Общая микробиология
 Скачать 0.8 Mb.
|
|
Антигенная структура. Гонококки содержат следующие антигены: - соматический антиген; - капсульный антиген; - липоолигосахарид (ЛОС); - антигены пилей; - белки наружной мембраны. Среди антигенов гонококков основная роль принадлежит антигенам пилей и белкам наружной мембраны. Пили состоят из белковых субъединиц, остатков сахаров и фосфорной кислоты. Последовательность соединения белковых субъединиц пилей может меняться, в результате чего изменяются антигенные свойства клеток. Наружная мембрана содержит протеины разных классов. Эти протеины проявляют сильные иммуногенные свойства. По составу протеинов наружной мембраны выделяют несколько серотипов гонококков. Антитела к протеинам клеточной стенки в присутствии комплемента проявляют бактерицидные свойства. Факторы патогенности гонококков: - капсула; - пили (фимбрии); - липоолигосахарид (ЛОС); - поверхностные белки наружной мембраны; - трансфериновые рецепторы TbrA и TbrB; - IgA-протеаза; - рибосомальный белок. Все свежевыделенные культуры имеют капсулу, которая состоит из полифосфатов. Капсула препятствует фагоцитозу и маскирует антигены клеточной стенки. Пили состоят из белка пилина и обеспечивают адгезию гонококка к эпителию. Изменение структуры пилина приводит к изменению состава фимбрий. Вариабельность строения пилей способствует выживаемости гонококков на эпителиальных клетках при смене хозяина и воздействии антител. Клетки, не имеющие пилей, заболевания не вызывают. Утрата гонококками пилей называется сменой фаз роста. Смена фаз роста позволяет гонококкам отрываться от эпителиальных клеток и разноситься по организму. Липоолигосахарид (ЛОС) гонококков отличается от липополисахаридов других грамотрицательных бактерий тем, что имеет разветвленное ядро и не имеет боковой цепи (О-антигена). Липоолигосахарид способен изменять антигенный состав, что позволяет гонококкам уклоняться от воздействия иммунной системы. Он обусловливает продукцию медиаторов воспаления – цитокинов. Поверхностный белок наружной мембраны I класса (белок РI, Porбелок) является порином и образует каналы, пронизывающие наружную мембрану гонококков. Этот белок способствует внутриклеточному выживанию бактерий и препятствует слиянию лизосом с фагосомой. Показано, что Por-белок способен отрываться от наружной мембраны гонококков и встраиваться в мембрану эпителиальных клеток человека, формируя в ней каналы. Это способствует проникновению возбудителя в эпителиальные клетки. Поверхностный белок II класса (Ора-протеин, протеин мутности, инвазин) способствует плотному прилеганию гонококков к эпителиальным клеткам и их инвазии внутрь клеток. Наличие этого белка обусловливает мутность колоний гонококков (например, при исследовании материала из уретры мужчин). При отсутствии этого белка колонии гонококков становятся прозрачными (в частности, при исследовании крови, синовиальной жидкости). Поверхностный белок III класса (Rmp-белок) осуществляет защиту от антител класса IgM. Трансфериновые рецепторы TbrA и TbrB взаимодействуют с трансферином человека и извлекают из него железо. IgA-протеаза расщепляет секреторный иммуноглобулин, в результате чего инактивируются местные антитела слизистых оболочек, препятствующие адгезии бактерий к рецепторам эпителиальных клеток. Рибосомальный белок (L12-протеин) отвечает за возникновение восходящей гонореи у женщин. Патогенез. Входными воротами для возбудителя гонококковой инфекции служит цилиндрический эпителий уретры, шейки матки, конъюнктивы и дистального отдела прямой кишки. На слизистой оболочке гонококки с помощью пилей закрепляются на поверхности эпителиальных клеток. В месте входных ворот посредством IgA-протеазы и поверхностных белков возбудитель подавляет защитные факторы организма и размножается, колонизируя эпителий. Под действием ЛОС происходит синтез цитокинов, вызывающих развитие воспалительной реакции. В результате этого наступает гибель и слущивание эпителиальных клеток, нарушается процесс самоочищения слизистых оболочек. Затем Por-белок гонококка встраивается в мембрану эпителиальных клеток, и с помощью Ора-белка наружной мембраны возбудитель проникает путем эндоцитоза (“непрофессионального” фагоцитоза) внутрь эпителиальной клетки с образованием фагосомы. Внутри клетки фагосомы сливаются, формируя вакуоли, в которых гонококки размножаются. В дальнейшем вакуоли сливаются с базальной мембраной эпителиальных клеток, а гонококки проникают в субэпителиальную ткань или в кровоток. В субэпителиальной ткани часть гонококков, сохранивших пили, прикрепляется к клеткам и перемещается на соседние участки. Другая часть гонококков поглощается фагоцитами и инфицирует другие ткани. Гематогенное диссеминирование инфекции отмечают у 1% заболевших. Таким образом, в развитии гонококковой инфекции возможны локальные или системные проявления. Генерализованная гонококковая инфекция возникает редко. При этом поражаются суставы, кожа, сердце, мозговые оболочки. Эпидемиология. Гонорея относится к наиболее распространенным инфекционным заболеваниям, передаваемым половым путем. Источником инфекции при гонорее является больной человек, особенно с хронической бессимптомно протекающей формой болезни. Механизм передачи возбудителя - контактный, путь передачи - половой. Восприимчивость к гонококкам очень высокая. Клиника. Инкубационный период составляет от 12 часов до 7 суток (в среднем 3 суток). У женщин и у 10% мужчин гонококковая инфекция протекает бессимптомно. Гонококковая инфекция проявляется в виде гнойного воспаления слизистой мочеполовых путей (гонорея), конъюнктивы глаз (бленнорея) и других органов. Гонококковый уретрит (воспаление слизистой мочеиспускательного канала) – самое частое проявление гонореи у мужчин. При этом отмечается острое начало заболевания с обильными гнойными выделениями из уретры, резью и болью при мочеиспускании. У женщин гонорея проявляется гонококковым цервицитом – поражением шейки матки и эндоцервикального канала. Практически всегда гонококковый цервицит протекает бессимптомно. В редких случаях отмечаются жалобы на появление скудных выделений из влагалища и боль внизу живота. Бессимптомное течение приводит к раннему развитию осложнений гонококковой инфекции. При гонококковом проктите наиболее часто отмечаются зуд, жжение в заднем проходе, незначительные гнойные выделения, болезненные позывы к дефекации. Гонококковый фарингит возникает вследствие орогенитальных половых контактов. Клинически гонококковый фарингит зачастую протекает бессимптомно и обнаруживается лишь при бактериологическом исследовании. Изредка пациентов могут беспокоить сухость в глотке, боль, усиливающаяся при глотании, “першение” в глотке. Гонококковый конъюнктивит или бленнорея взрослых сопровождается резкой болезненностью, слезотечением, припухлостью век, светобоязнью, появлением обильного гнойного отделяемого. Чаще поражается один глаз. Гонококковая инфекция имеет тенденцию к переходу в хроническую бессимптомную форму. Нелеченая гонорея является одной из основных причин бесплодия как у мужчин, так и у женщин. Диссеминированная гонококковая инфекция возникает при гонококковой бактериемии. Диссеминация проявляется петехиальными или пустулезными высыпаниями на коже, артралгией, артритом, эндокардитом, менингитом. Особое значение имеет гонорея новорожденных. До 50% новорожденных заражается гонореей от больной матери при прохождении через родовые пути. В этом случае развивается офтальмия новорожденных (бленнорея, гонобленнорея, неонатальная гонококковая инфекция). Офтальмия (бленнорея) новорожденных обнаруживается у ребенка на 2-3 день после родов. Вначале она проявляется водянистыми желтоватыми выделениями из глаз. Через сутки отмечается сильная отечность и покраснение век, а выделения становятся мутными. Еще через 4-5 дней краснота век уменьшается, выделения приобретают гнойный характер. В этот период в процесс может вовлекаться роговая оболочка с образованием язв, на месте которых формируются рубцы. Нелеченая бленнорея новорожденных ведет к слепоте. Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служит гнойное отделяемое из уретры, влагалища, шейки матки, прямой кишки и глотки, с конъюнктивы глаза (при бленнорее), а также сыворотка крови. Отбор материала проводит врач. При диагностике гонококковой инфекции применяют бактериоскопический, бактериологический и серологический методы. Бактериоскопическое исследование является основным методом диагностики острой гонореи и бленнореи. При этом готовят два мазка, один из которых окрашивают по Граму, а второй - метиленовым синим. В положительном случае при микроскопировании мазка, окрашенного по Граму, обнаруживают розовые (грамотрицательные) диплококки бобовидной формы, а в мазке, окрашенном метиленовым синим, наблюдаются диплококки в макрофагах - незавершенный фагоцитоз!!! Для дифференцировки гонококков от других грамотрицательных бактерий применяют прямой и непрямой варианты РИФ (хроническая форма). При прямом варианте мазки обрабатывают флюоресцирующими антителами против гонококков, при непрямом методе используют гонококки, сыворотку больного и антиглобулиновую сыворотку. Бактериологическое исследование проводят при отсутствии гонококков в мазках или при обнаружении атипичных форм. Этот метод позволяет выявлять гонококки в 1,5-4 раза чаще, чем микроскопическое исследование. Особенно показаны посевы при хронической гонорее, гонорейном проктите и контроле на излечение. Посев материала производят непосредственно после отбора на сывороточный или асцитический агар. Добавление к среде ристомицина и полимиксина М (10 ЕД/мл) значительно повышает высеваемость гонококков. Посевы инкубируют в атмосфере углекислого газа (10%). Серологический метод используют при хронической гонорее, а также в случае отсутствия у больного выделений. В качестве серологического метода используют РСК (реакцию Борде-Жангу). Реакция становится положительной с 3-4 недели заболевания. При острой форме болезни она положительна у 35% больных, при хронической форме - у 65% (слабоположительная у 100%). В качестве антигена для РСК применяют гоновакцину или антиген из убитых гонококков. В настоящее время для диагностики гонореи рекомендована полимеразная цепная реакция (ПЦР). Для забора материала используются эндоцервикальные, влагалищные тампоны и мужские уретральные тампоны. Методом ПЦР можно исследовать и мочу. Этот метод не рекомендован для исследования материала из ротоглотки и прямой кишки в связи с возможностью перекрестных реакций с другими нейссериями. Лечение гонококковой инфекции зависит от формы заболевания. При острой и подострой гонорее применяют антибиотики группы пенициллина. При непереносимости пенициллина используются другие антибиотики. Через 5-7 дней антибиотикотерапии воспалительные явления уменьшаются, выделения становятся скудными, гонококки в них не обнаруживаются. По истечении 7-10 дней определяют излеченность заболевания. При хронической гонорее применяют специфическую (гоновакцина) или неспецифическую (пирогенал) иммунотерапию и местное воздействие на пораженный орган. После такого воздействия в стационарных условиях проводят курс антибиотикотерапии повышенными дозами антибиотиков. Для контроля излеченности прибегают к провокации химическим, механическим, алиментарным или термическим методом. После провокации через 24, 48 и 72 часа исследуют выделения. При отсутствии после провокации гонококков в мазках и посевах больного оставляют для диспансерного наблюдения. Через месяц повторяют провокацию и делают уретроскопию. Если в течение этого срока возбудитель и клинические проявления болезни отсутствуют, то таких лиц снимают с диспансерного учета. В настоящее время в России в соответствии со стандартом медицинской помощи больным гонококковой инфекцией методы провокации не используются. Поэтому контроль излеченности проводят через 2 и 14 дней после окончания лечения. Профилактика гонококковой инфекции включает следующие мероприятия: - активное выявление и лечение больных и их половых партнеров с последующим контролем на излеченность; - обязательное обследование декретированных групп населения (работники детских дошкольных учреждений и общепита) перед поступлением на работу и в последующем через каждые три месяца; - обязательная первичная обработка новорожденного (закапывание в конъюнктивальную полость обоих глаз по одной капле 2% раствора азотнокислого серебра или сульфацила натрия) для профилактики бленнореи. Основное внимание в профилактике гонококковой инфекции принадлежит санитарно-просветительной работе, направленной на пропаганду здорового образа жизни и исключение случайных половых связей. 5 вопрос. Эшерихии, основные свойства. Физиологическая роль в организме человека, санитарно-показательное значение. Заболевания, вызываемые условно-патогенными эшерихиями. Диареегенные эшерихии, их отличие от условно-патогенных. Микробиологическая диагностика острых кишечных инфекций, вызванных эшерихиями. Таксономия. Эшерихии относятся к типу Proteobacteria классу Gammaproteobacteria порядку Enterobacteriales семейству Enterobacteriaceae роду Escherichia. Основным видом рода Escherichia, имеющим медицинское значение, является Escherichia coli (кишечная палочка). По антигенным свойствам эшерихии подразделяются на серогруппы. Морфологические и тинкториальные свойства. Эшерихии представляют собой полиморфные прямые или слегка изогнутые палочки с закругленными концами средних размеров. Палочки располагаются одиночно, реже – попарно. Спор не образуют. Клетки E. coli имеют пили (фимбрии) и обладают подвижностью благодаря перитрихиально расположенным жгутикам. По методу Грама эшерихии окрашиваются в розовый цвет (грамотрицательные). В мазках под микроскопом располагаются беспорядочно. Многие штаммы эшерихий имеют микрокапсулу. Культуральные и биохимические свойства. Эшерихии являются аэробами или факультативными анаэробами. Оптимальная температура роста 35-37С. Хорошо растут на простых питательных средах. На МПА эшерихии образуют колонии средних размеров, серо-белые, гладкие, влажные, блестящие, с ровными краями (S-форма). В жидких средах вызывают равномерное помутнение, иногда образуют незначительный осадок. Эшерихии обладают высокой биохимической активностью – ферментируют с образованием кислоты и газа глюкозу, лактозу, мальтозу, арабинозу, галактозу, маннит. Дульцит и сахарозу большинство штаммов кишечной палочки не ферментирует. Характерным признаком эшерихий является ферментация лактозы. По способности ферментировать лактозу различают лактозоположительные и лактозоотрицательные кишечные палочки. В качестве дифференциальнодиагностических сред при выделении кишечной палочки используют среды, содержащие лактозу (среды Эндо, Левина, Плоскирева). Среда Эндо содержит МПА, лактозу, фуксин и натрия сульфит. Готовая среда имеет бледно-розовый цвет. Сульфит натрия и фуксин оказывают ингибирующее действие на большинство грамположительных микроорганизмов. При разложении эшерихиями лактозы рН смещается в кислую сторону в результате образования ацетилальдегида, который взаимодействует с сульфитом натрия и приводит к восстановлению фуксина. Лактозоположительные штаммы кишечной палочки на среде Эндо образуют темно-красные колонии с металлическим блеском. Лактозоотрицательные эшерихии, сальмонеллы, другие энтеробактерии, не ферментирующие лактозу, образуют на среде Эндо бесцветные или бледно-розовые колонии. Среда Плоскирева содержит агар, лактозу, желчные кислоты, йод, нейтральный красный, бриллиантовый зеленый, соли. Готовая среда имеет светлокоричневый цвет. Желчные кислоты, йод, бриллиантовый зеленый подавляют рост грамположительных бактерий. На среде Плоскирева лактозоположительные штаммы кишечной палочки образуют колонии брусничного цвета. Среда Левина (ЭМС-агар) содержит МПА, лактозу, эозин и метиленовый синий. Готовая среда имеет красновато-фиолетовый цвет. На среде Левина лактозоположительные штаммы кишечной палочки образуют темно-фиолетовые (черные) колонии с зеленоватым оттенком. Протеолитическая активность у эшерихий выражена слабо - желатин они не разжижают, образуют индол, не образуют сероводорода. Мочевину не разлагают. Среди эшерихий выявляются как гемолитические штаммы, дающие полный αгемолиз, так и негемолитические штаммы. Антигенная структура эшерихий. Эшерихии содержат соматический О-антиген, капсульный К-антиген и жгутиковый Н-антиген. Эти антигены являются основой серологической классификации эшерихий. Соматический О-антиген (липополисахаридно-протеиновый комплекс) определяет серологическую группу эшерихий. В настоящее время по О-антигену выделяют 173 варианта (серовара) кишечной палочки. Для серологической типизации эшерихий промышленностью выпускаются диагностические Осыворотки. О-антиген не разрушается при нагревании до 100ОС в течение 2,5 часов. Белковый компонент обусловливает иммуногенные свойства, липидный – токсичность, полисахаридный – серологическую специфичность эшерихий. Капсульный К-антиген представлен мукополисахаридами. У эшерихий обнаружено 97 разновидностей К-антигена. К-антиген подразделяется на 3 разновидности (A, B и L), которые различаются по чувствительности к температуре и химическим соединениям. А-разновидность термостабильная, а B и Lразновидности термолабильные. К-антиген располагается на поверхности клеток, поэтому может препятствовать агглютинации эшерихий О-сыворотками. В этом случае О-антиген можно выявить только после разрушения К-антигена кипячением культуры в течение двух часов. Жгутиковый Н-антиген (белок флагеллин) обладает типовой специфичностью. Эшерихии имеют 57 разновидностей Н-антигена. Количество возможных комбинаций О-, К- и Н-антигенов превышает 2000. Антигенная структура эшерихий представляет собой формулу, в которой указываются буквенные и цифровые обозначения антигенов, разделенные двоеточием, например, О101:К5:Н10. |