в длину и 4 мкм в ширину. Скопление простейших покрывается оболочкой и становится цистой, которая долго сохраняется в мышечной и нервной ткани. Промежуточные хозяева могут заразиться либо ооцистами, либо цистами, содержащимися в мясе. Особенно опасно заражение токсоплазмозом беременных женщин, у которых трансплацентарно 62 заражается и плод. В последствии это приводит к нарушению развития плода и даже выкидышам. Токсоплазмоз распространен очень широко. В Париже 90% обследованных оказались носителями, в Германии – около половины. В Петербурге заражено более 30% жителей. В подавляющем большинстве случаев токсоплазмоз протекает бессимптомно. Особую опасность токсоплазмоз представляет для ВИЧ-инфицированных. У них часто поражается головной мозг и глаза. Диагностика чаще всего иммунологическая, реже – паразитологическая. Профилактика токсоплазмоза заключается в недопущении загрязнения детских песочниц кошачьими фекалиям, строгом соблюдении правил личной гигиены (мытье рук после контакта с землей, сырым мясом). Необходима тщательная термическая обработка мясных продуктов. Особенно внимательными должны быть беременные женщины. Пироплазмиды (Piroplasmida). Имеют неясное систематическое положение, вероятно, близки к споровикам. Представители этой группы простейших являются внутриклеточными паразитами многих млекопитающих, живущими в эритроцитах и некоторых других клетках. Размножение с чередованием поколений, сменой хозяев и без выхода наружу. Млекопитающие - промежуточные хозяева, в крови которых происходит бесполое размножение. Основными хозяевами и переносчиками пироплазмид являются иксодовые клещи. Причем клещи могут заражаться как от животных, так и передавать заболевание трансовариально (потомство зараженной самки клеща так же будет инвазировано). Болезнь протекает по типу лихорадки – повышенная температура, анемия, желтушность слизистых оболочек, кровавая моча. Особое значение имеют: Piroplasma canis - возбудитель кровомочки собак Babesia bovis - возбудитель северного бабезиоза КРС. Babesia ovis паразитирует в эритроцитах коз и овец. Возбудителями пироплазмидозов являются так же представители родов Theileria, Nutallia. Babesia divergens, Babesia rodhaini и Babesia microti являются возбудителями бабезиоза у человека. Впервые заболевание было зарегистрировано в Югославии в 1957 году. К настоящему времени зарегистрировано около 100 случаев заболевания. Болеют так же полевки, собаки, кошки и некоторые другие животные. Чаще всего заболевание протекает бессимптомно. У людей с резким нарушением иммунитета развивается почечная недостаточность и желтуха. Часто 63 присоединяется и вторичные инфекции - пневмония, сепсис. Без лечения болезнь оканчивается смертью в 80% случаев При диагностике пироплазмидозов исследуются окрашенные мазки крови. Профилактика заключается в выявлении и лечении больных животных, а также в предохранении их от нападения иксодовых клещей Лечение протозоозов. Обычно проводится медикаментозное лечение. При поражении кишечными простейшими (амебы, лямблии и др.), а так же трихомонадами назначают метронидазол (трихопол) и макмирор. При малярии назначают препараты хинина - хлорохин (делагил), мефлохин и др. Лейшманиозы и трипаносомозы излечиваются препаратами сурьмы и мышьяка. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ПРОТОЗООЗОВ Прижизненная диагностика простейших Нативный мазок. Для исследования кишечных простейших берут частицу фекалий и помещают ее на предметное стекло в каплю воды или физиологического раствора. После этого фекалии препаровальной иглой перемешивают с каплей воды и накрывают покровным стеклом. В фекалиях встречаются чаще всего цисты амеб, жгутиковых, споровиков и инфузорий. Реже встречаются и вегетативные формы (дизентерийная амеба, балантидий и другие). Для контрастирования разных объектов вместо воды используется раствор Люголя (кристаллический йод -1 г, йодистый калий -2 г, вода - 75 мл) (рис. 28 на цв. вклейке). Для исследования соскобов слизистых оболочек применяют тот же метод, но используют только физиологический раствор. Свежую кровь изучают довольно редко. Обычно это делают для выявления трипаносом. Для этого каплю крови помещают на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Изучение ведется на большом увеличении микроскопа. Трипаносомы прозрачны, но очень подвижны, поэтому об их присутствии можно догадаться по характерным движениям эритроцитов. Методы обогащения применяют для нахождения цист простейших при небольшой инвазии. Для выделения ооцист споровиков (кокцидии, ток-соплазмы) используют насыщенный раствор поваренной соли. Небольшое количество фекалий размешивают в десятикратном количестве соляного раствора, полученную суспензию процеживают через мелкоячеистое сито в сосуд и отстаивают около 15 минут. Ооцисты всплывают на поверхность. Проволочной петлей берут для исследования поверхностную пленку суспензии. 64 Для выделения цист амеб и жгутиковых применяют этот же метод, но вместо раствора поваренной соли рекомендуется насыщенный раствор сульфата цинка (ZnSO 4 ). Отстаивается суспензия в этом случае 30-40 минут. Весьма эффективным методом выявления цист простейших и яиц гельминтов служит формалин-эфирное осаждение. Для этого в центрифужные градуированные пробирки нужно налить 7 мл 10%-ного раствора формалина и добавить 1 г фекалий (такое количество фекалий, чтобы раствор в пробирке поднялся до 8 мл). Фекалии при помощи палочки смешать с формалином до образования однородной смеси. Процедить через воронку с металлическим ситечком или двухслойным бинтом в другую центрифужную пробирку (чтобы в новой пробирке процеженного раствора снова было 8 мл, если меньше, то дополнительно можно сполоснуть 10%-ным раствором формалина воронку с бинтом, через который процеживали раствор фекалий). Добавить в эту пробирку 2 мл эфира, т. е. до метки 10 мл, закрыть пробкой и энергично встряхивать в течение 30 с (встряхивать жела- тельно в вытяжном шкафу, в горизонтальном положении, придерживая при этом пробку). Смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 1 мин (или в течение 2 мин при 1500 об/мин). После центрифугирования в пробирке образуется 4 слоя: эфир, «каловая пробка», раствор формалина и на дне осадок, в котором будут содержаться яйца гельминтов и цисты простейших. «Каловую пробку» палочкой отделить от стенок пробирки и вместе с надосадочной жидкостью вылить, перевернув пробирку вверх дном, с краев пробирки убрать ватным тампоном лишнюю влагу, чтобы она не стекала на дно пробирки, перевернуть пробирку опять дном вниз. Осадок, оставшийся на дне пробирки (весь), нанести на предметное стекло пипеткой или непосредственно из пробирки; капли должны быть небольшими, по 2 капли на одном предметном стекле. При исследовании на цисты простейших в одну из капель осадка внести каплю раствора Люголя. Капли накрыть покровным стеклом (жидкость не должна выступать за края стекла или затекать на покровное стекло). Каплю с раствором Люголя исследуют на цисты и ооцисты простейших, а каплю без раствора Люголя исследуют на яйца и личинки гельминтов. Фиксация и окраска простейших При изучении паразитических простейших приходится прибегать в основном к использованию фиксированного и окрашенного материала. Для этого перед исследованием нужно приготовить достаточное количество предметных стекол и покровных стекол толщиной 0,17 мм (толщина 0,2 мм мало пригодна для изучения с использованием иммерсионной системы микроскопа). Толщина стекла 65 проверяется на ощупь - подходящее стекло слегка гнется между пальцами, а толстое гнется с трудом. Все стекла должны быть тщательно обезжирены. Для этого их нужно обработать смесью из равных количеств 96% спирта и эфира. В крайнем случае, можно просто протереть стекла чистой тряпочкой, смоченной 96% спиртом. То же относится и к предметным стеклам. Иногда стекла прогревают в пламени спиртовки. При протозоологических исследованиях используются в основном два метода окраски - метод Романовского - Гимза и метод Гейденгайна. Метод Романовского - Гимза. Обычно этот метод используется для окраски мазков и толстых капель крови. Его можно применить также и при окраске других субстратов (мазки и отпечатки из разных органов), но наилучшие результаты метод дает именно при окраске крови. При окраске содержимого кишечника неплохо окрашиваются, например, вегетативные формы лямблий. Приготовление тонкого мазка. Каплю крови берут у человека из 4-го пальца левой руки, либо из мочки уха. А у животного - из ушной раковины или хвоста. Место прокола обеззараживают спиртом, обезжиривают эфиром, затем делают прокол кожи стерильной иглой и первую выступившую каплю крови стирают сухой ватой. Следующую небольшую каплю снимают чистым сухим предметным стеклом, помещая ее в 1 см от правого края. Затем шлифованное покровное или предметное стекло ставят на стекло с кровью под углом 45° слева от капли. Далее коротким движением соединяют шлифованное стекло с каплей и, как только кровь равномерно распределится по ребру этого стекла, делают мазок, проводя ребром шлифованного стекла по предметному справа налево. Таким образом, капля распределится по стеклу более или менее равномерно. Правильно приготовленный мазок не должен доходить до края стекла. Далее мазок высушивается на воздухе (не нагревать!). В экспедиционных условиях мазок до фиксации необходимо предохранять также и от мух. После высыхания простым карандашом прямо на мазке делается надпись. После этого мазок нужно зафиксировать. Для этого этиловый или метиловый спирт наливают на мазок, или стекло погружают в стаканчик с одной из жидкостей. Фиксация длится 3-5 минут. Для фиксации очень удобно применять также раствор эозина метиленового синего по Май - Грюнвальду. При ее использовании лучше стекло с мазком погрузить в фиксатор. Если фиксатор налит на мазок, то ни в коем случае нельзя допускать высыхания фиксатора, иначе препарат в дальнейшем может быть испорчен. По истечении времени фиксации препарат нужно обмыть дистиллированной водой или, в крайнем случае, водопроводной. 66 Далее, на мазок наливают краску Романовского - Гимза, разведенную водой в соотношении 1-2 капли краски на 1 мл дистиллированной нейтральной воды. Окраска продолжается 30-45 минут. После этого проточной водой остатки краски нужно смыть, а мазок высушить. Смывать нужно осторожно. При отсутствии дистиллированной воды для промывания можно применять и водо- проводную. Мазок крови от трупа делают таким же способом. У мелких животных каплю крови удобно брать из сердца. При окрашивании этим методом эритроциты получаются розовыми, ядра лейкоцитов - темно- фиолетовыми, у кровепаразитов цитоплазма голубая или фиолетовая, ядро -фиолетовое или красно-фиолетовое. Если мазки делаются из консервированной крови или при добавлении в нее гепарина, то фон мазка после окраски будет розового цвета, избавиться от которого невозможно. Это является следствием окраски гемоглобина, попавшего в плазму крови при гемолизе. Приготовление толстой капли. При малом количестве кровепаразитов можно применять метод толстой капли, при котором в дальнейшем можно будет сэкономить время изучения препарата, так как одно поле зрения толстой капли примерно соответствует 70-80 полям зрения тонкого мазка. Для приготовления такого препарата капля крови не размазывается тонким слоем, а распределяется углом предметного стекла по другому стеклу до размеров 10-копеечной монеты. На одно стекло берут обычно 1-3 капли. Можно сделать и по- другому. По обычной методике сделать мазок и, пока он еще не подсох, нанести на него небольшие капли крови, которые сами распределятся по сырому мазку. Препараты также следует высушить, но ни в коем случае не нагревать. Обработку толстых капель фиксирующими жидкостями (спиртами, Мая - Грюнвальда) проводить нельзя. На высушенные капли сразу наливается раствор краски Романовского - Гимза, разведенной в соотношении 1-2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды. При этом происходит окраска ядер клеток и выщелачивание гемоглобина из эритроцитов. Продолжительность окраски 40-60 минут. После этого краска сливается со стекла, а стекло осторожно промывается путем погружения препарата в дистиллированную или водопроводную воду. Стекло мысушивают без нагревания. Тонкий мазок и толстая капля исследуются с применением иммерсионной системы. Для длительного сохранения мазки и капли можно приготовить на тонких (0,17 мм) покровных стеклах. После окраски и высушивания эти стекла можно наклеить канадским бальзамом на предметное стекло (естественно, мазком вниз). Мазки и толстые капли лучше всего обрабатывать сразу. Однако в полевых условиях это сделать не всегда удобно. В таком случае мазки 67 достаточно только зафиксировать. Без фиксации мазки не рекомен- дуется хранить больше 2-3 суток. Толстые капли, приготовленные несколько дней назад, перед окраской можно обработать дистиллированной водой, которую наливают на предметное стекло. Обработка длится 15-40 минут. После этого воду сливают и каплю окрашивают краской Романовского - Гимза по обычной методике. Метод Гейденгайна. Это более сложный метод, но зато он дает исключительно четкую картину. Для использования этого метода нужны следующие реактивы: 1. Жидкость Шаудинна. Состав: сулема (насыщенный водный раствор) - 2 части, 96% этиловый спирт - 1 часть, ледяная уксусная кислота - 5%. 2. 70% спирт. 3. Спирт-йод. К 70% спирту прибавить йодной настойки до цвета некрепкой чайной заварки. Точная концентрация йода несущественна. 4.96% спирт. 5. Дистиллированная вода. 6.10% водный раствор железоаммиачных квасцов. 7. Гематоксилин Гейденгайна. Приготовление: 1 г гематоксилина растворить в 10 мл 100% этилового спирта и долить до 100 мл дистиллированной водой. В открытой посуде состав должен созреть в течение 3-х недель. 8.100% спирт. Приготовление: в плотно закрывающуюся склянку на две трети высоты насыпается прокаленный (обезвоженный) медный купорос и заливается спирт (96%). Купорос отбирает у спирта воду и постепенно приобретает голубой цвет. На слой медного купороса обычно кладут кружок фильтровальной бумаги. В этом спирте происходит почти полное обезвоживание объекта. 9. Карбол-ксилол (на 100 г ксилола добавляют 25-30 г карболовой кислоты - фенола). 10. Канадский бальзам. Способ окраски. На покровном стекле делают тонкий мазок субстрата или отпечаток органа и быстро, пока мазок не высох, стекло мазком вниз помещают в часовое стекло с жидкостью Шаудинна. Рекомендуется перед фиксацией эту жидкость нагреть до появления паров. Стекло должно плавать по поверхности жидкости или погрузиться. Фиксация продолжается 5-10 минут. Далее стекло помещают в 70% спирт (5 минут), спирт-йод (5-10 минут), 70% спирт (5 минут). Обработанное таким образом стекло с мазком может храниться в последнем (70% спирте) несколько месяцев. Далее препарат переносят в дистиллированную воду (3-5 минут) и в 3-4% раствор железоаммонийных квасцов (4-20 часов). После препарат ополаскивают 68 в дистиллированной воде 1-3 секунды и переносят в гематоксилин на 4- 24 часа. После гематоксилина препарат ополаскивают водой. Далее следует удалить излишки краски (дифференцировать препарат). Это делается 1- 3% раствором железоаммонийных квасцов под контролем микроскопа. Окраска должна быть серо-лиловой. Далее препарат промывают водопроводной водой до 15-40 минут. После этого препарат последовательно проводят через спирты (70, 96, 100%), выдерживая по 3-5 минут в каждом. В карбол-ксилол препарат перекладывают на 2-5 минут до просветления и после этого приклеивают на предметное стекло на каплю канадского бальзама мазком вниз. Для удобства проводки через вышеперечисленные составы покровные стекла после фиксации в жидкости Шаудинна можно прикрепить к спичкам - сделать в торце спички небольшой расщеп и вставить в него край стекла. Если окрашенный таким образом препарат не нужно длительно сохранять, можно вместо канадского бальзама воспользоваться иммерсионным маслом. Но ни в коем случае нельзя допускать высыхания препарата. Для исследования фекалий на цисты криптоспоридий используется метод Циля - Нильсена. Для этого на предметном стекле приготовить тонкий мазок фекалий (можно добавить каплю физиологического раствора, чтобы мазок не был густым). Мазок хорошо высушить на воздухе. Далее на мазок положить фильтровальную бумагу и на нее нанести 1-3 капли карбол-фуксина (2 г основного фуксина растворить в 10-12 мл 96% этилового спирта, добавить 5 мл фенола и долить дистиллированной водой до 100 мл) и нагреть на пламени спиртовки до появления паров. После этого бумагу с мазка удалить, ополоснуть в воде и опустить стекло в стаканчик с 10%-мым раствором серной кислоты. Через 1-5 минут мазок обесцветится. После препарат промыть проточной водой и подкрасить 5%-ным раствором малахитового зеленого, приготовленного на 10%- ном этиловом спирте в течение 1-2 мин. Далее следует промыть мазок в воде и высушить на воздухе. Микроскопировать нужно с использованием масляной иммерсии. Ооцисты криптоспоридий окрашиваются в малиновый цвет и хорошо заметны на сине-зеленом фоне. |