|
|
Объект изучения микробиологии
82)Сальмонеллы-возбудители пищевых токсикоинфекций. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Род: Samonella
Вид: S.typhimurium, S.infatis, S.anatum, S.enteriса
Морфология, культуральные свойства:
Грам «-» палочки,мелкие, вытянутой формы с закругленными концами. Спор, капсул нет. Большинство изолятов подвижно(перитрихи), но существуют и неподвижные. Хемоорганотровы, оксидаза-отрицательные, каталаза-положительные. Температурный оптимум 35-37градусов. На питательных средах образуют мелкие прозрачные S-колонии. На агаре Эндо они розоватые и прозрачные, на агаре Плоскирева — бесцветные и выглядят плотными и мутноватыми, на ВСА — чёрно-коричневые, с металлическим блеском, окружены чёрным «гало», среда окрашивается в чёрный цвет. Исключениями яв-ся — S. paratyphi и некоторые другие, образующие на ВСА коричнево-зеленоватые колонии. На бульоне S—формы дают равномерное помутнение среды,R-формы — осадок.
Биохимические признаки. Характерные свойства — образование сероводорода и отсутствие индолообразования.
Эпидемиология сальмонеллеза. природный резервуар большинства возбудителей — человек и различные животные (включая пресмыкающихся, земноводных, рыб и птиц). Основные пути передачи сальмонелл — водный и пищевой, реже контактный. Сальмонеллы долго сохраняют жизнеспособность во внешней среде. Наиболее устойчива S. Typhimurium. Кипячение убивает сальмонелл мгновенно, но присутствие в воде белковых веществ увеличивает термоустойчивость сальмонелл. При замораживании они могут оставаться жизнеспособными длительное время.Хлорирование снижает загрязнённость сальмонеллами в 6 раз.
Антигены сальмонелл. У сальмонелл выделяют О-, Н- и К-антигены. Их распознавание положено в основу диагностической антигенной схемы Кауфманна-Уайта.
Термостабильные О-антигены. По О-антигенам сальмонеллы разделены на 50 групп от А до Z.
Термолабильные Н-антигены . Состав Н-антигены обусловливает разделение сальмонелл на серовары. Выделяют антигены I(специфические) фазы и II (неспецифические) фазы.
Патогенез поражения сальмонеллами. Патогенность сальмонелл определяют факторы адгезии и колонизации, факторы инвазии и способность к токсинообразованию.
Проникновение сальмонелл в кровь. Адгезию к клеткам эпителия обеспечивают пили. Сальмонеллы не могут самостоятельно проникать в эпителиальные клетки ЖКТ, а попадают в них посредством эндоцитоза. Сальмонеллы проникают далее в базальную мембрану, а затем в кровоток.
Воспаление слизистой оболочки. Проникновение и размножение сальмонелл в базальной мембране вызывает развитие местной воспалительной реакции и приток жидкости в очаг поражения. Появление диареи обусловлено синтезом энтеротоксинов.
Термолабильный LT-токсин сальмонелл увеличивает содержание цАМФ.
Термостабильный ST-токсин сальмонелл напоминает цитотоксин шигелл и нарушает синтез белков и активирует образование простагландинов.
Генерализация процесса. В отличие от прочих сальмонелл, возбудители брюшного тифа и паратифов, проникнув в кровоток, способны выживать и размножаться в фагоцитах, а после гибели последних в большом количестве высвобождаться в кровь. Погибающие сальмонеллы высвобождают эндотоксин. Эндотоксин угнетает деятельность ЦНС, а также может вызвать миокардит, миокардиодистрофию и инфекционно-токсический шок. Бактериемия приводит к инфицированию различных органов (жёлчного пузыря, почек, печени, костного мозга и др.) и вторичной инвазии эпителия кишечника (особенно пёйеровых бляшек). Проникновение сальмонелл в желчный пузырь вызывает длительное носительство с выделением возбудителя.
Клиника сальмонеллезов.
Брюшной тиф и паратифы — острые инфекционные заболевания, сопровождающиеся бактериемией, поражением лимфоидной ткани кишечника, лихорадкой и общей интоксикацией.
Гастроэнтериты — группа полиэтиологичных острых инфекционных болезней человека, животных и птиц с фекально-оральным механизмом передачи. Основные возбудители сальмонеллезного гастроентерита — S. typhimurium, S. heidelberg, S. enteritica, S. derby. Большинство возбудителей выделяют у человека и различных животных (основной резервуар).
Клинически выделяют гастроинтестинальные и генерализованные формы сальмонеллеза. Выделяют острое, хроническое и транзиторное носительство сальмонелл.
Микробиологическая диагностика сальмонелл.
Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь и мочу. При брюшном тифе также проводят забор проб из кожных высыпаний, желчи, содержимого двенадцатиперстной кишки, СМЖ и секционного материала.
Первоначально материал (особенно испражнения) помещают на среды обогащения (например, на селенитовый или 20% жёлчный бульон). Дифференциально-диагностические среды для высевов со сред обогащения бывают высокоселективными (например, висмут-сульфитный агар), среднеселективными (среда Плоскирева) и низкоселективными (среды Эндо и Левина). На висмут-сульфитном агаре возбудитель паратифа А образует зеленоватые колонии. Биохимические и культуральные свойства определяют на минимальном дифференцирующем ряду. На плотных средах возбудитель паратифа Б может давать феномен валообразования.
• Для дальнейшей работы отбирают сальмонеллы, ферментирующие глюкозу, не ферментирующие сахарозу и образующие H2S. Культуры пересевают со среды Олькеницкого на среду Хисса с маннитом, в 1 % пептонную воду для определения образования индола и полужидкий агар для определения подвижности.
• В последнее время широко используют дифференциально-селективные среды, наиболее часто — ксилозо-лизино-дезоксихолатный (XLD) агар и среду для сальмонелл и шигелл (SS-arap). На них сальмонеллы образуют колонии красного цвета с чёрным центром за счёт образования H2S
• Для диагностики брюшного тифа и паратифов наиболее часто применяют линейную РА.
• Для выявления AT в крови больных и реконвалесцентов применяют РПГА с поливалентными эритроцитарными диагностикумами.
Лечение. Основу составляет адекватная антимикробная терапия (препараты выбора — ампициллин, аминогликозиды, фторхинолоны и др.). У больных с гастроинтестинальной формой заболевания основной метод лечения — патогенетическая терапия, направленная на дезинтоксикацию и восстановление водно-электролитного баланса и гемодинамики. В первую очередь следует промыть желудок обычной питьевой водой или раствором соды.
Профилактика сальмонеллеза, брюшного тифа, паратифа. Профилактика основана на проведении ветеринарно-санитарных, санитарно-гигиенических и противоэпидемических мероприятий. Специфическую иммунопрофилактику не проводят; но для предупреждения брюшного тифа разработано три типа вакцин — убитая (эффективность 50-70%), живая аттенуированная (из штамма Ту 21а), проявляющая больший защитный эффект, но дающая побочные эффекты, и вакцина из Vi-Аг S. typhi
83)Лептоспиры. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Грам «-» спиралевидные микроорганизмы.
Род Leptospira; семейства Leptospiraceae. Его образуют тонкие спирохеты, что определило их название.Концы могут быть изогнуты. Спирали лептоспир плотно примыкают друг к другу, что придаёт им вид «нитки жемчуга* при микроскопии в тёмном поле. Движение лептоспир винтообразное; некоторое время могут быть неподвижными, напоминая верёвку или прихотливо изогнутые петли. Единственный вид, Leptospira interrogans.
Лептоспироз — острая природно-очаговая инфекция, характеризующаяся лихорадкой, симптомами общей интоксикации, поражением почек, печени, нервной системы и геморрагическим синдромом.
Эпидемиология лептоспирозов. Основной резервуар инфекции — более 80 видов диких и домашних животных. Источник заражения лептоспирами — загрязнённая вода. Человек заражается при проведении сельскохозяйственных и мелиоративных работ, а также при купании и использовании воды из загрязнённых водоёмов. Реже регистрируют случаи инфицирования при контактах с животными и через пищевые продукты, Лептоспиры чувствительны к действию солнечного света и высоких температур, высушивание вызывает немедленную гибель. Чувствительны к действию дезинфектантов.
Культуральные свойства. Лептоспиры — строгие аэробы, оптимальная температура 28-30 °С. Растут в жидких и полужидких средах, дополненных 10-15% кроличьей сыворотки. Рост наблюдают на 5-8-е сутки инкубирования в виде круглых колоний. Плохо окрашиваются по Граму и Романовскому-Гймзе (в розовый цвет); хорошо различимы при импрегнации серебром (окрашены в коричневый или чёрный цвет). Лептоспиры легко выявляются темнопольной микроскопией и несколько хуже — фазово-контрастной.
Патогенез лептоспирозов В организм человека лептоспиры проникают через слизистые оболочки носа, рта, пищевода, таз, а также через микротравмы кожных покровов. Возбудитель лептоспирозов проникает в кровь и циркулирует в ней. Поражения почек и печени характерны для всех леитоспирозов и особенно для болезни Васильева-Вейля.
Поражения печени обусловлены механическим повреждением гепатоцитов подвижными лептоспирами, а также токсическим действием эндотоксина, выделяющегося при гибели бактерий; могут приводить к развитию желтухи.
После выздоровления лептоспиры длительно сохраняются в почках и выделяются с мочой (до 40-го дня болезни). Менингеальные явления, часто наблюдаемые при лептоспирозах, связаны с непосредственным действием микроорганизмов и продуктов их распада на ЦНС.
Клинические проявления лептоспирозов Клиническая картина лептоспирозов вариабельна — от бессимптомных (субклинических) до тяжёлых желтушных форм. Инкубационный период длится 5-12 сут. Заболевание проявляется ознобом, резким повышением температуры тела до 39-40 °С. Характерны миалгии и головная боль, поражение конъюнктивы, гиперемия склер и лица. На 3-5-е сутки может появляться ярко-розовая сыпь (иногда кореподобная) на конечностях и туловище; продолжительность высыпаний вариабельна (до 10 сут). Летальность может достигать 35%.
Диагностика лептоспирозов. Включают бактериоскопические, бактериологические, серологические и биологические методы. Материал для исследований — кровь, при поражениях ЦНС — СМЖ, на более поздних сроках (10-12-е сутки) — центрифугат мочи.
Микроскопия лептоспир. Эффективна только в первые дни заболевания. Материал исследуют в тёмном поле либо микроскопируют мазки, окрашенные по Романовскому-Гймзе.
Выделение возбудителя лептоспирозов. Проводят в первые 2-4 сут посевом 8-10 мл венозной крови на 6-10 пробирок со средой Ферворта-Вольфа. Пробирки встряхивают для предупреждения сворачивания крови, заливают жидким парафином и инкубируют при температуре 28
30 °С. Через каждые 4-5 сут культуры исследуют, при отсутствии роста в течение 15-20 сут желательно сделать пересевы на свежую среду. Лептоспиры идентифицируют с помощью типовых агглютинирующих антисывороток.
Серологические исследования лептоспир. Исследуют парные сыворотки на 2-3-ю неделю болезни. Сывороточные AT определяют в реакции микроагглютинации и лизиса с сывороткой пациента и стандартным набором микроорганизмов. При положительном результате наблюдают образование клубков из лептоспир (специфичной считают реакцию с титром не ниже 1:400) или возникновение «зернистого» распада бактерий. Можно применять РСК или РПГА с эритроцитами, нагруженными лептоспирами.
Биологическая проба на лептоспиры. Хомячков или кроликов внутрибрюшинно заражают кровью или мочой больного. Через 48-72 ч проводят микроскопию брюшинного экссудата и крови. Кроме того, за животными ведут наблюдение: отмечают повышение температуры тела и появление желтухи. На 10-14-е сутки животные погибают; исследование позволяет обнаружить в тканях множественные геморрагические очаги, содержащие лептоспиры.
Лечение и профилактика лептоспирозов Препараты выбора при лечении лептоспирозов — антибиотики пенипиллинового ряда в сочетании с симптоматическими средствами. Больным предписан постельный режим и молочно-растительная диета.
Профилактика лептоспирозов включает проведение медико-санитарных, санитарно-ветеринарных и мелиоративных мероприятий.
Иммунопрофилактика лептоспирозов. В группах населения, наиболее подверженных заражению, проводят вакцинацию феноловой поливалентной вакциной, содержащей Аг серогрупп icterohaemorragiae, grippotyphosa и ротопа, трёхкратно, с недельными интервалами.
84) Возбудитель дифтерии. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых поражений. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Дифтерия — острое инфекционное заболевание, вызываемое Corynebacterium diphtheriae и её токсином. Дифтерийные палочки вызывают воспаление воздухоносных путей, реже кожных покровов. Токсин палочки Клебса-Лёффлера приводит к дегенерации периферических нервов, сердечной мышцы и других тканей. Эпидемиология дифтерии. Резервуар — человек (больной, реконвалесцент, бактерионоситель).Основной путь передачи — воздушно-капельный; также возможно заражение через предметы и пищевые продукты (обычно молоко). При комнатной температуре во влажной атмосфере палочка сохраняется долго.
Морфология. Дифтерийная палочка (палочка Леффлера) представлена тонкими, слегка изогнутыми или прямыми палочками. Часто они утолщены на концах и напоминают булаву. Для дифтерийной палочки характерен выраженный полиморфизм. На поверхности дифтерийной палочки имеются фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистой оболочки.
• Бактерии биовара дифтерии gravis — короткие неправильной формы, с небольшим количеством мета-хроматических гранул.
• Биовар дифтерии mitis образуют длинные изогнутые полиморфные палочки, содержащие много волютиновых зёрен (тельца Бабеша-Эрнста).
• Бактерии биовара дифтерии inmtermedius наиболее крупные, с бочковидными очертаниями; для них характерны поперечные перегородки, разделяющие клетку на несколько сегментов.
Corynebacterium diphtheriae хорошо окрашивается основными анилиновыми красителями грамположительна (окрашивание не всегда равномерно). Для окраски мазков обычно применяют щелочной метиленовый синий по Лёффлеру либо окрашивают их по Найссеру. Бактерии способны образовывать L- и фильтрующиеся формы. В мазках С. diphtheriae располагаются в виде «растопыренных пальцев», «иероглифов», «паркета», латинских букв V, Y, L и т.д.
Культуральные свойства. Дифтерийная палочка хорошо растёт при 36-37 °С. Питательные среды должны содержать аминокислоты, витамины, ионы металлов (Са2+, Mg2+ Fe2+ и др.). Наибольшее распространение получили среды с теллуритом. На таких средах дифтерийная палочка образует серовато-чёрные колонии в результате восстановления теллурита до металлического теллура, аккумулирующегося внутри бактерий. В жидких средах образуют помутнение и осадок.
Биохимическая активность. Отсутствие способности ферментировать сахарозу и разлагать мочевину — дифференцирующий признак, отличающий дифтерийную палочку от других коринебактерий. Другой дифференцирующий признак — способность разлагать цистин.
Дифтерийная палочка образует бактериоцины (корицины), обладающие узким спектром действия.
Токсинообразование.Corynebacterium diphtheriae продуцирует мощный экзотоксин — основной фактор патогенности. Нетоксигенные штаммы дифтерии не вызывают развитие заболевания.
Антигенная структура. У Corynebacterium diphtheriae выделяют О- и К- антигены ( Аг ).
Патогенез поражений. Входные ворота для возбудителя дифтерии — слизистые оболочки носоглотки, иногда глаз, половых органов (у женшин), повреждённые кожные покровы. Дифтерийная палочка колонизирует ткани в месте внедрения, вызывая развитие местного фибринозного воспаления. При этом тип воспаления зависит от строения слизистых оболочек. Например, в однослойном цилиндрическом эпителии дыхательных путей формируется крупозное воспаление, на многослойном плоском эпителии образуется жёлто-серая фибринозная плёнка, плотно спаянная с прилежащими тканями. Подобный тип поражений известен как дифтеритическое воспаление.
Клинические проявления. В зависимости от локализации дифтерии выделяют поражения ротоглотки (наиболее часто), дыхательных путей, носа и редкой локализации (глаза, наружные половые органы, кожа, раневые поверхности).
Микробиологическая диагностика дифтерии. Материалом для исследования служат дифтеритические плёнки, слизь из носоглотки или отделяемое из подозрительных поражений кожных покровов.
Забор материала на дифтерию проводят двумя стерильными тампонами: один используют для посева, с другого делают мазки и окрашивают их по Граму и Найссеру.
Бактериоскопия. Окраска по Граму не является специфичной, так как дифтерийные палочки сравнительно плохо воспринимают красители. Окраска по Найссеру позволяет выявить характерные зёрна Бабеша-Эрнста
Культивирование. Бактерии дифтерии выделяют посевом на элективные среды с теллуритом (например, Клауберга II). Для выделения чистой культуры дифтерии часть подозрительной колонии засевают на скошенный агар (или среду Ру), вторую часть — на твёрдую питательную среду для определения токсигенности и (не обжигая петли) проводят определение цистиназной активности (проба Пизу). При положительном результате наблюдают образование коричневого облачка вокруг линии укола.
Чистую культуру идентифицируют на средах Хисса, пользуясь укороченным пёстрым рядом (глюкоза, мальтоза, сахароза, мочевина).
Определение токсигенности. Проводят подкожным или внутрикожным заражением 0,5-1,0 мл бактериальной культуры морских свинок. Способность к образованию токсина можно определять заражением куриных эмбрионов или культур клеток с регистрацией последующего цитопатнческого эффекта.
Однако наибольшее распространение получил тест иммунодиффузии Илека. На среду с пониженным содержанием Fe2+ (для более интенсивного токсинообразования) проводят посев исследуемого изолята и эталонных токсигенного и нетоксигенного штаммов параллельными штрихами. На выросшие колонии накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной дифтерийным антитоксином. Образующийся токсин и антитоксин диффундируют в агар и в месте встречи образуют линии преципитации, так называемые «усы» или стрелы.
Фаготипирование. Для дифференциальной диагностики возбудителей используют набор из 9 коринефагов. С его помощью можно типировать большинство токсигенных и нетоксигенных штаммов биовара gravis.
|
|
|
Скачать 6.2 Mb.