Объект изучения микробиологии

• Название: Объект изучения микробиологии
• Анкор: Mikra_1-10 (2).docx
• Дата: 26.12.2017
• Размер: 6.2 Mb.
• Имя файла: Mikra_1-10 (2).docx
• Тип: Документы; #13104
• страница: 16 из 29

71. Основные принципы микробиологической диагностики вирусных инфекций.

Цель микробиологических исследований: установить факт наличия или отсутствия возбудителя в организме больного или на объектах окружающей среды.

Задачи микробиологических исследований: идентифицировать микроорганизмы в исследуемом материале, определить к какому виду они относятся, морфологические, биохимические, токсигенные и антигенные свойства, установить чувствительность микроорганизмов к антимикробным препаратам.

Отбор материала – первый этап микробиологической диагностики. Материал определяют свойствами возбудителя патогенезом вызываемого им заболевания. При поражении отдельных органов и систем отбирают материал соответствующей локализации. При отсутствии поражений исследуют кровь. Образцы следует забирать до назначения антимикробной терапии, соблюдая правила асептики для предупреждения загрязнения материала. Каждый образец следует рассматривать как потенциально опасный. Материал собирают в объеме достаточном для всего комплекса исследований. Микробиологическое исследование следует начинать немедленно после поступления материала в лабораторию. Выбор материала для исследования должен соответствовать характеру инфекционного процесса.

Выбор лабораторных исследований. Микробиологической диагностики инфекционных заболеваний составляют: микроскопические, микробиологические, биологические, серологические и аллергологические методы.

Микроскопические методы включают приготовление мазков и препаратов для микроскопирования. В большинстве случаев результаты микроскопических исследований носят ориентировачный характер ( например, определяют отношение возбудителей к окраске), так как многие микроорганизмы лишены морфологических и тинкториальных особенностей. Тем не менее микроскопией материала можно определить некоторые морфологические признаки возбудителей (наличие ядер, жгутиков, внутриклеточных включений и др.), а также установить факт наличия или отсутствия микроорганизмов в присланных образцах.

Микробиологические методы – «золотой стандарт» микробиологической диагностики, так как результаты микробиологических исследований позволяют точно установить факт наличия возбудителя в исследуемом материале. Идентификацию чистых культур (до вида микроорганизма) проводят с учетом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, токсигенных и антигенных свойств микроорганизма. Большинство исследований включает определение чувствительности к антимикробным препаратам у выделенного возбудителя. Для эпидемиологической оценки роли микроорганизма проводят внутривидовую идентификацию определением фаговаров, биоваров, резистентваров и т.д.

Биологические методы направлены на определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя. Методы включают заражение лабораторных животных исследуемым материалом с последующим выделением чистой культуры патогенна либо установлением факта присутствия микробного токсина и его природы. Моделирование эксперементальных инфекций у чувствительных животных – важный инструмент изучения патогенеза заболевания и характера взаимодействий внутри системы микроорганизм - макроорганизм. Для проведения биологических проб используют только здоровых животных определенных массы тела и возраста. Инфекционный материал вводят внутрь, в дыхательные пути, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и подкожно, в переднюю камеру глаза, через трепанационное отверстие черепа субокципитально (в большую цистерну головного мозга). У животных прижизненно забирают кровь, экссудат из брюшины, после гибели – кровь, кусочки различных органов, СМЖ, экссудат из различных полостей.

Серологичекие методы выявления специфических АТ и Аг возбудителя – важный инструмент в диагностике инфекционных заболеваний. Особую ценность имеет в том случае, если выделить возбудителя не представляется возможным. При этом необходимо выявить повышение титров АТ , в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10 – 20 суток (иногда этот интервал может быть более длительным). Антитело обычно появляется в крови на 1-2ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для ретроспективных эпидемиологических исследований. Определение классов Ig четко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием. Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс – диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.

Аллергологичиские методы. Аг многих возбудителей обладают сенсибилизирующим де0йствием, что используют для диагностики инфекционных заболеваний, а также при проведении эпидемиологических исследований. Наибольшее распространение кожно – аллергические пробы, включающие внутрикожное введение Аг(аллергена) с развитием реакции ГЗТ. Кожные пробы нашли применение в диагностике таких заболеваний как сап, меллиоидоз, бруцеллез. Наиболее известна проба Манту, используемая как для диагностики туберкулеза, так и для оценки невосприимчивости организма к возбудителю.

72. Серологический метод диагностики инфекционных заболеваний.

Особую ценность имеет в том случае, если выделить возбудителя не представляется возможным. При этом необходимо выявить повышение титров АТ , в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10 – 20 суток (иногда этот интервал может быть более длительным). Антитело обычно появляется в крови на 1-2ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для ретроспективных эпидемиологических исследований. Определение классов Ig четко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием. Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс – диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.

Сущность серологических методов исследования состоит в определении титра антител в сыворотке крови больного в динамике болезни по отношению к известному антигену, вводимому в серологическую реакцию.

В клинической практике чаще всего используется реакция агглютинации (РА) Видаля, ее разновидности, РНГА, РСК и более информативные современные методы (ИФА, РИА, ЛИФА и др.).

РА — определение неизвестных антител с помощью известных антигенов и установление вида возбудителя с помощью известных антител. РИГА и РНГА — более специфичны, используются меченные эритроциты. РТГА — основан на способности некоторых вирусов агглютинировать эритроциты. РИ — реакция иммунодиффузии, различная способность антигенов и антител диффундировать в геле. РСК титрование антигенов или антител по степени фиксации комплемента с комплексом антиген-антитело. PH - способность антител нейтрализовать токсины и антигены вирусов. ИФА — используются антитела, конъюгированные с ферментом. РИА — используется радиоактивная метка антигенов или антител. ЛИФА — лантанидный иммунофлюоресцентный анализ — используются в качестве метки элементы редкоземельных металлов.

Забор крови для серологического исследования выполняется так же, как и при посеве, но в отличие от последнего, его лучше осуществлять самотеком, а не шприцом. Для этого берут иглу с более широким просветом и вводят в локтевую вену без шприца. В пробирку собирают 3—5 мл крови. При таком сборе эритроциты меньше травмируются и сыворотка крови реже бывает с явлениями гемолиза. После отстаивания и центрифугирования крови сыворотку с помощью пипетки переносят в другую пробирку или эпиндорф и хранят в холодильнике при температуре +4 °С до постановки реакции. Поскольку иммунный ответ при большинстве инфекционных болезней развивается с 5-7-го дня, а максимальное нарастание титра антител происходит лишь в периоде реконвалесценции, серологические методы менее пригодны для ранней диагностики и используются главным образом в целях ретроспективной расшифровки этиологии уже перенесенного инфекционного заболевания.

Однако кровь для серологических исследований берется и в первые дни болезни, что в дальнейшем дает возможность наблюдать за нарастанием титра антител в динамике заболевания. Повторные серологические исследования при бактериальных инфекциях производятся не раньше, чем через 5-7 дней. При вирусных заболеваниях берутся «парные сыворотки» с интервалом 10-12 дней и при нарастании титра антител в 4 раза и более подтверждается диагноз предполагаемого заболевания.
73. Понятие об иммуномодуляторах. Принцип действия. Применение.

Известно большое количество иммуномодуляторов, разделяемых на три основных класса
Цитокины: ИЛ, ИФН, колониестимулирующие факторы, ФНО, эритропоэтины и др.
Природные соединения (микроорганизмы и их компоненты): Бактериальные и вирусные вакцины, Л ПС, гликаны, продигиозан, сальмазан, пирогенал, рибомунил и др.
Синтетические высоко- и низкомолекулярные препараты: Полифосфаты, поликарбоксилаты, полисульфаты, левамизол, инозиплекс, диуцифон и др.
• Синтетические экзогенные иммуномодуляторы включают тысячи соединений, обладающих, помимо иммуномодулирующего, рядом других эффектов
Их объединяет одно свойство — иммуномодуляторы имеют «иммунные точки действия», то есть мишени среди иммунокомпетентных клеток.

Эндогенные иммуномодуляторы — цитокины, обеспечивающие поддержание гомеостаза в организме. Экзогенные иммуномодуляторы разделяют на природные и синтетические. • Природные экзогенные иммуномодуляторы — компоненты микроорганизмов (вирусов, бактерий); наиболее изучены ЛПС, пептидо- и кетогликаны бактерий. Некоторые вакцины сами способны оказывать иммуномодулирующее и терапевтическое действие. Например, противогерпетическан вакцина снижает частоту рецидивов простого герпеса; введение БЦЖ усиливает эффективность химиопрепаратов, применяемых для лечения лепры. Аналогичный эффект наблюдают и при сочетании БЦЖ с противотуберкулёзными ЛС.
• Синтетические экзогенные иммуномодуляторы включают тысячи соединений, обладающих, помимо иммуномодулирующего, рядом других эффектов (например, гипотензивным). В эту группу препаратов входят синтетические аналоги нуклеиновых кислот (синтетические полинуклеотиды), адапто-гены, поверхностно-активные вещества (полисульфаты, поликарбонаты), производные пирана, имидазола, флюоренов, пиримидинов и др. Помимо иммуномодулирующего действия, многие синтетические препараты и микробные продукты способны активировать систему ИФН.
Препараты можно применять как для лечения иммунодефицитов, вызванных вирусными инфекциями, так и для профилактики инфекций у лиц с иммунодефицитами. В настоящее время выделяют три основных типа иммуномодулирующей терапии — активная, адаптивная и пассивная. Важное условие для успешного применения иммуномодуляторов — знание мишеней, на которые они действуют. Например, известные бактериальные продукты (ЛПС энтеро-бактерий, сальмозан, продигиозан и др.) активируют макрофаги. ИЛ-4, ИЛ-5 и ИЛ-6 стимулируют рост и дифференцировку В-лимфоцитов. Пептиды вилочковой железы (входящие в состав препаратов тимозин, тимопоэтин, тималин, Т-активин), левамизол, изопринозин, полиакриламидные кислоты, ИЛ-I, ИЛ-2 и ИЛ-3 стимулируют различные популяции Т-клеток.
Наконец, ИФН рассматривают как лимфокины с неспецифическим механизмом действия, а синтетические и природные полифосфаты и поликарбоксилаты — как поликлональные активаторы, действующие на целые субпопуляции лимфоцитов.
Применение иммуномодуляторов. Подавляющее большинство иммуномодуляторов в силу ряда причин (токсичность, недостаточная эффективность, побочные эффекты, высокая стоимость, недостаточная изученность) редко применяют на практике. Практическое применение нашли лишь единичные препараты:
Иммуномодуляторы, имеющие клиническое значение:

Диуцифон - Стимуляция секреции ИЛ-2

Левамизол - Коррекция функций Т-лимфоцитов и фагоцитов

Изопринозин - Стимуляция активности Т-лимфоцитов

Миелопептид - Стимуляция активности В-лимфоцитов

Дибазол, метилурацил, пентоксил, пирогенал, продигиозан, ЛПС энтеробактерий, сальмозан - Стимуляция активности фагоцитов, В-лимфоцитов, лейкопэза и цитотоксических свойств моноцитов

ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6 - Запуск и стимуляция дифференцировки В-лимфоцитов

Т-активин, тимозин, тимотропин, тималин - Коррекция функций Т-лимфоцитов, стимуляция синтеза ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3 и цитотоксической активности лимфоидных клеток

Полифосфаты, поликарбоксилаты - Поликлональная активация иммунокомпетентных клеток

Индукторы ИФН - Синтез ИФН

ИФН - Описано более 100 эффектов

Принцип действия иммуномодуляторов:Основная способность этих лекарств – активизация естественной защиты организма – иммунитета. Благодаря иммуномодуляторам наше тело активнее вырабатывает вещества, уничтожающие токсины и вирусы. Если организм недостаточно быстро производит антитела и интерфероны, то вирусы успевают опередить иммунную защиту и человек заболевает. Иммуномодуляторы поддерживают защитные механизмы в «боевой готовности», чтобы в любой момент организм мог эффективно противостоять вирусной инфекции.
74. Стафилококки. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.

Отдел: Firmicutes

Семейство: Micrococcaceae

Род: Staphylococcus

Виды: S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus.

Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются несимметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы.
Культуральные свойства: Стафилококки — факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не имеющим таксономического значения.  Могут расти  на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитическими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу.
Стафилококки пластичны, быстро приобретают устойчивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерминируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции бета-лактамазы.
Антигенная структура. Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент остается свободным и может соединяться со специфическим антигеном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена поверхностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков являются лизогенными (образование некоторых токсинов происходит с участием профага).
Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, бета-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков.
Резистентность. Устойчивость в окружающей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная.
Патогенез. Источником инфекции стафилококков  -  человек и некоторые виды животных (больные или носители). Механизмы передачи — респираторный, контактно-бытовой, алиментарный.
Иммунитет: Постинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненапряженный.
Клиника. Около 120 клинических форм проявления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гнойно-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглотки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (интоксикации).
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения.
Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие  грам«+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений.
Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течение суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, лецитиназы. Ферментация: глюк, маннита, образование а-токсина.
Для установления источника госпитальной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры.
Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте ( компонент клеточной стенки).
Лечение и профилактика. Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, метициллин, оксациллин, устойчивые к бета-лактамазе: ванкомицин. тейкопланин. линезолид. фузидиевая кислота ). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитоксическая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизированный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином. Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой  и адсорбцией на гидрате оксида алюминия.